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Micropropagacineinjertoinvitrodepistacho

E.Garca;P.Lorente;J.A.Marn;A.Arbeloa;P.Andreu
EstacinExperimentaldeAulaDeiCSIC
Av.Montaana1005.50059ZaragozaEspaa
egarcia@eead.csic.es

Resumen
Elcultivodelpistachero(P.veraL.)hadespertadoungranintersenzonasdeEspaaenlas
quecultivostradicionales,comolavidoelolivo,hanperdidorentabilidad.Sinembargo,su
expansinestfrenadaporladificultaddepropagacinporinjertodelasvariedadesde
intersylaseleccindeunpatrnclonalpropagadovegetativamente.Laaplicacindelas
tcnicasdecultivoinvitroalasespeciesdePistaciapermitir,ademsdelapropagacin
clonalymasiva,profundizarenelestudiodelosproblemasqueafectanalinjertoaldisponer
deunmodeloexperimentaleficazyflexiblequepermitaelseguimientodelinjertodurantelas
etapasiniciales,dondeesmsprobablelaaparicindesntomasdefaltadeafinidadentrela
variedadyelpatrnquellevenalafaltadeprendimientodelinjerto.Seiniciaroncultivosde
P.veraapartirdeexplantosnodalesydeP.terebinthusapartirdesemillasgerminadasin
vitro.Lamultiplicacininvitrodeambasespeciesseaproxima2brotesporbrotecada3
semanas.SeobtuvounaltoenraizamientodelpatrnP.terebinthus(82%)enunmedioWPM
modificadoylasplantasfuerontrasplantadaseninvernaderoconxito.picesdebrotesdeP.
verade1020mmfueroninjertadosinvitrosobrebrotesenraizadososinenraizardelpatrn
P.terebinthusyseestudihistolgicamentelaevolucindelosinjertos.Msdel70%delas
plantasinjertadassobrevivierondurantelas35semanasinicialesyalgunasplantas
continuaronsucrecimientoeninvernadero.Delamismaformaserealizaronhomoinjertosde
controlentreP.terebinthusconsigomismoysuestudiorevelquelatcnicautilizadaes
prometedora,aunquedeberserperfeccionadaenposteriorestrabajos.
Palabrasclave:Pistaciavera,P.terebinthus,cultivoinvitro
Micropropagationandinvitrograftingofpistachio
Abstract
PistachiocultureisbecominghighlyinterestinginSpain,wheretraditionalcropsasgrapeand
olivehavereducedtheirprofitability.However,itsexpansionishamperedbyboththe
difficultyofpropagationbygraftingofvarietiesofinterestandbythelackofaclonalselected
rootstock.Theapplicationofinvitroculturetechniqueswouldallowtheclonalpropagationof
Pistaciaspecies,aswellastoperformindepthstudiesoftheproblemsaffectinggrafting.In
vitrotechniquesprovideaneffectiveandflexibleexperimentalmodelthatallowsus
monitoringthegraftunionduringtheinitialstages,whenlackofaffinitysymptomsaremost
likelytoappear.InvitroP.veracultureswereinitiatedfromnodalexplants,whereascultures
ofP.terebinthuswereinitiatedfromseedsgerminatedinvitro.Theinvitromultiplicationof

bothspecieswascloseto2shootspershootevery3weeks.Ahighrootingpercentage(82%)
ofP.terebinthuswasobtainedinamodifiedWPMmediumandplantsweresuccessfully
transplantedtothegreenhouse.ShootapicesofP.veraof1020mmlengthweregraftedin
vitroonrootedorunrootedshootsofP.terebinthusinwhichtheapexwasremovedandthe
evolutionofthegraftunionswerestudied.Over70%ofthegraftedplantssurvivedduringthe
firts35weeksandsomeplantscontinuedtheirgrowthinthegreenhouse.Similarly,control
selfgraftedP.terebinthuswerestudied.Homograftsshowedthatthetechniqueofgraftingin
vitroispromisingbutshouldbeimprovedinfutureworks.
Keywords:Pistaciavera,P.terebinthus,invitroculture

Elcultivodelpistachero(P.veraL.)hadespertadoungranintersenzonasdeEspaaenlas
quecultivostradicionales,comolavidoelolivo,hanperdidorentabilidad.Sinembargo,su
expansinestfrenadaporladificultaddepropagacinporinjertodelasvariedadesde
intersylaseleccindeunpatrnclonalpropagadovegetativamente.Elpatrncornicabrao
terebinto(PistaciaterebinthusL.)poseeunaadecuadaadaptacinalclimaysueloespaolpor
serautctono,ademsdevigormoderadoytoleranciaalasenfermedadesdesuelo(Guerrero
etal.,2004).Lostrabajosdeseleccindeestepatrnsebasanensupropagacinporsemilla,
yaquenopropagaporestaquilla,ademsdeporsuscaracterespomolgicos,comosuvigor,
porteoproduccin(Guerreroetal.,2002)ytoleranciaalasequa(Gijnetal.,2010).Lafalta
deunadecuadomtododepropagacinlimitalaseleccinclonaldeestepatrn.
Enestetrabajoseinicianestudiospreliminaresdesupropagacininvitrocomoherramienta
deapoyoasuseleccin.P.terebinthushasidopropagadoinvitrotantoapartirdematerial
juvenil(ChelliyDrira,2002)comoadulto(Gannounetal.,1995),aunquesernecesarioajustar
elprotocoloalascondicionesdecultivoyalmaterialdeinters,yaqueesunaespecieque
planteaproblemasdefaltadeadaptacinalcultivoinvitro(Tabiyehetal,2006)conuna
frecuentepresenciadeexudadosenelmedioqueprovocansuoscurecimientoymodificacin.
Lamicropropagacinpermitevencerlafaltadeaptitudalenraizamientoylamultiplicacin
masivadeplantas,porloqueeslatcnicadeeleccinparaestepatrn.
SegnGuerreroetal.(2004)elxitodelinjertodependedenumerososfactorescomo,entre
otros,latemperatura,quedeterminaelcrecimientodelostejidosdecicatrizacin,lahumedad
ambiental,quepuedeprovocarestrshdricoenlavariedadinjertada,lanecesidadde
oxigenacindelostejidosencicatrizacin,lahiperactividadohipoactividaddelpatrnque
determinaelflujodesaviayquenodebeserexcesivooreducido.Todosestosfactorespueden
serlacausadelavariabilidadenlosresultadosdelinjertoeneltiempo,yaquelosfactores
ambientalesseescapananuestrocontrol.Adems,debemosconsiderarquealinjertaryemas
deunavariedadsobreunpatrnpocovigoroso,comoelcornicabra,hayqueesperarhasta
queeldimetrodelpatrnpermitalaoperacindelinjerto,loqueocasionaquesteserealice
avecesencampo,generandoplantacionesirregulares.Enestetrabajoplanteamos,adems,el

cultivoinvitrodeP.veraparapoderavanzarigualmenteenelestudiodelprendimientodel
injerto.P.verahasidopropagadoinvitrotantoapartirdematerialjuvenil(Benmahiouletal.,
2009)comoadulto(Onay,2000;Tilkatelat.,2009).Losprotocolosdebernajustarse
igualmenteanuestrasvariedadesycondicionesdecultivo.Elpistacheroesuncultivoque
presentaproblemasdepropagacindelasvariedadesdeintersporinjerto,yaquelos
resultadossonirregularesdebidoalosproblemasdeprendimientodelinjerto.
Adiferenciadeotrosfrutales,enlosquelosproblemasdeinjertosecentranenla
incompatibilidadyenlabsquedayseleccindepatronescompatibles,enpistacholos
problemasparecenserdebidosalacapacidadderespuestadelavariedadyelpatrnfrentea
undeterminadoestadofisiolgico,loquehacequesuestudioexijaunmayorconocimientode
losprocesosquetienenlugardurantelasdiferentesfases,perosobretodoenlasiniciales.En
estetrabajoproponemosunaaproximacindiferentealestudiodelinjertoenpistacho
mediantetcnicasdecultivoinvitro,queproporcionanunmodeloexperimentaladecuadoy
flexible,msfcildecontrolarydeestudiar.Losinjertosdepicesdebrotesdepistacho(P.
vera)realizadossobrebrotesdescabezadosdecornicabra,ambosmicropropagadosinvitro,
permitenelseguimientodelossucesosquetienenlugaranivelcelularehistolgico,ascomo
anivelmacroscpicoysuevolucineninvernadero.Laobtencindeunatcnicadeinjertoin
vitroeficazycontrastadasevefacilitadaenestetrabajoporladisponibilidaddehomoinjertos
delpatrnconsigomismoque,ejerciendodecontrolexperimental,permitirndetectarlos
aspectostcnicosquedebensermejoradosyasdetectarprecozmentelossntomasdefalta
deafinidaddelinjertoysusposiblescausas.
MaterialesyMtodos
Sehanutilizadoparaestetrabajocultivosinvitrodecornicabra(PistaciaterebinthusL.)
originadosapartirdesemillasrecolectadasenplantassilvestresdeportearbustivoenla
localidaddeRiglos(Huesca),ydenudosconunayemaaxilarprocedentesdeunrboladulto
crecidoenelCampusdeAulaDei(Zaragoza).Elestablecimientoinvitrosellevacaboenlos
aos2009y2008respectivamente.
Establecimientoinvitro
LosexplantosnodalesdeP.veraserecolectaronenprimavera,selavaronconagua
corrienteyseesterilizaronconHgCl2al0,05%durante15minutos,aclarndoseenagua
estriltresveces.Secultivaronuntotalde33explantosnodalesenmedioDKW(Drivery
Kuniyuki,1984)modificadoconantioxidante(0.01gl1decidoascrbico)ysedejaroncrecer
dosmeseshastasertrasplantadosamediodemultiplicacin.
Porotraparte,sesembraroninvitro24semillasdecornicabra(P.terebinthus)quese
esterilizaronconlejaal10%durante30minyseaclararonconaguadestiladaestril3veces.
Encondicionesaspticasseeliminaronlostegumentosysepusieronagerminarenmediode
cultivoenoscuridada5Cdurante6semanas.Seemplearontresmediosdiferentesde
germinacin:WP(LloydyMcCown,1980),MS(MurashigeySkoog,1962)yC2D(CheyPool,
1987).Transcurridas6semanaslassemillassepasaronalacmaradecultivoconiluminacin
(fotoperiodode16hconluzblancaproporcionadaporfluorescentes"coolwhite"yuna

intensidadde35molm_2s_1)yunatemperaturade24C,tomndoseeldatodegerminacin
semanalmente.
Multiplicacininvitro
UnavezbrotadaslayemasdeP.vera,losbrotesobtenidossesubcultivaronendistintos
mediosparasupropagacin.Seensayarontresmediosdiferentesparalamultiplicacin
basadosenelmedioDKW,MSyWP,aadiendo0.5MIBA,5MBA,30gl_1desacarosa,y7
gl_1deagar(Bactoagar,Difco,FisherScientific).Loscultivossemantuvieronenunacmara
decultivoenlasmismascondicionesdescritasanteriormenteysesubcultivaroncadatres
semanas.Secompararonlosdiferentesmediosdecultivoatendiendoa:necrosisapical(%),
tamaomediodelbrote(mm),nmerodeentrenudosporbroteytasademultiplicacin
(nmerodebrotesapartirdeunbrote),alas3semanasdelsubcultivo.Seanalizaron56
brotesportratamientoyserealizarondosrepeticiones.
LospicesdelasplntulasobtenidasapartirdelosembrionesgerminadosdeP.terebinthus
fueronsubcultivadoseliminandopreviamenteloscotiledonesylasracesysesometieronalos
mismostratamientosqueP.veraparasumultiplicacin.
Enraizamientoinvitro
BrotesdeP.terebinthussesubcultivaronenmediodeenraizamientoparainducirel
crecimientoderaces.SeensayarondosmediosdeenraizamientobasadosenlosmediosMSy
WPdescritosanteriormenteymodificados,reduciendolassalesmineralesalamitad,sinBAP
yaumentandolasconcentracindeIBAa5M.Loscultivossemantuvieronencmarade
cultivoenlasmismascondicionesdescritasanteriormenteypasadas48semanasenmedio
deenraizamiento,seanalizelnmerodebrotesenraizadosdeuntotalde78brotesen
medioWPy24brotesenMS.
Injertoinvitro
SeseleccionaronbrotescultivadosinvitrodeP.terebinthusdeunos4cmdelongitudyse
realizelinjertoconpicesdeP.verade12cmcultivadosinvitro.Elinjertoserealiz
decapitandoelpicedelportainjerto(enraizadoono)yrealizandounahendiduraeneltallo
dondeseencajelbrotedelavariedad,cuyabasehabasidorecortadaenformadeV(Onay
etal2004;Thimmappaiahetal2002).Paraayudaramantenerelinjertoseleaplicunagota
deagarosaliquidaal4%quesedejsolidificar(Jonardetal.1983).Losinjertosserealizaron
encondicionesaspticasconlaayudadeunmicroscopioestereoscpico.Losbrotesinjertados
secultivaronenlacmaradecultivoduranteuntiempovariableentre1y2meses,cuando
algunasplantasinjertadassetrasladaronalinvernadero.Asimismosehanrealizado
homoinjertosdeP.terebinthussobreP.terebinthusparacomprobarlaidoneidaddelatcnica
encondicionesdecompatibilidadtotal(control).
Serealizaron50injertosinvitro,delosque34correspondieronaP.vera/P.terebinthusy16
aP.terebinthus/P.terebinthus.
Elestudiohistolgicodelinjertoserealizentre4y8semanasdespusdelinjerto.Losbrotes
injertadosseobservaronconelmicroscopioestereoscpicoyposteriormentesecortaron

longitudinalmenteamanoalzadaparasuobservacinconunmicroscopiodefluorescencia
(OlympusAX60)equipadoconcmarafotogrficaOlympusC7070WZ.Laproliferaciny
diferenciacincelularenlazonadelinjerto,ascomolacomunicacinvascularentrepatrny
variedadfueobservadatraslatincindeloscortesconnaranjadeacridina0.01%enagua
(Pearse,1968)
Anlisisdelosdatos
Losdatosfueronanalizados,segnsudistribucin,condiferentespruebasestadsticas:ANOVA
(longituddelosbrotes),testdeKruskalWallis(nmerodeentrenudosporbroteynmerode
brotesporbroteotasademultiplicacin)yeltestdeproporciones"prop.test"(necrosis
apical).SeutilizelpaqueteestadsticoR(RDevelopmentCoreTeam,2008)

ResultadosyDiscusin
GerminacininvitrodeembrionesdeP.terebinthus
Lagerminacintuvolugaralrededorde40dasdespusdesusiembrainvitro.Seobtuvouna
germinacinmuyaltaenlosdiferentesmedios,llegandoal100%enelmedioMSyun75%de
promedioenelconjuntodelosmedios(Tabla1).Elcrecimientodelasplntulasfuevigoroso
enlamayoradeloscasoshastaeltrasplantedelpicecaulinaralosmediosdemultiplicacin.
Laaparicindeexudadosfuemuybajayelmedionoseoscureci.
MultiplicacinyenraizamientodebrotesdeP.terebinthus
Lospicestrasplantadossemultiplicaronenlostresmediosensayadoscontasascercanasa2
brotesporbrotecada3semanas(Tabla2,Figura1A),sinembargo,elmedioDKWhamostrado
brotesdemayorcalidad:mslargos,conmayornmerodeentrenudosyconmenornecrosis
apicalqueelMSoelWP.Sehanencontradodiferenciassignificativasenelnmerode
entrenudos,lalongituddelbroteoenelporcentajedenecrosisapical.Lostrabajosencurso
debernconfirmarestosresultados,peroelhechodequeelmediodecultivobasadoenlas
salesDKWsecomportetambinmejorenP.verarefuerzalabondaddeestosresultados.
Trabajosprevioshanutilizadomediossimilares.ChelliyDrira,(2002)ensayaronlosmedios
MSyOM(Rugini,1984)condistintasconcentracionesdemacronutrientes,observandoqueel
medioMSfavorecelaformacindecallobasalmientrasqueelmedioOMestimulaelvigorde
losbrotes.Nuestrotrabajosealalaadecuacindestemedioparalamultiplicacin.
LosbrotesmicropropagadosfueronenraizadosconxitoenelmedioWPmodificadodonde
enraizaronun82%delosbrotes(Figura1C),mientrasquesolamenteun42%enraizaronenel
medioMS.Sinembargoelenraizamientonofuesincrnico,apareciendolasraces
escalonadamentealolargode48semanas.Lasplantasfuerontrasplantadasconxitoenel
invernadero.
MicropropagacindeP.vera
Iniciodeloscultivosapartirdeexplantosnodales

Loscultivosfueroniniciadosapartirdeexplantosnodalesconunasupervivenciadel40%de
losexplantosalas12semanasdecultivo(Figura1B).Eloscurecimientodelmedioporlos
exudadosfuecontroladoeficazmenteconlaadicindecidoascrbicoalmediodurantelos
primerossubcultivos.Esteoscurecimientocestrasvariossubcultivosinclusoenelmediosin
antioxidante.Delaslneasdecultivoiniciadasconlosexplantossupervivientesseeligiuna
paralosestudiosposteriores,demaneraqueelmaterialfuerahomogneo.
Multiplicacindebrotes
SerealizunacomparacindemediosdecultivodeformasimilaralarealizadaconP.
terebinthusylosresultadosobtenidossemuestranenlaTabla2.Losbrotesdesarrollaron
entre2.1y3.3nuevosbrotesdepromediocada3semanas,segnelmediodecultivo.Las
diferenciasfueronestadsticamentesignificativas,siendomayorlamultiplicacinenelmedio
WP,sinembargo,estemediomostrelmayorporcentajedenecrosisapical,porloqueel
mediomsadecuadoparalamultiplicacindeP.verafueelDKWquemostr
significativamentebrotesconmayorcalidad:mslargos,conmsentrenudosyconmenor
necrosisapical(Figura1D).OtrosautoresutilizaronelmedioMSconalgunasmodificaciones,
tantoenlosreguladoresdecrecimientocomoutilizandolasvitaminasdeotromediodecultivo
(Onay,2000;Tilkatetal.2009).
InjertoinvitrodePverasobreP.terebinthusyhomoinjertosdeP.terebinthus
Losinjertosrealizadosencondicionesaspticasmostraronunasupervivenciamuyaltasiendo
del73%enelhomoinjertoydel44%enelP.vera/P.terebintoalas35semanasdecultivo.
Algunasdelasplantastrasplantadaseninvernaderocontinuaronsucrecimiento(Figura1E,F).
EnlosinjertosdeP.vera/P.terebinthuslaaparienciaexternadelosinjertosmostruna
notablevariabilidad:delos23injertosobservados,el4%mostrunaspectobueno(Figura1
H),el8%noprendiyestabasuelto,el26%mostrunengrosamientoenlazonadelinjerto
debidoaunaexcesivaproliferacindecalloyel61%tenauncoloroscuroenlazonadel
injerto.Sinembargo,elexamenhistolgicodelazonadeuninpermitiverqueelaspecto
externonosecorrespondasiempreconlaevolucininterna,yaqueelporcentajedeinjertos
quemostraronunazonadecontactoentrevariedadypatrneradel75%yhastael93%
mostrdiferenciacindeclulasdelxilemaenlazonadecontacto(Tabla3,Figura1,J).A
pesardequelamayoramostrunaevolucinpositivayquelaproliferacindeclulasdecallo
fuedel87%,unporcentajesimilar(81%)mostralgunazonaconclulasnecrticasque
creabanunadiscontinuidad.Dadoqueestosdatosfuerontomadosentrelaterceraylaquinta
semanatrasrealizarelinjertoyqueelestudioeradestructivo,seramuyprobablequemuchos
injertoshubieranevolucionadohaciamayoresconexionesvascularesyaunbuen
prendimiento.Seestnrealizandonuevosestudiosparaconocerlaevolucindelosinjertos
enetapasmstardas.
LoshomoinjertosdelpatrnP.terebinthushanmostradoengeneralunabuenaevolucin.La
aparienciaexternahasidobuena,sinapenascoloracinoscura(Figura1G).Lazonadeinjerto
mostrenelestudiohistolgico,alas11semanas,proliferacincelularydiferenciacinde
clulasdelxilemaenlatotalidaddelosinjertosestudiados(Figura1I).Sinembargo,un80%
delosinjertosmostrunazonadecontactoreducidafrenteal20%enlosquelazonaera

extensayel60%mostralgunazonaconnecrosiscelular.Estosaspectosnegativosenlos
homoinjertosindicanquealgunosaspectosdelatcnicadeinjertodebenmodificarsede
maneraqueseasegureuncontactontimoentrevariedadypatrnevitandolaseparacin
fsicaentreambosqueimpediraquetraslaproliferacincelularyladiferenciacindeclulas
delxilemaseestablezcanconexionesqueasegurenelaportedeaguaynutrientesalavariedad
ypermitanelprendimientodelinjerto.Disponerdeuninjertocontrolnoshapermitido
distinguirproblemastcnicosdeposiblesproblemasdeafinidadentrevariedadypatrn.Para
mejorarlafijacindelinjertoquegaranticeunfirmecontactoentrelostejidosdelavariedady
delpatrnhemosaadidoagarosaalazonadecontacto,perodadoslossntomasdefaltade
afinidadenloshomoinjertos,habrqueestudiarelefectodesistemasmecnicosdefijacin
enprximostrabajos.Jonardetal.(1983)aadieronagar,peroconelfindemejorarla
nutricindelayemayGebhardtetal(1988)utilizarontrozosdetubodesiliconaestrilpara
asegurarlafijacinentrepatrnyvariedad.Enestetrabajo,hemosobservadobuenas
conexioneseninjertosquehancrecidoencondicionesdeinvernadero,tantodeP.vera/P.
terebinthus(Figura1J)comoenloshomoinjertos(Figura1I),perosloaunospocosinjertosse
leshapermitidocrecerporperiodosprolongadosdetiempodebidoalosestudiosrealizados.
Latcnicaempleadaaquhamostradounosresultadosmuypositivos,yaquenoshapermitido
observardiferentesetapasdeproliferacinydiferenciacincelularenlazonadelinjertoque
podrnserrelacionadasconlaevolucinposterior,demaneraquesepuedahaceruna
determinacinprecozdelprendimiento.Porotraparte,laaparicindesntomasdemal
prendimiento,comounazonadecontactoreducidaolapresenciadenecrosiscelularpuede
ayudarnosacomprenderlascausasdelairregularidaddelprendimientoysuvariabilidad,de
maneraquepuedandeterminarselascondicionesquefavorezcanelxito.
Agradecimientos
EstetrabajohasidofinanciadoenparteporelproyectoRTA201000053C0303yporlaayuda
recibidadelGobiernodeAragncomoGrupodeExcelenciaA43.

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Tabla1.GerminacininvitrodePistaciaterebinthus
Table1.InvitrogerminationofPistaciaterebinthus
Medio n Germinacin(%)
WP 12
58.33
MS
6
100.00
C2D
6
83.33

Tabla2.ComparacindemediosdecultivoenlamultiplicacininvitrodePistaciaveraydeP.
terebinthus.Valorespromedio(errorestndar)delalongituddelosbrotes,elnmerode
entrenudos,latasademultiplicacin(nmerodebrotesporbrote)yelporcentajedenecrosis
apical(*,***,n.s.:P<0.05,P<0.001,nosignificativo,respectivamente)n:nmerodebrotes
analizados
Table2.ComparisonofdifferentculturemediainthemultiplicationstageofPistaciaveraand
P.terebinthus.Meanvalues(s.e.m.)ofshootlength,numberofinternodes,multiplication
rate(numberofshootspershoot)andthepercentageofapicalnecrosis(*,***,n.s.:
P<0.05,P<0.001,notsignificant,respectively)n:numberofanalyzedshoots

longitud(mm)

nmerode
entrenudos

tasade
multiplicacin

necrosis
apical(%)

DKW
MS
WP

P.terebinthus

111
112
112
significacin

23.681.00a
17.460.61c
20.640.75b
***

6.30.20a
4.90.15b
5.10.16b
***

2.50.11b
2.10.09c
3.50.17a
***

25.22c
47.32b
61.61a
***

DKW
MS
WP

30
30
30
significacin

30.93.25a
19.81.45b
20.51.48b
***

6.10.36a
4.90.28b
4.10.28b
***

1.80.13
1.80.19
1.90.15
n.s.

10.0b
36.7a
26.7ab
*

P.vera

Tabla3.Porcentajesdeinjertosinvitrodepistacho:P.vera/P.terebinthusyP.terebinthus/
P.terebinthusconproliferacincelular,diferenciacindeclulasdexilemayzonadecontacto
ynecrosis.

Table3.InvitrograftspercentagesofP.vera/P.terebinthusandP.terebinthus/P.terebinthus
showingcellularproliferation,xylemcelldifferentiation,contactareabetweenpartnersand
necroticcells.

P.vera/P.terebinthus
P.terebinthus/P.terebinthus

Proliferacin Diferenciacin
celular
clulasxilema

Zonade
contacto
Necrosis
variedad/patrn

16

87%

93%

75%

81%

100%

100%

20%extensa
80%reducida

60%

Figura1.Micropropagacineinjertodepistacho.Pistaciaterebhintus:A)Brotes
micropropagados;C)Brotesenraizados;E)Injertoterebinto/terebintoenmaceta.Laflecha
indicalaposicindelinjerto;G)Aspectoexternodelinjerto;I)Imagendelcortelongitudinal
delinjertoconmicroscopadefluorescencia.Pistaciavera:B)Instalacindelcultivo;D)Brotes
micropropagados;F)Injertovera/terebintoenmaceta.Laflechaindicalaposicindelinjerto;
H)Aspectoexternodelinjerto;J)Imagendelcortelongitudinaldelinjertoconmicroscopade
fluorescencia

Figure1.Micropropagationandinvitrocultureofpistachio.Pistaciaterebhintus:A)
Micropropagatedshoots;C)Rootedshoots;E)SelfgraftedP.terebinthusgrowinginthe
greenhouse.Arrowindicatesgraftposition;G)Graftexternalappearance;I)Graftlongitudinal
sectionunderfluorescencemicroscopy.Pistaciavera:B)Cultureinitiation;D)Micropropagated
shoots;F)P.vera/P.terebinthusplantgrowinginthegreenhouse.Arrowindicatesgraft
position;H)Graftexternalappearance;J)Graftlongitudinalsectionunderfluorescence
microscopy

A
A

C
C

E
E

G
G

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