UNIVERSIDAD SAN PEDRO

FAC. MEDICINA HUMANA

PRACTICA N 02
MEDIOS DE CULTIVO Y ESTERILIZACION
I.

GENERALIDADES:
Los medios de cultivo son sustancias nutritivas lquidas, slidas o semislidas, que pueden ser usados para
el crecimiento y desarrollo de los microorganismos, los cuales deben contener compuestos bsicos necesarios
para el desarrollo bacteriano, entre ellos:

Sustancias nutritivas apropiadas, como: Protenas, carbohidratos, sales minerales y vitaminas.

Tener un pH comprendido entre 6.8 a 7.6.

Estar previamente esterilizados y protegidos de la contaminacin.

Se considera adems para el crecimiento:

Necesidades de oxgeno (aerobios) y CO2 parcial o total (microaerfilos o anaerobios) y,

Temperatura de incubacin.
Los extractos de carne son nutrientes bsicos de muchos medios de cultivo, a los cuales suelen aadrseles
carbohidratos y sales inorgnicas.
El agar-agar es el solidificante de un medio lquido al igual que le gelatina. Se prepara a partir de algas al
estado seco, entre ellos: Gelidium y Pterocladia, cuyo principal componente es un polisacrido constituido
por D-galactopiranosa.
Los medios de cultivos sirven para los siguientes propsitos principales:
Fomentar el crecimiento microbiano de tal forma que se puedan AISLAR dichos microorganismos.
Facilitan algunas Reacciones Bioqumicas que luego pueden ser demostrables por observacin directa o bien
indirectamente por subsecuente reaccin en presencia de algunos reactivos adicionales, logrando su
IDENTIFICACION y posterior CLASIFICACION.
CLASIFICACION:
A)

POR SU ESTADO FISICO: Slidos, lquidos o semi-slidos.

B)

SEGN APLICACIN: Se conoce cuatro tipos perfectamente diferentes de medios:

Medios Bsicos o Comunes: Contiene los mnimos requerimientos para los microorganismos.
Ejm.: Caldo nutritivo
Agar nutritivo
Caldo Triptosa
Agar Triptosa
Caldo peptonado
Agar peptonado
Agar almidn, etc.

Medios Enriquecidos: Son aquellos medios bsicos los que han sido complementados con lquidos
corporales, Vitaminas especficas, aminocidos, protenas y otros nutrientes claramente definidos
como tales. Por ello contienen requerimientos de microorganismos ms exigentes.
Ejm.: Caldo Cerebro Corazn
Agar Cerebro Corazn
Caldo tripticasa-soya
Agar tripticasa-soya
Agar sangre, Agar chocolate, etc.

Medios Selectivos: Son usualmente medios de Agar bsicos no enriquecidos, a los cuales se les
han agregado ciertos reactivos que impiden el crecimiento de la mayora de las bacterias,
permitiendo por lo tanto el aislamiento de unas cuantas, seleccionadas, en los especmenes que
contengan grandes nmeros de organismos indeseables.
Ejm.:

Agar TCBS, Ruiz Castaeda, Ogawa o Lowensetein Jensen, Agar SS, Agar XLD.

Medios Diferenciales.- Son medios bsicos o enriquecidos, a los cuales se les ha agregado ciertos
reactivos que reaccionan con algunos tipos especficos de bacteria en cierta forma observable.

Agentes

Biolgicos

CHIMBOTE-PERU

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Ejm.:

FAC. MEDICINA HUMANA

Agar TSI, Agar LIA, Agar Citrato Simons, Caldo Urea y Agar Urea, etc.

ESTERILIZACION:
En Microbiologa esterilizacin implica la eliminacin o destruccin de todo organismo vivo, que se
encuentra en un medio determinado.
METODOS DE ESTERILIZACION (CLASIFICACION)
A)

Mtodos Qumicos.- La presencia de algunas sustancias qumicas en un medio, da lugar a la destruccin de

organismos. Ej.: Cristales de timol en el caldo urea (esterilizacin qumica)
Cajas petri roceadas con algunas gotas de metanol, prendidas con
dan lugar a que el formaldehdo esterilice in situ.

B)

fuego y cerradas inmediatamente,

Mtodos Fsicos.- En los cuales se lleva a cabo la destruccin por calor o radiaciones o bien eliminando los
micrororganismos por filtracin o centrifugacin.

Calor directo ( Flameado )

Ebullicin
Calor Calor hmedo
Vapor fluente
Mtodos fsicos
Vapor saturado a presin
Calor seco

Filtracin
Radiacin

Flameado: Exposicin directa del material a la llama. De uso frecuente para la esterilizacin del asa de
Kolle antes y despus de su empleo, en el mechero de gas o alcohol.
Ebullicin: Su empleo ms frecuente es en la esterilizacin de jeringas y agujas. No recomendable para
trabajos bacteriolgicos por ser deficiente.
Vapor Fluente: Es un vapor que esteriliza por su temperatura, sin recurrir a presin.
Vapor Saturado a Presin: Es el medio de esterilizacin ms usual y ms efectivo. Se consigue con las
autoclaves, en los que se regula a voluntad, tanto la presin como la temperatura.
Calor Seco: Se requiere alta temperatura y tiempo prolongado (Horno: 170C x 2 Hrs).
Filtracin: Consiste en separar los grmenes de un medio lquido por pasaje a travs de bujas o discos
de porosidad variable. Los filtros ms usados son los filtros de infusorios o de asbesto o los de C.M.C.
II.

OBJETIVOS:
Conocer las composiciones qumicas variadas de los medios de cultivos, sus caractersticas y propiedades
fsico qumicas particulares, a fin de establecer un desarrollo bacteriano.
Aprender a relacionar un medio de cultivo, segn las exigencias nutritivas de los m.o., para dar lugar a su
aislamiento, identificacin, clasificacin y conservacin.
Demostrar que la esterilizacin es una accin letal que tiene por finalidad eliminar grmenes en un medio
determinado y que es un aspecto bsico en la tcnica bacteriolgica.
Demostrar que la esterilizacin puede ser por agentes fsicos o qumicos sobre los m.o.

Agentes

Biolgicos

CHIMBOTE-PERU

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III.

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MATERIALES:

IV.

Placas petri 7 cm.

Tubos con tapa rosca 13 x 100 mm.
Matraces de 250 cc.
Probeta de 250 cc.
Balanza, potencimetro.
Esptulas.
Autoclave de 14 lts.
Mechero de Bunsen.
Bao Mara (BM).
Sangre de carnero desfibrinada.
Medios de Cultivo:
- Agar Nutritivo.
-Agar Sangre
-Agar Chocolate
-Caldo Nutritivo.
PROCEDIMIENTO:

Pesar los medios de cultivo indicados, calculando las cantidades en relacin con los volmenes requeridos.
Diluirlos en cantidades suficiente de HOH destilada, segn nuestro requerimiento.
Licuar el medio en bao BM a ebullicin, hasta completa disolucin.
Ajustar el pH con el potencimetro.
Si la lectura es menor de 7 agregar gota a gota NaOH/10 hasta llegar al pH deseado.
Si la lectura es mayor de 7 agregar gota a gota HCI N/10 hasta llegar al pH deseado.
Repartir el medio de cultivo en los tubos y esterilizar despus (Medio slido o lquido).
Para el caso de Placas, pueden quedar en el matraz esterilizar y luego ser repartido.
Nota:
Los medios de cultivo sean slidos o lquidos pueden esterilizarse en los matraces y/o en los frascos y
luego ser repartidos en tubos y placas en un ambiente estril y siempre frente a una llama. Considerando
dar inclinacin respectiva antes que enfren y solidifiquen.
Es usual esterilizar en frascos grandes y/o matraces y almacenarlos en refrigeracin a 4C
aproximadamente, recordando que antes de plaquear o entubar un medio slido ser necesario licuarlo
previamente en BM.
Esterilizar a 121C x 15 a 15 lb/pulg2.
Comprobar esterilidad en estufa a 37C x 24 horas.
Al final el medio queda listo para su empleo, se colocar en bolsas plsticas de polietileno (primer uso) y
se almacenar en la refrigeradora a temperatura de 4C, a fin de evitar deterioro por deshidratacin.
En algunos casos, dependiendo de su naturaleza podrn conservase al ambiente.

Agentes

Biolgicos

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PROTOCOLO
Identifique y dibuje los medios de cultivo ms utilizados en el laboratorio de microbiologa:
AGAR NUTRITIVO

AGAR SANGRE

AGAR CHOCOLATE

AGAR MAC CONKEY

AGAR TSI

AGAR LIA

AGAR MIULLER HINTON

AGAR TCBS

AGAR RUIZ CASTAEDA

AGAR CITRATO SIMONS

AGAR SABOURAUD

AGAR MANITOL SALADO

Agentes

Biolgicos

CHIMBOTE-PERU

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PROTOCOLO
Esquematice y dibuje los pasos para la preparacin de un medio de cultivo, esterilizacin y almacenamiento.

Agentes

Biolgicos

CHIMBOTE-PERU

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Agentes

Biolgicos

CHIMBOTE-PERU

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PREGUNTAS
1.

Considera importante la medida de pH durante la preparacin de un medio de cultivo? Por qu?

Rpta.:................................................................................................................................................................
..................................................................................................................................................................................

2.

Mencione y describa procedimientos de esterilizacin:

Rpta.:................................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................

3.

En qu caso debe utilizarse la filtracin como medio de esterilizar un producto:

Rpta.:................................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................

4.

D usted 5 ejemplos de productos que pueden ser esterilizados al calor seco.

Rpta.:................................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................

5.

Diga usted cul es el tiempo, temperatura y presin que suele utilizarse para esterilizar, haciendo uso de
autoclave. Fundamente: Por qu se utiliza estos parmetros?
Rpta.:................................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................
..............................................................................................................................................................

6.

Mencione qu tipos de bacterias pueden crecer en:

AGAR SANGRE:.....................................................................................................................................................
..................................................................................................................................................................................
AGAR CHOCOLATE:............................................................................................................................................
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AGAR TCBS:...........................................................................................................................................................
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Agentes

Biolgicos

CHIMBOTE-PERU

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AGAR MAC CONKEY:..........................................................................................................................................

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AGAR MANITOL SALADO:.................................................................................................................................
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7.

En qu casos sugerira usted realizara un cultivo, utilizando el medio Ruiz Castaeda.

Rpta.:........................................................................................................................................................................
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Agentes

Biolgicos

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