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Carles

Experto
en
fisicament@gmail.com

terapia

natural

Clos
china

Qu es?
El urinocultivo (cultivo de orina), o urocultivo como tambin se denomina, es una prueba (anlisis)
de laboratorio, que tiene como finalidad detectar la presencia de microorganismos infecciosos,
fundamentalmente bacterias y hongos, en la orina de las personas.

Para qu se utiliza?
La orina es un lquido transparente y amarillento cuyas funciones son la eliminacin de residuos
txicos del organismo y la regulacin y control de mecanismos bsicos orgnicos, que, en
condiciones normales es asptico, es decir, que no contiene microorganismos infecciosos. Sin
embargo, en situaciones no normales la orina puede contener bacterias (lo que se conoce como
bacteriuria) que, si estn presentes en un nmero o concentracin suficientemente elevados,
pueden causar una infeccin urinaria, o mejor, una infeccin del tracto urinario. Dependiendo de la
parte de este tracto que est afectada por la infeccin, sta recibir diferentes
denominaciones: cistitis, uretritis, protatitis, orquiepididimitis,pielonefritis o absceso renal.
Las infecciones del tracto urinario se pueden producir tanto en la comunidad como en personas
hospitalizadas, en las que habitualmente revisten una mayor gravedad, y son ms frecuentes en las
mujeres que en los hombres.
Las manifestaciones clnicas de estas infecciones pueden inducir al mdico a sospechar su
existencia e incluso ser suficientes en ciertos casos para establecer el diagnstico de infeccin,
pero en otros el diagnstico de certeza slo se puede establecer mediante la prctica de un
urinocultivo (urocultivo). En l se identifica el microorganismo (bacteria u hongo) que est presente
en la orina y, a partir de ah, mediante estudios adicionales se puede determinar la sensibilidad de
esos microorganismos a los diferentes antibiticos y seleccionar el ms adecuado para
combatirlos.

Cmo se realiza el urinocultivo?


Para realizar el urinocultivo es preciso recoger una muestra de orina del paciente.

Mtodos para la recogida de la orina


Para la recogida de la muestra se pueden utilizar diferentes mtodos dependiendo de las
condiciones en que se encuentre el paciente. El principio comn a todos ellos es que la toma se ha
de hacer en condiciones de asepsia, evitando la contaminacin externa de la orina recogida.

Mediante miccin espontnea


La recogida la realiza la persona cuya orina se va a cultivar o, en el caso de nios muy pequeos,
sus padres o personas responsables. Para la recogida se ha de utilizar un recipiente estril, de
boca ancha y con tapn de rosca para su cierre hermtico. El procedimiento a seguir es como
sigue:

La orina a recoger ser la de primera hora de la maana, dado que es cuando est ms
concentrada y ofrece las mejores condiciones para su estudio, en este caso, su cultivo.

Antes de la miccin se ha de proceder primero a un lavado y secado de manos y


despus a un cuidadoso lavado de la zona genital con agua y jabn pero no con
desinfectantes, aclarando abundantemente con agua para eliminar los restos de jabn.
La mujer utilizar una compresa empapada en jabn y se lavar de delante hacia atrs,
es decir, de la vagina hacia el ano.

Antes de iniciar la miccin, la mujer separar con su mano izquierda los labios vaginales
mientras con la derecha sostiene el recipiente estril. El hombre ha de retraer el
prepucio dejando al descubierto la cabeza del pene.

Una vez hecho esto se iniciar la miccin sin recoger la primera parte de ella. Esa
primera orina que no se recoge servir para arrastrar y eliminar los grmenes que haya
en la uretra. S se recoger la orina de la porcin media de la miccin y nuevament

El mdico que le haya solicitado el cultivo le indicar la cantidad de orina que ha de


recoger, pero normalmente es suficiente con 10-20 cm3. En cualquier caso, no ha de
llenar el recipiente por completo.

Finalmente se de tapar el recipiente enroscando el tapn de forma que quede


hermticamente cerrado. Durante todo el procedimiento se ha de evitar tocar el interior
del recipiente o del tapn con ninguna parte del cuerpo u otro elemento para evitar una
posible contaminacin.

La muestra as se recogida se ha de entregar a la mayor brevedad posible (como


mximo en el plazo de 2 horas) en el laboratorio en que se llevar a cabo el cultivo. Si
no fuera posible entregarla en es tiempo, se ha de mantener en la nevera a una
temperatura de 4 grados centgrados. En estas condiciones puede conservarse til para
cultivo durante 24 horas.

En el caso de las nias o nios pequeos la recogida de la muestra de orina se realizar en una
bolsa o colector estril, especficamente diseado al efecto, que le proporcionar el centro sanitario
o que podr adquirir en la farmacia, procediendo como sigue:

Lavar con agua y jabn la zona genital del nio o nia y aclarar cuidadosamente para
eliminar cualquier resto de jabn. Secar con una toalla limpia. No utilizar desinfectantes.

Aplicar la bolsa o colector al rea genital de acuerdo a las instrucciones proporcionadas


por el personal sanitario o por el fabricante.

Dado que los nios de esta edad no tienen todava control de esfnteres, es decir, no
pueden orinar a voluntad, se ha de observar el colector al menos cada media hora para
comprobar si se ha producido la miccin. Si sta no ha tenido lugar durante la primera
hora, se ha de retirar el colector y colocar uno nuevo repitiendo el procedimiento desde
el principio

Una vez recogida orina suficiente (de 5 a 10 cm3 es suficiente) se ha de retirar y cerrar
el colector de acuerdo a las instrucciones que constarn en l.

Para la entrega de la muestra en el laboratorio se han de tener en cuenta las mismas


indicaciones que en el caso de los adultos.

Otros mtodos de recogida


En determinadas situaciones (por ejemplo, pacientes hospitalizados que llevan colocada una sonda
vesical permanente) o en determinados pacientes (por ejemplo, nios muy pequeos en los que no
se ha podido utilizar el mtodo de la miccin espontnea para la recogida de una muestra de orina
vlida para cultivo) se utilizan mtodos de recogida como el sondaje vesical o la puncin
suprapbica. En ambos casos la tcnica la realiza personal sanitario (mdicos o enfermeras)
experto.
La muestra as obtenida se enva al laboratorio donde la orina se coloca en unos recipientes
cilndricos que contienen sustancias que favorecen la proliferacin de los microorganismos
infecciosos que pueda haber en la orina de la muestra. Estos recipientes as preparados se
conocen como medios de cultivo y son analizados por los expertos en Microbiologa para observar

si se produce proliferacin de microorganismos, habitualmente bacterias, que confirme la existencia


de una infeccin.

Otras consideraciones
La obtencin de una muestra de orina para cultivo no requiere ninguna preparacin especial por
parte del paciente. Por lo dems, se trata de una tcnica simple y absolutamente segura que no
requiere ninguna precaucin ni entraa riesgo o complicacin algunos.

Resultados del urinocultivo


Un resultado normal (negativo) quiere decir que no ha habido proliferacin de bacterias o de otros
microorganismos en el medio de cultivo, lo que quiere decir que no hay infeccin. Un resultado
anormal (positivo) indicara lo contrario, es decir, crecimiento bacteriano y por tanto presencia de
infeccin.
No obstante, se pueden producir resultados falsos positivos (crecimiento de bacterias que no
proceden del organismo del paciente) por contaminacin de la muestra en algn momento del
proceso de su obtencin o cultivo, o falsos negativos en caso de que el paciente estuviera tomando
antibiticos en el momento de recoger la muestra de orina o haberlos tomado en los das
inmediatamente anteriores.

UROCULTIVO

1- Objetivo
Realizaremos un urocultivo para la determinacin de los diferentes tipos de microorganismos
presentes en dos muestras de orina. Realizando las diferentes pruebas para el diagnostico de las

posibles enfermedades o infecciones urinarias.

2- FUNDAMENTO
El urocultivo se basa en la identificacin del nmero y de los tipos de bacterias presentes en la
orina. Es necesario que el mtodo de recogida sea el adecuado siguiendo unos protocolos de
higiene evitando as posibles contaminaciones de la muestra.
Para la identificacin del nmero de bacterias, realizaremos un recuento bacteriano (Hygicult TPC)
y para la identificacin de los tipos de bacterias presentes en la orina y sus patologias, se realizara
una siembra en medios de cultivo diferentes con la tcnica de siembra comnmente utilizado en el
urocultivo, segn el tipo de microorganismo comnmente encontrado en la muestra.
Los diferentes cultivos que vamos a utilizar sern:
CLED, Agar: Es un medio de cultivo diferencial para aislar y contar las bacterias presentes en la
orina. Tambin se utiliza para la diferenciacin de bacterias fermentadoras de la lactosa o las no
fermentadoras. Es comnmente utilizado para el crecimiento de enterobacterias y bacilos Gram
presentes en las orinas patolgicas.
CPS3: se utiliza para el aislamiento, recuento e identificacin directa de Escherichia coli,
Proteus y Enterococcus.
CNA: es un medio selectivo para el aislamiento y permite el crecimiento de bacterias Gram
positivas, aunque en ocasiones puede haber crecimiento de alguna Gram negativas.
Agar nutritivo: medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus
requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. En nuestro caso
ser utilizado para el cultivo de Cndida albicans y Streptococcus.
Por otro lado utilizaremos el kit Urin system, panel utilizado para el contaje, identificacin
presuntiva y susceptibilidad antibitica de microorganismos presentes en infecciones urinarias.
Este consta de 24 pocillos los cuales se dividen en 2 pocillos para el recuento, 7 pocillos de cultivo
para la identificacin y 15 para las pruebas de sensibilidad (antibiograma).
Tambin se realizar un examen macroscpico y microscpico de la muestra y del cultivo. En el
examen macroscpico de la muestra se deber observar el color, olor, la densidad, turbidez,
volumen, la qumica seca (tiras reactivas) y el diagnostico del pH y el examen microscpico en
fresco de la orina. En el examen macroscpico del cultivo ha de visualizarse la forma, color, forma
de sus bordes y la superficie de las colonias. Y en el examen microscpico del cultivo la
diferenciacin de las bacterias Gram positivas de gram negativas y las diferentes formas que
presenten (coco, bacilo, estafilococos)

3- Materiales
Asas de siembra desechables

Portaobjetos
Placas de Petri
Mechero
Pinzas
Papel platina
Papel de filtro
Vasos de muestra
Pipeta
Microscopio
Tubos de ensayo
Gradilla
Jeringa
Suero fisiolgico

Reactivos
Urin system plus (kit de recuento, identificacin y sensibilidad)
Hygicult tpc (recuento)
Tiras reactivas
Kit de gram

Medios de cultivo
CLED Agar, CNA, Agar nutritivo, CPS3.

Muestra
Muestra 1
Muestra 2

4- PROCEDIMIENTO:
Recogida de muestra:
Se utilizar un recipiente de muestra desechable. La orina que se recoger ser la primera orina de
la maana, por ser una orina ms concentrada.
Para su recogida se lavara cuidadosamente la zona genital, con agua y jabn y se secara con una
gasa estril o una toalla limpia. Hay que recoger la porcin de orina que corresponda a la mitad de
la miccin, desechando la porcin inicial y final de la miccin y recogiendo el resto en el frasco
estril. Por ltimo se tapa bien el frasco y se proceder a su anlisis.

Anlisis de la muestra:
Ante todo realizaremos los siguientes medos de cultivo: Cled agar, CPS3 y CNA, y mientras se van
auto clavando procederemos a la observacin macroscpica de la muestra, para ello
observaremos el volumen, la densidad, la turbidez, mediremos el PH y utilizaremos las tiras
reactivas para conocer si existe presencia de sangre, de nitritos, de cetonas, de acido ascrbico,
tambin para conocer la cantidad de protenas y de leucocitos.
Para realizar esta prueba vamos a introducir la tira reactiva dentro del recipiente con la ayuda de
unas pinzas. Luego la tira la depositaremos sobre un papel de filtro y procederemos rpidamente a
su lectura, comparando los colores con los del bote.

Despus vamos a realizar un examen microscpico. Para ello vamos a utilizar la tcnica de la
tincin de Gram para conocer la presencia de bacterias Gram + y Gram-.
Una vez se hallan autoclavado los medios, los dejaremos solidificar y realizaremos la siembra con

asas desechables en los correspondientes medios de cultivo. Luego los rotulamos con la fecha y el
nmero de la muestra (en este caso 1 2) y los incubamos a 37C durante 24 horas.
Por otra parte utilizaremos la tcnica hygicult tpc para obtener el recuento de bacterias que
aproximadamente hay en la orina, para ello, impregnamos el cultivo especfico, colocado en forma
de gel, dentro de la muestra y lo ponemos a cultivar de 18-24 horas.
La otra prueba que realizaremos ser la URIN SYSTEM PLUS que consiste en realizar dos
suspensiones. Una suspensin A (donde cogeremos 05ml de muestra con una pipeta y 15ml de
suero salino) y otra B (donde tomaremos 02ml de la suspensin A mas suero mdium del kit).
Procedemos a aadir a cada pocillo 02ml con la pipeta de las dos suspensiones hasta los pocillos
9 con la suspensin A y el resto con la suspensin B. Ponemos a cultivar 24 horas y leemos
resultados.
Pasadas las 24 horas observaremos el crecimiento obtenido:
Con respecto a los medios de cultivo de cada muestra, realizaremos un examen macroscpico de
las colonias, observando sus bordes, sus tamaos, su forma y su superficie.
Con lo observado anteriormente iremos buscando posibles microorganismos teniendo siempre en
cuenta las caractersticas de los medios. Luego haremos la tincin de Gram para comparar y
descartar las cuestiones antes analizadas.
Realizaremos un inoculo por cada muestra, luego realizaremos las extensiones necesarias y
teiremos con Gram. Por ltimo observamos al microscopio y copiamos los resultados para luego
compararlos con los posibles resultados de las colonias observadas.
Con respecto a la lectura de la tcnica hygicult TPC utilizaremos unas pinzas para sujetar los geles
de cultivo y colocarlos en un portaobjetos, para as observar mejor el crecimiento y apuntar los
resultados obtenidos de la concentracin bacteriana.
En cuanto a la los resultados de la prueba URIN SYSTEM PLUS observamos los cambios de
colores y anotamos la presencia de microorganismos comparando con la hoja de resultados que
posee el kit.

5- Resultados
Examen macroscpico de la orina
Muestra 1:presenta un olor caracterstico a caf. Con un color amarillento fuerte y con
presencia de sedimentos en el fondo del recipiente. Con una densidad normal y una ligera turbidez.
El pH que obtuvimos ha sido 7.5. El resultado de las tiras reactivas ha sido el siguiente: bilirrubina
negativa, Urobilingeno normal, cetonas normal, cido ascrbico negativo, glucosa normal,
protenas negativo, sangre negativo, pH 7.5, nitritos negativo, leucocitos negativo y una densidad
de 1,015.

Muestra 2:presenta un olor caracterstico, con un color amarillo claro, sin presencia de
sedimentos ni turbidez con una densidad normal. El pH ha sido 5. El resultado de las tiras reactivas
ha sido: bilirrubina negativa, Urobilingeno normal, cetonas normal, cido ascrbico negativo,
glucosa normal, protenas negativo, sangre negativo, pH 5, nitritos positivos, leucocitos negativo y
una densidad de 1,020.

Examen microscpico de la orina en fresco


Muestra 1:presencia de cocos, bacilos, clulas epiteliales.
Muestra 2:presencia de cocos, bacilos, clulas epiteliales y cristales.
Examen macroscpico de los medios de cultivo
Muestra 1:
- Cled agar: presencia de colonias de color amarillo, de tamao grande, con bordes circulares y
superficie convexa.

- CPS3: presencia de diferentes colonias:


o Colonias de color marrn oscuro, de grandes tamao y medianas, bordes circulares, superficie
elevada y se encuentran en gran cantidad.
o Colonias de color verde, de pequeos tamaos, bordes circulares, se encuentra en poca
cantidad.
o Colonias blancuzcas, de diminuto tamao, cricas y brillantes.

- CNA: presencia de dos tipos de colonias:


o Colonias con halo: las colonias son de color blanco, mientras que el halo es amarillento, su
forma es circular, sus bordes regulares y presentan superficie cncava.
o Colonias sin halo: forma circular y bordes regulares.

- Agar nutritivo: observacin de dos tipos de colonias.


o Colonias de color blanco: de pequeo tamao, brillantes, redondeadas.
o Colonias de color naranjadas: con bordes redondeados y de tamao normal.

Muestra 2:
- Cled agar: presencia de colonias de color amarillo, con bordes circulares y presentes en poca
cantidad.
- CPS3: presencia de diferentes colonias:
o Colonias de color verde, de grandes tamao, bordes circulares y estn presentes en mayor
proporcin
o Colonias de color blanco, de pequeos tamaos,
- CNA: presencia de dos tipos de colonias:
o Colonias con halo: las colonias son blancas y sus halos amarillos, tienen forma circular, sus
bordes son regulares y tienen una superficie elevada.
o Colonias sin halo: son de color blanco, su forma es circular.

Examen microscpico de los medios de cultivo


Muestra 1: tincin de gram, observacin por colonias y medios.
- Cled agar:
Colonias amarillas: E.coli se observan bacilos cortos de color rosa (presenta una leve acidificacin
del medio, estando este de color amarillo) y Enterococcus se observan diplococos gram positivos.

- CPS3:
Colonias marrones: E.coli, bacilos cortos gram negativos, se observan de color rosados.
Colonias verdes: Enterococci, con forma cocobacilar de color rosa.
Colonias blancas: Candida albicans, son levaduras, se observan con presencia de algunas
esporas, hifas.

- CNA:
Colonias blancas: E.coli, se observan bacilos cortos de color rosa.
Colonias blancas con halos: P.vulgaris, bacilos de color rosa y con pilis.

- Agar nutritivo:
Streptococcus: de color azul.

Muestra 2: tincin de gram, observacin por colonias y medios.


- Cled agar:
Colonias amarillas: E.coli se observan bacilos cortos de color rosa (presenta una leve acidificacin
del medio, estando este de color amarillo) y Enterococcus se observan diplococos gram positivos.
- CPS3:
Colonias marrones: E.coli, bacilos cortos gram negativos, se observan de color rosados.
Colonias verdes: Enterococci, con forma cocobacilar de color rosa.
Colonias blancas: Candida albicans, son levaduras, se observan con presencia de algunas
esporas, hifas.
- CNA:
Colonias blancas: E.coli, se observan bacilos cortos de color rosa.
Colonias blancas con halos: P.vulgaris, bacilos de color rosa y con pilis.
- Agar nutritivo:
Presencia de Streptococcus, bacilos cortos, diplococos, cocos, cocobacilos.

Resultados de la tcnica hygicult tpc


En la muestra 1 obtuvimos una concentracin bacteriana de 106 bact/ml y en la muestra 2 la
concentracin bacteriana obtenida fue de 105 bact/ml.

Resultados de la prueba URIN SYSTEM PLUS


Muestra 1:

Bacteriuria: CFU/ml > 106


E.coli: positivo
Proteus: positivo
Pseudomonas spp: negativo
Klebsiella: negativo
Enterococcus spp: positivo
Staphylococcus spp: negativo
Candida albicans: positivo
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD (ANTIBIOGRAMA)
No es susceptible a TZP, FOS, AMS, AUG y C.
Resistente frente a CAZ y SXT.
No han sido concluyentes: AK, CN, TOB, CFP, CTX, NA, CIP, LEV.

Muestra 2:
Bacteriuria: CFU/ml > 105
E.coli: positivo
Proteus: positivo
Pseudomonas spp: negativo
Klebsiella: negativo
Enterococcus spp: positivo
Staphylococcus spp: negativo
Candida albicans: positivo
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD (ANTIBIOGRAMA)
No es susceptible a TZP, FOS, AMS, AUG y C.
Resistente frente a CAZ y SXT.
No han sido concluyentes: AK, CN, TOB, CFP, CTX, NA, CIP, LEV.

6- Conclusin
Cada una de las anteriores pruebas han sido realizadas con un propsito y para corroborar que
nuestras sospechas tras la observacin del cultivo es cierta. Para ello tras la observacin de la
siembra y el cultivo, al observar las colonias, decidimos realizas las observaciones microscpicas
con la elaboracin de la tincin de gram, para verificar que, cada una de esas colonias se
corresponde con la forma que debe de presentar cada bacteria de estas.
Tras la realizacin de cada una de las pruebas nombradas con anterioridad durante todo el
desarrollo hemos podido llegar a la conclusin que, ambas muestra presentan E.coli y Proteus
vulgaris, Enterococcus, Streptococcus y Candida albicans. Ambas muestras poseen un alto
nmero de bacterias, presentan una alta bacteriuria. En la qumica seca poseen unos valores
normales.

Pruebas Microbiolgicas para E. coli


Filed under: Bacteriologa 5 comentarios
15 junio, 2011
Ms de un estudiante ha pasado por la situacin, de no conocer exactamente que medios
son los indicados para identificar

E. coli Salmonella Shigella Agar

una cepa bacteriana especficamente, aunque haya revisado el tema en clases recientes.
Por ello es prctico conocer sobre qu tipo de medios las bacterias se diferencian de otras
cepas aunque sean metablicamente muy similares. En este apartado revisar las pruebas
ms relevantes para identificar a la muy estudiadaEscherichia coli.
Cuando recibimos una muestra es importante definir el algoritmo de pruebas que debe
manejarse para lograr identificar el microorganismo de inters. La tincin de Gram nos
permite definir si el microorganismo es Gram positivo o Gram negativo en este caso en el
frotis debemos observar bacilos Gram negativos para seguir a las siguientes pruebas de
caracterizacin.

E. coli MacConkey

La mayora de los microorganismos pueden cultivarse sobre substratos nutritivos para el


estudio de sus propiedades o para la utilizacin de ciertas propiedades en condiciones
controladas. La proliferacin de bacterias es el resultado de una interaccin compleja de
diferentes sustancias alimenticias y principios activos dnde intervienen factores fsicos
como: temperatura, pH, el factor redox entre otras.
Al momento de tener una muestra en donde se desee identificar la presencia de E. coli hay
que definir que medios de cultivo son selectivos para enterobacterias. Los medios selectivos
son muy utilizados cuando se trabaja con muestras que provienen de reas que poseen una
flora abundante.
Los medios selectivos incorporan sustancias inhibidoras de la propagacin de un grupo
bacteriano que no sea de inters pero en cambio permite el crecimiento de otros grupos.
Para microorganismos entricos, los medios usados de modo habitual contienen ciertos
colorantes e ingredientes que inhiben los organismos gram positivos y permite la
propagacin de los bacilos entricos Gram negativos.

E. coli- Agar EMB

Otra tipos de medio que es una gran herramienta a la hora de la identificacin de


microorganismos entricos como la E. coli son los medios diferenciales que poseen
componentes qumicos e indicadores que permiten identificar con cierta facilidad algunos
gneros o especies bacterianas por el aspecto caracterstico que toman sus colonias.
Muchos medios selectivos son tambin diferenciales por ejemplo podemos mencionar:

Agar Salmonella Shigella: Se utiliza para aislar bacterias lactosa negativa


como Salmonella y Shigella. Especies de la familia Enterobacteriaceae lactosa positivas,
como Escherichia coli, presentan colonias rosadas en este tipo de medio.

Agar Tergitol 7: Este medio permite diferenciar especies fermentadoras de la


lactosa de las especies no fermentadoras. En este medio Escherichia coli presenta colonias
amarillas.

Agar MacConkey: Al igual que el anterior separa las bacterias fermentadoras de la


lactosa.Escherichia coli produce colonias rosadas.

Agar Eosina Azul de Metileno (EMB) de Levine: Permite la diferenciacin de


especies fermentadoras de la lactosa. Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli presentan
colonias que varan del prpura a verde metlico.
Pruebas Bioqumicas son la forma ms convincente del diagnstico de las enfermedades
infecciosas, mediante este proceso se determinan el gnero y las especies bacterianas de
inters. Cada tipo bacteriano tiene un cuadro de reacciones especficas donde se
comprueba el resultado de las reacciones y son la base de la identificacin de los diferentes
agentes bacterianos. En general para la identificacin de enterobacterias se sugiere realizar
las siguientes pruebas:

Agar TSI: Es un medio de cultivo diferencial basado en la capacidad de los bacilos


gram negativos de fermentar carbohidratos, de producir H2S y producir gas.

Se observa en el tubo el pico y el fondo cido, hay 1% de positividad para la


produccin de H2S en cepas de E. coli.

Prueba de orto-nitrofenil--galactopiransido (ONPG): Esta prueba


detecta la produccin de la enzima -galactosidasa y permite diferenciar organismos de
lenta utilizacin de la lactosa de aquellos que no la utilizan. La enzima -galactosidasa es
codificada por el gen lacZ del opern lactosa, el cual es inducido en presencia de lactosa y
ausencia de glucosa. Por lo tanto, se requiere que las bacterias hayan sido crecidas en un
medio con lactosa como el Agar TSI o el Agar MacConkey.

E. coli es positiva para esta prueba

Prueba de movilidad: Esta prueba determina la movilidad de los bacilos


fermentadores.

95% de positividad para cepas de E. coli.

Prueba de gelatinasa: Determina la produccin de la enzima gelatinasa, la


cual produce la hidrlisis de la gelatina.

E. coli es negativa para esta prueba

Prueba de rojo de metilo (RM): Identifica especies de bacterias que


producen cidos a partir de glucosa.

99% de positividad para cepas de E. coli.

Prueba de Voges Proskauer (VP): En esta prueba se detecta la


produccin de acetil-metilcarbinol (acetona), el cual se convierte a diacetilo en presencia
de KOH y O2 atmosfrico. El diacetilo es convertido posteriormente en un complejo rojo en
presencia de -naftol y creatinina. La produccin de acetona es una va alternativa del
metabolismo del cido pirvico, donde se producen cantidades pequeas de cidos mixtos
que pueden ser insuficientes para dar una prueba RM positiva. Por este motivo, la mayora
de las especies de la familia Enterobacteriaceae son VP positivo y RM negativo y viceversa.

esta prueba es negativa para cepas de E. coli.

Prueba de fenilalanina desaminasa: La determinacin de la enzima


fenilalanina desaminasa es til para diferenciar inicialmente a las especies
de: Proteus, Morganella y Providencia de otros bacilos gram negativos.

0% de positividad para cepas de E. coli.

Produccin de descarboxilasas y dehidrolasas de


aminocidos: Muchas especies bacterianas poseen enzimas que tienen la capacidad de
descarboxilar o de hidrolizar aminocidos especficos entre ellos la arginina, lisina, ornitina
en pruebas especficas, liberando animas de reaccin alcalina y CO2.

17% de positividad para Arginina.

90% de positividad para Lisina.

65% de positividad para Ornitina.

Prueba de Ureasa: Los microorganismos que hidrolizan la urea a travs de


la enzima ureasa, liberan amonaco lo cual produce un cambio de color rojo en el medio. El
agar urea de Christensen permite la deteccin de menores cantidades de amonaco para
aquellos microorganismos que producen menores cantidades de ureasa se evalan con este
mtodo.

1% de positividad para esta prueba en E. coli.

Produccin de Indol: El indol es uno de los productos de la degradacin


del aminocido triptofano. Para su deteccin la bacteria es cultivada en caldo triptona y
posteriormente se utiliza el reactivo de Ehrlich, el cual es ms sensible que el reactivo de
Kovacs cuando se estudian bacilos no fermentadores o anaerobios cuya produccin de indol
es mnima.

98% de positividad para esta prueba en E. coli.

Utilizacin de citrato: Esta prueba determina la capacidad de un


microorganismo de utilizar el citrato de sodio como nica fuente de carbono para el
metabolismo y crecimiento.

1% de positividad para cepas de E. coli.

Utilizacin de malonato: Esta prueba determina la capacidad de algunas


bacterias de utilizar el malonato como fuente de carbono y energa.

95% de positividad para cepas de E. coli.

Prueba de reduccin de nitratos: Determina la capacidad de reducir el


nitrato a nitrito o gas. Es til en la identificacin de la familia Enterobacteriaceae y en la
diferenciacin de especies de muchos otros grupos de microorganismos.

E. coli es negativa para esta prueba

Prueba de fermentacin de carbohidratos: Se recomienda el uso del


caldo de base prpura de bromocresol conteniendo un determinado sustrato a una
concentracin del 1% para la determinacin de la fermentacin de carbohidratos y
alcoholes para especies de la familia Enterobacteriaceae.

D-Sorbitol 94% de positividad.

Lactosa 95% de positividad.

Sacarosa 50% de positividad.

D-Manitol 98% de positividad.

D-Adonitol 5% de positividad.

L-Arabinosa 99% de positividad.

Maltosa 96% de positividad.