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Proteínas en hígado.

MÉTODOS EN BIOFISICA MOLECULAR.

Medición de la concentración de proteínas en hígado por el método Biuret y
Bradford, al aplicar procesos de desnaturalización térmica y lavado superficial.
Espectros de absorción y luminiscencia de las proteínas y sus aplicaciones para las investigaciones biológicas.

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Calle 59A Nº 63-20, Autopista Norte - Bloque 19, Laboratorio 209
Medellín Antioquia, Colombia, Sur América

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Bloque 19. entre los componentes de las proteínas están: un extremo amino(-NH ₂ ). Facultad de ciencias. Recibido para revisar 10-09-2012. se encuentran en diversos tipos de células y alimentos (carnes. [1] Las proteínas puede desempeñar muchas funciones que dependen sobre todo de la cadena de aminoácidos que las compone. tendones y cartílagos (presentes en el cuerpo humano para dar soporte estructural y movimiento). hormonas (agentes señalizadores). ________________________________________________________________________________________________________________________ 1. que existe entre los aminoácidos que forman una proteína).edu. así como en la purificación de proteínas es necesario determinar la concentración de proteínas en las muestras biológicas. ___________________________________________________________________________________________________________ Resumen Las proteínas son macromoléculas.co – diatoboncu@unal. Colombia. Albuminas (agentes de almacenamiento. Palabras Clave: Método biuret. son macromoléculas de alta importancia a nivel biológico. que fueron descubiertas por Berzelier en 1838 y posteriormente descritas por Mulder. oxígeno y nitrógeno. Para efectos prácticos se trabajo con el método biuret que se basa en la formación de ²⁺ un complejo coloreado entre el ion cúprico (Cu ) y los grupos aminos (pertenecientes al enlace péptido. es decir cumplen función como ácidos (grupo carboxilo) o como bases (grupo amino) y desarrollan diversas funciones a nivel biológico. hidrógeno.co Estudiante de ingeniería biológica. espectrofluorimetria. fluorescencia. hemoglobina (agente transportador a través del torrente sanguíneo). Laboratorio 209 Medellín Antioquia. compuestas principalmente por carbono. Son unas de las biomoléculas más importantes encontradas en las células vegetales y animales. para lo cual existen varios métodos como los de determinación colorimétrica o los de determinación fluorimétrica. formadas por la unión de un conjunto de aminoácidos que interaccionan por medio de enlaces peptídicos. la maceración. [2] Las proteínas son polímeros lineales conformados por aminoácidos que se unen entre si por medio de enlaces peptídicos (enlaces amida). proteínas reguladoras que actúan como sensores controlando la actividad de los genes. generalmente la reacción tiene mejores efectos en soluciones con gran concentración de proteína.2 Nina Rosa Peralta Rumbo. Muchas de las interacciones dadas entre los aminoácidos en una secuencia lineal. existen proteínas estructurales que brindan rigidez a la célula. entre las funciones que desempeñan las proteínas a nivel de los organismos encontramos: Enzimas (actúan como catalizadores biológicos). huevos. algunas contienen moléculas de azufre o fósforo. espectrofotometría.R) y un grupo carboxílico (COOH). Entre los objetivos del estudio se encontraba evaluar los efectos de algunos procesos mecánicos en la concentración del extracto enzimático de hígado y conocer las posibles interferencias que podían tener los métodos ópticos de análisis bioquímico. Sur América . influyen y estabilizan la conformación tridimensional que pueda adquirir la proteína para tener funcionalidad. que quiere decir lo principal o lo más importante. Para la escritura de las proteínas convencionalmente el grupo amino libre se escribe de lado izquierdo (aminoácido N – terminal). en algunas observaciones. funciones biológicas y algunas de sus propiedades fisicoquímicas.edu. Introducción La palabra proteína tiene su origen en el término griego proteios. Procesos como el lavado superficial de un tejido. proteínas transportadoras la cuales regulan el flujo de materiales a nivel membranal. Autopista Norte . Didier Alejandro Tobón Cuartas nrperaltar@unal. [3] Las proteínas constituyen cerca del 50% del peso seco de los tejidos. el aminoácido con el grupo carboxilo libre se escribe de lado derecho (aminoácido C – terminal). Universidad Nacional de Colombia sede Medellín. tienen propiedades anfipáticas. proteínas. Esta reacción suele ser muy especifica y la intensidad en la coloración varia según el numero de enlaces peptídicos. estudiante ingeniería física. longitudes de onda. un grupo metilo unido a un grupo orgánico que define generalmente las características del aminoácido (-CH ₃ . cereales). las proteínas generalmente tienen pesos moleculares altos.[4] El proceso de desnaturalización es un cambio estructural que sufren las proteínas perdiendo su estructura nativa. y calentamiento _______________________________________________________________________ Calle 59A Nº 63-20. son los compuestos de mayor abundancia en seres vivos y tienen actividad en gran parte de los procesos celulares.

Cantidad. en el cual la proteína se mezcla con una solución de NaOH y una solución de sulfato de cobre (CuSO₄) por lo que se produce una coloración violeta. Usualmente. 3 una longitud de onda de máxima absorción de 280 nm. Las proteínas de este alimento perteneciente a la categoría de las vísceras. el triptófano tiene Aminoácido. β-lamina o en las diferentes conformaciones (dominios o motivos) que tenga una proteína en su estructura generen cambios físicos en la absorción de la luz. Autopista Norte . de esta manera se forma un complejo coordinado. [6] La determinación por el método de biuret representa un método de análisis colorimétrico. Ácido aspártico 1825 mg g 2542 mg – g 1228 mg – g 1109 mg – g 239 mg – g 998 mg – g Ácido glutámico Alanina Arginina Cisteína Fenilalanina _______________________________________________________________________ Calle 59A Nº 63-20. Para una concentración del 10% p/v 1g hígado de res / 10 ml H2O se trabaja con 20 mg proteína /1 ml H2O.998 . Es muy posible que estos cambios estructurales en la α-hélice.239 0. La coloración observada se basa en la formación de un complejo entre el CuSO4 con los grupos aminos que forman el enlace peptídico. Fig. pero apenas se puede considerar. Este tipo de procedimiento se permite si los cromóforos después de un proceso de desnaturalización térmica están más expuestos al medio. [5] Experimentalmente. con algunas emisiones debido a la tirosina y fenilalanina. Las bandas de absorción más significativas se encuentra en la región ultravioleta cercana. 2. están formadas por aminoácidos como: Fig.Bloque 19. Realizando su contraste con una muestra que no fue sometida a desnaturalización térmica.109 0. Se sabe que 100 g hígado de res tienen 20 g proteína. permitiendo una mayor absorción de la luz. [7] Y también contrastar cuando por medio de procesos físicos como maceración y lavado se rompen dichos enlaces generando una disminución de la coloración violeta. La cistina presenta una banda centrada a 250 nm. ya que es muy débil y el porcentaje relativo de puentes disulfuro es muy pequeño en una proteína. en el intervalo de longitud de onda entre 230 y 300 nm.228 1.825 2. en donde la mayoría de las emisiones intrínsecas de una proteína es debido a la excitación de los residuos de triptófano. luego 1 g hígado de res posee 200 mg proteína. y algunos enlaces de di-sulfuro también tienen una notoria absorción en el rango de longitud de onda del ultravioleta cercano. de esta manera se forma un complejo coordinado. Complejo coordinado entre el ion de cobre y los grupos aminos. El uso del espectro de absorción de una proteína plegada como una mezcla de individual de los espectros de los residuos aromáticos.542 1. Fenilalanina y Tirosina. la determinación de los cambios de absorción que acompaña a la desnaturalización de una proteína puede llevarse a cabo con el fin de determinar la diferencia de absorción entre un cromóforos en una solución de agua destilada y el mismo cromóforos en una solución donde se haya perturbado el medio. Sur América 1. Laboratorio 209 Medellín Antioquia. La coloración observada se basa en la formación de un complejo entre el Cu⁺ ² con los grupos aminos que forman el enlace peptidico.producen efectos y cambios sobre la estructura nativa de la proteína. Este tipo de procedimiento permite detectar la presencia de enlaces peptídicos y será positivo cuando existan 2 o mas enlaces. Absorbancia de los cromóforos triptófano. 1. Colombia. en este rango absorben concretamente las cadenas laterales de los aminoácidos aromáticos o como la histidina y la cistina. [8].

. Method for the Rapid Determination of Protein in Meats Using the CEM Sprint™ Protein Analyzer. C. Universidad de Costa Rica.b bk.861g Triptófano 264 mg – 0. un ejemplo de esto es la maduración de las carnes en donde el pH disminuye. D. Institute of Biochemistry and Molecular Medicine. En línea. Para esto se pueden utilizar detergentes que ayuden a clarificar la muestra. debido a que la cantidad de cromóforos en el medio aumenta con la temperatura. Food Engineering TURKEY [13] Cindy Moser. Garrity.Bloque 19. Matsudaira.. Meury.edu/Teacher/NSF/C08/C08Links/pps99.. A. Switzerland [12] Mehmet BAŞLAR1. Zipursky. causando que esta cambie algunas de sus propiedades físicas. Edificio Severo Ochoa. como por ejemplo la absorción de la luz. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Estados Unidos. Freeman and Company. ICP-MS for multiplex absolute determinations of proteins. S.4 Glicina 1271 mg – 1. 5 ᵅ Edición. 14071-Córdoba [6] Angulo. 5. Editorial Tébar. Campus Universitario de Rabanales.. 3.editorialtebar. R.. P. Laboratorio 209 Medellín Antioquia.264 g Valina 1254mg – 1. The Journal of Biological Chemistry. M. 1969 pág. A.org/Apuntes/Biofisica_Bioquimica/Bioqui mica. H.. Colombia. 2008 [4] Lodish. A. Universidad Nacional de Colombia – Sede Medellín. 3rd edition. 1999 [7] Switzer. M. Bayburt University. Darnell.981 g Leucina 1697 mg – 1. Mustafa Fatih.htm [10] Sanz-Medel. [2] Bioquímica estructural.pdf [3] Hormaza.697 g Lisina 1493 mg – 1. 3. 1961-1967 [9] Intrinsic Fluorescence of Proteins and Peptides. [En línea] disponible en: http://www. Scott.493 g Metionina 512 mg – 0. Métodos para la cuantificación de proteínas. Bioquímica. dando así un dato más exacto de la absorbancia.657 g Treonina 861 mg – 0. Changes in Ultraviolet Absorption Produced by Alteration of Protein Conformation. Manual de laboratorio de biorgánica.uk/projects/gmocz/fluor. Harder. Journal of AOA C International Vol. Tabla de aminoácidos presente en el hígado de res. Disponible en: http://dwb.cryst. Autopista Norte .254 g Fig. Y. se obtienen también varios elementos trazas o componentes celulares aumentando la turbidez de éste.049 g Serina 947 mg – 0. Agosto 2010 [11] M. Determination of protein and gluten quality-related parameters of wheat flour using near-infrared reflectance spectroscopy (NIRS). Kaiser. April 25.aibarra. 2011 [5] Fernández. y por ende cambios en su estructura conformacional. Structure determination of channel and transport proteins by high-resolution microscopy techniques. Biologia celular y molecular. 1999 [8] Donovan.512 g Prolina 1049 mg – 1. Bioquímica Manual de Laboratorio. y L. Berk. Engineering Faculty.563 g Isoleucina 981mg – 0. 94.ac. generando interferencia en la medición de la absorbancia.    El aumento de la temperatura en las proteínas. Experimental Biochemistry: Theory and exercises in fundamental methods. Discusiones y conclusiones. A. N o.. New York.271 g Histidina 563 mg – 0.unl. [En línea] disponible en: http://www. Gálvan A. Existen otros factores como el pH que pueden influir la estructura conformacional de las proteínas desnaturalizándolas. permitiendo degradación de proteínas y el ablandamiento de los tejidos.. Sur América . J. E. Krieger. 244. Referencias [1] Ibarra.947 g Tirosina 657 mg – 0. J. genera procesos de desnaturalización.com/flash/pdf/Bioquimica %20estructural. 2011 _______________________________________________________________________ Calle 59A Nº 63-20. Al obtener el extracto enzimático del hígado. Kathy Herman.