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Caractersticas especiales
Usos principales
Campo claro
Campo oscuro
Comnmente
usado
para
examinar microorganismos vivos
que
sean
invisibles
al
microscopio de campo claro, que
sean difciles de teir o que se
alteren por la tincin; usado a
menudo para detectar Treponema
pallidum.
Contraste de fases
Fluorescencia
Electrnico
2.-
b).-
c).-
1.-Tincin simple: es aquella que hace uso de un slo tipo de colorante y sirve para
observar tamao y forma celular. Las ms comunes son la de azul de metileno,
carbolfucsina, cristal violeta y safranina.
Tcnica:
-frotis y fijacin de la muestra
-colorante durante un minuto
-lavar con agua para retirar exceso de colorante
-dejar secar al aire
-observar al microscpio de inmersin
mucho menor de pptidoglicano con ligaduras cruzadas menos extensas, lo que le da una
consistencia mucho ms laxa que permite la salida del complejo cristal violeta-yodo y la
posterior tincin con safranina. (Cuadro I).
CUADRO I: Reaccin de las clulas Gram (+) y Gram (-), frente a la tincin de Gram.
COLORANTE
Cristal violeta
Lugol
Alcohol
Safranina
GRAM (+)
azul
azul
azul
azul
GRAM (-)
azul
azul
decolorada
rojo
2.2
Otra importante tincin diferencial (que divide a las bacterias en grupos diferenciados) es la
tincin de cido alcohol resistencia. Los microbilogos utilizan esta tincin para identificar
bacterias pertenecientes a los gneros Micobacterium y Nocardia. Aunque muchas
bacterias de este grupo no son patgenas, hay dos miembros que son importantes
productores de enfermedad, Micobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae. La
diferencia principal del Micobacterium y Nocardia con otros microorganismos es que estos
dos gneros poseen ceras e sus paredes celulares.
En la tcnica de tincin de cido alcohol resistencia se aplica sobre la tincin fijada
el colorante rojo carbolfuchsina y el portaobjetos se calienta suavemente sobre la llama
durante varios minutos. El calor facilita la penetracin y retencin del colorante. Se deja
enfriar la preparacin y se lava con agua. A continuacin se trata con cido y alcohol, un
decolorante, que elimina el colorante rojo de las bacterias que no son cido alcohol
resistentes. Las bacterias cido alcohol resistentes retienen el color rojo porque la
corbolfuchsina es ms soluble en las ceras que forman parte de su pared celular que en el
cido alcohol. En las bacterias no cido alcohol resistentes, cuyas paredes carecen de ceras,
la carbolfuchsina es rpidamente eliminada durante la decoloracin, quedando sus clulas
sin teir. La extensin se tie entonces con azul de metileno como colorante de contraste.
Las bacterias que no son cido alcohol resistente aparecen azules tras la tincin de
contraste.
3.- Tinciones Especiales: Sirven para observar estructuras dentro o en el exterior de la
clula bacteriana, inclusiones citoplasmticas como tambin algunos microorganismos que
dadas sus caractersticas especiales no se tien adecuadamente con tcnicas rutinarias.
a. Esporas:
Son muy impermeables a los colorantes, por lo que se hace necesario usar
tcnicas especiales.
Tcnica:
- Frotis y fijacin de la muestra
- Cubrir frotis con papel filtro
- Teir con Verde Malaquita a emisin de vapores por 10 a 15 min.
- Enfriar y lavar con agua
- Aplicar Safranina por 30 segs a 1 min.
- Lavar con agua y secar al aire
- observar al microscopio con objetivo de inmersin
Las esporas aparecen de color verde y la clula vegetativa roja. La vaporizacin del
colorante sobre la muestra incrementa la penetracin de ste en los recubrimientos
impermeables de la espora (Cuadro II).
ESPORA
verde
verde
verde
CLULA VEGETATIVA
verde
decolorada
roja