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GUIA PRACTICA DE QUIMICA BIOLOGICA - I

PRCTICA DE LABORATORIO N 1

EQUILIBRIO INICO. DETERMINACION DE pH Y


EFECTO BUFFER POR COMPARACION CON UNA
SOLUCION INDICADORA
INTRODUCCION:
I.

EQUILIBRIO IONICO - pH.- Los organismos vivos dependen


absolutamente del agua para su existencia. El agua es la
biomolcula ms abundante y constituye la mayor parte de la
masa de las clulas vivientes (60 90%). El agua es el medio en
el cual estn disueltas una parte considerable de las sustancias
celulares.
La capacidad del agua para ionizarse y participar en las
reacciones cido-base es fundamental para las funciones de las
protenas, de los cidos nucleicos y de muchas otras
biomolculas.
En los procesos metablicos normales se forman cidos y bases;
sin embargo, usualmente predominan las sustancias cidas.
stas pueden ingresar al plasma sanguneo y otros lquidos
extracelulares para fines metablicos o de excrecin. En una
variedad de condiciones patolgicas, cantidades excesivas de
cidos o bases pueden acumularse en las clulas y tejidos del
organismo, conduciendo a trastornos del equilibrio cido-base.
Debido a que el nivel de la concentracin de iones H + es
enorme en las soluciones acuosas, es conveniente utilizar una
escala logartmica llamada pH para medir la concentracin de
iones H+.

II.

CONCEPTO DE pH.-El pH se usa para designar la actividad


del in hidrgeno. El pH se define como el logaritmo negativo
de la actividad o concentracin del in hidrgeno.

III.

SOLUCIONES BUFFER.- Son llamadas tambin Soluciones


Reguladoras de pH o Tampones, son sistemas acuosos que
tienden a resistir los cambios en su pH cuando se les aade
pequeas cantidades de cido (H +) o de base (H-). Un sistema
Tampn est constituido por un cido dbil (dador de protn) y
su base conjugada (aceptor de protn).

OBJETIVOS:
Preparacin de
comprobacin.

soluciones

un

pH

determinado

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su

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Preparar correctamente una solucin tampn y comprobar el


efecto buffer.
Determinacin de pH y efecto buffer de soluciones.

MATERIALES:
Tubos de ensayo
Vaso de precipitados
Matraz
Pipetas graduadas
Probeta
Baguetas
Gradillas
Balanza Analtica

SOLUCIONES:
Agua destilada
NaH2PO4.H2O en polvo
Na2HPO4.2H2O en polvo

NaOH

Rojo de Fenol

DESARROLLO DE LA PRCTICA:
1. Para el desarrollo de esta prctica se formaron grupos de 4
alumnos, a cada grupo se le asign la preparacin de una
solucin diferente, las cuales fueron:
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Solucin A : NaH2PO4.H2O

(250ml)

Para preparar 1lt de esta solucin se necesita 27.6gr de fosfato


de sodio en polvo. Para obtener la cantidad exacta que
necesitamos
para preparar 250ml hacemos el siguiente
clculo:

Segn el resultado es necesario 6.9gr de la sustancia para


obtener una solucin A de 250ml. Sabiendo esto, realizamos la
experiencia:
Se pes en la balanza analtica 6.9gr de fosfato de sodio en
polvo.
La sustancia pesada se coloc en un beaker, poco a poco se
fueron agregando los 250ml de agua destilada y con ayuda de
una bagueta, se disolvi el contenido completamente,
quedando lista la Solucin A.

Solucin B : Na2H PO4 2H2O (250ml)

Para preparar 1lt de esta solucin se necesita 35.59gr de


difosfato de sodio en polvo. Para obtener la cantidad exacta que
necesitamos
para preparar 250ml hacemos el siguiente
clculo:

Segn el resultado es necesario 8.89gr de la sustancia para


obtener una solucin B de 250ml. Sabiendo esto, realizamos la
experiencia:
Se pes en la balanza analtica 8.89gr de difosfato de sodio en
polvo.
La sustancia pesada se coloc en un beaker, poco a poco se
fueron agregando los 250ml de agua destilada y con ayuda de
una bagueta, se disolvi el contenido completamente,
quedando lista la Solucin B.

Solucin buffer pH 6.5

(125ml)

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En un vaso de precipitados se coloc 342,5ml de la solucin A,


luego se le agreg 157,5ml de la Solucin B, con ayuda de una
bagueta se combin obtenindose la Solucin Buffer de pH 6.5.

Solucin buffer pH 5.7

(125ml)

En un matraz se coloc 467,5ml de la solucin A, luego se le


agreg 32,5ml de la Solucin B, con ayuda de una bagueta se
combin obtenindose la Solucin Buffer de pH 5.7.
PREPARACION
composicin:

DE

NaOH

(10ml).-

De

acuerdo

su

Na=23
O=16
H=1
Para obtener 1lt es necesario 40gr y por regla de tres simple,
obtenemos que para preparar 10ml son necesarios 4gr.

2. Luego de tener listas las soluciones buffer se procedi a llenar 4


tubos de ensayo con 10ml de una solucin diferente cada uno,
as tenemos:
DATOS

TUBO 1

TUBO 2

TUBO 3

TUBO 4

Buffer pH 5,7

10 ml

Buffer pH 6,5

10 ml

Sol. HCL ph 4

10 ml

Sol HCL ph 2

10 ml

Rojo de fenol
Tiular NaOH
1N

Tubo 1:

10ml de solucin buffer de pH 6.5

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Tubo 2:
Tubo 3:
Tubo 4:

10ml de solucin buffer de pH 5.7


10ml de solucin de cido clorhdrico de pH 3.5
10ml de solucin de cido clorhdrico de pH 2.0

3. A cada tubo de ensayo se le agrego 0.2ml de rojo de fenol


(utilizado como indicador) y se obtuvo un cambio: de ser
transparentes, las soluciones cambiaron a:
Tubo
Tubo
Tubo
Tubo

1: color anaranjado
2: color amarillo
3: color amarillo
4: color amarillo

4. Por ultimo, realizamos la titulacin a dos de los tubos de


ensayo; el tubo 2, que contiene una solucin buffer y el tubo 4,
que contiene una solucin acida.
Para la titulacin se utiliz Na OH.
5. Finalmente se observaron los cambios y se anotaron los
resultados.

RESULTADOS:
En el tubo 2: el gasto total fue de 2ml de NaOH, debido a ello se
observ un viraje de amarillo a rojo.
En el tubo 4: el gasto total fue de 1ml de NaOH, debido a ello se
observ un viraje de amarillo a fucsia (rojo grosella).

CONCLUSIN:
Segn los resultados obtenidos en el tubo 2 y 4, observamos que el
viraje de colores se encuentra entre los parmetros establecidos al
cambiar de pH cualitativamente y es similar en ambos tubos, lo que
difiere es la cantidad de NaOH usado en la titulacin de cada tubo;
esto se debe a que en el tubo 2, encontramos a una solucin buffer
que resiste los cambios bruscos de PH y para que ste pueda cambiar
es necesario agregar cantidades mayores a las que se agregaran en
una solucin acida ,como la del tubo 4, para cambiar a un pH alcalino.
Con esta experiencia queda demostrado el funcionamiento de una
solucin buffer aprendido en teora.

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PRCTICA DE LABORATORIO N 2

CROMATOGRAFA
RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS - TEST DE
NINHIDRINA
INTRODUCCION:
I.

LA CROMATOGRAFA es un mtodo fsico de separacin para


la caracterizacin de mezclas complejas. Es un conjunto de
tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo
objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos

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componentes. Todas las cromatografas presentan dos fases:


una mvil y una estacional.
II.

LA CROMATOGRAFA EN PAPEL es un proceso muy utilizado


en los laboratorios para realizar anlisis cualitativos ya que
pese a no ser una tcnica muy potente no requiere de ningn
tipo de equipamiento. La fase estacionaria est constituida
simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se
deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la
solucin y evaporando el solvente. Luego el disolvente
empleado como fase mvil se hace ascender por capilaridad.
Esto es, se coloca la tira de papel verticalmente y con la
muestra del lado de abajo dentro de un recipiente que contiene
fase mvil en el fondo. Despus de unos minutos cuando el
solvente deja de ascender o ha llegado al extremo se retira el
papel y seca. Si el solvente elegido fue adecuado y las
sustancias tienen color propio se vern las manchas de distinto
color separadas. Cuando los componentes no tienen color
propio el papel se somete a procesos de revelado. Hay varios
factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la
eleccin del solvente y la del papel de filtro.

III.

NINHIDRINA.-La Ninhidrina es un reactivo usado para ver las


manchas de bandas de aminocidos separados por
cromatografa o electroforesis. La Ninhidrina reacciona con el
aminocido dando como producto un anin color violeta
intenso, llamado prpura de Ruhemann, que se estabiliza por
resonancia.
En esta reaccin se pierde la cadena lateral en
forma de aldehdo.
Esta reaccin sirve para detectar
aminocidos en varios sustratos.Despus del test de ninhidrina
la coloracin es violeta para todos los aminocidos excepto para
Prolina e Hidroxiprolina que presentan una coloracin amarilla.
Todos los aminocidos que poseen un grupo amino libre
reaccionan y forman dixido de carbono, amonaco y un
aldehdo que contiene un tomo de carbono menos que el
compuesto original. Esta reaccin da lugar a la formacin de un
producto color azul o prpura. En el caso de la prolina, que
estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un grupo
imino, la coloracin final es amarilla.

OBJETIVOS:
Aprender correctamente la tcnica de cromatografa de papel.
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Reconocer los aminocidos presentes en una solucin.


Comprender el fundamento de la reaccin de la ninhidrina.

MATERIALES

Papel Wathman

Micropipeta

Secadora de cabello

Frasco de vidrio

Lmina de vidrio

Cinta adhesiva

Tijera

Lpiz

Regla

Estufa

SOLUCIONES:

Aminocidos: alanina y valina

Reactivo de ninhidrina

DESARROLLO DE LA PRCTICA:
1. Esta prctica se inici con el uso del papel Wathman, se cort
una tira del papel de 15.5cm de largo por 5cm de ancho, (con
mucho cuidado de no manipular directamente el papel, ya que
en la piel poseemos aminocidos q podran impregnarse en l y
cambiar completamente el resultado de la experiencia).
Luego en la parte superior se deja un espacio de 0.5cm de
espesor y se traza con una lnea de la misma forma que en la
parte inferior; luego, sobre la lnea de la parte inferior, se traza
otra lnea dejando un espacio de 0.5cm ms.

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Sobre la segunda lnea trazada se ubican dos puntos dejando un


espacio horizontal de 1.5cm de dentro hacia afuera de ambos
extremos, dejando un espacio de 2cm entre dichos puntos.
2. Luego de tener listo el papel, se coloca 20microlitros de
aminocido por punto:
ALANINA: 20microlitros
VALINA: 20microlitros
Estos se colocan gota a gota con ayuda de una micropipeta y
despus de cada gota se seca con la ayuda de una secadora,
sin dejar que el aminocido se expanda fuera del punto
indicado.
3. Luego se adhiere el papel a la lmina de vidrio con cinta
adhesiva, se coloca dentro del frasco por 30min para la fase
mvil. Este frasco contiene un solvente (una solucin
proporcionada de: cloroformo: 4, metanol: 4, hidrxido de
amonio: 1).
Dentro del frasco podremos observar como el solvente asciende
por capilaridad por la superficie del papel.
4. Pasados los 30 minutos, retiramos el papel y lo llevamos a la
estufa por 30 minutos ms.
5. Pasados estos 30 minutos, retiramos el papel de la estufa y se
roca completamente con Ninhidrina, para luego llevarlo a la
estufa por 15 minutos ms.
6. Luego de los 15 minutos, retiramos el papel de la estufa y
observamos dos manchas violetas que se inician en los puntos
de los aminocidos y se expanden a lo largo del papel.
Delineamos las manchas, se mide la longitud de cada una y se
divide entre dos para hallar la distancia recorrida por el soluto
de cada aminocido.
Luego se observa a contra luz en el papel la lnea que nos indica
la distancia recorrida por el eluyente.

RESULTADOS:
Segn la experiencia realizada obtuvimos:
Distancia recorrida por el soluto:
ALANINA: 6cm/2 = 3cm
VALINA: 9cm/2 = 4.5cm
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Distancia recorrida por el eluyente = 14cm


Luego, con estos datos podemos hallar:
Rf = distancia recorrida por el soluto
distancia recorrida por el eluyente
Rf ala = 3/14 = 0.21
Rf val = 4.5/14 = 0.32

CONCLUSIN:
La experiencia realizada nos permiti reconocer la presencia de
aminocidos de dos maneras:
De manera cualitativa, que pudimos observar mediante la
coloracin que tom el papel wathman luego de salir de la
estufa, esta coloracin fue provocada por los aminocidos
presentes en el papel.
De manera cuantitativa, hallando la constante Rf que
determin la cantidad de aminocidos presentes en la muestra.

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PRCTICA DE LABORATORIO N 3

ACTIVIDAD ENZIMATICA-METODO STREET


CLOSE MODIFICADO
INTRODUCCION:
OBJETIVOS:
- Realizar la curva de calibracin para la hidrolisis del
almidn
- Hallar el factor de conversin

MATERIALES:
Calculadora
Hojas milimetradas
Lpiz
Borrador
Regla
PROCEDIMIENTO:
-

Separar 5 tubos de ensayo de la siguiente manera

Tubos
Componentes

(ml)

Sol. Almidn
0.4 %
En buffer pH
7.1

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H2O destilada

HCl 0.05 N
(inhibidor)

4.5

4.5

4.5

4.5

4.5

4.5

Sol. Lugol
(indicador)

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

Se mezcla el contenido de cada uno de los tubos de acuerdo a


las especificaciones de la tabla

Se deja en reposo de 5 a 10 minutos

Luego se realiza la lectura en el espectrofotmetro(mide la


densidad ptica)

Posteriormente se raza la curva de calibracin y graficar en el


papel milimetrado

Los valores que corresponden a y representan la densidad


ptica (D.O)en cada uno de los tubos, haciendo uso del
espectrofotmetro e l cual se lleva a cero con ayuda del agua
destilada
Lectura de densidad ptica:
T1 = 0.050
T2=0.120
T3=0.180
T4=0.215
T5=0.245

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Los valores que corresponden a x corresponde la


concentracin de la sustancia expresada en mg/ ml y se dan de
la siguiente manera. Para obtener una solucin de 10 ml de
almidn 0.4% en buffer de pH 7.1 se necesita 0.4 gr de
almidn ( 40 mg para 100 ml de buffer ) entonces podramos
establecer la siguiente relacin

T1:
T2:
T3:
T4:
T5:

X
X
X
X
X

1
2
3
4
5

ml
ml
ml
ml
ml

=
=
=
=
=

4 mg
8 mg
12 mg
16 mg
20 mg

/ 10 ml
/ 10 ml
/ 10 ml
/ 10 ml
/ 10 ml

0.4
0.8
1.2
1.6
2.0

mg/
mg/
mg/
mg/
mg/

ml
ml
ml
ml
ml

Realizando la curva de calibracin no nos da una lnea recta por


lo que empleamos la ecuacin de ajuste de la recta
y = mx + b
x

x2

2
x
N
N XY X Y
m=

Hacemos uso de la calculadora cientfica

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m=

6 ( 1.99 )( 6 )( 1.24)
(8.8) ( 1.24 )( 6 )( 1.99)
b=
2
2
6 ( 8.8 )(6)
6 ( 8.8 )(6)

b=-

m = 0.27

0.06
-

Ahora remplazamos los valores de

Y0

Y1

Y2

Y3

Y4

Y5

:Y

= mx + b

= (0.27) (0)

- 0.06 = - 0.06
Reemplazando los valores en la recta
observamos que ahora si forma una recta
= (0.27) (0.4) - 0.06 = 0.048
Factor de calibracin:
cc sust .
= (0.27) (0,8) - 0.06 = 0.156 Fe =
D.O
= (0.27) (1.2) - 0.06 = 0.264
F
= (0.27) (1.6) - 0.06 = 0.372
F
= (0.27) (2.0) - 0.06 = 0.480

c1

= 4,84

4.84

c2

= 4,76

4,76

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