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da
UNESP
Campus
de
BOTUCATU - SP
Fevereiro 2006
da
UNESP
Campus
de
BOTUCATU - SP
Fevereiro 2006
B732c
CERTIFICADO DE APROVAO
TTULO: CONTROLE DE VIROSES EM ALFACE POR MEIO DE
MTODOS INTEGRADOS DE MANEJO DA CULTURA
ALUNA: LUCIANA MAESTRO BORGES
ORIENTADOR: PROF. DR. MARCELO AGENOR PAVAN
IV
OFEREO
E
DEDICO
AGRADECIMENTOS
Matemtica e Estatstica da USP, pelo grande auxlio na anlise estatstica dos dados.
Aos demais professores do Curso de Ps-Graduao, pelos inmeros
ensinamentos transmitidos.
Mariana
Zatarin,
grande
VI
BIOGRAFIA DO AUTOR
VII
Fernando Pessoa
VIII
SUMRIO
Pgina
RESUMO .................................................................................................................................1
SUMMARY .............................................................................................................................3
1. INTRODUO..................................................................................................................5
2. REVISO BIBLIOGRFICA ...........................................................................................7
2.1. Aspectos gerais da cultura da alface..........................................................................7
2.2. Principais viroses em alface ......................................................................................8
2.2.1. Mosqueado da alface (Lettuce Mottle Virus - LeMoV) ................................9
2.2.2. Mosaico da alface (Lettuce Mosaic Virus - LMV) ......................................11
2.2.3. Complexo do vira-cabea (Tospovirus) ......................................................14
2.3. Avalio e diagnose de fitovrus .............................................................................16
2.4. Aspectos gerais dos insetos vetores de vrus na cultura da alface...........................19
2.4.1. Pulges. .......................................................................................................19
2.4.1.1. Modo de transmisso do LeMoV e LMV.....................................21
2.4.2. Tripes. ..........................................................................................................22
2.4.2.1. Modo de transmisso de Tospovirus ............................................25
2.5. Estratgias de controle de fitoviroses .....................................................................25
3. MATERIAL E MTODOS..............................................................................................31
3.1. Localizao e caracterizao da rea experimental.................................................31
3.2. Caractersticas das prognies e cultivares ...............................................................31
3.3. Delineamento experimental e tratamentos ..............................................................32
3.4. Instalao e conduo dos experimentos ................................................................35
3.5. Avaliao dos experimentos....................................................................................36
3.5.1. Avaliao dos aspectos agronmicos das prognies ..................................36
3.5.1.1. rea de projeo da saia ..............................................................36
3.5.1.2. Massa da matria fresca ...............................................................36
3.5.1.3. Produtividade ...............................................................................37
3.5.1.4. Tempo de incio do pendoamento ................................................37
IX
RESUMO
observao visual dos sintomas, sendo que amostras de plantas que apresentavam sintomas
foram coletadas e examinadas atravs de testes moleculares de diagnose especficos para
LMV-II, LMV-IV, LeMoV e Tospovirus. Para algumas amostras sintomticas negativas
ainda foram realizados testes de RT-PCR para possvel deteco de Cucumber mosaic
virus (CMV), testes de inoculao mecnica em hospedeiras diferenciadoras e anlises de
microscopia eletrnica. Quanto aos aspectos agronmicos das prognies, observou-se que o
tratamento palha de arroz apresentou resultado superior aos demais tratamentos para as
caractersticas massa fresca e produtividade e igual desempenho ao tratamento solo nu para
as caractersticas fechamento de cabea e tempo de incio de pendoamento. Dentre as
118p.
SUMMARY
the plants in the autumn/winter experiment presented symptoms, while in the spring/summer
experiment the number of plants with symptoms increased to 8,89%. In the samples analyzed
through RT-PCR tests it was verified the presence of LeMoV (3,84%), Tospovirus (16,16%),
LMV-II (60,82%) and 19,17% of the plants tested negative for viruses, in the autumn/winter
evaluation. In the spring/summer experiment was verified the presence of LMV-II (16,78%),
Tospovirus (20,47%) and 62,65% were negative.
1 INTRODUO
vrus do gnero
destaca-se ainda a doena do engrossamento das nervuras ou big-vein causada por dois
vrus, o Lettuce big-vein virus e Mirafiori lettuce virus. Na ausncia de resistncia gentica, o
controle das fitoviroses somente possvel quando efetuado preventivamente.
Aps a
2 REVISO BIBLIOGRFICA
cultivares se agrupam em seis grupos ou tipos, classificados de acordo com suas caractersticas
morfolgicas, como: repolhuda-manteiga, repolhuda-crespa (americana), solta-lisa, soltacrespa, mimosa e romana (FILGUEIRA, 2000).
O cultivo da alface, bem como a sua produo, vem crescendo
rapidamente devido, principalmente, ao seu grande consumo (BOLETIM MENSALCEAGESP, 1995). No grupo das hortalias herbceas o produto mais consumido durante
todo o ano (UENO et al., 1992). No Brasil o cultivo da alface ocupa uma rea plantada de
aproximadamente 35. 000 ha (COSTA e SALA, 2005), sendo o Estado de So Paulo um dos
principais produtores.
Em 2004, o Estado de So Paulo apresentou uma rea cultivada com
7.538 ha, um volume de produo de 159.480 toneladas e produtividade em torno de 21.000
kg/ha de alface. (CAMARGO et al., 2005).
Em geral, plantas silvestres e invasoras das culturas podem atuar tanto como
(BiMV),
10
inoculao mecnica (CHAVES, 1999) e seu crculo de hospedeiras est restrito s espcies
vegetais: Lactuca sativa (mosaico e mosqueado sistmicos), C. murale e Gomphrena globosa
(leses locais), Zinnia elegans (latente) (MARINHO et al., 1982, apud, CHAVES, 1999) e
Chenopodium quinoa e C. amaranticolor (leses locais e posteriormente sistmicas) (JADO,
2001).
Este vrus no transmitido atravs da semente (MARINHO et al.,
1982; CHAVES, 1999; JADO, 2002) e tem como vetor possivelmente o afdeo
Hyperornyzus lactucae, que o transmite de maneira no circulativa (MARINHO et al., 1982)
Marinho e Kitajima (1986b), por meio de exame de seces ultrafinas
de tecido foliar de alface observaram presumveis partculas do LeMoV na luz dos vasos
crivados e em algumas clulas parenquimatosas associadas aos plasmodesmas, alm de zonas
ricas em vesculas, em diversas clulas. Constataram, tambm, que o LeMoV inativado em
extrato bruto, temperatura ambiente; a 40C, em menos de 24 horas, perdendo a infectividade,
quando diludo a 10-3 , mas no a 10-2; e quando submetido temperatura de 600C, mas no
55 0C, por 10 minutos.
As informaes disponveis a respeito das propriedades biolgicas e
sorolgicas do LeMoV so limitadas e os primeiros dados moleculares do LeMoV s foram
obtidos recentemente por Jado (2004). As preparaes purificadas de Marinho e Kitajima
(1986a) de LeMoV apresentaram baixa concentrao de partculas virais e, conseqentemente,
os antissoros obtidos apresentaram ttulos baixos. Com o protocolo desenvolvido para
purificao por Jado (2004), pde-se obter um rendimento de aproximadamente de 1 mg de
vrus por 100g de folhas frescas e os oligonucleotdeos (JADO, 2004) desenvolvidos para o
LeMoV (Lmo3s/Lmo4aS) foram altamente especficos em teste de deteco por RT-PCR,
sendo uma importante ferramenta na diagnose do LeMoV.
Os sintomas ocasionados pelo LeMoV em alface incluem o mosqueado
e o mosaico, sendo muito difcil distingu-lo do LMV, tendo por base somente a
sintomatologia (MARINHO e KITAJIMA, 1986b; ZERBINI, 1995). Porm atravs de um
estudo feito por Echer et al. (2003a), pde-se observar que, o LeMoV capaz de se multiplicar
e causar sintomas em Amaranthus hybridus, no ocorrendo o mesmo com o LMV. Assim, A.
hybridus pode ser utilizado como hospedeira diferenciadora, possibilitando separar LeMoV do
11
LMV, quando presentes em infeces mistas, alm de facilitar a identificao das amostras de
campo que possam conter somente o LMV como vrus causador de mosaico.
Testes preliminares indicam uma possvel fonte de resistncia ao
LeMoV nas cultivares B.S.Simpson/IAC 2391, Guape/IAC 1149 e Monte Alegre IAC
(MARINHO e KITAJIMA, 1986b).
estudados por Echer (2003b), destacaram-se como tolerantes Lucy Brown, Classic,
Annie, Jackal, Niner, Onondaga e Summertime, que apesar de terem desenvolvido
sintomas, estes foram leves e desapareceram no decorrer do ciclo da cultura.
12
13
14
("medium") e L ("large").
15
No entanto, a espcie INSV ainda no foi relatada no Brasil. Levantamentos realizados por
Nagata et al. (1995) indicam que no Estado de So Paulo h predominncia da espcie TCSV.
As espcies de Tospovrus so transmitidas atravs de insetos
pertencentes ordem Thysanoptera, comumente conhecidos como tripes, de maneira
persistente (MATTHEUS, 1991).
16
17
simples, uma tcnica demorada e nem sempre apresenta absoluta preciso nos resultados
(FIGUEIRA, 2000).
Atravs de anlise de microscopia eletrnica pode-se observar a
morfologia viral, medir o seu tamanho e avaliar a qual dos gneros ele pertence. Pode-se
tambm observar, a estrutura dos tecidos infectados para procurar alguma alterao especfica
que contribua para a diagnose dos vrus. Entretanto a simples estrutura dos vrus no tem
valor diagnstico definitivo. Para isso outras informaes devem ser consideradas como a
gama de hospedeiras, sintomas e mesmo a sua transmissibilidade (KITAJIMA e NOME
1999).
18
Tabela 01. Reaes de espcies vegetais utilizadas na identificao dos vrus que causam
mosaico e mosqueado em alface (PAVAN e KUROZAWA, 1997).
Vrus
Hospedeiros
LMV
LeMoV
BMV
CMV
TuMV
lc
lc/s
lc
lc/ln
lc
lc/s
lc/s
lc
lc
lc
ma/c
Datura stramonium
Gomphrena globosa .
lc
lc
lc/s
Helianthus annus
ma/c
Lactuca sativa
mq
m/mq
Nicotiana clevelandii
lc
lc
Nicotiana glutinosa
ma/s
lc/s
Petnia hybrida
ma/s
Pisum sativum
Zinnia elegans
lat
ln
Chenopodium amaranticolor
lc: leso clortica; ln: leso necrtica; s: sistmico; m: mosaico; mq: mosqueado; ma: mancha; c: clortico; lat:
latente; -: no hospedeira. *: no testada.
Embora a
sorologia seja amplamente utilizada, as tcnicas moleculares vem se tornando cada vez mais
comum, e a tendncia de que seu uso seja crescente (ZERBINI et al., 2001).
A reao em cadeia da polimerase (Polymerase Chain Reaction, PCR),
uma tcnica bastante simples verstil e de ampla aplicao, desenvolvida por Kary Mullis
em 1980, que revolucionou a gentica molecular atravs da possibilidade de produzir muitas
cpias de uma seqncia especfica do DNA, facilitando o estudo da anlise de genes
(HENSON e FRENCH, 1993).
fragmento do cido nuclico, especfico para o patgeno que se quer determinar, por muitas de
19
20
A capacidade de
proliferao enorme, da sua grande importncia econmica, pois em pouco tempo podem
tomar conta de qualquer cultura, causando com isso vrios danos, quer pela suco contnua
da seiva e deformaes, quer pela transmisso de doenas (BORROR e DeLONG, 1988).
Na cultura de alface, os pulges atacam as folhas sugando a seiva e, em
conseqncia, produzem o enrolamento das folhas (GALLO et al., 2002). Alm de danos
diretos, so vetores importantes de vrus, tais como LMV, LeMoV, CMV, BiMV e TuMV
(Turnip mosaic potyvirus) (PAVAN e KUROZAWA, 1997).
Foram registradas, associadas cultura da alface, as espcies de afdeos
Myzus persicae (Sulz.) (SANTOS et al., 1992) e
M. euphorbiae (SOUSA-SILVA e
ILHARCO, 1995) no Brasil. Das espcies vetoras conhecidas, o afdeo M. persicae o mais
importante, pois individualmente capaz de transmitir mais de 80 vrus diferentes
(KENNEDY et al., 1962).
Foram identificadas por Auad et al. (2002) as espcies M. persicae, M.
euphorbiae e U. ambrosiae, em alface cultivada hidroponicamente.
A maior ocorrncia
21
alguma sobre superfcies que reflitam este comprimento de onda de luz, seja sobre um carro,
uma planta hospedeira ou no. Ao pousarem, provam a superfcie com uma picada de curta
durao, conhecida como picada de prova. Essa picada dura apenas poucos segundos, em
geral, em torno de 20 segundos, tempo este suficiente para furar a epiderme e transmitir vrus
de relao estiletar. Aps a picada de prova, caso no tenha encontrado a sua hospedeira,
retornam ao vo, mas desta vez curto, repetindo-as at que a encontre. Alguns dias aps o
inicio do vo, os msculos alares se degeneram, impossibilitando o vo (LEWIS, 1973).
Furiatti e Almeida (1993), em estudos populacionais de afdeos em
campos de batata-semente no Paran, registraram alta populao de M. persicae na faixa de
temperatura de 18oC a 20oC; confirmando as observaes de Eastop (1977), que diz que a
temperatura um fator que condiciona o tamanho das populaes de afdeos, bem como seu
comportamento individual.
A flutuao populacional de M. persicae em Campinas, SP,
conhecida, sendo que as maiores revoadas ocorrem no perodo de abril a setembro, com o pico
no ms de maio (COSTA e COSTA, 1972).
Segundo Kitajima et al. (1980), tem-se notado que no perodo de maro
a setembro, a incidncia de mosaico em alface maior, podendo atingir ndices da ordem de
70-80%. Isto indica que o perodo de maiores revoadas dessa espcie coincide com o de
maior incidncia dos vrus causadores de mosaico e mosqueado em alface.
22
2. 4. 2 Tripes
23
autor menciona ainda o ciclo de vida (ovo a adulto) de algumas espcies do gnero
Frankliniella: 15,9 dias para F. fusca; 11 dias para F. tritici e 13,7 dias para F. tenuicornis.
Os tripes podem medir de 0,5 a 14 mm de comprimento, sendo que as
maiores espcies so tropicais. As espcies mais comuns em regies temperadas no medem
mais do que 1 ou 2 mm de comprimento (LEWIS, 1973).
Os thysanopteros geralmente apresentam dois pares de asas delgadas e
com largas franjas marginais, sendo que o comprimento das asas em relao ao corpo
freqentemente difere entre os vrios grupos, espcies e sexo; ambos os sexos podem
apresentar asas longas (macropteros) ou asas curtas (brachypteros) e em algumas espcies
machos e fmeas possuem asas de tamanhos diferentes. Algumas vezes um ou ambos os
sexos podem no apresentar asas, mas a disperso area no depende da presena das asas,
sendo que muitas espcies pteras se dispersam pelo ar de forma mais eficiente do que
algumas espcies aladas (LEWIS, 1973; PALMER et al., 1989).
O aparato bucal dos tripes nico entre os insetos, consistindo,
essencialmente, de uma nica mandbula (esquerda), labro e maxilas reduzidas a um par de
estiletes assimtricos, que so co-adaptados para formar um canal atravs do qual o alimento
absorvido (HEMING, 1978).
No processo de alimentao em tecidos foliares, os tripes perfuram a
epiderme, utilizando a mandbula, que rapidamente retirada dos tecidos e substituda pelos
estiletes maxilares, que formam um tubo com uma abertura terminal por onde o alimento
succionado.
24
25
Apesar do grande
nmero de trabalhos com substncias antivirais, para vrus de plantas ainda no existe uma
que seja comprovadamente eficiente (FIGUEIRA, 2000).
26
27
determinados pelas correntes de ar locais formadas quando o vento livre encontra obstculos,
como, por exemplo, as margens das culturas ou barreiras de proteo e rvores (LEWIS, 1973;
SLEUTJES, 2003).
Segundo Vida et al. (2004) o uso de telado e eliminao de plantas
invasoras hospedeiras so medidas comumente utilizadas para o controle de vrus, cujos
principais agentes disseminadores so insetos, podendo ter as plantas daninhas como fonte de
inculo.
comumente de nilon, junto s laterais da estufa, cuja malha impede a passagem de insetos
para a cultura no interior da estufa. O uso de telado anti-afdeo proporciona boa proteo das
plantas aos insetos. Costa et al. (1972), estudando os efeitos de coberturas de tela para a
proteo de mudas de tomate contra a invaso de vetores, concluram que mudas de tomate
produzidas sob proteo tiveram uma produo mais elevada do que as no protegidas.
Ribeiro et al. (1981), avaliando as possibilidades de controlar doenas virticas transmitidas
por afdeos atravs da proteo das plantas at fase de estaqueamento do tomateiro, com
telados de nilon, constataram que o tratamento eficaz e pode ser economicamente vivel no
controle de viroses, particularmente sob condies que favoream sua incidncia.
Yudin et al. (1991) obtiveram reduo de 10% no nmero de tripes
capturados atravs de armadilhas adesivas amarelas em campos de produo de alface, quando
estes se apresentavam com barreiras formadas por redes de polivinil aluminizada, em
comparao com campos sem a presena da barreira.
O controle fsico, por sua vez, tem apresentado uma importncia
relativa crescente no controle de pragas, em funo de que, na grande maioria dos casos, h
poucas opes alm do controle qumico (NAKANO, 1999).
28
29
apresenta valores prticos, pode ser complementada por outras medidas de controle.
problema a disponibilidade de variedades resistentes para a maioria das raas e das espcies
de patgenos (BERGAMIM FILHO e AMORIM, 1996). Considervel esforo, tempo e
recursos financeiros tm sido gastos para selecionar e melhorar cultivares resistentes a vrus,
pois importante que a cultivar melhorada tenha as caractersticas agronmicas desejadas e
que no seja suscetvel a outras doenas (KHETARPAL et al., 1998).
Como a disseminao de determinados vrus pode ocorrer via semente,
de suma importncia que as sementes usadas na plantao tenham boa sanidade, sejam de
boa procedncia ou sejam material certificado (MAURY et al., 1998). Se as sementes ou
mudas plantadas estiveram livres de vrus e no houver nas redondezas nenhuma fonte de
inculo, ou seja, hospedeiras vivas para o vrus e para o vetor, a chance de se evitar uma
epidemia so bem grandes (SIGVALD, 1998). Somente uma revoada de insetos vetores
trazidos por correntes areas poderiam introduzir o vrus na lavoura, e haveria uma grande
chance de se no for possvel evitar, pelo menos retardar bastante essa introduo
(SATAPATHY, 1998). Contudo, o objetivo maior deve ser de impedir ou retardar o mximo
possvel a entrada do vrus na lavoura. Resultados com tendncias semelhantes foram obtidos
por Doodson e Saunders (1970) e Borges (2001).
Baseado na resposta sensitiva dos tripes aos diversos comprimentos de
onda (LEWIS, 1959; MOFFITT, 1964; WALKER, 1974; YUDIN et al., 1987), o uso de
superfcies reflexivas tm sido muito utilizada no combate aos vetores transmissores de
viroses.
GREENOUGH et al., 1990; BROWN e BROWN, 1992; CSIZINSZKY et al., 1995). O uso
de superfcie aluminizada reduziu a porcentagem de plantas da famlia das solanceas afetadas
por tospoviroses em 60% na Flrida. Os tratamentos comparativos foram o plstico preto e
solo sem cobertura (GREENOUGH et al., 1990).
Csizinszky et al (1995) obtiveram uma reduo nos danos causados por
tripes em funo da utilizao de materiais de diversas cores como cobertura do solo. Outros
materiais de origem natural tambm foram testados para verificar sua ao repelente sobre os
insetos (COSTA e COSTA, 1971; LITSINGER e RUHENDI, 1984; YUKI, 1990; VOS et al.,
1995, GUIMARES e PAVAN, 1998). A casca de arroz um material que se apresenta
como alternativa vivel de custo (GUIMARES e PAVAN, 1998). O uso de repelentes
30
reflexivos tais como casca de arroz e superfcie de alumnio, reduz sensivelmente a incidncia
de vrus transmitidos por afdeos. Esses produtos repelem os insetos alados em vo, evitando
que desam nas culturas que esto com essas protees (LEWIS, 1973).
Litsinger e Ruhendi (1984) obtiveram a reduo do nmero de tripes
coletados em plantas de caupi quando estas se apresentavam com cobertura de palha de arroz.
Guimares e Pavan (1998) tambm obtiveram diferenas nas respostas de canteiros com e sem
a presena de casca como cobertura de solo, na incidncia de tospoviroses na cultura da alface.
De acordo com Wyman et al. (1979) o objetivo principal das superfcies
colocadas no solo seria de evitar a infeco precoce das plantas. A maioria dos trabalhos
mostra que aps certo tempo do plantio h uma perda gradativa da repelncia, aumentando
bastante a incidncia do vrus, chegando a ser comparvel s testemunhas (MOORE et al.,
1965; WOLFENBARGER e MOORE, 1967; ADLERZ e EVERETT, 1968; GEORGE e
KRING, 1971 e WYMAN et al., 1979).
Para controle de viroses em alface, as reas das plantaes em qualquer
das suas fases (sementeiras, canteiros, viveiros ou plantaes definitivas), bem como aquelas
que a circunda, devem ser to livres quanto possvel de vegetao espontnea ou de outras
culturas que possam servir como fontes de vrus ou do vetor (FIGUEIRA, 2000). Alm de
manter a cultura no limpo, sem ervas daninhas hospedeiras dos insetos vetores e viroses, a
eliminao das plantas atacadas tambm se faz importante (PAVAN e KUROZAWA, 1997).
Medidas para a reduo do inculo inicial ou da taxa de progresso de
doena aplicadas isoladamente so, geralmente, insuficientes em nvel prtico para o controle
de uma ou de todas as doenas incidentes numa determinada cultura (BERGAMIM FILHO e
AMORIM, 2001).
Segundo Vida et al. (2001), as medidas para controle de doenas devem
ser integradas num sistema flexvel, que seja compatvel com o controle de insetos e com os
sistemas de produo utilizados, alm de econmico.
Dentro desse contexto existe a necessidade de se adotar um conjunto de
medidas, com diferentes abordagens simultneas, para que o controle das fitoviroses seja
satisfatoriamente eficiente.
31
3 MATERIAL E MTODOS
precipitao mdia anual de 1. 534 mm, sendo a temperatura mdia de 21C. Os valores
dirios de temperatura mnima, mxima, mdia do ar e precipitao pluviomtrica, referentes
ao perodo de conduo dos experimentos, foram obtidos junto Estao Meteorolgica da
Fazenda Experimental de So Manuel.
Os experimentos foram conduzidos em solo classificado como
Argissolo Vermelho Amarelo Distrfico (Utissol), corrigido de acordo com a anlise qumica
(em anexo) coletada antes da instalao dos experimentos.
32
33
T2 - Solo nu (Figura 4)
T3 - Tnel coberto com filme PEBD (poliestireno de baixa densidade) aditivado anti-vrus
de 150 m (Figuras 5 e 6)
34
Figuras 5 e 6. Tratamento 3 - Tnel coberto com filme PEBD aditivado anti-vrus de 150 m
35
considerao a anlise de solo, de acordo com a recomendao sugeridas por Trani et al.
(1996).
No
36
A = r2
A = rea
= 3,1416
r = d/ 2
d = dimetro (d1+d2)/2 )
d1 = comprimento entre as folhas basais opostas mais longas
d2 = comprimento entre as folhas basais opostas mais curtas
37
3. 5. 1. 3 Produtividade
PT = PC X MF - %IV
1. 000
PT = produtividade em toneladas/ha-1
PC = produtividade corrigida, correspondente ao nmero de plantas por hectare, descontada a
rea entre os canteiros, Borges, L. M. (2003), resultando, no caso do espaamento de 0,30 x
0,25 m, 98.952 plantas/ha-1
MF = valor mdio da massa da matria fresca da unidade experimental, em quilograma/planta
%IV = porcentagem de incidncia de viroses
3. 5. 1. 5 Fechamento de cabea
38
2 ou 3 , sendo que as parcelas que apresentaram maioria de plantas com cabea aberta recebeu
nota 1, cabea parcialmente fechada, nota 2 e cabea fechada, nota 3.
3. 5. 3 Diagnose de Fitovrus
39
ambiente. Em seguida a soluo foi centrifugada por um minuto a 5. 000 rpm, o sobrenadante
foi descartado e o pellet lavado duas vezes com 500 L de soluo de lavagem (Tris-HCI 20
mM pH 7,5, EDTA 1 mM, NaCL 100 mM e igual volume de etanol absoluto).
Aps
centrifugao por 1 minuto a 5. 000 rpm, o pellet foi secado a vcuo por 15 a 20 minutos e o
RNA ressuspendido em 400 l de gua Milli-Q tratada com DEPC, seguido de incubao por
5 minutos a 55 C e centrifugao por 5 minutos a 13. 000 rpm. O sobrenadante (300 L) foi
transferido para um novo tubo e armazenado a -20C. Foi utilizada uma alquota de 5 L para
o RT-PCR.
As anlises de RT-PCR foram realizadas para deteco de LMVUniversal, LMV-Most, Tospovrus, LeMoV e CMV.
Todas as amostras foram submetidas a RT-PCR especficas para LMVUniversal e LeMoV. Somente as amostras positivas para o teste de RT-PCR LMV- Common
40
foram submetidas anlise de RT-PCR para deteco de isolados de LMV Most, sendo que
as amostras negativas para LMV-Most, porm positivas para o primer universal para LMV
foram classificadas como LMV-Common. Para a anlise de RT-PCR (tospovrus) foram
submetidas somente as amostras suspeitas de infeco por este vrus. Para a anlise de RTPCR (CMV) foram selecionadas ao acaso 33 amostras contendo sintomas de mosaico, e que
no foram identificadas por nenhum dos oligonucleotdeos utilizados (Tabela 02) nas anlises
de RT-PCR realizadas.
As anlises de RT-PCR foram realizadas em volume de 50 L contendo
Tris-HCL 10 mM pH 8,8, Triton X-100 a 0,2% (v/v), MgCL2 0,75 mM, 250 M da mistura de
nucleotdeos, 1 M de cada oligonucleotdeo, 0,02 unidades da enzima transcriptase reserva
do Avian myeloblatosis virus (AMV, AmershamPharmacia) e 0,3 unidades de Taq DNA
Polimerase. Para deteco dos diferentes isolados utilizou-se oligonucleotdeos especficos;
9171 e 8894 para LMV Commom, BR1016M e BR535P para LMV Most, pLmo e pLmo ant
para LeMoV, BR 60 e BR 65 para Tospovrus e 00. 35-3 e 00. 38-8 para CMV.
A reao para deteco de LMV-Universal constituiu-se de 15 minutos
a 42C para a etapa de transcrio reversa, seguidos de 5 minutos a 95C para inativao da
transcriptase reversa e 40 ciclos de desnaturao por 200 segundos a 95C, anelamento por 20
segundos a 54C e extenso por 40 segundos a 72C.
A reao para deteco de LMV-Most constituiu-se de 30 minutos a
42C para a etapa de transcrio reversa, seguidos de 5 minutos a 95C para inativao da
transcriptase reversa e 40 ciclos de desnaturao por 30 segundos a 92C, anelamento por 50
segundos a 56C e extenso por 60 segundos a 72C.
A reao para deteco de LeMoV constituiu-se de 30 minutos a 42C
para a etapa de transcrio reversa, seguidos de 3 minutos a 95C para inativao da
transcriptase reversa e 35 ciclos de desnaturao por 30 segundos a 95C, anelamento por 40
segundos a 54C e extenso por 20 segundos a 72C.
A reao para deteco de tospovrus constituiu-se de 30 minutos a
42C para a etapa de transcrio reversa, seguidos de 5 minutos a 95C para desnaturao
inicial e 40 ciclos de desnaturao por 1,30 minutos a 95C, anelamento por 2 minutos a 48C.
A reao para deteco de CMV constituiu-se de 30 minutos a 42C
para a etapa de transcrio reversa, seguidos de 5 minutos a 95C para inativao da
41
Tabela 02. Oligonucleotdeos utilizados para amplificao dos vrus nas anlises de RTPCR.
VRUS
OLIGONU
CLEOT
DEO
SEQUNCIA
LMV
9171
5GCGTTGATGTCGTCATCYTT 3
Universal
8894
5CCGTACATAGCIGARTGTGCT 3
LMV
BR 1016 M
5CTTGATCTATAAGAGCTGC 3
Most
BR 535 P
5GTTTCGGTACCAGAACCC 3
482
2004
Tospovirus
BR 60
5AGAGCAATCGTGTCA 3
871
Eiras et al.,
BR 65
5 ATCAAGCCTTCTGAAAGTCAT 3
453
2001
pLmo3
5 ACATGAGCA CTAGTGAGG 3
pLmo4
5 AGATAGAGC CGTCTGGCG 3
3cp
5TATGATAAGAA(A/G)CTTGTTTC3
5cp
5GCCGTAAGCTGGATGGACAA 3
LeMoV
CMV
PARES
DE
BASES
REFERNCIA
Peypelut et al.,
278
2004
Peypelut et al.,
Jado, 2004
300
Boari, 1998
488
42
para 5ml de soluo. A inoculao das plantas indicadoras foi efetuada por frico das folhas
previamente polvilhadas com carvo vegetal modo e peneirado.
Em seguida, as folhas
inoculadas foram lavadas com gua corrente para a retirada do excesso de inculo e abrasivo e
mantidas em casa de vegetao.
Amostras das plantas indicadoras que apresentaram sintomas de
viroses foram posteriormente analisadas em microscpio eletrnico de transmisso, modelo
CM 100 (Philips), disponvel no Departamento de Produo Vegetal da FCA/UNESP. Para
tal, foi utilizada a tcnica de leaf dip colocando-se sobre uma tela de cobre coberta por uma
pelcula de formvar, uma gota de extrato foliar macerado em soluo tampo fosfato 0,05M
pH 7,2 durante 5 minutos. O material foi lavado com gua destilada, seco em papel filtro e
depois contrastado com acetato de uranila a 3%. Aps 3 minutos, retirou-se o excesso de
acetato, utilizando-se papel de filtro e realizaram-se as observaes.
3. 5. 5 Anlise estatstica
43
variabilidade dos dados, optou-se por realizar anlises dos efeitos principais de tratamento e
prognie, separadamente, nos casos de inexistncia de efeito significativo de interao entre
estes fatores na mediana da resposta. Deste modo, primeiro realizou-se um teste global para
verificar se a nota global diferencia entre os tratamentos e as prognies. Para verificar quais
so essas diferenas realizou-se os contrastes dois a dois, dentro de tratamento e prognie.
Devido ao grande nmero de contagens nulas ou prximas de zero, a
aplicao da maioria dos procedimentos inferenciais para os dados de porcentagem de plantas
com sintomas de viroses ficou dificultada. Como alternativa aos mtodos usuais, realizou-se
comparaes entre as propores de plantas afetadas, independentemente, pareando as
prognies dentro de cada tratamento. Em particular, escolheu-se contrastes entre a prognie 1,
suscetvel, e as demais prognies, pois para outros tipos de combinaes era muito comum
ocorrer incidncia zero de sintomas de fitoviroses para as duas prognies, ficando, desta
forma, impossvel fazer qualquer tipo de teste. Maiores detalhes sobre tais testes podem ser
encontrados em Conover (1999).
44
4 RESULTADOS E DISCUSSO
45
S.Q.
Q.M.
Tratamento
666788
222263
35,1669
< 0,001
Prognie
18
251107
13950
2,2073
0.005088
tratamento*prognie
54
156870
2905
0,4596
0,999308
Resduo
152
960675
6320
Fonte de variao
G.L.
S.Q.
Q.M.
Tratamento
666788
222263
40,9703
Prognie
18
251107
13950
2,5715
7,172-4
Resduo
206
1117545
5425
46
Tabela 5. Efeito das prticas culturais sobre a rea de projeo da saia de plantas de alface
no experimento de outono/inverno. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
Palha de arroz
793,30 a
Solo nu
757,32 b
Tnel tela
704,49 c
Tnel plstico
650,33 d
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
Cv. Elisa
796,81 a
11
772,21 ab
6
769,10 ab
14
753,13 abc
12
745,27 abc
16
740,18 abc
13
739,26 abc
17
737,62 abc
15
731,01 abc
3
730,29 abc
7
717,82 abc
5
716,63 abc
18
715,96 abc
2
711,59 abc
8
702,86 abc
9
694,22 abc
1
691,59 abc
10
678,62 bc
4
656,59 c
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
47
G.L.
3
18
54
152
S.Q.
787158
368633
131728
1064811
Q.M.
262386
20480
2439
7005
F
37,4552
2,9234
0,3482
P
< 2,2-16
1,797-4
0,99998
prognie e tratamento
(modelo
reduzido)
no
experimento
de
G.L.
3
18
206
S.Q.
787158
368633
1196539
Q.M.
262386
20480
5808
F
45,1732
3,5258
P
< 2,2-16
5,331-06
48
49
Tabela 9. Efeito das prticas culturais sobre a rea de projeo da saia de plantas de alface, no
experimento de primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
Tnel plstico
858,37 a
Palha de arroz
764.82 b
Solo nu
734,70 bc
Tnel tela
700,39 c
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
Tabela 10. rea mdia de projeo da saia, das prognies de alface, no experimento de
primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Prognies
_________________________________
Cv. Elisa
834,50 a
6
824,57 a
2
815,92 ab
5
812,33 ab
17
788,69 abc
3
783,87 abc
12
776,23 abc
7
774,87 abc
14
769,19 abc
13
765,69 abc
1
758,08 abc
10
757,78 abc
4
756,63 abc
18
754,93 abc
15
736,67 abc
9
716,74 bc
16
713,40 bc
8
697,35 c
11
689,44 c
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
50
Tabela 11. Resultados da ANOVA para a varivel massa da matria fresca considerando
os fatores prognie e tratamento e interao (modelo saturado), no experimento de
outono/inverno. So Manuel, SP, 2003.
Fonte de variao
Tratamento
Prognie
tratamento*prognie
Resduo
G.L.
3
18
54
152
S.Q.
93670
101482
17363
184560
Q.M.
31223
5638
322
1214
F
25.7149
4.6432
0.2648
P
1.644-13
4.623-08
1
Tabela 12. Resultados da ANOVA para a varivel massa da matria fresca considerando
os fatores prognie e tratamento (modelo reduzido), na poca 1. So Manuel, SP, 2003.
Fonte de variao
Tratamento
Prognie
Resduo
G.L.
3
18
206
S.Q.
93670
101482
201924
Q. M.
31223
5638
980
F
31.8537
5.7517
P
< 2.2-16
4.968-11
51
comprovaram que, o tratamento tnel plstico em relao a massa da matria fresca, foi o que
obteve menor desempenho, evidenciando o resultado negativo do efeito estufa proporcionado
pela uso do plstico, contrariando assim outros resultados que demonstraram a superioridade
das condies do cultivo em ambiente protegido em relao ao sistema de cultivo a campo
(DANTAS, 1997; SANTOS et al, 2003).
Goto (1998) comenta que, em funo da produo de alface ser normal
e regular durante o perodo de abril a dezembro, no se justifica o uso de cultivo protegido na
regio Sudeste neste perodo, visto que a relao custo/benefcio se torna negativa.
Analisando-se a massa da matria fresca das diferentes prognies
(Tabela 14), observa-se que as prognies 1, 2, 4, 5, 8, 9, 10, 12, 17 e 18 diferiram
estatisticamente da cultivar comercial Elisa, apresentando menor massa da matria fresca.
Tabela 13. Efeito das prticas culturais sobre a massa da matria fresca em plantas de
alface, no experimento de outono/inverno. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
Palha de arroz
297,92 a
Tnel tela
278,96 b
Solo nu
262,44 c
Tnel plstico
243,03 d
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
52
Cv. Elisa
6
13
3
14
11
15
7
16
2
12
9
17
5
8
18
1
4
10
315,90
310,67
288,83
285,54
283,64
283,58
272,00
271,47
270,64
266,82
264,62
263,13
262,02
260,45
259,83
259,39
252,47
251,34
218,84
a
ab
abc
abc
abc
abc
abc
abc
abc
bc
c
cd
cd
cd
cd
cd
cd
cd
d
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
53
Tabela 15. Resultados da ANOVA para a varivel massa da matria fresca considerando
os fatores prognie e tratamento e interao (modelo saturado), no experimento de
primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
Fonte de variao
Tratamento
Prognie
tratamento*prognie
Resduo
G.L.
3
18
54
152
S.Q.
604605
117241
66891
168202
Q.M.
201535
6513
1239
1107
F
182,1218
5,8860
1,1194
P
< 2,2-16
1,446-10
0,2939
Tabela 16. Resultados da ANOVA para a varivel massa da matria fresca considerando
os fatores prognie e tratamento (modelo reduzido), no experimento de
primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
Fonte de variao
Tratamento
Prognie
Resduo
G.L.
3
18
206
S.Q.
604605
117241
235093
Q.M.
201535
6513
1141
F
176,5948
5,7073
P
< 2,2-16
6,227-11
54
Tabela 17. Efeito das prticas culturais sobre a massa da matria fresca , no experimento
de primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
Palha de arroz
391,93 a
Tnel plstico
319,07 b
Solo nu
354,35 c
Tnel tela
252,15 d
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
Cv. Elisa
377,35 a
6
367,66 ab
2
355,21 abc
17
343,95 abcd
5
340,69 abcde
7
338,24 abcdef
14
337,49 abcdef
3
336,81 abcdef
12
333,52 abcdefg
18
330,05 abcdefg
1
328,89 abcdefg
4
326,45 abcdefg
13
323,05 bcdefg
10
322,66 bcdefg
15
306,79 cdefg
9
302,95 defg
11
298,24 defg
16
296,30 defg
8
291,80 fg
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
55
G.L.
3
18
54
152
S.Q.
1061.16
1519.14
255.85
1704.86
Q.M.
353.72
84.40
4.74
11.22
F
31.54
7.52
0.42
P
<0.000
<0.000
1.000
56
G.L.
3
18
206
S.Q.
1061.16
1519.14
1960.71
Q.M.
353.72
84.40
9.52
F
37.16
8.87
P
0.000
0.000
57
Tabela 21. Efeito das prticas culturais sobre a produtividade da alface, no experimento
de outono/inverno. So Manoel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
Produtividade (t/ha)
____________________________________
Palha de arroz
28,62 a
Tnel tela
26,83 b
Solo nu
24,88 c
Tnel plstico
22,05 d
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
Produtividade (t/ha)
____________________________________
Cv. Elisa
31,26 a
6
30,74 ab
3
28,26 abc
13
27,43 abc
14
27,32 abc
7
26,86 abc
15
26,73 bc
11
26,13 bc
5
25,77 bc
8
25,55 cd
2
25,36 cd
9
25,30 cd
16
24,64 cd
4
24,37 cd
12
24,19 cd
17
24,19 cd
18
23,76 cd
1
22,30 cd
10
19,99 d
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
58
G.L.
3
18
54
152
S.Q.
5920.87
1148.15
655.23
1646.83
Q. M.
1973.62
63.79
12.13
10.83
F
182.16
5.89
1.12
P
<0.000
<0.000
0.293
G.L.
3
18
206
S.Q.
5920.87
1148.15
2302.06
Q.M.
4973.62
63.79
11.18
F
176.61
5.71
P
0.000
0.000
59
Tabela 25. Efeito das prticas culturais sobre a produtividade da alface no experimento
de primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
Produtividade (t/ha)
____________________________________
Palha de arroz
35,37 a
Tnel plstico
30,95 b
Solo nu
28,04 c
Tnel tela
23,60 d
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
Produtividade (t/ha)
____________________________________
6
35,54 a
Cv. Elisa
35,53 ab
2
33,07 abc
7
32,30 abcd
5
32,02 abcde
14
31,30 abcde
4
30,12 abcde
17
29,46 abcde
3
29,41 abcde
18
29,20 abcde
1
29,13 bcde
10
28,77 bcde
8
28,49 bcde
9
28,25 bcde
15
26,56 cde
11
26,25 cde
16
26,22 de
13
25,22 de
12
24,28 e
___________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
60
Fonte de variao
tratamento
prognie
tratamento*prognie
Resduo
S.Q.
3293,1
8402,2
990,3
3985,3
Q.M.
1097,7
466,8
18,3
26,2
F
41,8661
17,8033
0,6995
P
< 0,001
< 0,001
0,343
G.L.
3
18
206
S.Q.
3293,1
8402,2
4975,6
Q.M.
1097,7
466,8
24,2
F
45,447
19,326
P
< 0,001
< 0,001
61
Tabela 29. Efeito das diferentes prticas culturais sobre a varivel tempo de incio do
pendoamento, no experimento de outono/inverno. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
Palha de arroz
29,35 a
Solo nu
28,74 a
Tnel plstico
23,94 b
Tnel tela
20,02 c
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
62
de
incio
do pendoamento
das diferentes
prognies, no
1
33,83 a
7
32,08 ab
13
32,08 ab
3
31,50 ab
16
30,33 ab
15
29,17 abc
06
29,17 abc
12
28,58 abc
Cv. Elisa
28,58 abc
17
28,00 abcd
14
26,83 abcde
2
25,67 bcde
11
22,17 def
8
21,00 efg
18
20,42 efg
5
19,83 efg
10
18,67 fgh
4
14,58 gh
9
12,25 h
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
63
G.L.
3
18
54
152
S.Q.
149,56
1222,37
133,77
1016,67
Q.M.
49,85
67,91
2,48
6,69
F
7,4536
10,1530
0,3704
P
< 0,001
< 0,001
0,9999700
G.L.
3
18
206
S.Q.
149,56
1222,37
1150,44
Q.M.
49,85
67,91
5,58
F
8,9269
12,1600
P
< 0,001
< 0,001 6
64
luminosidade elevadas, deixa de manifestar todo seu potencial gentico, havendo reduo do
ciclo e antecipao da fase reprodutiva.
Analisando-se a varivel tempo mdio de incio do pendoamento das
diferentes prognies, no experimento de primavera/vero (Tabela 34), observa-se que apenas
as prognies 9, 10 e 11 diferiram estatisticamente da cultivar comercial Elisa, apresentando
menor tempo para o incio do pendoamento. Estas mesmas prognies tambm diferiram
estatisticamente da cultivar Elisa, no experimento de outono/inverno.
Analisando-se a diferena entre a maior e a menor mdia observada
entre as prognies (prognie 1 - prognie 10), Verificou-se que esta foi de apenas 7,92 dias, ou
seja, bem menor que a diferena observada entre a maior e a menor mdia, no experimento de
outono/inverno, que foi de 21,58 dias.
Tabela 33. Efeito das prticas culturais sobre o tempo de incio do pendoamento, no
experimento de primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
______________________________
Solo nu
12,63 a
Palha de arroz
11,67 ab
Tnel plstico
11,05 bc
Tnel tela
10,44 c
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
65
_________________________________
______________________________________
1
13,75 a
7
13,75 a
2
13,33 ab
6
13,33 ab
12
13,33 ab
Cv. Elisa
12,92 ab
15
12,92 ab
3
12,91 ab
17
12,50 ab
16
12,08 ab
5
11,67 ab
14
11,67 ab
8
11,25 ab
18
11,25 ab
13
10,83 abc
4
10,00 bcd
11
7,00 cde
9
6,67 de
10
5,83 e
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste tukey a 5% de probabilidade.
66
maioria das observaes apresentou o nvel 3 (fechada) (81%), contra 19% de observaes
com fechamento intermedirio. Para os tratamentos tnel plstico e tnel tela, temos a
tendncia oposta, com a maioria das observaes no nvel 2 (intermediria). Provavelmente,
por haver maior expanso da rea, para captao de luz.
Tabela 35. Classificao das parcelas de acordo com os nveis de fechamento de cabea das
plantas de alface, conduzidas sob diferentes prticas culturais, no experimento
de outono/inverno. So Manuel, SP, 2003.
Tratamento
Palha de arroz
Solo nu
Tnel plstico
Tnel tela
Fechamento de cabea
Nmero de parcelas e porcentagem relativa
Nvel 1
Nvel 2
Nvel 3
0 (0%)
11 (19%)
46 (81%)
0 (0%)
23 (40%)
34 (60%)
2 (4%)
44 (77%)
11 (19%)
1 (2%)
37 (65%)
19 (33%)
Tabela 36. Classificao das prognies de acordo com os nveis de fechamento de cabea,
no experimento de outono/inverno. So Manuel, SP, 2003.
Prognie
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
Cv. Elisa
Fechamento de cabea
Nmero de parcelas e porcentagem relativa
Nvel 1
Nvel 2
Nvel 3
2 (17%)
6 (50%)
4 (33%)
0 (0%)
5 (42%)
7 (58%)
0 (0%)
4 (33%)
8 (67%)
0 (0%)
10 (83%)
2 (17%)
0 (0%)
5 (42%)
7 (58%)
0 (0%)
2 (17%)
10 (83%)
0 (0%)
5 (42%)
7 (58%)
0 (0%)
10 (83%)
2 (17%)
0 (0%)
9 (75%)
3 (25%)
1 (8%)
8 (67%)
3 (25%)
0 (0%)
6 (50%)
6 (50%)
0 (0%)
6 (50%)
6 (50%)
0 (0%)
6 (50%)
6 (50%)
0 (0%)
6 (50%)
6 (50%)
0 (0%)
6 (50%)
6 (50%)
0 (0%)
7 (58%)
5 (42%)
0 (0%)
5 (42%)
7 (58%)
0 (0%)
7 (58%)
5 (42%)
0 (0%)
2 (17%)
10 (83%)
67
68
Tabela 37. Comparao das medianas de fechamento de cabea nas diferentes prticas
culturais, no experimento de outono/inverno. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
Palha de arroz
3,00 a
Solo nu
3,00 a
Tnel plstico
2,00 b
Tnel tela
2,00 b
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste da mediana.
Cv. Elisa
3,00 a
6
3,00 a
3
3,00 a
2
2,50 b
5
2,50 b
7
2,50 b
17
2,50 b
11
2,50 b
12
2,50 b
13
2,50 b
14
2,50 b
15
2,50 b
18
2,50 b
16
2,00 c
1
2,00 c
9
2,00 c
4
2,00 c
8
2,00 c
10
2,00c
___________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste da mediana.
69
70
Tabela 39. Classificao das parcelas de acordo com os nveis de fechamento de cabea
das plantas de alface, conduzidas
sob
diferentes
prticas culturais, no
Fechamento de cabea
Nmero de parcelas e porcentagem relativa
Nvel 1
Nvel 2
Nvel 3
0 (0%)
7 (12%)
50 (88%)
0 (0%)
14 (25%)
43 (75%)
4 (7%)
23 (40%)
30 (53%)
27 (47%)
30 (53%)
0 (0%)
Tabela 40. Classificao das prognies de acordo com os nveis de fechamento de cabea,
no experimento de primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
Prognie
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
Cv. Elisa
Fechamento de cabea
Nmero de parcelas e porcentagem relativa
Nvel 1
Nvel 2
Nvel 3
2 (17%)
5 (42%)
5 (42%)
1 (8%)
4 (33%)
7 (58%)
2 (17%)
3 (25%)
7 (58%)
4 (33%)
3 (25%)
5 (42%)
3 (25%)
1 (8%)
8 (67%)
0 (0%)
3 (25%)
9 (75%)
0 (0%)
5 (42%)
7 (58%)
3 (25%)
7 (58%)
2 (17%)
1 (8%)
6 (50%)
5 (42%)
1 (8%)
6 (50%)
5 (42%)
1 (8%)
6 (50%)
5 (42%)
0 (0%)
6 (50%)
6 (50%)
3 (25%)
2 (17%)
7 (58%)
2 (17%)
4 (33%)
6 (50%)
2 (17%)
3 (25%)
7 (58%)
1 (8%)
4 (33%)
7 (58%)
4 (33%)
0 (0%)
8 (67%)
1 (8%)
3 (25%)
8 (67%)
0 (0%)
3 (25%)
9 (75%)
71
Tabela 41. Efeito das prticas culturais sobre os nveis de fechamento da cabea de
plantas de alface, no experimento de primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
de cabea
_______________________________________
Palha de arroz
3,00 a
Solo nu
3,00 a
Tnel plstico
3,00 a
Tnel tela
2,00 b
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste da Mediana.
72
Tabela 42. Comparao das medianas de fechamento de cabea das diferentes prognies,
no experimento de primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
____________________________________________________________________________
Tratamentos
_________________________________
Cv. Elisa
3,00 a
6
3,00 a
18
3,00 a
7
3,00 a
2
3,00 a
16
3,00 a
3
3,00 a
5
3,00 a
13
3,00 a
17
3,00 a
15
3,00 a
12
2,50 b
14
2,50 b
9
2,00 c
10
2,00 c
11
2,00 c
1
2,00 c
4
2,00 c
8
2,00 c
____________________________________________________________________________
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si pelo teste da mediana.
4.2 Fitoviroses
73
palha de arroz
solo nu
tnel plstico
tnel tela
Plantas infectadas
2,00%
1,50%
1,00%
0,50%
0,00%
19/mai
26/mai
30/mai
6/jun
Avaliaes
Figura 09. Avaliao visual semanal de plantas de alface com sintomas de vrus, do
experimento de outono/inverno. So Manuel, SP, 2003.
74
Tabela 43. Porcentagem total de plantas com sintomas de vrus nos diferentes tratamentos e
prognies, no experimento de outono/inverno. So Manuel, SP, 2003.
Prognies
1*
Palha de
arroz
8,34%
Solo nu
8,34%
Tnel
plstico
19,45% a
Tnel tela
8,34%
Mdia
11,12%
0,00%
8,34%
8,34% a
0,00%
4,17%
0,00%
0,00%
0,00% b
0,00%
0,00%
0,00%
5,56%
2,78% b
0,00%
2,09%
0,00%
0,00%
0,00% b
0,00%
0,00%
0,00%
0,00%
0,00% b
0,00%
0,00%
0,00%
0,00%
0,00% b
0,00%
0,00%
0,00%
0,00%
2,78% b
0,00%
0,70%
5,56%
0,00%
5,56% a
0,00%
2,78%
10
8,33%
2,78%
8,34% a
11,12%
7,64%
11
5,56%
8,34%
8,34% a
5,56%
6,95%
12
5,56%
13,89%
5,56% a
5,56%
7,64%
13
0,00%
5,56%
5,56% a
5,56%
4,17%
14
0,00%
5,56%
5,56% a
0,00%
2,78%
15
0,00%
2,78%
0,00% b
0,00%
0,70%
16
5,56%
16,67%
8,34% a
2,78%
8,34%
17
5,56%
2,78%
13,89% a
5,56%
6,95%
18
13,89%
0,00%
2,78% b
11,12%
6,95%
Elisa
0,00%
0,00%
0,00% b
0,00%
0,00%
Tinto
0,00 %
0,00%
0,00% b
0,00%
0,00%
Mdia
2,92%
4,03%
4,86%
2,78%
3,65%
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem entre si ao nvel de 10% de probabilidade.
(*) Prognie testemunha para os contrastes entre prognies.
75
Botucatu/UNESP. C.P. 237, CEP 18603 -630, Botucatu SP, Comunicao Pessoal, 1990.
76
8,00%
palha de arroz
solo nu
tnel plstico
tnel tela
Plantas infectadas
7,00%
6,00%
5,00%
4,00%
3,00%
2,00%
1,00%
0,00%
26/nov
3/dez
13/dez
Avaliae s
Figura 10. Avaliao visual semanal de plantas de alface com sintomas de viroses, no
experimento de primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
77
Tabela 44. Porcentagem total de plantas com sintomas de viroses nos diferentes tratamentos e
prognies, no experimento de primavera/vero. So Manuel, SP, 2003.
Prognies
1*
Palha de
arroz
13,89% a
Solo nu
2,78% b
Tnel
plstico
19,45% a
Tnel tela
2,78% b
Mdia
9,73%
5,56% a
5,56% b
2,78% b
11,12% b
6,26%
13,89% a
19,44% a
11,11% a
0,00% b
11,11%
8,34% a
8,33% b
8,34% a
0,00% b
6,25%
2,78% a
2,78% b
11,12% a
2,78% b
4,87%
5,56% a
2,78% b
0,00% b
0,00% b
2,09%
2,78% a
2,78% b
5,56% a
2,78% b
3,47%
2,78% a
0,00% b
0,00% b
2,78% b
1,39%
8,33% a
2,78% b
8,34% a
2,78% b
5,56%
10
11,11% a
13,89% b
13,90% a
11,11% b
12,50%
11
19,45% a
8,34% b
8,34% a
2,78% b
9,73%
12
13,89% a
38,89% a
33,33% a
19,45% a
26,39%
13
8,34% a
36,11% a
27,78% a
13,89% b
21,53%
14
2,78% a
8,34% b
11,11% a
2,78% b
6,25%
15
8,34% a
19,44% a
16,67% a
2,78% b
11,81%
16
16,67% a
8,34% b
11,11% a
2,78% b
9,73%
17
13,89% a
19,45% a
5,56% a
16,67% a
13,89%
18
5,56% a
5,56% b
25,00% a
2,78% b
9,73%
Elisa
5,56% a
8,34% b
2,78% b
2,78% b
4,87%
Tinto
0,00% b
2,78% b
0,00% b
0,00% b
0,70%
Mdia
8,48%
10,84%
11,11%
5,14%
8,89%
78
Tabela 45. Resultado dos testes de RT-PCR para amostras de plantas com sintomas de
fitoviroses, do experimento de outono/inverno. Botucatu, SP. 2003.
____________________________________________________________________________
Amostras positivas
_____________________________________________________
LeMoV
LMV-Common
LMV-Most
Tospovirus
__________
______________
___________
___________
Amostras negativas
__________________
3,84%
60,82%
0%
16,16%
19,17%
____________________________________________________________________________
79
Tabela 46. Resultado dos testes de RT-PCR para amostras de plantas com sintomas de
fitoviroses, do experimento de primavera/vero. Botucatu, SP. 2003.
____________________________________________________________________________
Amostras positivas
____________________________________________________
LeMoV
__________
LMV-Common
______________
LMV-Most
___________
Amostras negativas
___________________
Tospovirus
___________
0%
16,87%
0%
20,47%
62,65%
____________________________________________________________________________
80
Tabela 47. Porcentagem de plantas com sintomas de viroses (PSV), confirmados atravs de
testes de RT-PCR especficos para LeMoV, LMV-Common e Tospovirus, e
amostras negativas, nos experimentos 1 e 2 . Botucatu, SP, 2003.
N
I
E
L
e
M
o
V
0,7
8,3
2,1
4,2
EXPERIMENTO 1
(outono/inverno)
O
T
U
O
L
T
M
S
R
P
V
O
O
II
S
V
EXPERIMENTO 2
(primavera/vero)
PSV
L
e
M
o
V
L
M
V
II
T
O
S
P
O
V
O
U
T
R
O
S
PSV
11,1
0,7
9,0
9,7
10,4
4,2
1,4
0,7
4,2
6,3
5,2
0,0
4,9
6,3
11,2
5,6
0,7
0,7
0,7
2,1
2,1
4,2
6,3
4,2
2,8
2,1
4,9
2,5
2,1
2,1
1,1
3,5
3,5
1,8
0,7
0,7
0,7
0,7
1,4
1,1
1,4
1,4
2,8
2,8
2,8
5,6
4,2
10
6,3
1,4
7,7
3,5
9,0
12,5
10,1
11
1,4
4,9
0,7
7,0
4,2
5,6
9,8
8,4
12
0,7
4,9
0,7
1,4
7,7
9,0
17,4
26,4
17,1
13
2,8
1,4
4,2
9,0
2,1
10,4
21,5
12,9
14
2,8
2,8
0,7
5,6
6,3
4,6
15
0,7
0,7
1,4
10,4
11,8
6,3
16
4,2
2,1
2,1
8,4
2,8
6,9
9,7
9,1
17
2,1
2,8
2,1
7,0
6,2
2,1
5,6
13,9
10,5
18
1,4
2,1
3,5
7,0
6,3
3,5
9,8
8,4
Elisa
2,1
2,1
4,2
2,1
Tinto
0,7
0,7
0,4
Mdia
0,14
2,22
0,59
0,70
3,65
0,00
1,50
1,82
5,57
8,89
6,3
Mdia
2
Exp.
81
Tabela 48. Nmero de insetos vetores capturados em armadilhas adesivas amarelas durante
o experimento de outono/inverno. So Manuel, SP. 2003.
Experimento 1 - Outono/Inverno
Tratamento
Tripes
Pulges
A1
B1
C1
A1
B1
C1
Palha de arroz
47,33
50,17
44,17
8,17
27,67
6,83
Solo nu
43,17
48,00
40,67
7,33
26,83
6,50
Tnel plstico
7,33
10,67
28,83
1,17
4,67
5,17
Tnel tela
1,00
1,33
4,33
0,00
1,00
4,33
82
Tabela 49. Nmero de insetos vetores capturados em armadilhas adesivas amarelas e azuis
durante o experimento de primavera/vero. So Manuel, SP. 2003.
Experimento 2 - Primavera/Vero
Tripes1 e 2
Tratamento
Pulges2
A3
B3
C3
A3
B3
C3
Palha de arroz
42,50
73,67
88,67
4,00
5,67
8,34
Solo nu
22,00
68,17
81,00
3,50
5,20
7,00
Tnel plstico
13,50
58,34
183,33
1,83
7,67
7,84
Tnel tela
5,00
6,71
24,00
0,00
0,33
1,17
83
84
Nos
ensaios
realizados
nos
perodos
de
outono/inverno
Esses
produtos repelem os insetos alados em vo, evitando que desam nas culturas que esto com
essas protees (LEWIS, 1973; YUKI et al., 1998).
Litsinger e Ruhendi (1984) obtiveram a reduo do nmero de tripes
coletados em plantas de caupi quando estas se apresentavam com cobertura de palha de arroz.
Guimares e Pavan (1998) tambm obtiveram diferenas nas respostas de canteiros com e sem
a presena de casca como cobertura de solo, na incidncia de tospoviroses na cultura da alface.
De acordo com Wyman et al. (1979) o objetivo principal das
superfcies colocadas no solo seria de evitar a infeco precoce das plantas. A maioria dos
trabalhos mostra que aps certo tempo do plantio h uma perda gradativa da repelncia,
aumentando bastante a incidncia do vrus, chegando a ser comparvel s testemunhas
(MOORE et al., 1965; WOLFENBARGER e MOORE, 1967; ADLERZ e EVERETT, 1968;
GEORGE e KRING, 1971 e WYMAN et al., 1979).
85
Contudo, foi observado nos ensaios, que com o tempo houve uma alta
incidncia de afdeos e tripes no tratamento palha de arroz e solo nu, mas a incidncia de
viroses foi baixa. Isto leva a crer que houve uma perda gradativa da repelncia da palha de
arroz ou perda de autonomia de vo pela freqncia e intensidade do vento na regio ou ainda
no houve disponibilidade de fonte de inculo no local da pesquisa.
Segundo Lewis (1973) e Yuki (1978) embora maior coleta de afdeos
corresponda a maior incidncia de molstia, as propores so variveis, ou seja, no existe
uma correlao fixa entre o nmero de Myzus persicae coletado na armadilha amarela de gua
e a incidncia do vrus. Isto se deve provavelmente a disponibilidade de fontes de vrus em
determinadas pocas do ano, isto , perodos em que h boas hospedeiras do vrus, e em
quantidades elevadas a proporo nmero de vetor/incidncia de vrus, deve ser mais baixa.
Com relao aos sistemas protegidos de conduo da alface, tnel
plstico e tnel tela houve menor incidncia de afdeos e tripes e baixa incidncia de viroses,
com exceo do tratamento com tnel plstico que em funo do ambiente proporcionar
melhores condies de adaptao dos insetos aps a suas entradas nos tneis, necessitando
assim, de um manejo mais adequado.
Costa et al. (1972), estudando os efeitos de coberturas de tela para a
proteo de mudas de tomate contra a invaso de vetores, concluram que mudas de tomate
produzidas sob proteo tiveram uma produo mais elevada do que as no protegidas. Em
relao a cultura de alface, a tela teve efeito positivo resultando na baixa incidncia das
viroses, contudo no nos dados de produo, j que os melhores desempenho das prognies e
cultivares foram observados em solo coberto por palha de arroz.
Ribeiro et al. (1981), avaliando as possibilidades de controlar doenas
virticas transmitidas por afdeos atravs da proteo das plantas at fase de estaqueamento
do tomateiro, com telados de nylon, constataram que o tratamento eficaz e pode ser
economicamente vivel no controle de viroses, particularmente sob condies que favoream
sua incidncia.
Na anlise individual da rea de projeo da saia, massa da matria
fresca, produtividade, poca de pendoamento e fechamento da cabea, em todas as pocas e
condies, diferena significativas foram observadas com relao as prognies 6 e 7, que
apresentaram bom desempenho em todos os aspectos analisados e s comparada a cultivar
86
Elisa, referncia pelo seu desempenho produtivo. Contudo, destacaram-se desta, se levarmos
em considerao que no apresentou nenhuma incidncia de LMV, sendo resistente a LMV-II,
LeMoV e Tospovirus. Comprovando que a maneira ideal de controlar fitoviroses a obteno
de cultivares resistentes, mesmo que parcial ou completamente imunes, conforme observou
Hammond, 1998.
O desenvolvimento de cultivares resistentes para controle de doenas
apresenta-se como uma soluo econmica e eficiente, requerendo o mnimo ou nenhuma
experincia por parte dos extensionistas ou produtores rurais (REDDY e WIGHTMAN, 1988).
Considervel esforo, tempo e recursos financeiros tm sido gastos para selecionar e melhorar
cultivares resistentes a vrus, pois importante que a cultivar melhorada tenha as
caractersticas agronmicas desejadas e que no seja suscetvel a outras doenas
(KHETARPAL et al., 1998). Entretanto, tcnicas culturais quando implementadas
adequadamente e visando o controle de viroses, podem ser as responsveis por melhor
eficincia no controle, bem como proteger da incidncia de novos vrus ou de estirpes, as
cultivares consideradas resistentes.
Resta, ainda ser analisado e identificado o vrus encontrado nas
amostras analisadas pelos testes de diagnoses, contudo, no foi alvo de anlise neste
experimento.
87
5 CONCLUSES
- O tratamento cobertura com palha de arroz resultou em plantas com maior massa
fresca, maior produtividade, melhor fechamento de cabea e maior tempo para o incio do
pendoamento;
- A baixa incidncia de vrus, possivelmente pela falta de fonte de inculo dos respectivos
vrus, no permitiram concluir sobre a eficcia das diferentes prticas culturais na incidncia
de vrus.
88
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111
112
APNDICE
113
(Experimento 1)
T
e
m
60
r
50
p
e
c
40
r
a
t
u
r
30
i
20
t
a
10
a
s
(C)
0
29/4
6/5
13/5
20/5
27/5
3/6
(mm)
(Experimento 2)
T
e
60
50
m
p
40
e
r
a
30
20
t
u
10
r
a
s
(C)
0
5/11
12/11
Precipitao
19/11
Temp. Mn.
26/11
Temp. Mx.
3/12
10/12
Temp. Md.
(mm)
114
1.1.
MO
(g dm-3)
15
P resina
Ca
Mg
CTC
-----------------------------mg dm-3-----------------------------15,1
4,4
24
9
61
%
61
Experimento 1
Outono/Inverno
Experimento 2
Primavera/Vero
28/03
06/10
Semeadura em bandejas
31/03
08/10
Aplicao de fungicida
01 e 11/04
09 e 20/10
Repicagem e raleio
10/04
17/10
Transplantio no campo
29/04
05/11
06/05
12/11
07/05
13/11
06 e 20/05
14 e 21/11
10 dia DAT
20 dia DAT
30 dia DAT
7 dias de
permanncia
no campo
Avaliao de fitovirose
Fase de Muda
Avaliaes de fitovirose
Semanais
Colocao
09/05
19/05
29/05
Retirada
16/05
26/05
05/06
Colocao
13/11
23/11
03/12
Retirada
20/11
30/12
10/12
12/05
18/11
19/05
26/05
30/05 e 06/06
25/11
02/12
09/12
06/06
09/12
08/06
08/06
09/12
09/12
09/06
10/12
Colheita
09/06
10/12
16/06
24/06
01/07 e 06/07
Jun/03 a Set/03
14/12
19/12
24/12
Dez/03 a Maro/04
Avaliao de tempo
do pendoamento
Testes de diagnose
115
116
117
118