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Arquitectura celular

:
El citoesqueleto

2012

-composición
-dinámica
-modificadores

El citoesqueleto
Red dinámica de filamentos
proteicos:
POLIMEROS NO COVALENTES

• Morfología y resistencia celular
• Movimiento celular, contracción muscular
• Transporte de organelas, partículas y
cromosomas durante la mitosis
Microfilamentos (8 nm): polímeros
bicatenarios de actina que forman cordones
lineales y arreglos “geles” bi- o tri
dimensionales.
Pueden estar anclados a la membrana
plasmatica. Define morfología superficie
celular (filopodios, lamelipodios)
Microtúbulos (25 nm): cilindros de α y β
tubulina. Más rígidos que los microfilamentos con un extremo asociado a un
centrosoma (MTOC: centro organizador
de microtubulos)
Filamentos intermedios (10 nm):
proteínas fibrosas que proporcionan
resistencia mecánica a la célula. Suelen
estar anclados a la membrana plasmática.

Tilney and Porter
J.Cell Biol (1967)

25 nm
Microscopía
electrónica

MICROTUBULOS

Modelo de
plastilina

MICROFILAMENTOS 500 nm 125 nm .

Tubulina NIH 3T3 Actina .

F-Actina Tubulina M.G. Thomas Con los mismos componentes. las células elaboran distintos CSK y presentan distintas morfologías Notar grosor de F-actin en fibroblastos (fibras de estrés) vs microtubulos .

Filamentos intermedios .

actividad ATPasa (hexokinasa ciclo glucólisis) universal entre eucariotas (ancestro procariota?) -altísima homología (374-375 aa: 80 % identidad entre amebas y humanos) -muy abundantes: actina y miosina: entre las TOP 5 en abundancia entre las proteínas naturales actina en células musculares: 10 % (60 % actina-miosin) células no musculares: 5 % (0.Actina alfa-actina (4 genes distintos): células musculares beta-actina (lamelipodios) y gama-actina (stress fibers) : ubicuas (5 aa dif).1-5 mM) -modificaciones post-traduccionales: N-acetilación 3 metil histidina (His 73) fosforilación Presenta NES (señales de exportación nuclear .

lamelipodios defectuosos Modelo molecular: Cargas positivias voluminosas de arg evitan agregación. . Science 2006 .Arginilación de beta-actina: N-acetilación permite arginilación en Asp3 (40 % in vivo) -no afecta estabilidad -afecta polimerización: sin Arg forma agregados filamentosos. Permite formación de una red relajada Karakozova et al..

gama.beta Tubulina: (GTPasa flia Ras. beta. delta y variantes de éstas Subunidad: dímero alfa . procariotas: FtsZ) alfa.

78-90 % beta-tub) -diferencias en C-terminal (15 aa) (zona expuesta del MT) -alta heterogeneidad de dímeros y de MT. -MT muy regulados por diversas modificaciones post-traduccionales (PTMs) .mamíferos (ratón): 7 genes alfa-tubulina 8 genes beta-tubulina -muy homólogas (90% alfa-tub.

ubicado en la cercanía del núcleo. hacia la periferia celular .Microtúbulos Polímeros tubulares constituidos por heterodímeros de α.y β-tubulina • Estructura polar con un extremo (+) (beta) que poli-meriza 3 veces más rápido que el extremo (-) (alfa) • Parten del centrosoma.

Nucleación de los microtúbulos Gama-tubulina: capaz de reclutar subunidades Anillos: gama-Tubulin Ring Complex (gama-TuRC) centrosoma .

Beta-tubulina Gamma tubulina Actina M. . Loschi.

cuyo extremo .Microtúbulos Inestabilidad dinámica : Rescate Catástrofe (varias veces por min) Esta es la forma mas importante decontrolar la longitud de los microtúbulos. capturado en el centrososma.está en gral. tambien se observa treadmilling -1984: se lo observó in vitro -recientemente se lo confirmó en vivo . En microtúbulos libres.

Si un microtúbulo se desprenden del MTOC. En esta región se observa inestabilidad dinámica. Ej: dendritas neuronales. donde se concentra gamma-tubulina. y presentan los extremos + en la periferia celular. expone sus extremos – y puede experimentar “treadmilling” o depolimerización completa. . Células altamente polarizadas presentan arreglos especiales de microtúbulos. microtúbulos corticales de células epiteliales (polaridad basolateral-apical). con polaridad mixta. Estas presentan numerosos MTOCs en la zona apical. los microtúbulos están anclados al MTOC ubicado en el centrosoma.En general.

0.2 µm. .Polaridad de los microtúbulos - CCW - + CW Scale bar.

Filamentos intermedios (no polares) : proteínas fibrosas 2 (polar) N TERMINAL: (6-1200 AA). FOSFORILACIÓN 4 (apolar) 8 32 8-10 nm Cabezas globulares=entrecrutamiento (covalente) . POLIMERIZACIÓN: NO NUCLEACIÓN.

H. uñas) (variedad: 10-20) Neurofilamento (NF L. densamente empaquetados Neurofilamentos controlan calibre axonal = transmisión impulso -Estables quimicamente (purificacion diferencial) Polimerizacion no requiere ATP/GTP Regulacion por fosforilacion (mitosis) IFAPs . M) axones NFL + NFH o NFM. agrupadas en familias PROTEINA LOCALIZACION Lamins A. C lamina nuclear (lado interno envoltura nuclear) Vimentina mas o menos ubicua Desmina músculo GFAP (glial fibrillary acidic protein) astrocitos Periferin ciertas neuronas Keratinas tipo I (acídicas) Keratinas tipo II (básicas) celulas epiteliales y apéndices (pelos.Filamentos intermedios: Existen 50 proteínas fibrosas distintas. B.

vía nestin.Los tres tipos de filamentos interactúan Interacción microfilamnetos. con filamentos nucleares (laminas) .

.Heart contractions cause periodic wavy buckling of microtubles.

El citoesqueleto es dinámico 1970s: estable microtúbulos cromosomas actual: remodelamiento es crucial para muchas funciones celulares: -mitosis -cambios en forma celular (extravasado de linfocitos) -movilidad -extensión de lamelipodios. filopodios y prolongaciones en general -plasticidad sináptica -activación de TCR linfocitos T (y otras vías de señalización) .

Two types of crawling motion .html Sequence 1 (673 K) .nwu.Los microfilamentos se reorganizan durante la migración celular polimerización De-polimerización http://www.edu/pages/movies.borisylab.

Microfilamentos Treadmilling (movimiento de noria) en F-actina + - El filamento de actina es una estructura polar • Extremo (+) o barbado de rápida polimerización • Extremo (-) o punta es de polimerización lenta La polimerización requiere de ATP unido al monómero de actina La hidrólisis de ATP a ADP debilita la afinidad entre monómeros • Pequeñas proteínas controlan la polimerización .

Nucleadores de actina: ramificado: ARP2/3 no ramificado: .. et al. -formina -Cobl Cordon-Bleu (Cobl) Ahuja. 131:337–350 . 2007. Cell. R.

Remodelación de microfilamentos: ejemplo en extensión de lamelipodios y migración celular indicando “formación de lamelipodia” Thymosin (secuestra monomeros) 0 indicando “formación de lamelipodia” .

Thymosin 1 .

WASP: Wiskott-Aldrich Sindrome protein .

Thymosin 2 .

Thymosin 3 .

Thymosin 4 .

Thymosin 5 .

Thymosin 6 .

secuencia: 1.50 % actina es g-actina (50-200 uM) Como se regula la polimerización de actina (cortex) ? 1. actina ATP-profilina se une a extremo + 3. se libera profilina -se une a membranas fosfolipídicas -Regulada por fosforilación (conecta signaling con el CSK de actina): Thymosina beta-4: inhibe la polimerización Secuestra g-actina. . 2. Profilina: interviene en la polimerización une G-actina. intercambia ADP-ATP.

ARP 2/3 complex contiene Arp 2 Arp 3 p40 p35 p18 p14 Es estrictamente regulada (WASP) .

cambia conformación === depolimeriza dónde? -en regiones subcelulares con remodelamiento microfilamentos: (movilidad celular y citokinesis) cómo? Regulada por: -LIMK 1 (responde a diversas kinasas) -fosfatasas (dependientes y no dependientes de Ca)La forma desfosforilada tiene localización nuclear (lleva actina) Ej: respuesta quimiotáctica de neutrófilos a péptidos = defosforilación . preferentemente a actina-ADP.ADF/ cofilin: (15-19 kD) Se une lateralmente (1:1).

regulada por polifosfoinosítidos (PIP2) . inhibida por PIP2.Caping (CP): heterodímero alfa/beta. une a extremo + === estabiliza e impide polimerización. Gelsolina: caping y depolimeriza.

Endosomas y Movimiento de Listeria monocytogenes ActA: en la superficie de la bacteria (activador de Arp2/3) La bacteria es un puntito azul en la cabeza del cometa .

Neuron 2012 .Vitriol and Zheng.

Vitriol and Zheng. Neuron 2012 .

los filamentos intermedios no requieren un paso de nucleación para iniciar su polimerización. A diferencia de microtubulos y microfilamentos. Sus extremos + y – libres están expuestos a polimerización y depolimerización.A diferencia de los microtúbulos. la nucleación de microfilamentos puede ocurrir en muchos sitios dentro del citoplasma. Los microfilamentos tienen polaridad muy heterogénea. asociado a las membranas de ciertas organelas que utilizan “cometas de actina” para desplazarse. . (Modelo favorito: efecto de látigo o “mov browniano elástico”). lo que se conoce como treadmilling. Las organelas y membrana plasmática son “impulsadas” por el crecimiento de Factina. Por ejemplo.

apoptosis y movilidad celular. fracturándolos. transporte de glucosa. . (Similar a gelsolina) Latrunculina y tolytoxina secuestran subunidades Citocalasina B: Inhibe polimerización de actina por bloqueo del extremo en crecimiento.) une y estabiliza filamentos citocalasinas (1950) bloquea extremo +: no permite polimerización swinholide (1995) se une a dímeros de actina y a microfilamentos.Drogas que afectan microfilamentos falloidina (19. Inhibe el anillo contráctil.. Afecta LTP.

teratogénico. Impide polimerización vinca alcaloides: vinblastina vincristina unen subunidades y al extremo + e impiden polimerización (afectan recambio GDP. Compite con tau (MAP). ondulados. Antineoplásico. engrosados.Drogas que afectan microtúbulos Taxol: colchicina. de microtúbulos. Antimitótico (huso mitótico). hidroliza GTP.Pi en el cap (50% normal)) nocodazole unen subunidades e impiden polimerización Colchicina: une a dímeros de tubulina. activando la actividad GTPasa.Cambia confromación. se une con distinta afinidad a dímeros y a microtubulos. neurotóxico. Previene polimerización. Microtúbulos supernumerarios. . colcemida: se une lateralmenrte a los microtúbulos y los estabiliza.

. Loschi.ACTINA TIAR (cytochalysin B) M.

Control Microfilam: OK microtúb: OK Cyto B No! OK Colchicine OK No! .

Densidad de microtúbulos Tratamiento con nocodazol Prolongaciones celulares El equilibrio dinámico o estabilidad varía en distintas regiones subcelulares. Cuerpo celular Tiempo de exposición a nocodazole .

PNAS 2001) -neurotóxicos (transporte axonal dependientes de microtúbulos) -Fibrosis quística: viscosidad del esputo disminuye con agentes depolimerizantes de actina (gelsolina) -Infecciones por hongos -Enfermedades cardiovasculares . folículos pilosos. criptofisinas. alcoloides de vinca. estramestina) -afectan también células sistema inmune (médula).Interés farmacológico: Robotización y Screening automatizado de fenotipos ($$$$$$$$$$) -CANCER: antimitóticos (1980) (taxanos (TAXOL).. células intestinales -Resistencia a taxol (Goncalves et al.

En cuales funciones celulares es relevante el Citoesqueleto ? Interacción CSK – I. organelas con membraba . maquinaria traduccional -III.II. membrana plasmática .

Golgi mitocondria lisosomas mitocondria .

nocodazol

Golgi
Microtubulos

mitocondria

microtúbulos
Cos-7 o/n anti-CSK drugs

ER
mitocondria

mov de mit en levaduras: microfil . según tipo celular .ER.•distribución en el citoplasma (homogénea o no) •herencia durante división celular Microtúbulos y microfilamentos.mitoc en Cos-7: microtub .herencia de cloroplastos: microfil . Golgi: microt .

1986) .II-Maquinaria traduccional circa MCMLXX (90 % total proteína celular) 75 % total polyA RNA + ribosomes -síntesis de proteínas es dependiente de la integridad de los microfilamentos (Penman.

organelas con membraba .II.En cuales funciones celulares es relevante el Citoesqueleto ? Interacción CSK – I. membrana plasmática . maquinaria traduccional -III.

Interacciones de microfilamentos y filamentos intermedios con la membrana plasmática: -colabora en la señalización intracelular -coordina el CSK de distintas células -en mantener polaridad de la membrana (asimetrías en la composición de lípido sy proteínas) -brinda soporte mecánico a uniones celulares .III.

Microfilamentos anclados en uniones adherentes .

Permite la coordinación del movimiento de las células en un tejido: el ejemplo muestra la invaginación de un epitelio .

Don W.Filamentos intermedios (keratina) se anclan a desmosomas y semidesmosomas A Structural Scaffolding of Intermediate Filaments in Health and Disease Elaine Fuchs. Cleveland Science 1998 .

señalización intracelular. alfa-actinina filamina MICROFILAMENTOS Hemidesmosoma (ECM) integrinas ECM plectina. vinculina.El CSK en uniones celulares: soporte mecánico al complejo de la unión. BP230 FILAMENTOS INTERMEDIOS . coordinación de CSK de distinas células tipo de unión proteína de membrana involucrada en la adhesión ligando (extracelular) proteína ancladora (intracelular) tipo de filamento adherente (célula-célula) cadherina cadherina (en la otra célula) alfa y beta cateninas vinculina alfa –actinina placoglobina (gama-catenina) MICROFILAMENTOS Desmosoma (célula-célula) cadherinas desmogleins y otras desmoplakinas placoglobina FILAMENTOS INTERMEDIOS Adhesión focal (ECM) integrinas ECM talina.

Regulación del citoesqueleto: -Proteínas asociadas al citoesqueleto: ABPs MAPs IFAPs -Modificaciones post-traduccionales .

MT detyrosinados unen Kinesina 1.Modificaciones post-traduccionales de tubulinas •De-tyrosinación reversible C-terminal (alfa tub) (Caputo. específico de neuronas TTL KO: severos defectos en SNC . sino consecuencia de) (detirosina el mT. no reversible. BBRC 1974) también marca estabilidad (no es causa. se re-tirosina el dímero: MT estables están detirosinados). MT tyrosinados unen CLIP170 Δ2 Tubulin: pierde tambien glutamico C-terminal.

Específica de SNC (50% està polyGlutamilada!!!). se re-tirosina el dímero: MT estables están detirosinados). PolyGlu-T interactúa con MAPs y kinesina dependiendo de la longitud.Modificaciones post-traduccionales de tubulinas •De-tyrosinación reversible C-terminal (alfa tub) (Caputo. sino consecuencia de) (detirosina el mT. Binding de Tau es optimo con 3E. . MT detyrosinados unen Kinesina 1. sino consecuencia de) (acMT unen kinesina 1) •Poliglutamilación: adición de 1-6 ácido glutámico en C-terminal de alfa1A tub(Glu445) y beta3 tub(Glu438). BBRC 1974) también marca estabilidad (no es causa. MT tyrosinados unen CLIP170 •acetilación reversible de Lys 40 (lumen)(ausente en beta tub) marca estabilidad (no es causa.

. J Neurochem 2009 .Tubulin Tyrosin Ligasa (TTL y TTL-like. 14 genes) Fukushima et al.

Las PTM muestran distinta distribución subcelular Axón: AcTub/TyrTub Fukushima et al. J Neurochem 2009 ..