Javier Pichaco Garca

Inmunologa
2 Grado en Bioqumica

 Fuerza del campo elctrico= Fuerza de friccin

qE

fv
f = coeficiente de friccin
(CVs / m2 = kg/s)
v = velocidad de la molcula
(m/s)

q = carga (C)
E = intensidad del campo
(V/m = N/C)

Las molculas se movern en funcin de sus movilidades electroforticas:

= v/E =q*E/E*f=q/f

Todo sistema que adquiera una corriente, debe emplearla en un trabajo qumico o
mecnico o se disipar en forma de calor. Una temperatura muy alta tiene un
efecto nefasto en el desarrollo de la electroforesis:

Provoca un ensanchamiento de las bandas

Forma corrientes que mezclan muestras separadas
Desnaturaliza los analitos ms sensibles a la temperatura
Disminuye la viscosidad del soporte y por tanto la resistencia al medio
Para controlar todos estos efectos indeseados, se emplean sistemas
refrigerantes de aire o lquido que consiguen mantener una temperatura
constante

 La electroforesis se lleva a cabo en soportes que deben ser:

Porosos
Inertes
Distinguiremos dos tipos en funcin a estas caractersticas:
Restrictivos Separacin por tamao y forma
No restrictivos Separacin por carga de la molcula

Los soportes Se utilizan fundamentalmente para reducir la movilidad del frente

de molculas que migran hacia los polos.

-Geles de agarosa:
Es un polisacrido lineal cuyo monmero es la agarobiosa. Sus propiedades
gelificantes se atribuyen a la formacin de enlaces intra e intercatenarios.
Generalmente no posee cargas, aunque la sustitucin con determinados residuos
con grupos carboxilos, metoxilos, sulfatos generan cargas que pueden ser
pocos beneficiosas para el proceso.

-Geles de poliacrilamida:
Se le suele llamar PAGE
Es un polisacrido cuyo monmero es la acrilamida

-Electroforesis Zonal:
La muestra se desplaza por un soporte slido (PAGE, acetato de celulosaetc) y
consta de una fuente de alimentacin (para proporcionar la corriente elctrica),
una cubeta y el propio soporte

-Electroforesis Libre:

Las diferentes biomolculas, que se encuentran libres es una disolucin, se desplazan a

velocidades diferentes segn sus cargas y coeficientes de friccin respectivos, formndose
nubes que se van desplazando en la disolucin tampn y que puede seguirse con diversos
sistemas pticos, ponindose de manifiesto las sustancias que se van separando.

-Electroforesis Capilar:
Los componentes bsicos
incluyen:
Fuente de alimentacin (alto
voltaje)
Capilar (25-100 micrmetros
dimetro)
2 recipientes para el
tampn donde se acopla el
capilar
Los dos electrodos
conectados a la fuente
Detector (espectrofotmetro)

 Es una tcnica que combina la electroforesis zonal y la inmunodifusin doble

Durante la historia a permitido caracterizar diferentes protenas en suero y distinguir
distintos tipos de inmunoglobulinas y sus caractersticas electroforticas
Se suele llevar a cabo en gel de agarosa

Procedimiento:
Se aplica la muestra sobre el gelElectroforesis
Se aplica suero con anticuerpos especficosReposar 24-48 horas
Formacin de complejos Anticuerpo-Antgeno insolubles Aparicin de bandas
Se lava
Se tie con azul de coomassie (Por ejemplo)
Ver resultados

 http://www.hgucr.es/wpcontent/uploads/2011/12/tecnicas_de_separaci%C3%B3n_pr
ote%C3%ADca.pdf (Laura Rncn de Pablo)
http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm
Biochemical methods : a concise guide for students and
researchers / A. Pingoud ... [et al.]. http://gmocrl.jrc.ec.europa.eu/capacitybuilding/manuals/Manual%20E
S/Sesi%C3%B3n5.pdf