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UNIVERSIDAD POLITECNICA SALESIANA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA DE LOS


RECURSOS NATURALES
BIOTECNOLOGIA VEGETAL

CULTIVO in-vitro DE MORTIO (Vaccinium floribundum


Kunth) EN MEDIO DE CULTIVO CASERO A BASE DE
JUGO DE PIA Y JUGO DE CAA

Alejandro R.
Cevallos T.
Espn D.
Gamboa K.
Garca J.
Sexto A
14 de enero 2016

INTRODUCCIN
El mortio (Vaccinium floribundum), de la familia Ericaceae, llamado tambin uva de
monte, es una fruta nativa de los pramos ecuatorianos (Lojn, 2003). Es un arbusto
pequeo, generalmente de 1 a 4 m de alto. Posee flores blancas con lneas rosadas,
de unos 5 mm de largo. Sus frutos son bayas globosas de 5 a 10 mm de dimetro, de
color prpura oscuro en la madurez, con cliz persistente en el pice; pulpa comestible
de sabor algo cido, pero agradable, con semillas numerosas, y pequeas (Garca,
2013).
En pramos ecuatorianos es considerada endmica y ha sido utilizada por sus habitantes
desde tiempos inmemoriales principalmente en el Da de los Difuntos para la
elaboracin de la tradicional colada morada. En la actualidad aunque es poco comn se
lo emplea para consumo fresco as como en jugos, mermeladas y dulces. Sus frutos
tienen contenidos importantes de azcares, minerales, antioxidantes, vitaminas del
complejo B, C y minerales como potasio, calcio, y fsforo (Morales, 2011). Por sus
propiedades fsico qumicas presenta la ventaja de ser refrigerado sin alteracin de sus
caractersticas organolpticas y nutricionales, variaciones en peso o volumen, para la
elaboracin posterior de cualquier producto con valor agregado lo cual facilita poder
mantener un mercado permanente, aun fuera de las pocas de cosecha.
En este estudio se lo realiza en dos medios de cultivo como son el de pia y caa; el
medio de pia se lo utiliza al poseer una gran cantidad de nutrientes entre los que
podemos destacar. El calcio el cual participa en los procesos metablicos de absorcin
de otros nutrientes ya que participa en los procesos enzimticos y hormonales, ayuda a
proteger la planta contra el estrs de temperatura alta - el calcio participa en la
induccin de protenas de choque trmico, el hierro es un constituyente de varias
enzimas y algunos pigmentos; ayuda a reducir los nitratos y sulfatos y a la produccin
de energa dentro de la planta (Luchi, 2012).
Estudios han mencionado que este fruto es de crecimiento silvestre y de una pequea
produccin anual, considerando la posibilidad de reproduccin in-vitro, por
multiplicacin vegetativa con medianos resultados (Torres y Trujillo, 2010; Freire,
2004). Para lo cual se ha planteado el objetivo principal de la investigacin es evaluar el
medio de cultivo ptimo para el cultivo in-vitro del mortio.

OBJETIVO GENERAL:
-

Desarrollar un cultivo in vitro de Mortio (Vaccinium floribundum Kunth),


utilizando dos medios de cultivo artesanales a bases de Jugo de Pia y Jugo de
caa.

OBJETIVOS ESPECFICOS:

Desarrollar el protocolo de desinfeccin ptimo para explantes de mortio

(Vaccinium floribundum Kunth).


Evaluar el porcentaje de crecimiento de explantes en funcin del medio.
Determinar el medio de cultivo artesanal ideal para el crecimiento in vitro de
mortio (Vaccinium floribundum Kunth).

METODOLOGA
Preparacin de Medio de cultivo:

Extraer zumo de pia y jugo de caa.


Filtrar varias veces para obtener claridad del medio.
Para preparar un litro de medio, se debe medir 500 ml de jugo de caa con 500

ml de agua.
Para preparar un litro de medio de zumo de pia, se debe medir 600 ml de zumo

de pia con 400 ml de agua.


En el caso de la pia se debe hervir, desnaturalizando la bromelina.
Se aade 45gr de gelatina por litro, para medio de jugo de caa.
Se aade 65gr de gelatina por litro, para medio de zumo de pia.
Se agita y se deja que se cocine.
Posteriormente se dispensa en los frascos de vidrio, que sern para la siembra.
Se autoclava en olla de presin, contando 30 min desde la 1era salida de vapor.
Si su uso no es inmediato, se puede guardar en refrigeracin durante algunas
semanas.

Protocolo de esterilizacin de material:

Para la esterilizacin del instrumental utilizado en la siembra, tanto para semillas


como para yemas. Usado en cada siembra

Siembra
Instrumental:

Vidrio.

Metal

0,1,2,3,4,5
Mtodo
Presin vapor (Autoclavar): con olla de presin por 30 min.
Caractersticas:
Nmero.
Capacidad.
Frasco de Clorox
1
300 ml
Frascos de siembra
16
250 ml
500 ml
Frasco de Alcohol 70%
2
750 ml
Cajas Petri
2
50 ml
700 ml
Frascos de agua hervida
5
500 ml
200 ml
Pinzas
2
Aguja de diseccin
1
Mtodo
Calor seco: Horno de cocina a 70 C x 20 min
Caractersticas:
Nmero.
Tamao
2
5 cm
Papel filtro
6
2
10 cm
Papel cocina

Papel

2
5 cm

10 cm

2
10 cm

20 cm
Papel peridico

2
30 cm

2
40 cm

Protocolos de desinfeccin:
Siembra #0 (16/10/2015)
Explante: Yemas axilares
Procedimiento:
Cortar los segmentos del tallo luego hacer un lavado en agua corriente por tres minutos
con la finalidad de quitar la mayor cantidad de tierra que se encuentra entre las hojas,
sumergir por cinco minutos en alcohol al 70 %, realizar un lavado con agua hervida,
sumergir en hipoclorito de sodio (NaClO) al 2.5% por cinco minutos, realizar cinco
lavados con agua hervida para eliminar restos de reactivos que puedan afectar al
explante en el medio de cultivo estril.
Explante: Semillas
Las semillas se colocaron sobre una toalla de cocina, que fue utilizada como una bosa
de t, para poder sumergir las semillas en las soluciones con reactivos del protocolo de
desinfeccin, una vez hecho esto se hizo un lavado en una mezcla de agua + jabn +
lugol por cinco minutos, luego se hizo un lavado con agua destilada, se sumerge en
alcohol 70% tres minutos, se sumerge en hipoclorito de sodio 2.5% por diez minutos, se
hace cinco lavados en agua hervida y se introduce en el medio de cultivo estril.
Protocolo 1
Siembra
Semillas

Fecha:

Reactivo

1 16/10/201

Agua +

Jabn
Lquido +
Lugol.
Alcohol

TIEMPO

[]
300
l1
70%

Exposicin

Contaminacin
+++

ml*
5 min

5 min

(NaClO)
Agua hervida

2.5%
300 ml

10 min
* 5 min *3

l
Agua
corriente
Siembra 1

16/10/201

Yemas

Alcohol
(NaClO)
Agua
destilada

300

ml

70%
2.5%
300 ml
l1

3 min
3 min

+++

*
3 min *3

Siembra #1 (7/11/2015)
Explante: Yemas axilares
Procedimiento:
Los tallos con presencia de yemas axilares se lavaron en una mezcla de agua de la llave
+ jabn lquido por tres minutos, cinco minutos con la finalidad de quitar la mayor
cantidad de tierra que se encuentra entre las hojas, se cort los tallos en segmentos de 3
cm de largo, se los sumergi por cinco minutos en alcohol al 70 %, luego se los lav
con agua hervida, y se los sumergi en Clorox al 10% por cinco minutos, y se realiz
tres lavados con agua hervida cada lavado por 5 minutos. Se realiz los cortes del tallo
dentro de una solucin de agua + jugo de limn antes de introducir los explantes en el
medio
Explante: Semillas
Las semillas se colocaron sobre una toalla de cocina, que fue utilizada como una bosa
de t, para poder sumergir las semillas en las soluciones primero se hizo un lavado en
una mezcla de agua + jabn por cinco minutos en agitacin, luego se hizo un lavado con
agua destilada para quitar toda el agua con jabn, se sumerge en alcohol 70% cinco
minutos, se sumerge Clorox al 10% por cinco minutos, se hace cinco lavados en agua
hervida cada uno de 5 minutos y se introduce en el medio de cultivo estril.

Protocolo 2

Fecha:

[]

Agua +

500

Jabn
Lquido
Agua hervida
Siembra
Semillas

TIEMPO

Reactivo

ml*

l1

Alcohol
Clorox
Agua hervida

500

70%
10%
500

min

agitacin
ml*
-

l1

7/11/2015

Contaminacin

Exposicin

5 min
5 min
ml * 5 min *3

l1
Agua +
Jabn
Lquido
Agua hervida
Siembra 2
Yemas

500

ml*

500

Alcohol
Clorox
Agua
destilada

ml

70%
10%
500 ml
l1

min

agitacin
*
-

l1

7/11/2015

5 min
5 min
*
5 min *3

Siembra #2 (13/11/2015)
Explante: Yemas axilares
Procedimiento:
Los tallos con presencia de yemas axilares se lavaron en una mezcla de agua de la llave
+ jabn lquido por cinco minutos con agitacin en cada minuto, con la finalidad de
quitar la mayor cantidad de impurezas y tierra que se encuentra entre adherida a los tallo
y las hojas, para lo cual se cort los tallos en segmentos de 3 cm de largo, se los
sumergi por cinco minutos en alcohol al 70 %, luego se los lav con agua hervida, y se
los sumergi en Clorox al 10% por cinco minutos, y se realiz tres lavados con agua

hervida cada lavado por 5 minutos. Se realiz los cortes del tallo dentro de una solucin
de agua + jugo de limn antes de introducir los explantes en el medio.
Explante: Semillas
Las semillas se colocaron sobre una toalla de cocina, que fue utilizada como una bosa
de t, para poder sumergir las semillas en las soluciones primero se hizo un lavado en
una mezcla de agua + jabn por cinco minutos en agitacin, luego se hizo un lavado con
agua destilada para quitar toda el agua con jabn, luego se sumerge en alcohol 70%
cinco minutos, se sumerge Clorox al 10% por cinco minutos, se hace tres lavados en
agua hervida cada uno por 5 minutos y se introduce en el medio de cultivo estril.
Protocolo

Fecha:

Reactivo

TIEMPO

[]

Agua +
Jabn
Siembra 2
Semillas

Lquido
Agua
13/11/2015

hervida
Alcohol
Clorox
Agua
hervida

1
500 ml* l

Siembra 2
Yemas

Lquido
Agua
13/11/2015

hervida
Alcohol
Clorox
Agua
destilada

Caa

min

70%
10%

5 min
5 min
5 min *3

1
500 ml * l

1
ml* l

agitacin
-

- -

min

agitacin

1
500 ml * l

70%
10%

5 min
5 min

1
500 ml * l

5 min *3

Siembra #3 (06/12/2015) - Coloracin Roja


Preparacin del medio de cultivo

500 ml* l

Agua +
Jabn

Contaminacin

Exposicin

--

Se procedi a filtrar el jugo de caa puro en papel filtro hasta obtener un color ms
claro, se coloc 500ml en una olla a la que se aadi 500ml de agua; para que
gelifique se aadi 45g de gelatina sin sabor (Gelhada) al final para dar la
coloracin deseada se utiliz colorante vegetal 3-4 gotas.
Pia
Se procedi a filtrar el jugo de pia extrado ese momento en papel filtro hasta
obtener un color ms claro, se coloc 300ml en una olla y se llev a ebullicin por
poco tiempo para que se desnaturalice la bromelina; posteriormente se aadi
700ml de agua; para que gelifique se aadi 60g de gelatina sin sabor (Gelhada) al
final para dar la coloracin deseada se utiliz colorante vegetal 3-4 gotas.
Protocolo de desinfeccin
Yemas axilares
Procedimiento: Los tallos con presencia de yemas axilares se lavaron en agua corriente
para retirar restos de tierra e impurezas, luego se sumergi en una mezcla de agua de la
llave + jabn lquido a la vez que con ayuda de un cepillo dental suavemente
fregbamos el los tallos con yemas, esto por cinco minutos, con la finalidad de quitar
mayor cantidad de impurezas y tierra que se encuentra entre adherida a los tallo y las
hojas, luego a los segmentos de tallo (3 cm), se los sumergi por cinco minutos en
alcohol al 70 %, luego se los sumergi en Clorox (hipoclorito de sodio) al 10% por
cinco minutos, y posteriormente se realiz tres lavados con agua hervida cada lavado
por 5 minutos, pare retirar totalmente un exceso de qumicos que afecten al explante. Se
realiz los cortes del tallo dentro de una solucin de agua + jugo de limn antes de
introducir los explantes en el medio.
Semillas
Las semillas obtenidas anteriormente(secas) fueron rehidratas desde el da anterior, a
estas se las coloco sobre papel de cocina, que fue utilizado como una bosa de t, para
poder sumergir las semillas en las soluciones con reactivos del protocolo de
desinfeccin; el cual consista en un lavado de la mezcla de agua + jabn por cinco
minutos, luego se las sumerge en alcohol 70% tres minutos, se sumerge en Clorox
(hipoclorito de sodio) al 10% por 5 minutos, se hace tres lavados en agua hervida y se
introduce en el medio de cultivo estril.
Protocolo
B
Siembra 3
Semillas

Fecha:

Reactivo

06/12/201
5

Agua +
Jabn
Lquido
Agua
hervida

TIEMPO
Exposicin

Contaminacin

5 min +
agitacin

[]
500 ml* l
500 ml* l

Alcohol
Clorox
Agua
hervida

Siembra 3
Yemas

06/12/201
5

Agua +
Jabn
Lquido
Agua
hervida
Alcohol
Clorox
Agua
destilada

70%
10%
1

500 ml * l

1
ml* l

5 min
5 min
5 min *3

5 min +
agitacin

500 ml * l
70%
10%

++

5 min
5 min

1
500 ml * l

5 min *3

Siembra #4 (12/12/2015)
Explante: Yemas axilares
Procedimiento:
Los tallos con presencia de yemas axilares se lavaron en una mezcla de agua de la llave
+ jabn lquido por tres minutos con la finalidad de quitar la mayor cantidad de tierra
que se encuentra entre las hojas, se cort los tallos en segmentos de 3 cm de largo, se los
sumergi por cinco minutos en alcohol al 70 %, luego se los lav con agua hervida, y se
los sumergi en Clorox al 10% por cinco minutos, y se realiz tres lavados con agua
hervida cada lavado por 5 minutos. Se realiz los cortes del tallo dentro de una solucin
de agua + jugo de limn como antioxidante antes de introducir los explantes en el medio

Explante: Semillas
Las semillas se colocaron sobre una toalla de cocina, que fue utilizada como una bolsa
de t, para poder sumergir las semillas en las soluciones primero se hizo un lavado en
una mezcla de agua + jabn por cinco minutos en agitacin, luego se hizo un lavado con
agua destilada para quitar toda el agua con jabn, se sumerge en alcohol 70% cinco
minutos, se sumerge Clorox al 10% por cinco minutos, se hace cinco lavados en agua
hervida cada uno de 5 minutos y se introduce en el medio de cultivo estril.
Protocolo

Fecha

Siembra # 4 12/12/2015
Semillas

Reactivo

[]

Agua +
Jabn
Lquido

500

Alcohol

70%

l1

TIEMPO
Contaminacin
Exposicin
ml* 5
min
+
agitacin
3 frascos no
5 min

Clorox
Agua hervida

10%
500

5 min
ml * 5 min *3

l1
Siembra # 4
Yemas

2/12/2015

Agua +
Jabn
Lquido
Agua hervida

500

ml* 5
min
agitacin

500

ml

+ +

* -

l
Alcohol
Clorox
Agua
destilada

70%
10%
500 ml

5 min
5 min
* 5 min *3

l1

Protocolo de esterilizacin de material:


Para la esterilizacin del instrumental utilizado en la siembra, tanto para semillas como
para yemas

Siembra # 4
Instrumental:
Vidrio.

Metal
Papel

12/12/2015
Mtodo
Presin vapor (Autoclavar): con olla de presin por 30 min.
Caractersticas:
Nmero.
Capacidad.
Frasco de Clorox
1
300 ml
Frascos de siembra
16
250 ml
Frasco de Alcohol 70%
2
500 ml
750 ml
Cajas Petri
2
50 ml
Frascos de agua hervida
5
700 ml
500 ml
200 ml
Pinzas
2
Aguja de diseccin
1
Mtodo
Calor seco: Horno de cocina a 70 C x 20 min
Caractersticas:
Nmero.
Tamao
2
Papel filtro
6
5 cm
2
10 cm

Papel cocina

2
5 cm

10 cm
Papel peridico

2
10 cm

20 cm

2
30 cm

2
40 cm

Siembra #5 (20/12/2015) - Coloracin Roja


Preparacin del medio de cultivo jugo de caa + carbn
Se procedi a filtrar el jugo de caa puro en papel filtro hasta obtener un color ms
claro, se coloc 500ml en una olla, ms 45 g de gelatina sin sabor y 0.03 g de carbn
activado que es un compuesto antioxidante ya que contribuye a absorber compuestos
fenlicos. Se adiciona en concentraciones cercanas al 0.1 - 3% (peso/vol), (Sharry,
Adema, & Abedini, 2015). Luego se aaden los 500ml de agua y se procede a calentar
hasta homogenizar la mezcla por aproximadamente 10 minutos.
Volumen Final: 1 L

Elaboracin Medio de Cultivo Jugo de Caa + Carbn


Explante

Medio
artesanal

Jugo de
Pia (L)

Gelatina
(g/L)

Carbn
3% (p/v)

Agua
(L)

Lquido vertido
en el recipiente
(0,125 L)

C(S 5.1)

Caa +
Carbn

0,0625

5,625

0,00375

0,0625

0,125

C(S 5.2)

Caa +
Carbn

0,0625

5,625

0,00375

0,0625

0,125

C(S 5.3)

Caa +
Carbn

0,0625

5,625

0,00375

0,0625

0,125

C(S 5.4)

Caa +
Carbn

Total de componentes
utilizados

0,0625

5,625

0,00375

0,0625

0,25 L

22,5 g

0,015 g

0,25 L

0,125

Elaboracin Medio de Cultivo Jugo de Pia + Carbn


Se procedi a filtrar el jugo de pia puro en papel filtro hasta obtener un color ms
claro, se coloc 500ml en una olla, ms 75 g de gelatina sin sabor y 0.03 g de carbn
activado que es un compuesto antioxidante ya que contribuye a absorber compuestos
fenlicos. Se adiciona en concentraciones cercanas al 0.1 - 3% (peso/vol), (Sharry,
Adema, & Abedini, 2015). Luego se aaden los 500ml de agua y se procede a calentar
hasta homogenizar la mezcla, por aproximadamente unos 20 minutos para favorecer a la
desnaturalizacin de la Bromelina y que no afecte a la gelificacin.
Volumen Final: 1 L
Elaboracin Medio de Cultivo Jugo de Pia + Carbn
Explante
Medio
Jugo de
Gelatina
Carbn 3%
artesanal
Pia (L)
(g/L)
(p/v)

Agua
(L)

Lquido vertido
en el recipiente
(0,125 L)

P(S 5.1)

Pia + Carbn

0,0625 L

9,375 g

0,00375 g

0,0625
L

0,125 L

P(S 5.2)

Pia + Carbn

0,0625 L

9,375 g

0,00375 g

0,0625
L

0,125 L

P(S 5.3)

Pia + Carbn

0,0625 L

9,375 g

0,00375 g

0,0625
L

0,125 L

P(S 5.4)

Pia + Carbn

0,0625 L

9,375 g

0,00375 g

0,0625
L

0,125 L

0,25 L

22,5 g

0,015 g

0,25 L

Total de componentes
utilizados

Protocolos de desinfeccin:
Explante: Yemas axilares
Procedimiento: Los tallos con presencia de yemas axilares se lavaron en agua corriente
para retirar restos de tierra e impurezas, luego se sumergi en una mezcla de agua de la
llave + jabn lquido a la vez que con ayuda de un cepillo dental suavemente se restreg
los tallos con yemas, esto por cinco minutos, con la finalidad de quitar mayor cantidad

PROTOCOLO DE DESINFECCIN "SEMILLAS

de
Lavado
ALCOHOL Tiempo
[NaClO] Tiempo
Explante PROTOCOLO
Agua
exposicin %v/v
Exposicin
DESINFECCIN
%v/v
Hervida
(S 5.1)
C
70%
1 min
20%
10 min
x3
(S 5.2)
C
70%
1 min
20%
10 min
x3
(S 5.3)
C
70%
1 min
20%
10 min
x3
(S 5.4)
C
70%
1 min
20%
10 min
x3
impurezas y tierra que se encuentra adherida a los tallo y las hojas, luego a los
segmentos de tallo (3 cm), se los sumergi por 1 minuto en alcohol al 70 %, luego se los
sumergi en Clorox (hipoclorito de sodio) al 20% por 10 minutos, y posteriormente se
realiz tres lavados con agua hervida cada lavado por 5 minutos, pare retirar totalmente
un exceso de qumicos que afecten al explante. Se realiz los cortes del tallo dentro de
PROTOCOLO DE DESINFECCIN "YEMAS
Tiempo
ALCOHOL
PROTOCOLO
Explante DESINFECCIN
exposici
%v/v
n
(Y 5.1)
C
70%
1 min
(Y 5.2)
C
70%
1 min
(Y 5.3)
C
70%
1 min
(Y 5.4)
C
70%
1 min

Lavado

[NaClO] Tiempo
Agua
%v/v
Exposicin

20%
20%
20%
20%

10 min
10 min
10 min
10 min

Hervida
x3
x3
x3
x3

una solucin de agua + jugo de limn antes de introducir los explantes en el medio.

Explante: Semillas
Las semillas obtenidas anteriormente (secas) fueron rehidratas desde el da anterior, a
estas se las coloco sobre papel de cocina, que fue utilizado como una bosa de t, para
poder sumergir las semillas en las soluciones con reactivos del protocolo de
desinfeccin; el cual consista en un lavado de la mezcla de agua + jabn por cinco
minutos, luego se las sumerge en alcohol 70% 1 minuto, se sumerge en Clorox
(hipoclorito de sodio) al 20% por 10 minutos, se hace tres lavados en agua hervida y se
introduce en el medio de cultivo estril.

CONCLSIONES:
BIBLIOGRAFIA
Garca, J. A. (14 de Febreo de 2013). Recuperado el 11 de Noviembre de 2015, de
http://kanobosur.blogspot.com/2013/02/arbol-frutal-chivacu.html
Lojn, L. 2003. El verdor de los andes ecuatorianos: realidades y promesas. Proyecto
Desarrollo Forestal Participativo en los Andes, pg. 296.
Luchi, R. (30 de Mayo de 2012). Recuperado el 11 de Noviembre de 2015, de
http://urandia.blogspot.com/2012/05/hierbas-del-planeta-sol-segun-william_30.html
Morales, A. 20022011. Frutoterapia, nutricin y salud Plus Vitae. EDAF del Plata,
MadridEspaa, primera edicin, pg. 212
Torres, M. L. y D. Trujillo. 2010. Cultivo in vitro del mortio (Vaccinium floribundum),
Universidad SanFrancisco de Quito, Quito, Ecuador, pgs. 915

ANEXOS.
Imgenes siembra 0. (16/10/2015).

Fig. 1. Distribucin yemas y contaminacin.

Fig. 2. Distribucin semillas.

Fig. 3. Contaminacin yemas.

Fig. 4. Contaminacin semillas.

Tabla 1. Resultados de la siembra 0. (16/10/2015).

Imgenes siembra 1. (07/11/2015).

Fig. 5. Distribucin yemas

Fig. 6. Distribucin semillas.

Fig. 7. Contaminacin yemas.

Fig. 8. Contaminacin semillas.

Tabla 2. Resultados de la siembra 1. (07/11/2015).

Imgenes siembra 2. (13/11/2015).

Fig. 9. Distribucin de yemas

Fig. 10. Distribucin semillas.

Fig. 11. Yema no contaminada

Fig. 12. Semillas no contaminadas.

Tabla 3. Resultados de la siembra 2. (13/11/2015).

Imgenes siembra 3. (06/12/2015) Coloracin roja

Fig. 1. Contaminacin yemas.

Fig. 2. Distribucin yemas.

Fig. 3. Contaminacin semillas

Fig.4. Distribucin semillas

Tabla 4 Resultados de la siembra 3. (06/12/2015) Coloracin roja

ANEXOS.
Imgenes siembra # 4 (12/12/2015)

Fig. 1. Distribucin semillas

Fig. 2. Distribucin semillas sin contaminacin

Fig. 3. Contaminacin semillas.

Fig. 4. Frascos de semillas sin contaminacin

Fig. 1. Yemas contaminadas en medio de pia.

Tabla 5. Resultados de la siembra # 4 (12/12/2015)

Fig. 2. Yemas contaminadas en medio de caa

T abla 6 Resultados de la siembra 5. (12/12/2015) Carbn Activado