La Biotecnologa y su Aplicacin en la Agricultura

MDULO III: EL SUELO Y SUS MICROORGANISMOS

COORDINADOR: DR. VCTOR OLALDE
3.3. LOS MICROORGANISMOS EN LA FERTILIDAD DEL SUELO
Mara del Rosario Ramrez Flores
3.3.1. Hongos micorrzicos
Los hongos micorrzicos se asocian a las races de la mayora de las plantas,
produciendo lo que denominamos micorriza. El Trmino micorriza se deriva de los
vocablos griegos mykes que significa hongo y rhiza raz. Existen diferentes
tipos de micorrizas, sin embargo dos son las de mayor distribucin en el mundo;
ectomicorrizas y endomicorrizas.
Micorrizas Arbusculares
Las plantas terrestres son capaces de formar diferentes tipos de simbiosis con los
microorganismos de suelo. Estas simbiosis pueden contribuir significativamente en
la sustentabilidad natural y agrcola de los ecosistemas. Entre stas, las Micorrizas
Arbusculares (MA) son una de las simbiosis ms antiguas, se tiene evidencia que
las MA existen hace 400 millones de aos, adems se sugiere que las MA
asistieron a las plantas para colonizar la parte terrestre del planeta (Schbleret al.,
2001).
Aproximadamente el 70-90% de las plantas terrestres incluyendo tambin
cultivares importantes a nivel mundial tales como: Zea mays (maz), Oryza sativa
(arroz), Triticumspp (trigo) y Sorghum bicolor (sorgo), son capaces de formar esta
asociacin simbitica con hongos pertenecientes al filo Glomeromycota, en el cual
se presenta alta diversidad gentica y funcional entre aproximadamente las 150
especies de hongos de este filo (Smith y Read, 1997; Parniske, 2008).
Los hongos son simbiontes bitrofos u obligados, es decir, son capaces de
germinar sin la presencia del simbionte, sin embargo necesitan del hospedero

para completar su ciclo de vida (figura 3). En esta asociacin el hongo mejora el
desarrollo de la planta con la adquisicin de nutrientes, principalmente fsforo y
nitrgeno, adems ayuda a la planta bajo condiciones de diferentes estreses
abiticos (sequa, salinidad y concentraciones altas de metales pesados) y biticos
(proteccin contra patgenos). Por su parte, la planta brinda carbohidratos y
proteccin al hongo. Cabe mencionar que el mayor beneficio de la simbiosis de da
cuando existe una baja disponibilidad de nutrientes (Smith y Read, 1997).El
transporte de nutrientes se lleva a cabo a travs de estructuras simbiticas
localizadas dentro de la raz de la planta llamadas arbsculos.
Figura 3. Ciclo de vida de hongos micorrzicos

Inicia con la germinacin de las esporas donde se ven involucradas molculas de

sealizacin, despus el hongo forma los apresorios. Ya establecida la
colonizacin se desarrollan las estructuras llamadas arbsculos. Adems tambin
se extienden las hifas extraradiculares, donde se producen nuevamente las
esporas que son liberadas al suelo (modificado de Bcking, 2012).
Las esporas de los hongos se encuentran en el suelo, pueden germinar
espontneamente y vivir pocos das de sus reservas de lpidos antes de encontrar

a su hospedero. Ante la ausencia de una raz hospedera y ante la falta de seales

por parte de la planta, las hifas se retraen (Schmitz y Harrison, 2014). Los
exudados de la raz de las plantas estn involucrados en la va de sealizacin en
la fase presimbitica del desarrollo de MA, stos incluyen a las estringolactonas.
Sin embargo estas hormonas endgenas se identificaron por primera vez como
responsables de la induccin de la germinacin de plantas parsitas Estriga
(Akiyamaet al., 2005).
Con los descubrimientos ms recientes se sugiri la participacin de estas
molculas en la sealizacin de la simbiosis. Por su parte, el hongo tambin
produce molculas que intervienen en la sealizacin. A dichas molculas se les
caracterizaron y se les llamaron factores de hongos son los lipoquitooligosacridos
y son muy similares a las que liberan bacterias fijadoras de nitrgeno del gnero
Rhizobium en el proceso de nodulacin denominados factores Nod (Schmitz y
Harrison, 2014).
Despus de que se desarrollan las hifas, el hongo forma una estructura llamada
apresorio, se adhiere en la epidermis de la raz y es el primer contacto clula a
clula entre simbiontes. En las clulas de las plantas, se forma el aparato de
prepenetracin (APP). El APP es citoplasma que contiene microtbulos y
microfilamentos, que se alinean con el retculo endoplsmatico, formando un tubo
hueco que gua la hifa a travs de las clulas hasta llegar al crtex. Es ah donde
se forman estructuras llamadas arbsculos, por los cuales se da el intercambio de
nutrientes entre el hongo y la planta y hasta este punto se puede decir que la
simbiosis est bien establecida (Figura 4) (Harrison, 2005; Paszkowski, 2006).

Figura 4. Desarrollo de las MA

Inicia con la germinacin de la espora y un intercambio de seales entre el hongo
(factores de hongo) y la planta (estrigolactona). El apresorio se coloca en la
epidermis de la raz, donde posteriormente se forma el aparato de prepenetracin
que gua a la hifa. Una vez que la hifa llega a las clulas del crtex se forman los
arbsculos (modificado de Parniske, 2008).

Las hifas de los hongos se extienden extraradicalmente explorando un

volumen de suelo mucho mayor, que el que lo haran las plantas con sus
races. Hay que destacar la gran importancia de las micorrizas como
auxiliares eficaces de las especies forestales, agrcolas y ornamentales. Por
un lado, las micorrizas mejoran las condiciones nutricionales de las plantas
con el correspondiente aumento de crecimiento; y por otro la planta adquiere
defensas fsicas y qumicas que la protegen de la accin de los agentes
patgenos. En referencia a los aspectos nutricionales, los rboles
micorrizados absorben mayor cantidad de N, P, K, Na, Zn, Cu y agua. Estos
incrementos son consecuencia de:
3
a) Aumento del rea del suelo en contacto fsico con la micorriza (raz e hifas).
b) Aumento de la movilidad, a travs de las hifas del hongo, de los minerales
del suelo en las regiones prximas a la raz.
c) Incremento de la actividad biolgica de la rizsfera, acelerando los
procesos de mineralizacin y reciclaje de nutrientes.
En cuanto a los agentes patgenos:
a) Barrera fsica en las races del rbol: el manto de hifas cubre el meristemo
radicular y cortex dificultando mucho la penetracin de agentes patgenos.
b) Produccin de antibiticos por la micorriza.
c) Produccin de inhibidores por parte de la planta: se estimula la resistencia
qumica, impidiendo la germinacin de zoosporas de Phytophtora
cinnamoni y de otros patgenos.
d) Reducen la incidencia de nematodos.
e) Mayor resistencia a la acidez y a la sequa.
f) Aminora la toxicidad de ciertos metales como Al, Cu o Zn.
En recientes investigaciones hemos demostrado que la calidad de los frutos y la
sobrevivencia de las plantas se incrementa significativamente. En caso de papa se
puede reducir la aplicacin de fsforo, se incrementa el grosor de la pared de los
tubrculos, incrementa los tubrculos de primera, y ayuda a controlar el ataque de
patgenos de raz.

Literatura citada

Akiyama, K., Matsuzaki, K., & Hayashi, H. (2005). Plant sesquiterpenes

induce hyphal branching in arbuscularmycorrhizal fungi. Nature, 435(7043),
824-827.

Bcking, H., Liepold, E., &Ambilwade, P. (2012). The role of the Mycorrhizal
Symbiosis in nutrient uptake of plants and the regulatory mechanisms
underlying these transport processes. In Plant Science: InTech.
4

Harrison, M. J. (2005). Signaling in the ArbuscularMycorrhizal Symbiosis.

Annu. Rev. Microbiol., 59, 19-42.

Parniske, M. (2008). Arbuscularmycorrhiza: the mother of plant root

endosymbioses. Nat Rev Microbiol, 6(10), 763-775.

Paszkowski, U. (2006). A journey through signaling in arbuscularmycorrhizal

symbioses.New Phytol, 172(1), 35-46.

Schmitz, A. M., & Harrison, M. J. (2014). Signaling events during initiation of

arbuscularmycorrhizal symbiosis. J Integr Plant Biol, 56(3), 250-261.

Schbler, A., Schwarzott, D., & Walker, C. (2001). A new fungal phylum, the
Glomeromycota: phylogeny and evolution. Mycol. Res., 105(12), 1413-1421.
Smith, S., & Read, D. (2008). Mycorrhizal Symbiosis (Third ed.). London:
Academic Press.

3.3.2. Bacterias promotoras de crecimiento de plantas (PGPRs)

Vctor Olalde Portugal
Naieli Herrera
De manera general, las caractersticas de las PGPR son las siguientes:
a) No requieren de la invasin interna de tejidos de plantas ni de la formacin
de estructuras especializadas.
b) Un segundo criterio para considerar a una rizobacteria como PGPR, es que
sta tenga la capacidad de persistir en el suelo despus de su inoculacin,
ya que una poblacin que disminuye rpidamente en la rizsfera tiene una
baja capacidad competitiva con la microflora nativa del suelo.

c) Quiz, la caracterstica ms importante considerada en la literatura, es que

este tipo de bacterias presenten una capacidad de colonizacin efectiva en
la superficie de la raz para tener un efecto significativo sobre el crecimiento
de la planta (Smith y Goodman, 1999; Yoram, 1999).
Mecanismos de accin de las PGPR.
Conceptualmente y de acuerdo a Kloepper y col. (1989), las bacterias promotoras
del crecimiento pueden tener un impacto favorable sobre el crecimiento y
desarrollo de las plantas por dos vas diferentes: indirectas y directas (Bloemberg
y Lugternberg, 2001).
Promocin directa del crecimiento de plantas.
La promocin directa del crecimiento de plantas, ocurre cuando las PGPR proveen
a la planta de compuestos que son sintetizados por las bacterias o bien facilitan la
disponibilidad de nutrimentos presentes en el suelo a travs de diferentes
mecanismos:
a) Fijacin de nitrgeno (Strenhoudt y Vanderleyden, 2000).
b) Incremento en la disponibilidad de minerales, principalmente fsforo
(Idriss y col., 2002).
c) Sntesis de compuestos reguladores del crecimiento; cido indolactico
(AIA), giberelinas y citocininas (Bari y Okin, 1993; Cassan y col., 2001;
Garca y col., 2001).
d) Sntesis de compuestos de bajo peso molecular menos caracterizados
que modulan el crecimiento y desarrollo de las plantas, por ejemplo,
compuestos voltiles (Ryu y col., 2003).
e) Ha sido sugerido que la secrecin de cido succnico y lctico por cepas
del gnero Pseudomonas pueden actuar directamente estimulando el
crecimiento de plntulas de esprrago (Burd, 2000).
f) Regulacin de los niveles de etileno por accin de la enzima
1-aminociclopropano-1-carboxilato
desaminasa (Shah y col., 1998;
Belimov y col., 2002).
Una bacteria en particular puede promover el crecimiento y desarrollo de la planta,
usando uno o ms de estos mecanismos. Adems, puede utilizar diferentes
mecanismos en diferentes tiempos durante el ciclo de vida de la planta. La
mayora de las investigaciones realizadas en el mbito de estimulacin del
crecimiento de plantas se han enfocado a la elucidacin de mecanismos
involucrados en el control biolgico y relativamente las bacterias que actan por
estimulacin directa han recibido menos atencin, sin descartar la idea de que
stas representan un enorme potencial para la agricultura.

Colonizacin de las PGPR.

Enfocando la atencin en los mecanismos directos de estimulacin del crecimiento
de plantas, se asume que como prerrequisito es necesaria la adhesin de la
bacteria a la semilla o a la raz de la planta, mostrando la capacidad de las
diferentes cepas de PGPR para colonizar la superficie de la raz y rizsfera. Por
ejemplo, estudios de microscopia electrnica de races de plntulas de canola,
creciendo bajo condiciones axnicas en presencia de la cepa Pseudomonas
putida GR12-2, indican que la adherencia de la bacteria a la superficie de la
semilla fue suficiente para aumentar la elongacin de la raz durante los primeros
das de desarrollo de las plntulas (Hong y col., 1991).
De igual modo, el estudio realizado por Persello-Cartieanux y col. (2001), indica
que la colonizacin de la rizosfera de Arabidopsis thaliana por cepas de
Pseudomonas tienen la capacidad de inducir cambios morfolgicos en la raz
promoviendo de esta manera su desarrollo. Sin embargo, el proceso de
colonizacin puede variar notablemente debido a factores que modifican la
interaccin planta-PGPR. De modo que, la estructura del suelo, el contenido de
humedad, aeracin, pH, genotipo de la planta, actividades y composicin de la
microflora nativa del suelo pueden influir y afectar en magnitud y direccin la
respuesta del crecimiento de la planta posterior a la inoculacin con cepas PGPR
(Buyer y col., 1999; Pillay y Nowak, 1997).
Debido a que la colonizacin de la raz es un proceso activo controlado por
estmulos ambientales, los sistemas planta-PGPR se tornan complejos y con ello,
la oscilacin en el efecto promotor del crecimiento de plantas por variacin en el
proceso de colonizacin, el uso de microorganismos benficos con aplicaciones
prcticas se dificulta. No es raro, que la aplicacin de estas cepas en la rizosfera
muestren inconsistencia en su efecto positivo sobre el desarrollo de las plantas y
en muchos casos se carezca de reproducibilidad.
Es por ello, que un mejor conocimiento en la relacin planta-PGPR es requerido
para seleccionar y optimizar el uso de cepas con actividades fitoestimulantes que
sean estables bajo una gran variedad de condiciones de campo. Bajo este
concepto, se hace necesario el planteamiento de investigaciones que involucren la
identificacin de mensajeros o molcula seal producida por bacterias PGPR que
puedan regular el crecimiento y desarrollo de las plantas.
Reguladores de crecimiento producidos por PGPR.
La evaluacin del efecto promotor por accin de cepas PGPR, es medido en la
mayora de los casos por un incremento en la magnitud de diferentes parmetros
biomtricos, por ejemplo; peso seco del follaje, raz y fruto, rea foliar, nmero de
hojas, altura de la planta entre otros, observando una rpida germinacin de la
semilla, mejor emergencia de la plntula, aceleramiento en su desarrollo e
incremento en el rendimiento del cultivo (Cattelan y col., 1998; Lazarovits y
Nowak, 1997).

El mecanismo que ha sido con mayor frecuencia involucrado para explicar los
efectos de las PGPR antes mencionados, es la produccin de fitohormonas,
enfocando la atencin en la capacidad de diferentes cepas de PGPR para modular
los niveles de etileno en plantas y de producir auxinas, funcionando como
reguladores de crecimiento y desarrollo en plantas.
Produccin de auxinas por PGPR y su efecto en el desarrollo del sistema
radicular.
Las auxinas promueven la diferenciacin de tejido vascular, divisin y elongacin
celular, elongacin de tallos y raz e iniciacin de races adventicias y laterales. En
plantas, la auxina ms abundante es el cido indolactico (AIA), este compuesto
principalmente se sintetiza a partir del triptofano en el meristemo apical y en hojas
jvenes de donde se transporta a travs del floema al resto de los tejidos
vegetales (Glick y col., 1999b). La concentracin de auxinas es crtica para la
repuesta fisiolgica, adems de los factores que influyen en los niveles endgenos
de auxinas, como es la sntesis de novo, degradacin, hidrlisis y formacin de
conjugados, las auxinas secretadas por cepas PGPR pueden funcionar como
fuente exgena para la planta.
Es reconocido que cepas de PGPR de los gneros Azotobacter, Pseudomonas,
Bacillus, Enterobacter y Azospirillum sintetizan AIA y su efecto en plantas
mimetiza los efectos de AIA exgeno. Por otra parte, como se mencion con
anterioridad, la promocin del crecimiento de la raz es uno de los principales
marcadores por el cual el efecto benfico de las PGPR es medido. Dos diferentes
pruebas han sido realizadas para ensayar el efecto del AIA producido por PGPR
sobre el crecimiento de plantas; un mtodo compara los efectos de la inoculacin
de races con mutantes de bacterias que producen niveles alterados de auxinas.
Una segunda prueba vara la cantidad del inculo de una sola cepa, asumiendo
que una alta densidad de inculo significa mayor disponibilidad de AIA para la
planta. Un ejemplo claro, es la aplicacin de la cepa tipo silvestre de
Pseudomonas putida GR12-2 en semillas de canola, que estimula de dos a tres
veces la elongacin de la raz primaria comparada con el control no inoculado, una
mutante sobre-productora de AIA de esta bacteria estimula extensivamente el
desarrollo de races laterales en plntulas de canola (Xie, y col., 1996) y de races
adventicias en frjol (Mayak y col., 1997).
Otro ejemplo, de la influencia positiva en el desarrollo del sistema radicular es la
aplicacin de la cepa de Azospirillum brasilense que incrementa el nmero y
longitud de races laterales en trigo (Barbieri y Galli, 1993). Estos reportes nos
indican que la produccin de AIA por bacterias PGPR en la rizsfera es importante
para determinar el efecto de stas sobre la morfologa de la raz, asociado a la
especie de la planta y al estado de desarrollo del sistema radicular.

Modulacin de los niveles de etileno en plantas por PGPR y su efecto en el

desarrollo del sistema radicular.
El etileno (CH2= CH2) es un gas importante que acta como regulador del
crecimiento vegetal, as como para responder a condiciones de estrs (Deikman,
1997). Se le ha asociado a procesos tan diversos como la maduracin del fruto,
senescencia, abscisin, germinacin, elongacin y desarrollo celular, nodulacin,
y respuesta al ataque de patgenos (Kende y Zeevaart, 1997).
En plantas superiores el etileno se produce a partir de la L-metionina e involucra la
formacin de dos intermediarios, la S-adenosil-L-metionina (SAM) y el cido 1aminociclopropano-1-carboxilato (ACC). Las enzimas involucradas en est
secuencia metablica son la SAM sintetasa, la cual cataliza la conversin de
metionina a SAM y la ACC sintasa, la cual es responsable de la hidrlisis de SAM
a ACC y 5-metiltioadenosina (MTA), finalmente la ACC oxidasa, metaboliza el
ACC a etileno, CO2 y HCN (Yang y Hoffman, 1984).
El patrn de crecimiento observado en plntulas expuestas a etileno es llamado
triple respuesta debido a que se describe un tro de cambios en el crecimiento
nico, que incluye la inhibicin de la elongacin del hipocotilo y raz, la ausencia
de la respuesta geotrpica normal y una curvatura exagerada del pice del tallo,
tambin conocida como gancho apical del hipocotilo. Estas respuestas se han
usado como marcadores fenotpicos para el aislamiento de mutantes en la va de
biosntesis del etileno en Arabidopsis thaliana (Guzmn y Ecker, 1990).
Por otra parte, la investigacin de algunas PGPR que adems de su capacidad de
estimular el desarrollo de las plantas son tambin capaces de disminuir los niveles
de etileno en las mismas. Muchos microorganismos son capaces de utilizar ACC
como un substrato a travs de una nica reaccin. En 1978, una enzima capaz de
degradar el ACC fue aislada de la cepa Pseudomonas sp. ACP, as la ACC
deaminasa ha sido detectada en un gran nmero de rizobacterias, mostrando en
la Tabla 1, algunos ejemplos de estas cepas, las cuales han sido aisladas de
suelo en diferentes zonas geogrficas (Belimov y col., 2002). Muchos de estos
microorganismos fueron identificados por su capacidad de crecer en medio
mnimo mineral conteniendo ACC como nica fuente de nitrgeno (Penrose y
Glick, 2003).

Tabla 1. Ejemplos de rizobacterias que han mostrado actividad de ACC

deaminasa.
gnero y especie

cepa

fuente de aislamiento

Pseudomonas

ACP

Suelo

Pseudomonas putida

GR12-2

suelo de pasto Canadian Arctic

Pseudomonas putida

UW1

suelo de, frijol Waterloo Canada

Enterobacter cloacae

UW2

suelo de trbol Waterloo Canad

Pseudomonas fluorescens

CAL1

suelo de cebolla San Benito, California,

USA

Enterobacter cloacae

CAL3

suelo de algodn, Fresco, California, USA

Kluyvera ascorbata

SUD165

suelos contaminados con metales

Diferentes estudios han revelado el papel de ACC en la interaccin planta-PGPR,

la cepa tipo silvestre de P. putida GR12-2 contiene la enzima ACC deaminasa,
estimulando la elongacin de la raz y reduciendo significativamente los niveles
de ACC de plntulas de canola, en comparacin con semillas no tratadas
(Penrose y col., 2001; Penrose y Glick, 2001). Adicionalmente, los niveles de
ACC en races de plntulas de semillas tratadas con mutantes ACC deaminasa
menos de esta cepa, fue similar al de los controles no tratados. Semillas de canola
fueron tratadas con Escherichia coli expresando un gen de ACC deaminasa
aislado de Enterobacter cloacae, la cual tambin estimulo la elongacin de la raz,
un resultado que demuestra que la capacidad de la bacteria para promover la
elongacin de la raz est directamente relacionado a la presencia de la enzima
ACC deaminasa en la bacteria (Glick, 1994; Shah y col., 1998).
De acuerdo a estas observaciones, Glick y col. (1998), proponen un modelo, por el
cual, las rizobacterias promotoras del crecimiento de plantas pueden disminuir los
niveles de etileno y as estimular el crecimiento de stas. En este modelo, se
postula que ocurre la siguiente secuencia de eventos (Fig. 1); la cepa PGPR unida
a la superficie de semilla o raz de una planta en desarrollo y en respuesta al
triptofano y otras molculas pequeas de los exudados de la semilla y/o raz, las
PGPR sintetizan y secretan AIA, determinada cantidad de AIA bacteriano puede
ser tomado por la planta. Este AIA en conjuncin con el AIA endgeno de la planta
puede estimular la proliferacin y elongacin celular, o inducir a la actividad de la
ACC sintasa para convertir SAM a ACC.

Figura 5. Modelo que representa el papel de la enzima ACC deaminasa en la

interaccin planta-PGPR. AIA: cido indolactico, SAM: S-adenosil-L-metionina,
ACC: cido 1-amino-ciclopropano-1-carboxlico.

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Es postulado que una porcin del ACC producido por esta reaccin puede ser
exudado de la semilla o raz de la planta (junto con otras molculas normalmente
presentes en los exudados), y ser tomado por la bacteria y subsecuentemente ser
hidrolizado por la enzima ACC deaminasa, a amonio y -cetobutirato. La
disponibilidad y rompimiento de ACC por la bacteria promotora disminuye la
cantidad de ACC afuera de la planta, por lo que hay un incremento en la cantidad
del ACC que es exudado por la planta para mantener el equilibrio entre los niveles
de ACC interno y externo.
Este modelo predice que la accin de la enzima ACC deaminasa disminuye la
cantidad de ACC. Dos consecuencias directas que resultan de la disminucin en
los niveles de ACC en la planta son una reduccin en la cantidad de etileno y la
elongacin de la raz. Sugiriendo que la actividad de la enzima ACC deaminasa es
uno de los principales mecanismos que las PGPR usan para tener un efecto
fitoestimulatorio.

Otras molculas reguladoras producidas por PGPR.

La existencia de otro tipo de molculas producidas por cepas PGPR que puedan
funcionar como reguladores de crecimiento en plantas, diferentes a las llamadas
hormonas clsicas ha tomado importancia en los ltimos aos. De esta manera,
el papel que juegan los metabolitos producidos por cepas PGPR que puedan
modificar seales fisiolgicas en plantas es an desconocido, siendo escasos los
estudios que indican el efecto benfico en plantas por molculas reguladoras.
Bai y col. (2002), reportan la produccin de un activador anlogo a un lipoquitooligosacrido (LCO) por la cepa Serratia proteamacuans 1-102, el cual estimula la
germinacin de semillas de soya incrementando el proceso en la formacin de
ndulos, concluyendo que el activador producido por esta cepa puede proveer una
seal, incrementando la calidad en la seal durante el proceso planta-bacteria. De
igual modo, Mathesius y col. (2003), establecen la participacin de la molcula Nacil-homoserina lactona (AHL) producida por Pseudomonas auriginosa y
Sinorhizobium maliloti, la cual induce cambios en la secrecin de compuestos en
Medicago truncatula favoreciendo la interaccin planta-bacteria.
La participacin de este tipo de molculas ha sido referido nicamente a
rizobacterias Gram negativas, por lo que investigaciones que involucren otro grupo
de rizobacterias consideradas como PGPR, podra ayudar a ampliar el
conocimiento en este campo.

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