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MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO DE

BIOQUMICA I

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE QUERTARO

FACULTAD DE MEDICINA

LICENCIATURA EN MEDICINA GENERAL

PROFESOR TITULAR: MIM. Viridiana Sotomayor Villezcas

REGLAMENTO INTERNO DE LABORATORIO


1. Todo el personal de laboratorio: alumnos, instructores, laboratorista y docente,
debern usar en el laboratorio bata blanca limpia.
2. Queda prohibido introducir cualquier alimento, bebida. No se podr comer ni
beber dentro del laboratorio.
3. No colocar sobre la mesa de trabajo, libros, ropa, celulares.
4. Queda prohibido el uso de celulares y aparatos electrnicos dentro del
laboratorio.
5. Todo el material que se utilice en la realizacin de las practicas debe ser lavado
y entregarlo limpio al final de cada sesin.
6. Limpiar su rea de trabajo antes y al finalizar la prctica.
7. No jugar ni adoptar actitudes de juego dentro del laboratorio, as como
conducirse con respeto hacia los compaeros y empleados de la Universidad.
8. Los alumnos son responsables del uso y manejo del material de laboratorio por
lo que si se rompe, pierde u ocurre algn accidente con el material y/o equipo
del laboratorio, el alumno cubrir el importe de este.
9. Siempre que se tenga duda de cmo manejar algn reactivo y/o equipo en el
laboratorio preguntar al profesor.
10. El lmite para la entrada al laboratorio es de 10 minutos despus de la hora de
inicio de la clase.

REPORTE DE PRCTICAS Y EVALUACIN


Para contar con la calificacin aprobatoria en el laboratorio se deber contar con un
80% de las asistencias, el promedio de las calificaciones en sus reportes equivale a un
60% de la calificacin y el otro 40% corresponde a su trabajo en el laboratorio,
participacin, conocimiento de la prctica a realizar.
Se entregara por equipos de 3-4 personas un reporte a la siguiente semana de
realizada la prctica, el cual deber llevar los siguientes puntos y ser evaluado de
acuerdo a los siguientes puntajes:

Objetivo 10%
Antecedentes 20% (incluir toda la informacin necesaria para comprender el
tema, fundamentos, importancia, formulas, valores de referencia, etc.)
Material y Metodologa 30% (escribir la metodologa realizada al momento de la
prctica, cantidades utilizadas, componentes utilizados, etc.)
Clculos y Resultados 20% (incluir la preparacin de soluciones, clculos
realizados con unidades utilizadas, graficas, tablas, etc.)
Conclusiones 15%
Referencias 5% (utilizar fuentes confiables, citar autor, fecha, procedencia)

REGLAMENTO DE ALMACN DE LA FMUAQ


ENCARGADO: Sr. Benjamn Fras Yaez

1. LOS USUARIOS
1.1 Para solicitar material el interesado (a) deber presentar su credencial
vigente que lo acredite como estudiante de la FMUAQ.
1.2 Llenar el vale correspondiente con datos personales del usuario: nombre,
grado, rea y nmero de expediente.
2. LA SOLICITUD
2.1 Al realizar la anotacin del material que se requiera, deber especificar con
claridad la fecha de salida y entrega, seguida de su firma.
2.2 El periodo mximo de entrega ser de 48 horas en el caso de material de
uso general. en caso de usar el material por ms tiempo del establecido, se
requerir de una autorizacin firmada por el maestro correspondiente.
3. LA ENTREGA
3.1 Cada usuario deber entregar personalmente el material que requiri.
3.2 El material se debe entregar en iguales condiciones de las cuales sali del
almacn, no solo en estado fsico, sino limpio y seco.
3.3 En caso de haber solicitado un reactivo y si este se acab, deber entregar
el envase.
3.4 Una vez recibido el material y/o reactivos ser responsabilidad del alumno su
cuidado y resguardo.
3.5 En caso de no entregar el material en la fecha anotada, no se le
proporcionara nuevo material hasta que el primero sea entregado y se har
acreedor a una multa:
1-10 das $2.00
11-20 das - $5.00
21 das en adelante - $20.00 por cada da de retraso.
En caso de requerir el material por ms del tiempo previsto, se podr solicitar
una prorroga solo por una ocasin y con autorizacin del profesor tutor del
laboratorio.
4. EL HORARIO
4.1 El almacn permanece abierto de lunes a viernes de 7:00 a 14:30 horas
4.2 Fuera de este horario no se surtir material, por lo tanto el material que sea
utilizado fuera del horario tendr que ser requerido con anticipacin.

PRACTICA # 1
FLEBOTOMA

OBJETIVO
Realizar la toma de muestra sangunea por puncin venosa y capilar, conocer las
tcnicas y cuidados necesarios para la buena toma de muestra, as como los
fundamentos de la toma de muestra arterial.

INTRODUCCIN
Las venas de un paciente constituyen la principal fuente de especmenes para anlisis
de laboratorio, como punto de entrada de medicamentos, as como el sitio ideal para
transfusiones sanguneas y/o procedimientos intravenosos.
El proceso mediante el cual la sangre es removida de la vena es conocido como
flebotoma. La importancia de la flebotoma reside en que es el primer contacto entre el
laboratorio y sus pacientes, mientras que desde el punto de vista de la muestra, un
proceso cuidadoso conlleva una muestra apropiadamente colectada, as como la
garanta de la seguridad de su origen y el correcto envasado y transporte, factores
necesarios para la correcta evaluacin e informe de los exmenes a realizar.
La toma de muestra de sangre para anlisis de laboratorio se puede realizar mediante
las siguientes tcnicas: venosa o perifrica y capilar. Para la mayora de los exmenes
clnicos, incluyendo hemogramas y dosificacin de hemoglobina, se recomienda utilizar
sangre venosa, mientras que para las frmulas leucocitarias o frotes perifricos puede
extraerse sangre en el lbulo de la oreja o de la yema de un dedo. En los casos de
nios, se recomienda utilizar la yema del dedo gordo del pie o del taln.
MATERIALES Y REACTIVOS
Agujas
Jeringas
Sistema al vaco para toma de muestras (Vacutainer)
Ligas
Torundas con Alcohol
Guantes
Tubos tapa roja

Marcador

METODOLOGA
Despus de la explicacin terica de cmo se debe realizar la toma de muestra
venosa.
Lavarse las manos
Poner en una posicin cmoda al paciente
Verificar que todo lo necesario para la toma se encuentra a la mano
Colocar la liga
Inspeccionar la zona de puncin y seleccionar la mejor vena para la toma de la
muestra, ver la direccin de la vena para puncionar en esa direccin
Realizar la limpieza de la zona a puncionar con un movimiento hacia arriba (no dar
crculos, no tallar la zona), esperar a que seque el alcohol
Introducir la aguja y en el caso de la toma de muestra con jeringa succionar el embolo
para obtener la muestra, en el caso de sistema al vaco colocar el tubo para obtener la
muestra y una vez lleno el tubo se saca el tubo y posteriormente la aguja.
Se coloca una torunda limpia con alcohol y se presiona la zona de puncin durante 5
minutos aproximadamente.
Separar el suero de la muestra, centrifugando por 10 minutos a 3000 rpm.
Poner el suero en un tubo Eppendorf previamente identificado y dejar en congelacin
(el suero ser utilizado para practicas posteriores).

Reportar en los Antecedentes


Qu tipo de tomas de muestra sangunea hay, cuando se utiliza cada una de ellas y
ejemplos de estudios de laboratorio que se realizan de acuerdo a cada una de ellas
(venosa, arterial y capilar)?
Qu problemas se pueden presentar al momento de la toma de muestra?
Qu pasos son indispensables para la toma de muestra sangunea?
Cules son los tubos ms utilizados para la toma de muestra y que aditivos
contienen?
Qu consideraciones ticas hay que tomar en cuenta a la hora de la toma de una
muestra sangunea?

Qu diferencias hay entre la puncin con jeringa y la puncin con equipo al vaco?

PRACTICA # 2
DETERMINACIN DE GLUCOSA

OBJETIVO
Medir los niveles de glucosa en suero por medio de dos tcnicas analticas
(espectrofotomtrica y con glucmetro o electroqumica)

INTRODUCCIN
La determinacin de glucosa es una de las herramientas diagnosticas ms utilizadas e
importantes, sobre todo en un pas como Mxico donde la diabetes es un grave
problema de salud pblica.
La glucosa es la mayor fuente de energa del cuerpo humano. La concentracin de la
glucosa en la sangre est regulada por varias hormonas, incluyendo dos antagonistas:
insulina y glucagn. La cuantificacin de la glucosa en sangre es usada para el
diagnstico de desrdenes del metabolismo de carbohidratos tales como diabetes,
glicemia neonatal, hipoglicemia idioptica y enfermedad pancretica.

MATERIALES Y REACTIVOS
Espectrofotmetro
Glucmetro
Torundas con alcohol
Celdas para espectrofotmetro
Micropipetas
Tubos Eppendorf
Gradilla
Suero sanguneo
Kit para determinacin de Glucosa

METODOLOGA

Primero se determinaran los niveles de glucosa en suero por medio de puncin capilar
y con ayuda de un glucmetro.
Limpiar la zona a puncionar
Realizar la puncin con la lanceta
Formar presionando el dedo del paciente una gota de sangre
Introducir la tira reactiva en el glucmetro
Colocar la gota de sangre
Poner una torunda con alcohol al paciente para detener el sangrado
Ver la lectura de la concentracin de glucosa que marca el glucmetro

Para la determinacin de Glucosa por medio de espectrofotometra, despus de


realizada la pltica y explicacin correspondiente al uso de este equipo y de la
importancia de la glucosa en el diagnstico clnico, se procede a la parte prctica.

Descongelar el suero sanguneo extrado en la prctica anterior


Poner a atemperar los reactivos del kit de glucosa unos 15 minutos antes de la prctica
Leer con mucho cuidado el inserto del fabricante, este documento contiene la
informacin necesaria para la realizacin de la tcnica y cambia dependiendo cada
fabricante, por lo que es muy importante que cada vez que se va a utilizar un kit para la
determinacin de algn analito se sigan las instrucciones del fabricante. Dentro de el
viene el procedimiento a realizar, cantidad de reactivo a utilizar, concentracin de
estndar, interferentes, etc.
Una vez ledo se procede a realizar la metodologa como lo indica el fabricante.
Para la lectura en el espectrofotmetro se calibra y programa este de acuerdo a las
especificaciones mencionadas en la clase.
Realizar la lectura de las muestras
Realizar el clculo de la concentracin de glucosa presente en el suero sanguneo
problema.

Reportar en antecedentes
Cules son los valores normales de glucosa en sangre?
Qu es la espectrofotometra?
Cul es la reaccin llevada a cabo para la determinacin de glucosa?

Qu otras pruebas clnicas pueden ayudar al diagnstico de diabetes?


Qu es una curva de tolerancia a la glucosa?
Dnde se puede medir glucosa (en que fluidos corporales)?
PRACTICA # 3
DETERMINACIN DE COLESTEROL TOTAL, HDL Y LDL

OBJETIVO
Medir los niveles de colesterol total, HDL y LDL en suero por medio de
espectrofotometra.

INTRODUCCIN
Los dos lpidos de la sangre con un mximo inters en el diagnstico clnico son el
colesterol y los triacilgliceroles (TAG), ambos son transportados en lipoprotenas, que
son partculas globulares de alto peso molecular.
Las lipoprotenas principales que circulan en el plasma humano son los quilomicrones,
las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL), las lipoprotenas de baja densidad
(LDL) y las lipoprotenas de alta densidad (HDL).
El colesterol es esencial para el crecimiento y la viabilidad de las clulas de los
organismos superiores ya que forma parte de las membranas celulares, es un
precursor metablicos de los cidos biliares, vitamina D y hormonas esteroideas; sin
embargo, los altos niveles de colesterol srico son considerados como un importante
factor de riesgo de enfermedad y muerte porque contribuyen a la formacin de placas
aterosclerticas.
El colesterol puede provenir de tanto de los alimentos, como de la sntesis por el
cuerpo, en especial de las clulas hepticas e intestinales. La medicin de colesterol
total permite detectar hipercolesterolemia, aislada o asociada a hipertrigliceridemia,
sndrome metablico, etc. O bien se medien sus fracciones la relacin LDL/HDL debe
ser considerada para evaluar el riesgo de desarrollo de enfermedades
cardiovasculares.
MATERIALES Y REACTIVOS
Espectrofotmetro
Celdas para espectrofotmetro
Micropipetas

Tubos Eppendorf
Gradilla
Suero sanguneo
Kit para determinacin de colesterol
METODOLOGA

Para la determinacin de colesterol por medio de espectrofotometra, despus de


realizada la pltica y explicacin correspondiente al uso de este equipo y de la
importancia de la determinacin de colesterol en el diagnstico clnico, se procede a la
parte prctica.
Descongelar el suero sanguneo extrado en la prctica anterior
Poner a atemperar los reactivos del kit de colesterol unos 15 minutos antes de la
prctica
Leer con mucho cuidado el inserto del fabricante, este documento contiene la
informacin necesaria para la realizacin de la tcnica y cambia dependiendo cada
fabricante, por lo que es muy importante que cada vez que se va a utilizar un kit para la
determinacin de algn analito se sigan las instrucciones del fabricante. Dentro de el
viene el procedimiento a realizar, cantidad de reactivo a utilizar, concentracin de
estndar, interferentes, etc.
Una vez ledo se procede a realizar la metodologa como lo indica el fabricante.
Para la lectura en el espectrofotmetro se calibra y programa este de acuerdo a las
especificaciones mencionadas en la clase.
Realizar la lectura de las muestras
Realizar el clculo de la concentracin de glucosa presente en el suero sanguneo
problema.

Reportar en antecedentes
Cules son los valores normales de colesterol en sangre?
Cul es la reaccin llevada a cabo para la determinacin de colesterol?
Qu lipoprotenas transportan al colesterol y cul es su importancia?
Clnicamente por qu es importante la medicin de colesterol total?
Clnicamente por qu es importante la medicin de HDL y LDL?

PRACTICA # 4
DETERMINACIN DE TRIGLICRIDOS EN SUERO SANGUNEO

OBJETIVO
Medir los niveles de triglicridos en suero sanguneo por un mtodo enzimtico.

INTRODUCCIN
La evaluacin de pacientes en los que se sospecha alguna alteracin en los lpidos
plasmticos puede incluir la medicin de colesterol total y TAG y de una o ms
lipoprotenas.
Los triglicridos constituyen el 95% de la grasa que se almacena en los tejidos y su
funcin principal es proveer de energa a las clulas. Los triglicridos se sintetizan tanto
en el intestino a partir de las grasas de la dieta como ene l hgado a partir de los
carbohidratos de la dieta y son transportados al torrente sanguneo por los
quilomicrones y el VLDL.
Niveles elevados de triglicridos en suero se asocian a un mayor riesgo de enfermedad
cardiaca, desordenes del metabolismo lipdico, deficiencia de la actividad de la lipasa,
diabetes, sndrome metablico, desordenes renales o endocrinos.

MATERIALES Y REACTIVOS
Espectrofotmetro
Celdas para espectrofotmetro
Micropipetas
Tubos Eppendorf

Gradilla
Suero sanguneo
Kit para determinacin de triglicridos

METODOLOGA

Para la determinacin de colesterol por medio de espectrofotometra, despus de


realizada la pltica y explicacin correspondiente al uso de este equipo y de la
importancia de la determinacin de colesterol en el diagnstico clnico, se procede a la
parte prctica.
Descongelar el suero sanguneo extrado en la prctica anterior
Poner a atemperar los reactivos del kit de creatinina unos 15 minutos antes de la
prctica
Leer con mucho cuidado el inserto del fabricante, este documento contiene la
informacin necesaria para la realizacin de la tcnica y cambia dependiendo cada
fabricante, por lo que es muy importante que cada vez que se va a utilizar un kit para la
determinacin de algn analito se sigan las instrucciones del fabricante. Dentro de el
viene el procedimiento a realizar, cantidad de reactivo a utilizar, concentracin de
estndar, interferentes, etc.
Una vez ledo se procede a realizar la metodologa como lo indica el fabricante.
Para la lectura en el espectrofotmetro se calibra y programa este de acuerdo a las
especificaciones mencionadas en la clase.
Realizar la lectura de las muestras
Realizar el clculo de la concentracin de glucosa presente en el suero sanguneo
problema.

Reportar en antecedentes
Cules son los valores normales de triglicridos en sangre?
Cul es la reaccin llevada a cabo para la determinacin de triglicridos?
Clnicamente por qu es importante la medicin de triglicridos?
Por qu en pacientes diabticos hay un aumento de triglicridos?

PRACTICA # 5
DETERMINACIN DE CREATININA EN SUERO SANGUNEO

OBJETIVO
Medir los niveles de creatinina en suero sanguneo por un mtodo colorimtrico.

INTRODUCCIN
La creatinina es un compuesto orgnico generado a partir de la degradacin de la
creatina (que es un nutriente til para los msculos). Es un producto de desecho del
metabolismo normal de los msculos que usualmente es producida por el cuerpo en
una tasa muy constante (dependiendo de la masa de los msculos), y normalmente
filtrada por los riones y excretada en la orina.
Es un excelente marcador de funcin renal. Un ndice alto de creatinina en suero
(asociado a un ndice alto de urea) corresponde a u a disminucin en la filtracin
glomerular en el rion (FGR). La determinacin de creatinina es ms fiable que la
prueba de urea, ya que el ndice de urea en suero se ve afectado por varios factores
como la dieta, grado de deshidratacin y el metabolismo de protenas (el ndice de
creatinina no es afectado por estos factores).
La medicin de niveles de creatinina puede ayuda a medir la FGR, observar necrosis
muscular, etc.

MATERIALES Y REACTIVOS
Espectrofotmetro
Celdas para espectrofotmetro
Micropipetas

Tubos Eppendorf
Gradilla
Suero sanguneo
Kit para determinacin de creatinina

METODOLOGA

Para la determinacin de colesterol por medio de espectrofotometra, despus de


realizada la pltica y explicacin correspondiente al uso de este equipo y de la
importancia de la determinacin de colesterol en el diagnstico clnico, se procede a la
parte prctica.
Descongelar el suero sanguneo extrado en la prctica anterior
Poner a atemperar los reactivos del kit de creatinina unos 15 minutos antes de la
prctica
Leer con mucho cuidado el inserto del fabricante, este documento contiene la
informacin necesaria para la realizacin de la tcnica y cambia dependiendo cada
fabricante, por lo que es muy importante que cada vez que se va a utilizar un kit para la
determinacin de algn analito se sigan las instrucciones del fabricante. Dentro de el
viene el procedimiento a realizar, cantidad de reactivo a utilizar, concentracin de
estndar, interferentes, etc.
Una vez ledo se procede a realizar la metodologa como lo indica el fabricante.
Para la lectura en el espectrofotmetro se calibra y programa este de acuerdo a las
especificaciones mencionadas en la clase.
Realizar la lectura de las muestras
Realizar el clculo de la concentracin de glucosa presente en el suero sanguneo
problema.

Reportar en antecedentes
Cules son los valores normales de creatinina en sangre?
Qu es un mtodo colorimtrico-cintico?
Clnicamente por qu es importante la medicin de creatinina?

Qu es y por qu se realiza la depuracin de creatinina?

PRACTICA # 6
DETERMINACIN DE CIDO RICO EN SUERO SANGUNEO

OBJETIVO
Medir los niveles de cido rico en suero sanguneo por un mtodo colorimtrico.

INTRODUCCIN
El cido rico (AU) es el producto final del catabolismo de los nucletidos puricos
(adenosina y guanina) endgeno y exgeno (de origen alimenticio). Esta
transformacin ocurre fundamentalmente en el hgado. Aproximadamente el 75% del
AU se elimina por los riones, el resto se libera en el tracto gastrointestinal donde es
degradado por enzimas bacterianas.
El AU es muy poco soluble en agua, por lo que cuando sus niveles aumentan, en orina
pueden aparecer cristales de urato. Este fenmeno tambin puede ocurrir en plasma,
los cristales se depositan principalmente en las articulaciones provocando
inflamaciones dolorosas (gota).
El aumento de AU puede deberse a un aumento en la sntesis de purinas, desordenes
metablicos (por ejemplo sndrome de Lesh-Nyhan), tumores, leucemia, soriasis,
drogas citotxicas y fallo renal.
La disminucin de AU es menos frecuente pero puede deberse a fallo renal, sndrome
de Fanconi, enfermedad de Hodgkin.

MATERIALES Y REACTIVOS
Espectrofotmetro
Celdas para espectrofotmetro

Micropipetas
Tubos Eppendorf
Gradilla
Suero sanguneo
Kit para determinacin de cido rico
METODOLOGA
Para la determinacin de colesterol por medio de espectrofotometra, despus de
realizada la pltica y explicacin correspondiente al uso de este equipo y de la
importancia de la determinacin de cido rico en el diagnstico clnico, se procede a la
parte prctica.
Descongelar el suero sanguneo extrado en la prctica anterior
Poner a atemperar los reactivos del kit de AU unos 15 minutos antes de la prctica
Leer con mucho cuidado el inserto del fabricante, este documento contiene la
informacin necesaria para la realizacin de la tcnica y cambia dependiendo cada
fabricante, por lo que es muy importante que cada vez que se va a utilizar un kit para la
determinacin de algn analito se sigan las instrucciones del fabricante. Dentro de el
viene el procedimiento a realizar, cantidad de reactivo a utilizar, concentracin de
estndar, interferentes, etc.
Una vez ledo se procede a realizar la metodologa como lo indica el fabricante.
Para la lectura en el espectrofotmetro se calibra y programa este de acuerdo a las
especificaciones mencionadas en la clase.
Realizar la lectura de las muestras
Realizar el clculo de la concentracin de glucosa presente en el suero sanguneo
problema.

Reportar en antecedentes
Cules son los valores normales de cido rico en sangre?
Clnicamente por qu es importante la medicin de cido rico?
Qu padecimientos estn relacionados con los cambios en los niveles de cido rico?

PRACTICA # 7
DETERMINACIN DE TRANSAMINASAS HEPTICAS SUERO SANGUNEO

OBJETIVO
Comprender la importancia de la determinacin de transaminasas hepticas y realizar
su medicin por medio de un mtodo enzimtico.
INTRODUCCIN
El hgado es el rgano ms grande del cuerpo humano y uno de los ms importantes
en cuanto a la actividad metablica que desarrolla en el organismo. Entre sus
innumerables funciones se destacan:
1) Almacenamiento de glucgeno
2) Sntesis de cidos grasos (AG) y conversin a cetonas, formacin de lipoprotenas,
colesterol y fosfolpidos
3) Sntesis de protenas plasmticas, conversin y desaminacin de aminocidos y
formacin de urea
4) Metabolismo y almacn de vitaminas
5) Sntesis, liberacin y degradacin factores de coagulacin
6) Catabolismo y excrecin de hormonas
7) Detoxificacin de sustancias endgenas (Bilirrubina), bacterias, subproductos y
sustancias exgenas (frmacos)
8) Formacin de bilis: secretora y excretora
9) Mantenimiento del balance hidroelectroltico
En la prctica clnica las pruebas de funcin heptica se pueden dividir en:
a) Pruebas que informan sobre posible lesin hepatocelular o citlisis
b) Pruebas relacionadas con el metabolismo de la bilirrubina (captacin, conjugacin y
excrecin), as como del stasis biliar (colestasis)

c) Pruebas que analizan la sntesis heptica de sustancias necesarias para el


funcionalismo corporal.
Entre las pruebas que informan de lesin hepatocelular o citlisis destacan las
transaminasas o aminotransferasas. stas representan enzimas del metabolismo
intermedio, que catalizan la transferencia de grupos amino del cido asprtico o alanina
al cido acetoglutrico, formando cido oxalactico y cido pirvico.
En el hgado se producen mltiples reacciones de transaminacin, pero las nicas
transaminasas con valor clnico son dos
1) aspartato-aminotransferasa o transaminasa glutmicooxalactica (AST o GOT) cuya
vida media es de 48 horas
2) alaninoaminotransferasa o transaminasa glutmico-pirvica (ALT o GPT) con una
vida media de 18 horas. La ALT es ms especfica de dao heptico que la AST, debido
a que la primera se localiza casi exclusivamente en el citosol del hepatocito, mientras
que la AST, adems del citosol y mitocondria, se encuentra en el corazn, msculo
esqueltico, riones, cerebro, pncreas, pulmn, eritrocitos y leucocitos.
La elevacin srica de transaminasas se correlaciona con el vertido a la sangre del
contenido enzimtico de los hepatocitos afectados, aunque la gradacin de la elevacin
enzimtica puede no relacionarse con la gravedad lesin. As, pues, se puede
considerar la enfermedad heptica como la causa ms importante del aumento de la
actividad de la ALT y frecuente del aumento de la actividad de la AST.

MATERIALES Y REACTIVOS
Espectrofotmetro
Celdas para espectrofotmetro
Micropipetas
Tubos Eppendorf
Gradilla
Suero sanguneo
Kit para determinacin de cido rico

METODOLOGA
Para la determinacin de las transaminasas hepaticas por medio de
espectrofotometra, despus de realizada la pltica y explicacin correspondiente al
uso de este equipo y de la importancia de la determinacin de estas enzimas en el
diagnstico clnico, se procede a la parte prctica.

Descongelar el suero sanguneo extrado en la prctica anterior


Poner a atemperar los reactivos del kit ambos kits ALT y AST unos 15 minutos antes de
la prctica
Leer con mucho cuidado cada uno de los insertos del fabricante, este documento
contiene la informacin necesaria para la realizacin de la tcnica y cambia
dependiendo cada fabricante, por lo que es muy importante que cada vez que se va a
utilizar un kit para la determinacin de algn analito se sigan las instrucciones del
fabricante. Dentro de el viene el procedimiento a realizar, cantidad de reactivo a utilizar,
concentracin de estndar, interferentes, etc.
Una vez ledo se procede a realizar la metodologa como lo indica el fabricante.
Para la lectura en el espectrofotmetro se calibra y programa este de acuerdo a las
especificaciones mencionadas en la clase.
Realizar la lectura de las muestras
Realizar el clculo de la concentracin de glucosa presente en el suero sanguneo
problema.

Reportar en antecedentes
Cules son los valores normales de estas enzimas en sangre?
Clnicamente por qu es importante la medicin de cada una?
Qu otras enzimas se pueden medir para ver funcionamiento heptico?

PRACTICA # 8
USO DE LA CROMATOGRAFA PARA DIAGNOSTICO CLNICO

OBJETIVO
Utilizar la tcnica de cromatografa para la separacin de aminocidos y comprender
como esta tcnica es de suma importancia para diagnstico clnico de enfermedades.

INTRODUCCIN
La cromatografa como se vio el semestre pasado es una tcnica de separacin de
compuestos, la cual puede ser de gran utilidad en distintas reas como el ramo
ambiental, alimenticio, farmacutico y clnico.
Esta tcnica es utilizada para el diagnstico de patologas y una de las ms relevantes
en el mbito clnico es el tamiz metablico neonatal.
El tamiz metabolico neonatal es una prueba clnica til para detectar los Errores Innatos
del metabolismo (EIM).
Los (EIM) son patologas debidas a anormalidades genticas, que son provocadas en
el individuo por la deficiencia en la produccin de enzimas o la anormal produccin de
protenas de transporte, produciendo as una deficiencia metablica.
Los EIM tienen un patrn de herencia autosmica recesiva, por lo que se estima que un
25% de la descendencia se vea afectada por los mismos. Dichos errores pueden ser
detectados mediante pruebas de laboratorio, especficamente realizando un tamiz
metablico neonatal. Este tamizaje se debe realizar entre las primeras 24 horas de vida
y un mximo de 1 mes despus del nacimiento, sobre todo para prevenir de ser posible
alguna discapacidad fsica, mental o incluso la muerte en pacientes que presentan EIM.
Existen alrededor de 300 errores innatos del metabolismo descritos, sin embargo solo
se detectan algunos de ellos a travs de los diferentes tipos de tamices implemetados
alrededor del mundo.

MATERIALES Y REACTIVOS
Secadora de cabello

Papel Whatman # 4
Capilares
Vasos de precipitado
Frasco con tapa hermtica y boca ancha
Soluciones de aminocidos (alanina, leucina, glicina y cisteina)
Solucin reveladora de ninhidrina
Solucin de butanol-cido actico- agua 4:1:1

METODOLOGA
Marcar una lnea con lpiz en la parte inferior del papel filtro a una altura de 1.5 cm
Seleccionar 3 aminocidos y una de las muestras problema y colocarlos sobre la lnea
teniendo sumo cuidado de que las gotas no sean muy grandes y quede espacio entre
ellas para que no se junten.
Secar muy bien con la secadora
Repetir 2 veces ms la adicin de carbohidratos y problema y el sacado entre cada
adicin, esto para concentrar las muestras.
Una vez que se han realizado las 3 concentraciones de las muestras, introducir el papel
filtro al frasco al cual previamente se la aadi el disolvente seleccionado.
Cuidar al momento de meter el papel filtro que el nivel de disolvente este por debajo de
las gotas con las muestras.
Cerrar muy bien el frasco y dejar correr la cromatografa hasta que el disolvente llegue
a 1 cm antes del extremo del papel filtro (aprox 30 min)
Sacar el papel filtro y secar muy bien con la secadora de pelo
Llenar el papel filtro con ayuda de un atomizador de la solucin reveladora (Cuidado
por que mancha)
Secar nuevamente el papel filtro con la secadora
Observar los resultados de la cromatografa y anotar que carbohidratos estaban
presentes en la solucin problema.

Reportar en los Antecedentes


Mencione la importancia de la cromatografa en los estudios clnicos

Mencione algunas enfermedades que pueden detectarse con tamiz metablico


neonatal.
Qu especificaciones son importantes al momento de realizar el tamiz metablico
neonatal?

PRACTICA # 9
EXAMEN GENERAL DE ORINA

OBJETIVO
Realizar un examen general de orina, ver las especificaciones preanalticas para dicho
estudio, as como la fase analtica y posanaltica, para llevarlo a cabo de manera
correcta.

INTRODUCCIN
El examen general de orina representa uno de los estudio de diagnstico ms
importantes en el laboratorio clnico. La orina es el fluido corporal ms utilizado ya que
su obtencin es fcil y no invasiva en la mayora de los casos.
El anlisis de un examen general de orina (EGO), puede llevar al diagnstico,
evaluacin y seguimiento de patologas como: trastorno renal, alteraciones
metablicas, sobredosis de frmacos, etc.
Para este examen como para todos los estudios clnicos es de suma importancia tener
en cuenta las indicaciones previas a la recoleccin de la muestra, procesar la muestra
mximo 2 horas despus de emitida la muestra y contar con personal calificado para
llevar a cabo la correcta lectura e interpretacin del anlisis.
El EGO consta de 3 fases, las cuales se vern con detenimiento en el momento de la
elaboracin de la prctica.

METODOLOGA
Explicar la fases del anlisis del EGO y la importancia de una toma de muestra
adecuada, de un anlisis correcto y como y que parmetros de referencia debe incluir
el examen.
Etiquetar la muestra proporcionada por los alumnos, colectada de manera adecuado y
en un recipiente especial para el estudio.
Observar la muestra y ver sus caractersticas macroscpicas.

Pasar 10 mL de la muestra a un tubo de ensayo.


Colocar la tira reactiva por unos segundos dentro de la orina y leer los parmetros
bioqumicos.
Centrifugar la muestra a 2000 rmp por 5 minutos.
Decantar
Tomar una gota de sedimento y colocarlo en un porta objetos
Poner un cubre objetos
Leer al microscopio con el objetivo de 40X y observar los parmetros microscpicos
que se deben reportar en este estudio.

Realizar el reporte del EGO con los parmetros de referencia necesarios.

ANEXOS
BIOSEGURIDAD
OBJETIVO
Conocer el material Peligroso Biolgico infeccioso, su manejo y desecho adecuado, de
acuerdo a las normas mexicanas NOM-087 y NOM-052.
INTRODUCCIN
Residuos peligrosos biolgicos infecciosos
Qu son los residuos peligrosos biolgicos infecciosos?
Los residuos peligrosos biolgicos infecciosos en lo sucesivo (RPBI), son aquellos que
se generan durante las actividades asistenciales a la salud de humanos o animales en
los centros de salud, laboratorios clnicos o de investigacin, bioterios, centros de
enseanza e investigacin, principalmente; que por el contenido de sus componentes
puedan representar un riesgo para la salud y el ambiente.
Cules son considerados los RPBI?
De acuerdo a la Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, son
considerados los siguientes:
La sangre: La sangre y los componentes de sta, slo en su forma lquida, as como los
derivados no comerciales, incluyendo las clulas progenitoras, hematopoyticas y las
fracciones celulares o acelulares de la sangre resultante (hemoderivados).
Los cultivos y cepas de agentes biolgico-infecciosos: Los cultivos generados en los
procedimientos de diagnstico e investigacin, as como los generados en la
produccin y control de agentes biolgico-infecciosos. Utensilios desechables usados
para contener, transferir, inocular y mezclar cultivos de agentes biolgico-infecciosos.
Los patolgicos: Los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven durante las
necropsias, la ciruga o algn otro tipo de intervencin quirrgica, que no se encuentren
en formol. Las muestras biolgicas para anlisis qumico, microbiolgico, citolgico e
histolgico, excluyendo orina y excremento. Los cadveres y partes de animales que
fueron inoculados con agentes enteropatgenos en centros de investigacin y bioterios.

Los residuos no anatmicos


Son residuos no anatmicos los siguientes:
Los recipientes desechables que contengan sangre lquida.
Los materiales de curacin, empapados, saturados, o goteando sangre o cualquiera de
los siguientes fluidos corporales: lquido sinovial, lquido pericrdico, lquido pleural,
lquido Cfalo-Raqudeo o lquido peritoneal.
Los materiales desechables que contengan esputo, secreciones pulmonares y
cualquier material usado para contener stos, de pacientes con sospecha o diagnstico
de tuberculosis o de otra enfermedad infecciosa segn sea determinado por la SSA
mediante memorndum interno o el Boletn Epidemiolgico.
Los materiales desechables que estn empapados, saturados o goteando sangre, o
secreciones de pacientes con sospecha o diagnstico de fiebres hemorrgicas, as
como otras enfermedades infecciosas emergentes segn sea determinado por la SSA
mediante memorndum interno o el Boletn Epidemiolgico.
Materiales absorbentes utilizados en las jaulas de animales que hayan sido expuestos
a agentes enteropatgenos.
Los objetos punzocortantes
Los que han estado en contacto con humanos o animales o sus muestras biolgicas
durante el diagnstico y tratamiento, nicamente: tubos capilares, navajas, lancetas,
agujas de jeringas desechables, agujas hipodrmicas, de sutura, de acupuntura y para
tatuaje, bisturs y estiletes de catter, excepto todo material de vidrio roto utilizado en el
laboratorio, el cual deber desinfectar o esterilizar antes de ser dispuesto como residuo
municipal.
Por qu representan un riesgo a la salud o al ambiente?
Por sus caractersticas, ya que pueden contener agentes biolgicos infecciosos que se
definen como cualquier microorganismo capaz de producir enfermedades cuando esta
presente en concentraciones suficientes (inculo), en un ambiente propicio
(supervivencia), en un hospedero susceptible y en presencia de una va de entrada).
Existe regulacin para los RPBI?
Con la finalidad de prevenir alguna situacin de emergencia debida al mal manejo de
los RPBI, la autoridad Ambiental (SEMARNAT) public el 7 de noviembre de 1995 la
Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-1995, Que establece los requisitos para
la separacin, envasado, almacenamiento, recoleccin, transporte, tratamiento y
disposicin final de los residuos peligrosos biolgico-infecciosos que se generan en
establecimientos que presten atencin mdica.
Debido a que esta Norma present algunos problemas de interpretacin como en su
aplicacin, se gestion en coordinacin con la Secretara de Salud, su modificacin,
derivndose el 1 de noviembre de 2001 el Proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM087-SEMARNAT-SSA1-2000, Proteccin Ambiental - Salud Ambiental Residuos

Peligrosos Biolgico-Infecciosos Clasificacin y especificaciones de manejo. De este


proyecto se derivaron 370 comentarios, mismos que fueron contestados y publicados
en el Diario Oficial de la Federacin el da 20 de enero de 2003.
Finalmente el 17 de febrero de 2003 se publica en el Diario Oficial de la Federacin la
Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccin Ambiental
Salud Ambiental Residuos Peligrosos Biolgico-Infecciosos Clasificacin y
especificaciones de Manejo.
A quines aplica la NOM-087-SEMARANT-SSA1-2002?
Con base en el campo de aplicacin de esta norma es de observancia obligatoria a
todos aquellos que por sus actividades generen los RPBI descritos en la Norma, sin
importar el volumen de sus generacin, aclarando que aquellos que su generacin sea
menor a 25 kilogramos al mes, podrn ubicarse como generadores de Nivel I, esto para
el tiempo de almacenamiento de sus RPBI.
Existe otra Norma Oficial Mexicana donde aparezcan los RPBI?
Existe la Norma Oficial Mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005 que establece las
caractersticas, el procedimiento de identificacin, clasificacin y los listados de los
residuos peligrosos, sin embargo esta es de carcter General, por lo que para los RPBI
prevalecen las condiciones establecidas en la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002.
Cul es la infraestructura para el tratamiento de los RPBI?
A partir de la publicacin de la Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-1995, se
desarroll la infraestructura para el tratamiento de este tipo de residuos, con la
condicin de que dicha norma establece que los residuos denominados patolgicos
sean incinerados, por ese motivo se increment el nmero de hornos para el
tratamiento de los residuos, sin embargo han sido muchos equipos que han cerrado por
no cumplir con los parmetros establecidos en la Norma Oficial Mexicana NOM-098SEMARNAT-2002, Proteccin ambiental-Incineracin de residuos, especificaciones de
operacin y lmites de emisin de contaminantes. Actualmente la incineracin es uno
de los procesos de tratamiento ms observados por las asociaciones no
Gubernamentales por ese motivo se concluye que las empresas que actualmente
cuentan con esta autorizacin son capaces de cumplir con los parmetros establecidos
en la NOM-098.

ESPECTROFOTOMETRA

La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite determinar la


concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las molculas absorben
las radiaciones electromagnticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende
de forma lineal de la concentracin. Para hacer este tipo de medidas se emplea un
espectrofotmetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que

pasa por una solucin y medir la cantidad de luz absorbida por la misma. En esta
prctica se darn a conocer las caractersticas generales y conceptos relacionados con
la espectrofotometra. A continuacin y tras la explicacin del funcionamiento del
espectrofotmetro se harn espectros de absorcin con el fin de determinar la longitud
de onda donde la muestra presenta la mxima absorcin, y tras realizar las
correspondientes rectas de calibrado se cuantificarn las concentraciones de distintas
biomolculas.

El estudio a nivel bioqumico de cualquier biomolcula requiere la utilizacin de


tcnicas analticas que permitan su determinacin cualitativa y cuantitativa, as como su
caracterizacin fsico-qumica y biolgica. Uno de los mtodos ms sencillos,
accesibles, tiles y utilizados es la espectroscopa, en general, y la espectroscopa
ultravioleta-visible, en particular. Se pueden identificar y cuantificar biomolculas en
solucin y en muestras biolgicas, con el empleo
El fundamento de la espectroscopa se debe a la capacidad de las molculas para
absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UVvisible. Las
longitudes de onda de las radiaciones que una molcula puede absorber y la eficiencia
con la que se absorben dependen de la estructura atmica y de las condiciones del
medio (pH, temperatura, fuerza inica, constante dielctrica), por lo que dicha tcnica
constituye un valioso instrumento para la determinacin y caracterizacin de
biomolculas.
En espectroscopa el trmino luz no slo se aplica a la forma visible de radiacin
electromagntica, sino tambin a las formas UV e IR, que son invisibles. En
espectofotometra de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano,
de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm).

FASES ANALTICAS EN EL LABORATORIO CLNICO

El objetivo de los anlisis clnicos, es proporcionar al mdico herramientas que


contribuyan al diagnstico, tratamiento y seguimiento del estado de salud del paciente.
Por ello es muy importante contar con estndares estrictos de calidad dentro de los
laboratorios ya que con ello se asegura que los resultados obtenidos de la muestra
sean confiables.
Un laboratorio clnico debe tener como uno de sus propsitos principales, la produccin
de datos analticos de alta calidad por medio del uso de mediciones analticas que sean
precisas, exactas y adecuadas para tal fin. Para concretar este propsito se hace
necesario la utilizacin de programas de control de calidad interno y externo,
estandarizar procedimientos por medio de manuales y sobre todo tener un estricto
control de todas las fases analticas.
FASE PRE ANALTICA

Se trata de errores no analticos que afectan los resultados y que no reflejan el estado
real del paciente.
Dentro de este tipo de errores se pueden encontrar las siguientes causas:
1. Variables de ciclo biolgico: es importante indicar al paciente y saber que existen
pruebas que estan sujetas a ciclos biolgicos y que de no ser tomadas de
manera adecuado el resultado no ser el deseado. Variacin cclica se refiere a
los cambios en la concentracin de los compuestos analizados, que ocurre de
forma predecible a ciertas horas del da, semana o mes. La variacin rtmica es
tpica de muchas funciones biolgicas; la variacin diurna en el metabolismo de
drogas y la incidencia de infarto al miocardio son dos ejemplos de la importancia
de este campo. La variacin cclica ms reproducible es la circadiana, la cual
ocurre durante el transcurso de un solo da. La variacin cclica durante un
perodo de tiempo mayor que un da (infradiana), tambin puede afectar los
resultados en las pruebas de laboratorio.
2. Variables fsicas relacionadas con el paciente: El ejercicio fsico es una causa
comn controlable de variacin en los resultados de las pruebas de laboratorio.
Dentro de las pruebas qumicas de rutina se ha observado que: el potasio, el
fsforo, la creatinina y las protenas sricas son significativamente alterados por un
perodo breve de ejercicio. Con el ejercicio regular, hay un aumento en las enzimas
relacionadas con la actividad muscular y un aumento en la concentracin de cido
rico en sangre. Es por ello que es sumamente importante recomendarle al paciente
ir en un estado basal a la toma de muestra.
3. Recoleccin de muestras: es muy comn observar errores causados por una mala
toma de muestra, por ello es indispensable tener personal altamente capacitado
para que estas sean obtenidas de manera correcta y si el paciente es quien va a
colectar la muestra (por ejemplo orina) que se le proporcione toda la informacin
necesaria para que este lo haga de manera correcta.
4. Errores causados posterior a la toma de la muestra: es indispensable que la
muestra sea conservada y en caso de ser necesario transportada de manera
correcta. Tambin es comn que la muestra no se proces en el los tiempos
indicados, que sea al identificada, etc.

ETAPA ANALTICA
En esta etapa es muy importante que las tcnicas a utilizar para la
determinacin de cualquier analito, sean las ms adecuadas.
Es importante tambin mantener un estricto control de calidad tanto interno
como externo.
No utilizar reactivos caducos o de dudosa confiabilidad.

Mantener en ptimas condiciones el funcionamiento de los equipos.


Correr diariamente controles de calidad.
Pertenecer a un organismo de control de calidad externo.
Conocer las tcnicas a realizar y seguir siempre las indicaciones del fabricante.
Conservar los reactivos de manera adecuada.
ETAPA POST ANALTICA
La preservacin de la calidad post-analtica es el proceso para verificar la calidad en todos
los procedimientos que se llevan a cabo cuando el reporte sale del laboratorio y queda en
manos del mdico o profesional al cuidado de la salud.
Implica desde el uso de intervalos de referencia correctos, verificacin de los clculos en
los reportes final, revisin de los resultados de la prueba para detectar posibles errores de
Trascripcin, que los reportes sean fciles de leer e interpretar, procedimientos para
informar al mdico de resultados que requieran de atencin inmediata, que el nombre y
datos del paciente estn correctos, en general todo lo que se refiere a un correcto reporte
de resultados.