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La composicin de la desoxypentosa los cidos nucleicos del timo y el bazo

Mientras que los primeros investigadores en este campo, tales como


Miescher y Hopne-Seyler, parecen haber conjeturado el carcter
macromolecular y compleja de los cidos nucleicos que eran los primeros en
aislar, este punto de vista pronto fue abandonado en favor de la
tetranucletido qumicamente ms atractivo hiptesis, y los estudiantes de
qumica de cidos nucleicos (por ejemplo, (1, 2)) que todava senta que
todava queda mucho por descubrir trabajado en contra de la corriente de
su tiempo. En el pasado ms reciente, el desarrollo de mtodos para el
estudio y la caracterizacin de polmeros de alto ha provocado un
resurgimiento del inters en la qumica de macromolculas presentes en la
naturaleza.
En cuanto al cido desoxirribonucleico de timo de ternera, el carcter
molecular alto de esta componed extremadamente asimtrica se ha
demostrado en varias ocasiones (3-6). Que este cido nucleico fue
considerado como el prototipo de todos los cidos nucleicos desoxipentosa
es comprensible, ya que es el nico compuesto de este tipo fcilmente
disponible para una investigacin qumica detallada, pero el supuesto
implcito por parte de muchos trabajadores que desoxypentose cido
nucleico es una solo individuo qumica, independientemente de la fuente de
la que se obtiene, es incorrecta. Una comparacin de los resultados
contenidos en thk presente comunicacin con las presentadas en un
documento de acompaamiento (7) ser de inters a este respecto. Un
estudio reciente de este laboratorio (8), as como un artculo de revisin (9),
ha proporcionado una discusin ms completa de la literatura pertinente. El
problema de la especificidad de cido nucleico tambin se ha considerado
en repetidas ocasiones (10, 11).
La gran parte de las actividades de la clula viva, adscrito en la actualidad a
los cidos nucleicos desoxypentose, hace que sea imprescindible para
perfeccionar una fundacin que har posible la consideracin directa de los
problemas de la estructura, composicin y especificidad. Sean cuales sean
los cambios qumicos se producen en los cidos nucleicos en el curso del
desarrollo celular o por radiaciones o mutgenos, tales como los
compuestos de la serie de mostaza, difcilmente ser del tipo que puede ser
revelado por la mera inspeccin de las caractersticas fsicas pticos u otros.

Una comparacin qumica con respecto a la identidad de los


extremadamente complejos compuestos de origen celular, tales como
cidos nucleicos, protenas o polisacridos, tiene que basarse en la
naturaleza y las proporciones de sus constituyentes, en la secuencia en la
que estos componentes estn dispuestos en la molcula, y del tipo de
vnculos, que los mantienen unidos. Evidentemente, la decisin ser mucho
ms fcil si, como en las protenas, el nmero de diferentes componentes es
muy grande, aparte de la importante ayuda prestada por procedimientos
inmunoqumicos. En el caso de los cidos nucleicos, el nmero
relativamente pequeo de diferentes componentes hace muy atractiva la

postulacin de la identidad y la regularidad que, sin embargo, nunca se ha


demostrado adecuadamente. Se entender que las desviaciones de anlisis
de proporciones estrictamente integral, simple, admisibles para las
sustancias de tamao relativamente pequeo, se vuelven muy significativo
cuando se aplica a compuestos cuyos pesos moleculares variar en los
millones.
El presente estudio intenta proporcionar una visin general de la
distribucin de las purinas y pirimidinas en hidrolizados de los cidos
nucleicos desoxypentose derivados de timo de ternera y el bazo de res. Se
basa en los mismos microprocedures para la separacin y la estimacin de
los componentes nitrogenados de cidos nucleicos (12) que ya han servido
para la investigacin de la composicin de los cidos nucleicos de pentosa
(8). El ltimo documento menciona tambin incluy un examen de los
mtodos de hidrlisis empleadas y una discusin crtica de la validez de los
resultados experimentales. Estos puntos, por lo tanto, no necesitan ser
revisados aqu de nuevo.
Una sinopsis de los resultados con varias preparaciones de cido nucleico se
proporciona ms adelante en la Tabla V, que enumera las proporciones
molares en las que se encontraron los cuatro componentes nitrogenados. En
contraste con los cidos nucleicos de pentosa (8), citosina era la base
presente en la concentracin ms baja. Aunque, en lo que respecta a la
composicin, el acuerdo entre los cidos nucleicos de timo y el bazo de es
sorprendentemente buena, no debe hacerse ninguna reclamacin como a la
identidad. Se ver que la distribucin de las purinas y pirimidinas estaba
lejos de la requerida por un tetranucleotide: por 10 molculas de citosina,
no se encontraron aproximadamente 16 molculas de adenina, guanina, 13
de 15 (o 13) de la timina.
La correlacin de los resultados presentados aqu con los resultados
anteriores en la literatura es difcil por una serie de razones. Casi todas las
preparaciones de cido nucleico desoxypentose que fueron objeto de
estudios analticos detallados haban sido aislados con el uso de lcali fuerte
y probablemente se degrada en cierta medida. Por otra parte, ya que "los
cidos nucleicos de animales" fueron considerados como de una sola
especie, los trabajadores de ms edad no prestaron atencin a la posible
contaminacin de su material con cidos nucleicos pentosa, y esto puede,
en preparaciones derivadas de fuentes distintas del timo y el esperma de
pescado, han contribuido a graves errores. Por la misma razn, las
preparaciones de diferente, y, a menudo no declarado, el origen se
analizaron con frecuencia indistintamente. Dos estudios son por lo general
en que se basa la distribucin equimolar de las cuatro componentes
nitrogenados. Steudel en 1906 (13), inform sobre la composicin de los
cidos nucleicos de timo y de esperma de arenque. Sus cifras porcentuales,
aunque interpretado por l como evidencia de la estructura tetranucletido,
en realidad tendencia hacia los valores obtenidos en el presente estudio;
que corresponden a las siguientes proporciones molares: adenina 2,0,
guanina 1.5, citosina 1,0, timina 1,7. Levene y Mandel (14), sin embargo, las
cifras reportadas para un cido nucleico a partir de una fuente no
identificada, probablemente a partir de bazo (15), que pareca sostener la
hiptesis de tetranucletido.

La composicin de una preparacin altamente polimerizado de cido


desoxirribonucleico timo parece haber sido considerada slo en un caso, y
esto mediante un mtodo bastante indirecta. Gulland et al. (16)
interpretaron los resultados de las valoraciones electromtricos (17), en
relacin con la determinacin de la relacin entre el nitrgeno de purina
nitrgeno no purina en el hidrolizado (1.6) como significando que su
producto contena, por cada 4 gm. tomos de fsforo , 1,0 mol de cada uno
de timina y de guanina, 1,2 moles de citosina, y 0,8 mol de adenina. Estas
deducciones, que se basan en una comparacin de las curvas de valoracin
del cido nucleico en s y de la llamada cido tmico a la que da lugar por la
degradacin del cido, no estn de acuerdo con los resultados presentados
aqu. Sin embargo, cabe sealar que los resultados reales de la titulacin de
cido nucleico de Gulland correspondan a tres disociaciones atribuibles al
grupo amino y a dos disociaciones del hidroxilo purina-pirimidina por 4
tomos de P (17, 18), que est en excelente de acuerdo con las
proporciones molares calculados para la Preparacin 3 en la Tabla V (3,9
grupos amino de 2,6 hidroxilos purina-pirimidina) y de acuerdo satisfactorio
con las otras preparaciones.
El presente estudio concluye con un intento de caracterizar el componente
de azcar del cido nucleico desoxypentose de bazo, hasta ahora no
identificado, mediante la comparacin de su comportamiento de particin
con la de desoxirribosa del cido nucleico del timo. Las tcnicas empleadas
han sido discutidos en un artculo anterior (B), pero debido a la inestabilidad
de los azcares desoxi la hidrlisis se llev a cabo de una manera diferente.
Los cidos nucleicos fueron parcialmente degradada enzimticamente a la
etapa de nuclesido y los azcares liberados bya tratamiento a corto con
cido muy diluido. Los dos hidratos de carbono de acuerdo completamente
en su comportamiento de particin en tres disolventes diferentes. Se puede
concluir provisionalmente que el cido nucleico desoxypentose del bazo
contiene 2-desoxirribosa.
En conclusin, unas pocas palabras hay que decir acerca de un asunto de
inters ms general. En qu medida constancia de la composicin se aplica
a las macromolculas de origen biolgico es desconocida y puede, tal vez,
ni siquiera puede determinar por mtodos existentes. No es imposible que
muchas preparaciones aparentemente homogneos de origen celular en
realidad son mezclas de individuos qumicos estrechamente relacionados,
representativos de diferentes posiciones dentro de la clula. Esto puede ser
particularmente cierto de los cidos nucleicos desoxypentose derivados del
ncleo de la clula, si se tienen en cuenta las concepciones actuales de la
estructura especfica de cromosomas y genes. Dado que, en ese caso, la
composicin constante de los cidos nucleicos del mismo tipo de clulas es
ms que una expresin estadstica del estado sin cambios de 'la clula, se
convierte en una cuestin de inters real para comparar la distribucin de
los componentes en los cidos nucleicos desoxypentose derivados de
diferentes mutantes deficientes de la misma especie.

EXPERIMENTAL
Material

cido desoxirribonucleico de timo de ternera Tres altamente polimerizados se utilizaron


preparaciones. Las cifras de su contenido de nitrgeno y fsforo, as como los dems datos
que se dan en la Tabla I, se refieren a las sustancias secas. Preparacin 1 se aisl como la sal
de sodio de timo por un mtodo que sigui, con algunas modificaciones, que de Hammarsten
(I). '
Preparacin% 'era una sal de potasio derivado de la sal de sodio, Preparacin 1, por un
mtodo de purificacin que hizo uso de la accin precipitante conocido de sales de lantano (1,
19). slo un experimento se describir. La sal de lantano, producido por la adicin de 6 cc. de 2
por ciento de acetato de lantano acuoso a una solucin de 200,8 mg. nucleada del sodio en
400 cc. de solucin salina, se recogi por centrifugacin en el fro y se lava dos veces con 0,2
por ciento acetato de lantano. A continuacin, se suspendi en 50 cc. de cloruro de potasio M
que contiene 5 por ciento oxalato de potasio (pH 7,2), y la mezcla se agit mecnicamente
durante 43 horas.
El conglomerado voluminosa de fibras, producida por la adicin de 150 cc. de alcohol absoluto
a la leche viscosa, se separ por filtracin sin demora, se lav con 66 por ciento y con alcohol
absoluto, y se recogi en 40 cc. de agua.
La solucin muy turbia fue liberado de oxalato de lantano por centrifugacin durante 1 hora a
1900 g, y el sobrenadante se dializ, se filtr a travs de tierra de infusorios, y de nuevo se
dializ durante 10 das contra muchos cambios de agua destilada enfriada con hielo. Despus
de una centrifugacin ms la solucin se congel y se evapor en el vaco. El
desoxyribonucleate potasio (Preparacin 2, Tabla I) pesaba 166,1 mg. (83 por ciento del
material de partida) y form una fibra de fieltro blanco que dio una solucin clara, muy viscosa
en agua. Este nucleada de potasio sirve como el estndar de las determinaciones (20) de los
contenidos desoxypentose de los otros preparados que, en trminos de ste, variaron desde 95
a la 102 por ciento.
Preparacin 3 se aisl por un procedimiento algo similar a la de Gulland et al. (16)
Desoxypentose Nucle + cido ic de la carne de vaca Bazo-1800 gm. de limpiado, bazo carne
fresca se trituraron mecnicamente y se lava por suspensin en varias porciones 2 litros de
solucin salina fisiolgica enfriada con hielo. El material de tejido se separ por presin a travs
de cuatro capas de estopilla, suspendidas en 1500 cc. solucin de cloruro de sodio M fro (21),
y se mantuvo durante la noche en el refrigerador.
El residuo insoluble se extrajo de nuevo en 4 ", esta vez con solucin de NaCl al 10 por ciento.
Los extractos combinados se centrifugaron a 19.009 durante 1 hora y 1,5 volmenes de 95 por
ciento de etanol se aadieron al sobrenadante. El sedimento, obtenido mediante la
centrifugacin de la mezcla enfriada, se recogi en 800 cc. de fro 10 por ciento de NaCl, la
solucin se aclar en 19OOg, y la nucleoprotena precipit mediante la adicin de 1,5
volmenes de alcohol etlico. El precipitado fibroso se pone en cola en un gancho de vidrio y
por tanto separa del material granular, que se desech.
A continuacin, se suspendi en solucin salina fisiolgica y desproteinizado (22) de la manera
habitual por nueve tratamientos con cloroformo-octanol (8: 1).
Los hilos, se precipit por la adicin de 2 partes de etanol, se levantaron y el sedimento
granular producido simultneamente reelaborados y se convierten en gran parte a los hilos por
cuatro precipitaciones de solucin salina con alcohol (cf. (23)). La solucin salina viscoso de los
hilos combinados se diluy suficientemente para permitir la clarificacin por centrifugacin, y el
cido nucleico de nuevo se precipit con alcohol. entonces su solucin salina se someti a
dilisis frente a agua corriente del grifo durante 60 horas, frente a agua destilada enfriada con
hielo durante 24 horas, y se evapor en el estado congelado en un vaco, cuando el nucleada
desoxypentose de sodio se obtuvo como una pelusa blanca que pesa 1,13 g. (Preparacin 4,
Tabla I).
Otra de sodio desoxypentose nucleada preparacin de bazo carne aparece que en la
Preparacin 5 en la Tabla I. Esta fraccin se prepara por una combinacin de los
procedimientos descritos anteriormente (1, 16, 21). Propiedades fsicas-Todas las
preparaciones de cidos nucleicos forman pelusas blancas o fibras y dio soluciones viscosas
en agua. Las preparaciones 2, 3, y 4 (Tabla I) estaban libres de pentosa y la protena;
Preparaciones 1 y 5 contenan rastros de este ltimo. Ellos mostraron el espectro de absorcin
caracterstica en el ultravioleta con los mximos y mnimos enumerados en la Tabla I (agua
destilada como disolvente). Las razones para el uso de la expresin E (P), es decir, el
coeficiente de extincin atmica con respecto a fsforo, se han explicado anteriormente (23).
Los datos de viscosidad para algunos de los preparativos del mismo modo se dan en la Tabla I.
Se ver que las soluciones ms fuerte que el 0,1 por ciento exhibi anormalmente altas

viscosidades. Las preparaciones de bazo dieron soluciones que eran menos viscosas que las
de los productos de timo.

Composicin de desoxipentosa Nucleic Acids mtodosLos procedimientos para la liberacin, la separacin, y la estimacin de las
purinas y pirimidinas, que se describe en detalle con respecto a los cidos
ribonucleicos en una reciente publicacin (8), se siguieron exactamente.
Pukes pirimidinas y purinas-Los que se encuentran en los hidrolizados eran
adenina (mximo de absorcin a 262,5 m, u) y guanina (249 mdp); las
pirimidinas citosina eran (267.5 mdp) y timina (264,5 m / .c). En ningn caso
se demostr uracilo en los cromatogramas. Los valores encontrados para el
contenido de purina estn dispuestos en la Tabla II, las de pirimidinas en
Tabla III.
Se seal en un artculo anterior (8) que las cifras de pirimidina que
sirvieron para el clculo de las proporciones y composicin llevaron a una
correccin al alza del 5 por ciento. Esto se hizo con el fin de tener en cuenta
la retencin de una pequea cantidad de compuestos de pirimidina en el
precipitado de hidrocloruro de purina que fue producido por el tratamiento
del cido nucleico con HCl metanlico, preliminar a la liberacin de las
pirimidinas por medio de cido frmico concentrado . Se han determinado
las razones de este procedimiento (8). Con los cidos ribonucleicos, la
extensin de la prdida de pirimidinas as incurridos no pudo estimarse
fcilmente, ya que algunos de adenina, y terminados en la fraccin de
pirimidina por el lavado a fondo de los hidrocloruros de purina, habra
contaminado la fraccin uracilo (12). Con desoxypentose cidos nucleicos,
sin embargo, estas estimaciones se podran realizar, como la adenina y la
timina son separados sin
dificultad.
TABLA II
Purina contenido de Desoxypentose Nucleic Acids *
Cada valor representa la media de al menos seis determinaciones paralelas
en el mismo hidrolizado. El sistema disolvente usado para las separaciones
era n-butanoldiethylene glicol-agua (en atmsfera NH3) en los Experimentos
4, 7, 12, y 13; en todos los dems, se emple n-butanol-morfolinadietilenglicol-agua (12).
Las preparaciones se numeran como en I. Preparativos Tabla 1, 2, y 3 se
obtuvieron a partir de timo de ternera, Preparaciones 4 y 5 de bazo de
ternera.
TABLA III
Pirimidina contenido de Desoxypentose Nucleic Acids *
* Cada valor representa la media de al menos seis determinaciones
paralelas en el mismo hidrolizado. n-Butanol-agua sirve como sistema
disolvente. t Consulte la Tabla II para la explicacin.
1 Este hidrolizado tambin fue examinado por uracilo, pero no se encontr
ninguna. El segmento cromatograma eliminado en el lugar de uracilo
produjo un extracto que absorbe ninguna luz ultravioleta.
Cuando determinaciones de pirimidina paralelas se llevaron a cabo en dos
muestras de cido nucleico del timo (Preparacin 3, Tabla I), los valores
obtenidos por la tcnica habitual (8), que se evita el lavado de clorhidratos
thepurine, citosina fueron 4,3, timina 6,8 por ciento ( Experimento 3,
Tabla III) 0.3 En el otro experimento, la muestra de cido nucleico se
degrad con la ayuda de HCl metanlico y los hidrocloruros de purina se
centrifugaron y el sobrenadante separado de la manera habitual.
TABLA IV
Desoxypentose cidos nucleicos; Proporciones y Balances *

* Las preparaciones se numeran como en la Tabla I. Las siguientes


abreviaturas se emplean en esta tabla: A. = adenina; G. = guanina; C =
citosina; T. = timina; N. A. = cido nucleico total.
Posteriormente fueron lavadas mediante la suspensin en 0,5 cc. de
metanol y HCl gaseoso se pas de nuevo a travs de la mezcla durante 3
horas. Despus de la centrifugacin, los sobrenadantes unidos se
evaporaron y la mezcla de hidrocloruro de resi- 8 La purina aislados en este
experimento se sometieron a un anlisis (cf. nota de pie de 3 (8)). Los
valores encontrados, a saber. 9.7 adenina, guanina 8,6 por ciento, estaban
en buen acuerdo con los datos recogidos en la Tabla II. debido fue
hidrolizado con cido frmico como se ha descrito previamente (8). El
cromatograma ahora exhibe cuatro puntos, que pertenece a la citosina y
timina y para algunos de los adenina (34 por ciento del total) y guanina
(20.5 por ciento del total), que haba sido trasladado a la fraccin pirimidina
por el proceso de lavado. Los valores encontrados fueron citosina 5.2, timina
7,2 por ciento. Desde timina es la pirimidina mejor separado de mezclas
contaminadas con purinas (12), que sirve para el clculo del dficit
pirimidina relativa que, en este experimento particular, fue 5,9 por ciento.
Proporciones y el equilibrio entre los resultados obtenidos con las diversas
preparaciones se comparan en las Tablas IV y V. En lo que respecta a las
expresiones utilizadas, se puede hacer referencia al estudio de los cidos
ribonucleico recientemente
TABLA V
Desoxypentose cidos nucleicos; Las relaciones molares *
* Las preparaciones se numeran como en la Tabla I. publicada de esta (8) de
laboratorio. Las preparaciones 2, 3, y 4 se consideran ligeramente ms
fiable que las Preparaciones 1 y 5.
Tasa de Liberacin Puke-La velocidad de escisin de los nucletidos de
purina del cido nucleico del timo por calentamiento con cido sulfrico N
Se sigui con la Preparacin 3 (Tabla I). Los resultados reunidos como
Experimentos 5 a 10 en la Tabla II son indicativos de la facilidad relativa con
la que los purines son liberados; valores mximos para la adenina y la
guanina se obtuvieron despus de 30 minutos. prolongado calentamiento
provocado una cierta cantidad de destruccin (Experimentos 9 y he aqu) .4
4 Uno tiene la impresin de que los diferentes cidos nucleicos difieren en
su capacidad para dividir fuera de purinas en el tratamiento con HCl en
metanol, que es el primer paso en la determinacin de pirimidinas (8).
Mientras que con los cidos ribonucleicos y con el cido desoxirribonucleico
de timo de 15 a 30 minutos son suficientes para provocar la aparicin de
clorhidratos de purina, las preparaciones correspondientes de bazo y de
bacilos de la tuberculosis (7) fueron mucho ms lento, lo que requiere
alrededor de 2,5 horas.
* Las preparaciones se numeran como en la Tabla I. publicada de esta (8) de
laboratorio. Las preparaciones 2, 3, y 4 se consideran ligeramente ms
fiable que las Preparaciones 1 y 5.
Tasa de Liberacin Puke-La velocidad de escisin de los nucletidos de
purina del cido nucleico del timo por calentamiento con cido sulfrico N
Se sigui con la Preparacin 3 (Tabla I). Los resultados reunidos como
Experimentos 5 a 10 en la Tabla II son indicativos de la facilidad relativa con
la que los purines son liberados; valores mximos para la adenina y la
guanina se obtuvieron despus de 30 minutos. prolongado calentamiento
provocado una cierta cantidad de destruccin (Experimentos 9 y he aqu) .4
4 Uno tiene la impresin de que los diferentes cidos nucleicos difieren en
su capacidad para dividir fuera de purinas en el tratamiento con HCl en

metanol, que es el primer paso en la determinacin de pirimidinas (8).


Mientras que con los cidos ribonucleicos y con el cido desoxirribonucleico
de timo de 15 a 30 minutos son suficientes para provocar la aparicin de
clorhidratos de purina, las preparaciones correspondientes de bazo y de
bacilos de la tuberculosis (7) fueron mucho ms lento, lo que requiere
alrededor de 2,5 horas.
Como comprobacin adicional, se determin el nitrgeno purina en una
preparacin por precipitacin con sulfato de plata (24), el procedimiento
experimental de Gulland et al. (16) siendo seguidos. El nitrgeno de las
purinas, por lo tanto estima en el nucleada de sodio, Preparacin 3, Tabla I,
despus de la hidrlisis con N HzEQ durante 1 hora a 115125 ", se encontr
como el 8,7 por ciento, en buen acuerdo
con el valor de 9,0 por ciento registrado en la Tabla IV.5 azcar de
componentes de Desoxypentose Nucleic Acids
El procedimiento para la identificacin de cromatografa del componente de
azcar de los nucletidos de purina despus de la hidrlisis cida, tal como
se aplica al estudio de los cidos nucleicos de pentosa (8)) no se podra
extender directamente a la investigacin de los desoxypentoses debido a la
gran inestabilidad de estos azcares. Primero era necesario para convertir
los cidos nucleicos en una mezcla de nuclesidos desoxypentose. Las
sustancias de este tipo tienen, en el pasado, que se sirve para el
aislamiento del azcar desoxi pura (25, 26). La degradacin enzimtica de
los cidos nucleicos a la etapa de nuclesido se llev a cabo por una mezcla
de enzimas que consisten en desoxirribonucleasa purificada de pncreas
(27) 6 y de un preparado enzimtico, derivado de Aspergillus
myzae, que se designa como "mylase P" (Wallerstein Laboratories, New
York). 'ensayos preliminares con esta mezcla de enzimas mostr que, en las
condiciones de los experimentos descritos a continuacin, alrededor de 65
por ciento del fsforo de cido nucleico se convirti en inorgnico
fosfato en el plazo de 11 horas. 10 mg. de cada preparacin de cido
nucleico se disolvieron en 1,5 cc. de tampn Verona1 de pH 6,7 (que
contiene 15 micromoles de sulfato de magnesio), 0,5 cc. de la solucin
enzimtica (que contiene un total de 100 y de desoxirribonucleasa y 5 mg.
de mylase P) se aadi, y la mezcla, protegida con 0,01 por ciento de
mercuritiosalicilato de etilo, se incubaron durante 20 horas a 30 ". A
continuacin, se desproteinizado por que se agita con cloroformo-octanol y
se centrifug.
Las muestras de las soluciones se eliminaron con el fin de probar, por
CHRO-6 Cabe mencionar aqu que los intentos para caracterizar todos los
componentes nitrogenados en la misma muestra de cido nucleico, basado
en la precipitacin de los nucletidos de pirimidina como sales de uranio (8),
se extendieron a los cidos nucleicos desoxypentose. Sin embargo, este
procedimiento produjo bajas cifras de las pirimidinas, en acin confirman los
hallazgos similares con cidos ribonudeic (8). Para la preparacin 2 (Tabla I)
citosina 3.2, se encontraron timina 6,3 por ciento; para la preparacin 4,
citosina 3.7, timina 6,1 por ciento. En el caso de t, que desoxypentose
cidos nucleicos, una parte de los precipitados de uranio era insoluble en
HCl 2 N y se concentr frmico
cido. cromatografa, por la presencia de azcares libres en esta etapa, pero
ninguno fue encontrado. Las soluciones restantes se ajustaron a pH 1,5 por
medio de HCl N y se calent en agua hirviendo durante exactamente 12
minutos. Los hidrolizados fueron, en porciones de 0,01 y 0,02 cc., Se
neutraliz en el papel de filtro con gaseoso NH8 y se someti a
cromatografa en tres sistemas de disolventes diferentes (28). El desarrollo

se llev a cabo por medio de dihidrocloruro de m-fenilendiamina como se ha


descrito previamente (29)) y se observaron las zonas fluorescentes que se
formaron en la luz ultravioleta.
Slo se observ una, componente de azcar en movimiento muy rpido en
todos los hidrolizados, cuya posicin en el cromatograma fue, sin importar el
sistema disolvente utilizado, idntico para las Preparaciones 1 y 3 a partir
de timo y para la preparacin de 4 bazo (Tabla I). Los vaIues de RF, es decir,
la proporcin de las distancias del punto de partida desde el adsorbato y
desde el frente del disolvente (30), que se encuentra (a aproximadamente
28 ") para el componente de azcar de los cidos nucleicos tanto el timo y
el bazo fueron los siguientes: ( a) en cido isobutrico (saturado con HZO),
0,55; (6) en butanol-piridina (a la capa superior, resultante de la mezcla de
1 volumen de piridina, 1,5 volmenes de agua, y 3 volmenes de n-butanol,
se aadi 1 volumen de piridina), 0,60; (C) en n-butanol-etanol-agua (4: 1:
5), 0.45.8 Los valores de RR para D-ribosa en estos disolventes, que se
enumeran en el mismo orden, fueron 0,44, 0,49, 0,30; para la L-ramnosa
0.48, 0.56, 0.40. El hidrato de carbono presente en el cido nucleico
desoxypentose de bazo era, por lo tanto, con toda probabilidad idntica con
el azcar de cido desoxirribonucleico timo, a saber. W-desoxirribosa.
Estamos en deuda con el Sr. W. Saschek y la seorita R. Rother para los
microanlisis.
RESUMEN
El presente trabajo contina el estudio de la composicin de los cidos
nucleicos. La distribucin de las purinas (adenina, guanina) y las pirimidinas
(citosina, timina) en los hidrolizados de varias preparaciones altamente
polimerizados de los cidos nucleicos desoxypentose de timo de ternera y el
bazo carne fue investigado con la ayuda de un mtodo publicado
recientemente para la separacin y la estimacin de estos componentes
nitrogenados en cantidades -Minute.
La composicin de tanto el timo y el bazo desoxypentose cidos nucleicos
se encontr muy similar, pero no era de acuerdo con la expectoracin 8
Cuando timo de cido nucleico se someti al tratamiento habitual para la
reaccin de difenilamina (20), pero con la omisin de difenilamina, no se
observ ninguna banda fluorescente en el cromatograma despus de la
aplicacin de m-fenilendiamina.
Tambin se realizaron pruebas de control para determinar la ausencia de
azcares cromatogrficamente demostrables de los taciones mezcla
empleada de enzimas derivadas de la hiptesis de tetranucletido. Para 10
molculas de citosina, 16 molculas de adenina, 13 de la guanina, y 15 (o
13) de timina fueron encontrados.
El componente de azcar de bazo desoxypentose cido nucleico, que fue
liberado de una parte de los nuclesidos obtenidos por digestin enzimtica,
se pareca mucho a los hidratos de carbono liberado de manera similar a
partir de cido timo desoxirribonucleico en su comportamiento
cromatogrfico en tres disolventes diferentes y se identific tentativamente
como 2-desoxirribosa.