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Trabajos de revisin de
un campo de frontera, de
manera que sea utilizable
para la docencia
Introduccin
El oxgeno molecular (O2) o dioxgeno es uno de los gases
ms importantes de la Tierra. Constituye el 21% de la
atmsfera, 89% del peso del agua del mar y al menos el 47%
de la corteza terrestre. La atmsfera terrestre est constituida
por los siguientes componentes:
Nitrgeno: 78.08%
Oxgeno: 20.95%
Argn: 0.93%
Bixido de carbono: 0.03%
Nen: 0.0018%
Helio: 0.0005%
Criptn: 0.0001%
Hidrgeno: 0.00006%
Autor para recibir correspondencia. Departamento de Biologa, Facultad de Qumica, Edificio B, Lab 209, Ciudad Universitaria, UNAM04510
Mxico, D.F. Mxico.
Telfono y fax: (55) 56 22 35 15
Correo electrnico: pedraza@servidor.unam.mx
Recibido: 23 de junio de 2005; aceptado: 2 de agosto de 2005.
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Ozono: 0.00004 %
Xenn: 0.000008 %
El oxgeno atmosfrico es producido por la oxidacin del
agua por el complejo de ruptura del agua del fotosistema I
de las clulas fotosintticas durante la fase luminosa de la
fotosntesis:
2H2O O2 + 4H+ + 4e
(1)
(2)
A esta reaccin tambin se le conoce como reduccin tetravalente del oxgeno, indicando que este complejo reduce
completamente al oxgeno y no libera especies parcialmente
reducidas. Las reacciones 1 y 2 establecen un ciclo entre los
organismos productores y consumidores de oxgeno.
Dado el uso frecuente de los trminos oxidacin y
reduccin en esta revisin, stos se definen en la tabla 1 junto
con los trminos agente oxidante y agente reductor
Acoplado al proceso de respiracin o consumo de oxgeno, las clulas sintetizan la mayor parte del adenosn
trifosfato (ATP) que se requiere para los diversos procesos
celulares. A estos dos procesos acoplados (la oxidacin de
los acarreadores de electrones reducidos NADH y FADH 2
y el transporte de los electrones hasta el O2 para formar H2O
y la sntesis de ATP a partir del ADP) se le conoce como
fosforilacin oxidativa.
El oxgeno no slo se requiere en la respiracin; hay
muchas enzimas que tambin lo utilizan. Una lista parcial de
estas enzimas se presenta en la tabla 2.
Adems el oxgeno juega un papel esencial en la qumica de los radicales libres, razn por la cual resulta de importancia definir algunos conceptos bsicos para entender la
importancia del mismo no slo en el proceso respiratorio
sino tambin en el metabolismo celular.
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Tabla 1. Diferencias entre el proceso de oxidacin y el proceso de reduccin (Halliwell y Gutteridge, 1999).
Trmino
Oxidacin
Definicin
Ejemplo
Prdida de electrones
Reduccin
Ganancia de hidrgeno
Ganancia de electrones
Agente oxidante
Agente reductor
Radicales libres
Un radical libre ( RL) se define como cualquier especie
qumica, ya sea atmica o molecular, capaz de existir inde pendientemente, que contenga uno o ms electrones desapareados (que ocupan por s mismos un orbital molecular o
atmico), ya sea por ganancia o prdida de un electrn de
un no radical o por la ruptura homoltica de una molcula:
X e + X.+ Radical formado por la prdida de un
electrn de un no radical.
Y + e Y. Radical formado por la ganancia de un
electrn de un no radical.
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+e
O2
Dioxgeno
O2
+e
+e
Anin
superxido
H2O2
Perxido de
hidrgeno
+e
OH H2O
Radical
hidroxilo
(3)
Agua
Configuracin electrnica
en el orbital 2*
Dioxgeno (O2)
Superxido (O2 )
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H2O2 + 1O2
(4)
OCl + H2O2
(5)
H2O + Cl + 1O2
(6)
2O2 + NADPH + H+
(7)
.
2
O +H
(8)
Perxido de hidrgeno: El perxido de hidrgeno es for mado por la enzima superxido dismutasa SOD). Aunque no
es un radical libre, tiene una gran lipofilicidad que le permite
atravesar las membranas celulares y reaccionar con el anin
superxido en presencia de metales de transicin, para
generar el radical hidroxilo. Por esta razn se le considera
un oxidante importante en las clulas de los organismos
aerobios.
Abril de 2006
SOD
Radicales
No-radicales
Superxido (O2 )
Hidroxilo (OH)
Peroxilo (RO2)
Ozono (O3)
Alcoxilo (RO)
Hidroperoxilo (HO2)
Un grupo de flavoenzimas localizadas en el retculo endoplasmtico del hgado y el rin son importantes en el
metabolismo de los aminocidos y producen perxido de
hidrgeno, de acuerdo con las reacciones (Eberhardt, 2001):
D-aminocido + H 2O + E-FAD -cetocido
+ NH
3 + E-FADH2
E-FADH2 + O2 E-FAD + H2O2
L-aminocido + H2O + E-FMN -cetocido + NH3
+ E-FMNH2
E-FMNH2 + O2 E-FMN + H2O2
2 + H2O2
(9)
(10)
Fe2+/Fe3+
O2 + OH + OH
(11)
XO
2O2.- + 2H+
Fe3+ + O2.
Fe2+ + O2
(12)
(13)
Ahora bien, el radical hidroxilo tambin se puede for mar a partir del cido hipocloroso:
HOCl + O2.
OH. + Cl + 1O2
(14)
NO + O2
ONOO
(15)
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MPO
HOCl + OH
(16)
Energa solar
O2
O2 + O
2O
O3
(17)
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Fundamento
Niveles plasmticos de
malondialdehdo
Alcanos exhalados
Grupos carbonilo en el
plasma
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H2O2 + O2
(18)
Catalasa (CAT)
Esta enzima se encuentra en las mitocondrias y los peroxiso mas, y cataliza la reduccin del perxido de hidrgeno a agua:
2H2O2
2H2O + O2
(19)
2H 2O + R
(20)
GSSG + H2O
(21)
(22)
NADP+ + 2GSH
(23)
Aparentemente el NADPH reduce el FAD, el cual transfiere dos electrones a la unin disulfuro (SS) entre dos
residuos de cistena del sitio activo. Los dos grupos SH
formados interactan entonces con el GSSG reducindolo a
dos molculas de GSH.
Glutatin S-transferasa (GST)
Hasta el momento se han encontrado las isoformas GST
citoslicas y GST microsomales. Las GST citoslicas estn
divididas en cuatro familias principales: , , y , y en
cuatro familias minoritarias: , , y ). Las GST citoslicas
estn constituidas por dos subunidades protenicas idnticas,
mientras que las GST microsomales son trmeros (Sharma,
Yang, Sharma, Awasthi y Awasthi, 2004)
Su funcin primaria es catalizar la conjugacin de GSH
con una gran cantidad de compuestos orgnicos ( RX). La
reaccin general de esta enzima es:
RX + GSH RSG + HX
(24)
Se ha demostrado que las GST pueden reducer hidroperxidos de lpidos por medio de una actividad de glutatin
peroxidasa independiente de selenio y que estas enzimas
tambin pueden detoxificar al 4-hidroxinonenal un producto de la peroxidacin de lpidos.
Tiorredoxina (Trx)
Es un polipptido con un peso molecular de 12 kDa, espe cialmente distribuido en el retculo endoplsmico (Nakamu ra, 2005). Esta protena contiene dos grupos tiol adyacentes
en su forma reducida (SH) que se pueden oxidar a su forma
disulfuro (S 2 o SS):
Trx-(SH)2 + protena-S2 Trx-S2 + protena-(SH)2
GSSG + NADPH + H+
(25)
Trx-S2 + 2H2O + O2
(26)
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(27)
Peroxirredoxinas (Prxs)
Este grupo de enzimas se caracteriza por poseer residuos de
cistena en su centro cataltico, lo cual las identifica como
enzimas antioxidantes especficas para el grupo tiol. Los
grupos cistenas son oxidados a cido sulfnico en forma
reversible por los sustratos de estas enzimas (perxidos).
Estn subdivididas en tres subclases: Prx 2-cistena tpica
(Prx I-IV), Prx 2-cistena atpica (Prx V) y Prx 1-cistena (Prx
VI). Su localizacin vara en funcin de la subclase. Suelen
encontrarse en el citoplasma, peroxisoma y mitocondria (Prx
I y V), ncleo y citoplasma (Prx II), citoplasma y lisosomas
(Prx IV), mitocondria (Prx III), citoplasma (Prx VI) (Immenschuh y Baumgart-Vogt, 2004).
Estn envueltas en la degradacin enzimtica de perxido de hidrgeno, hidroperxidos y peroxinitrito, por lo
tanto, las Prxs asumen un papel importante contra el estrs
oxidativo.
Prx (SH)2 + 2H2O2
Prx S2 + 2H2O + O2
(28)
(29)
HO
(30)
Tabla 6. Caractersticas generales de algunos compuestos de bajo peso molecular que integran al sistema antio xidante
(Halliwell y Gutteridge, 1999).
Compuestos hidrosolubles
Compuestos liposolubles
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das en algn proceso oxidativo o enfermedad. Dicha infor macin es importante para conocer ms a fondo el mecanis mo del dao y puede ser muy importante para tratar de
establecer una terapia con un antioxidante que neutralice
dicha ERO con el propsito de detener el dao oxidativo.
Esto es importante en el contexto de que no se conoce an
un antioxidante universal que prevenga todo tipo de dao
oxidativo. Algunos de estos mtodos descritos a continuacin para identificar a alguna ERO, tambin pueden ser
usados para estudiar y caracterizar el potencial antioxidante
de alguna sustancia o extracto. Por lo anterior es importan te contar con mtodos que nos permitan identificar y cuan tificar dichas especies.
Deteccin del superxido
Reduccin del citocromo c
Este mtodo se basa en la reduccin de ferricitocromo c (Fe3+ cit
c) a ferrocitocromo c (Fe2+ cit c) razn por la cual ha sido utilizado para medir el tiempo de formacin del superxido por
numerosas enzimas, clulas y tejido vascular. La reaccin es:
Fe3+ cit c + O2
Fe2+ cit c + O2
(31)
La reduccin del citocromo se cuantifica espectrofotomtricamente a 550 nm, utilizando un coeficiente de extincin molar para el ferricitocromo c de 0.89 104 M1/cm1.
Inhibicin de aconitasa
Las alteraciones en la actividad de la aconitasa han sido
utilizadas como un indicador sensible de los cambios en la
actividad del superxido in vivo e in vitro. La aconitasa cataliza
la interconversin de citrato a isocitrato y est presente tanto
en el citosol como en la mitocondria. El superxido, inactiva
a la aconitasa debido a la oxidacin seguida por la prdida
reversible de hierro (el cual es el cofactor de la enzima); por
lo tanto, con la formacin de superxido, una fraccin de la
aconitasa en algn momento es inactiva, pero ca paz de reactivarse, as la relacin de aconitasa inactiva/aconitasa activa
es un indicador de la produccin de superxido.
Oxidacin de hidroetidina
La hidroetidina (HE) es un compuesto permeable a las
clulas que puede transferir dos electrones al superxido
provocando la oxidacin de la hidroetidina. La reaccin es
relativamente especfica para superxido, con una mnima
oxidacin del compuesto inducida por la presencia de perxido de hidrgeno o cido hipocloroso. La oxidacin intracelular de HE a etidio por el superxido puede analizarse
por citometra de flujo en suspensiones celulares y por
microfluorometra in vivo en cortes de tejidos y sangre.
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Reacciones de quimioluminiscencia
Los mtodos de quimioluminiscencia para la deteccin de
superxido han sido frecuentemente empleados porque son
potencialmente accesibles a los sitios intracelulares donde es
generado este radical, por lo cual son altamente especficos.
El compuesto quimioluminiscente utilizado ms ampliamente es la lucigenina, aunque ya se han desarrollado otros
compuestos como la coelenterazina y el 2-metil-6-[4-metoxi fenil]-3,7-dihidroimidazo[1,2-] pirazin-3-ona (MCLA) que se
utilizan para medir la formacin de superxido en neutrfilos, macrfagos, cultivos celulares y tejido vascular
Resonancia del espn electrnico y atrapamiento del espn
La espectroscopa por resonancia de electrn-espn ( RES)
tambin conocida como Resonancia paramagntica electrnica (RPE), es un mtodo analtico que permite la deteccin
directa de los radicales libres. Cabe mencionar de manera
general, que esta tcnica se basa en las propiedades magnticas de los electrones no apareados y su ambiente molecular.
Los electrones desapareados pueden existir en dos orienta ciones en paralelo o antiparalelo con respecto al campo
magntico aplicado; por ello es posible observar diferencias
de energas en los estados correspondientes a la regin de
microondas del espectro electromagntico; as se pueden
diferenciar especies tal como el NO , superxido y radical
hidroxilo en sistemas biolgicos en bajas concentraciones.
Deteccin de perxido de hidrgeno
Ensayos ligados a peroxidasa de raz fuerte (HRP)
Estos ensayos dependen de la oxidacin de un compuesto
donador de tomos de hidrgeno. As, bajo la presencia de
perxido de hidrgeno, los donadores de tomos de hidr geno son oxidados por la HRP:
HRP + H2O2
HRP-H2O2 (Compuesto 1)
HRP-H2O2 + AH2
HRP + 2H2O + A
(32)
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Abril de 2006
Agradecimientos
Este trabajo fue posible gracias a los donativos del Consejo
Nacional de Ciencia y Tecnologa (Conacyt, 40009-M) y de
la Direccin General de Asuntos del Personal Acadmico
(DGAPA, PAPIIT IN227103) de la UNAM.
Referencias
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Bibliografa recomendada
Hansberg, W., La biologa del dioxgeno en singulete, TIP
Revista Especializada en Ciencias Qumico-Biolgicas, 2, (2),
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