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COMPOSICIN

QUMICA Y
ESTRUCTURA
DEL ADN

COMPOSICIN QUMICA DEL ADN

FRIEDRICH MIESCHER
(1844-1895)
SUIZA

FRIEDRICH MIESCHER EN
1871 AISL DEL NCLEO DE
LAS CLULAS DE PUS
(GLOBULOS BLANCOS) UNA
SUSTANCIA CIDA RICA EN
FSFORO QUE LLAM
"NUCLENA".
EL NOMBRE DE CIDO
NUCLEICO PROCEDE DEL DE
"NUCLENA" PROPUESTO
POR MIESCHER.

COMPOSICIN QUMICA DEL ADN

Albrecht Kossel Phoebus Levene


(1853-1927)
(1869-1940)
Alemania
Rusia-EUA

Albrecht Kossel y
Phoebus Levene
De los aos 1885 a
1901 aislaron y
nombraron los cinco
componentes orgnicos
de los cidos
nucleicos Adenina.
Timina, Guanina,
Citocina y Uracilo.

COMPOSICIN QUMICA DEL ADN

Cuando se realiza la hidrlisis


completa de los cidos nucleicos,
se obtienen tres tipos de
componentes principales:
1) Azcar: Pentosas.
2) Bases nitrogenadas: Pricas y
Pirimidnicas.
3) cido fosfrico.

COMPOSICIN QUMICA DEL ADN


AZUCARES DE LOS CIDOS NUCLECOS

GRUPO OH EN
EL CARBONO
2 DE LA
PENTOSA

ADN

ARN

CIDOS FOSFRICO

COMPOSICIN QUMICA DEL ADN

BASES NITROGENADAS
1) LAS BASES PRICAS
DERIVADAS DE LA PURINA
(FUSIN DE UN ANILLO
PIRIMIDNICO Y UNO DE
IMIDAZOL) SON LA ADENINA
(6-AMINOPURINA) Y LA
GUANINA (2-AMINO-6HIDROXIPURINA).
2) LAS PURINAS SE UNEN AL C1
DEL AZCAR MEDIANTE UN
ENLACE N-GLUCOSDICO A
TRAVS DEL N9 DEL ANILLO
IMIDAZOL

COMPOSICIN QUMICA DEL ADN

BASES NITROGENADAS
1) LAS BASES PIRIMIDNICAS
(DERIVADAS DE LA
PIRIMIDINA) SON LA
TIMINA (2,6-DIHIDROXI5-METILPIRIMIDINA O
TAMBIN LLAMADA 5METILURACILO), CITOSINA
(2-HIDROXI-6AMINOPIRIMIDINA) Y
URACILO (2,6DIHIDROXIPIRIMIDINA)
2) LAS PIRIMIDINAS SE
UNEN AL C1 DEL AZCAR
MEDIANTE UN ENLACE NGLUCOSDICO A TRAVS
DEL N3 DEL ANILLO

BASES NITROGENADAS
1) LAS BASES NITROGENADAS QUE FORMAN
NORMALMENTE PARTE DEL ADN SON:
ADENINA (A), GUANINA (G), CITOSINA Y
TIMINA (T)
2) LAS BASES NITROGENADAS QUE FORMAN
PARTE DE EL ARN SON: ADENINA (A),
GUANINA (G), CITOSINA (C) Y URACILO (U).
POR TANTO, LA TIMINA ES ESPECFICA DEL
ADN Y EL URACILO ES ESPECFICO DEL ARN

COMPOSICIN QUMICA DEL ADN


La unin de:
Pentosa + Base nitrogenada = Nuclesido
Pentosa + Base nitrogenada + cido fosfrico = Nucletido
Nucletido + Nucletido + Nucletido + .... = Polinucletido
LA TERMINOLOGA EMPLEADA PARA REFERIRSE A LOS
NUCLESIDOS Y NUCLETIDOS ES LA SIGUIENTE:
Base Nitrogenada

Nuclesido

Nucletido

Adenina

Adenosina

cido Adenlico

Guanina
Citosina
Timina
Uracilo

Guanidina
Citidina
Timidina
Uridina

cido Guanlico
cido Citidlico
cido Timidlico
cido Uridlico

COMPOSICIN QUMICA DEL ADN


LOS NUCLETIDOS SE UNEN
ENTRE SI PARA FORMAR
LARGAS CADENAS DE
POLINUCLOTIDOS, ESTA
UNIN ENTRE MONMEROS
NUCLETIDOS SE REALIZA
MEDIANTE ENLACES
FOSFODISTER ENTRE LOS
CARBONOS DE LAS POSICIONES
3 DE UN NUCLETIDO CON LA
5 DEL SIGUIENTE

COMPOSICIN QUMICA DEL ADN

1) Los polinucletidos son polmeros lineales de


nucletidos cuyos grupos fosfatos unen las
posiciones 3y 5de azucares consecutivos.
2) Los grupos fosfatos son acdicos por lo que a
pH fisiolgico estn cargadas negativamente.
3) Los nucletidos estn formados por un residuo
de azcar unido por el C1 a una base nitrogenada
y a un grupo fosfato por el C5.

PROPORCIONES DE LAS BASES NITROGENADAS


(REGLAS DE CHARGAFF)
Chargaff (1950) demostr que las proporciones de las bases nitrogenadas eran
diferentes en los distintos organismos, aunque seguan algunas reglas. Estas
reglas de Chargaff se cumplen en los organismos cuyo material hereditario es
ADN de doble hlice y son las siguientes:
1) La proporcin de Adenina (A) es igual a la de Timina (T). A = T . La relacin
entre Adenina y Timina es igual a la unidad (A/T = 1).
2) La proporcin de Guanina (G) es igual a la de Citosina (C). G= C. La relacin
entre Guanina y Citosina es igual a la unidad ( G/C=1).
3) La proporcin de bases pricas (A+G) es igual a la de las bases pirimidnicas
(T+C). (A+G) = (T + C). La relacin entre (A+G) y (T+C) es igual
a la unidad (A+G)/(T+C)=1.
4) Sin embargo, la proporcin entre (A+T) y (G+C) era
caracterstica de cada organismo, pudiendo tomar por tanto,
diferentes valores segn la especie estudiada. Este resultado
indicaba que los cidos nucleicos no eran la repeticin montona
de un tetranucletido. Exista variabilidad en la composicin
de bases nitrogenadas
Edwin Chargaff

MODELO DE LA ESTRUCTURA DEL ADN

(Premio Nbel en Fisiologa y Medicina 1962)

James D. Watson

Usando los datos obtenidos por Chargaff (1950),


relativos a la composicin de bases nitrogenadas
en el ADN de diferentes organismos y en
estudios de difraccin de rayos X sobre fibras de
ADN; determinan la estructura tridimensional o
disposicin espacial de las molculas de ADN.
Ellos propusieron un modelo de estructura para el
ADN conocido con el nombre de Modelo de la
Doble Hlice.

Francis H. C. Crick

Maurice H. F. Wilkins

DNA-B

Las caractersticas del modelo son las siguientes:


1) El ADN es una doble hlice enrollada helicoidalmente a derechas (sentido dextrorso
dextrgira). Algo parecido a dos muelles entrelazados.
2) Enrollamiento de tipo plectonmico: para separar las dos hlices es necesario girarlas
como si fuera un sacacorchos
3) Cada hlice es una serie de nucletidos unidos por enlaces fosfodister en los
que un grupo fosfato forma un puente entre grupos OH de dos azcares sucesivos
(posiciones 3 de un azcar y 5 del siguiente).
4) Las dos hlices se mantienen unidas mediante puentes o enlaces de hidrogeno
producidos entre las bases
nitrogenadas de cada hlice.
Siguiendo los datos de
Chargaff (1959), la Adenina
de una hlice aparea con la
Timina de la hlice
complementaria mediante
dos puentes de hidrgeno.
Igualmente, la Guanina de
una hlice aparea con la
.
Citosina de la complementaria
mediante tres puentes de
hidrgeno

Las caractersticas del modelo son las siguientes:


5) Las dos hlices por razones de complementaridad de las bases nitrogenadas son
antiparalelas, teniendo secuencias de tomos inversas. Una hlice lleva la secuencia 5P
3OH , mientras que la hlice complementaria sigue la secuencia de tomos 3OH
5P.
6) El dimetro de la doble hlice es de 20 A.
7) Las bases nitrogenadas son estructuras planas perpendiculares al eje de la doble
hlice y estn apiladas unas sobre otras a una distancia de 3,4 A. Cada 10 bases,
cada 34 A se produce una vuelta completa de la doble hlice (360).
8) Las bases se encuentran en
sus configuraciones cetnicas,
cumpliendo as las
reglas de apareamiento A-T
y G-C.
9) La secuencia de bases
nitrogenadas puede ser
cualquiera, no existe ninguna
restriccin

ALTERNATIVAS
AL MODELO DE
LA DOBLE
HLICE

ALTERNATIVAS AL MODELO DE LA DOBLE HLICE


ADN-B: ADN en disolucin, 92% de humedad relativa, se encuentra en
soluciones con baja fuerza inica se corresponde con el modelo de la Doble
Hlice.
ADN-A: ADN con 75% de humedad, requiere Na, K o Cs como contraiones,
presenta 11 pares de bases por giro completo y 23 A de dimetro. Es
interesante por presentar una estructura parecida a la de los hbridos
ADN-ARN y a las regiones de autoapareamiento ARN-ARN.
ADN-Z: doble hlice sinistrorsa o levgira (enrollamiento a izquierdas), 12
pares de bases por giro completo, 18 A de dimetro, se observa en
segmentos de ADN con secuencia alternante de bases pricas y pirimidnicas
(GCGCGC), debido a la conformacin alternante de los
residuos azcar-fosfato sigue un
curso en zig-zag. Requiere una
concentracin de cationes superior
a la del ADN-B, y teniendo en
cuenta que las protenas que
interaccionan con el ADN tienen
gran cantidad de residuos bsicos
sera posible que algunas
convirtieran segmentos de ADN-B
en ADN-Z. Las posiciones N7 y
C8 de la Guanina son ms
accesibles.

ALTERNATIVAS AL MODELO DE LA DOBLE HLICE


Palndromos: Plegamiento o apareamiento de una hlice consigo misma. El
palndromo tambin es una figura gramatical que se lee igual en los dos
sentidos. Existe ADN palindrmico de hlice sencilla y de hlice doble. En
el palndromo de doble cadena la secuencia de bases se lee igual en
direccin 5 P 3OH en ambas cadenas.
Existen algunos virus cuyos cidos nucleicos son de una sola hlice: el ADN de
los fagos X174 y M13 es circular de hlice sencilla, sin embargo, se ha
comprobado que una pequea parte resiste la accin de enzimas que digieren
especficamente ADN de hlice sencilla. Por tanto, estas regiones
resistentes
de
ADN
presentan
complementaridad
interna
o
autoapareamiento, formando ADN duplex o doble hlice, teniendo
secuencias palndrmicas. Una situacin semejante se ha observado en el
ARN de hlice sencilla del bacteriofago MS2 (3569 ribonucleotidos y tres
genes). En este caso, el gen de la protena de la cubierta del virus
presenta segmentos que tienen complementaridad interna (autoapareamiento)
que se pliegan sobre si mismos formando horquillas (regiones de ARN de
doble hlice)
El ARN transferente (ARN-t) que transporta los aminocidos y el ARN
ribosmico (ARN-r) que intervienen en el proceso de traduccin, son cidos
ribonucleicos de una sola hlice y tambin presentan autoapareamiento

ALTERNATIVAS AL MODELO DE LA DOBLE HLICE

LOS APAREAMIENTOS QUE OCUREN EN LA


ESTRUCTURA DE DOBLE HLICE NO SATURAN
TODAS LAS POSIBILIDADES DE LAS BASES DE
ESTABLECER RECONOCIMIENTOS ESPECFICOS

LA TRIPLE
HLICE DEDE
ADN
POSIBLES
TRIADAS
BASES
N9
Me
Me
O
R

N3

N1

H
N

O
H

H N
1

N3

N7

N1 R
R

O H

N9

N3

N3 H

N1

H
N
H

N
H

N7

N1
N3

H
N

N1 R

N3

N1
O

N9
R

N3

d(C+-GC)

d(T-AT)

N7 R

O
N1

N3

N H

N7

N1

N
H

N3

N9
R

d(G-GC)

Puentes de Hidrgeno Hoogsteen

H
N
R

N3

N1
O

H
H
N
H

H
N

H
N7

N1
N3

N9
R

d(G-G-C)*

N3

R
N9

N3
Me
O

N7

N1
O

N3

N1
O

N1
H

H
H
N7

N1
N3

d(A-AT)

N9
R

R
N7
N9

Me

N H
R

N3

N1
O

R
N1

H
H
N7

N1
N3

d(T-AT)*

Me

N3

N9
R

LA TRIPLE HLICE DE ADN o ADN-H


"In vitro" es posible obtener tramos de
triple hlice intercalando oligonucletidos
cortos constituidos solamente por
pirimidinas (timinas y citosinas) en el surco
mayor de una doble hlice. Este
oligonucletido se une a pares de bases AT y G-C mediante enlaces de hidrgeno
tipo Hoogsteen que se establecen entre la
T o la C del oligonucletido y los pares AT y G-C de la doble hlice. No se sabe la
funcin biolgica del ADN-H aunque se ha
detectado en cromosomas eucariticos.

LA TRIPLE HLICE DE ADN o ADN-H

LA PRESENCIA DE LA
TERCERA CADENA ROMPE
EL SURCO MAYOR EN 2
PARTES

Me

MM groove

Me
O
R

N3

N1
O

O
H

H
N7

N1
N3

m groove

N9
R

N3

N1 R
O

mM groove

LA TRIPLE HLICE DE ADN o ADN-H

REGIONES CAPACES DE DAR TRIPLE


HLICE EN EL GENOMA HUMANO
0.40

Human Genome
Promoters
UpStreams
DownStreams
Introns
Exons
Coding

0.35

Probability (%)

0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

Length of the track

25

26

27

28

29

30

ES POSIBLE INFLUIR EN LA FUNCIONALIDAD DEL DNA


MEDIANTE LA FORMACION DE ESTRUCTURAS HIBRIDAS
DNA(T): ANTI-GENE & DNA-RNA: ANTISENSE

HLICES CUADRUPLES O ADN-G (TETRAPLEXES)


"In vitro" se han obtenido cuartetos de Guanina (ADN cuadruplexo) unidas
mediante enlaces tipo Hoogsteen, empleando polinucletidos que solamente
contienen Guanina (G). Los extremos de los cromosomas eucariticos
(telmeros) tienen una estructura especial con un extremo 3' OH de cadena
sencilla (monocatenario) en el que se repite muchas veces en tandem una
secuencia rica en Guaninas. Se piensa que el ADN cuadruplexo telomrico
servira para proteger los extremos cromosmicos de la degradacin
enzimtica. Ejemplo de secuencia telomrica rica en guaninas (G):
5P TTGGGTTGGGGTTGGGG...............TTGGGG 3'OH

SE FORMAN FUNDAMENTALMENTE
EN SECUENCIAS RICAS EN
POLIGUANINAS
CLAVES PARA LA ESTABILIZACIN
DE LOS TELMEROS
UNA DE LAS DIANAS MS
PROMETEDORAS EN TRATAMIENTO
ANTINEOPLSICO

ESTRUCTURA
CRISTALINA
DEL ADN-G

EL GENOMA
BACTERIANO ES
UN NUCLEOIDE

EL GENOMA BACTERIANO ES UN NUCLEOIDE


1) Aunque en las bacterias no se
observan estructuras con las
caractersticas morfolgicas de los
cromosomas eucariticos, su genoma
se encuentra organizado en cuerpos
definidos. El material gentico puede
ser visto como un grupo bastante
compactado o una serie de grupos
llamado nucleoide, que ocupa
aproximadamente un tercio del
volumen de la clula
2) Cuando clulas de E. coli son
lisadas las fibras de DNA son
liberadas en forma de lazos. El DNA
en estos lazos no es encontrado en
forma de doble hlice extendida si no
que se encuentra compactado
asociado a protenas

SUPERENROLLAMIENTO
DEL ADN

COMO SE PUEDE
ENPAQUETAR TANTO ADN
EN TAN POCO ESPACIO ?

EL SUPERENRROLLAMIENTO

La DNA Girasa o Topoisomerasa II, introduce superenrrollamiento negativo (el


ADN tuerce a lo largo de su eje en la direccin opuesta a la de la doble
hlice, que es hacia la derecha); mientras que la ADN Topoisomera I,
elimina el superenrrollamiento negativo por medio de un corte que permite
que el ADN regrese a su estado relajado.
Existen adems las llamadas Girasas Inversas (producen superenrrollamiento
positivo) en especie extremfilas como las Archaea.

R
L
C

Electroforesis en gel de
agarosa 0.8% del plsmido
pUC18 sometido a diferentes
dosis de radiacin gamma.
Lneas 1-7, dosis de 0, 50, 100,
150, 200, 300, 400 Gy
respectivamente.
R:
Forma
relajada
o
covalentemente abierta
L: forma lineal
C: forma superenrrollada o
covalentemente cerrada

DEFINICIN
MOLECULAR DEL
GEN

DEFINICIN MOLECULAR DE GEN

UNA DEFINICIN SIMPLE DE UN


GEN ES: AQUELLA UNIDAD DE
ADN QUE CONTIENE LA
INFORMACIN PARA
ESPECIFICAR LA SNTESIS DE
UNA NICA CADENA
POLIPEPTDICA O RNA
FUNCIONAL

ORGANIZACIN DE GENES, TRANSCRIPCIN Y


TRADUCCIN EN PROCARIONTES
1) El opern triptofano es un
segmento continuo del cromosoma
del E. coli que contiene 5 genes
que codifican las enzimas
necesarias para la sntesis paso a
paso del triptofano
2) Todo el opern se transcribe a
partir de un promotor y forma un
mRNA largo continuo que contiene
5 genes (mRNA policistrnico)
3) El orden de los genes en el
genoma bacteriano es paralelo a
la funcin secuencial de las
protenas codificadas en la va del
triptofano.

ESTRUCTURA DEL
OPERON BACTERIANO

Regulacin de la trascripcin a partir


del opern lac de E. coli.
La regin de control de la transcripcin
( 10 pares de bases) incluye tres
regiones de unin de protenas: el sito
CAP, que une la protena activadora del
catabolito, el promotor lac, que une el
complejo RNA Polimerasa 70, y el
operador lac, que une al represor lac.
a) En ausencia de Lactosa se produce
muy poco mRNA porque el represor lac
se une al operador, inhibiendo la
iniciacin de la transcripcin por la RNA
Polimerasa 70.
b) En presencia de Glucosa y Lactosa,
el represor lac se une a la lactosa y se
disocia del operador, permitiendo iniciar
la transcripcin a una frecuencia baja.
c) La mxima transcripcin del opern
lac tiene lugar en presencia de lactosa
y ausencia de glucosa. En esta situacin
el cAMP se incrementa en respuesta a
la concentracin baja de glucosa y
forma el complejo CAP-cAMP, que se
une al sitio CAP, donde interacta con
la RNA Polimerasa para estimular la
velocidad de iniciacin de la
trascripcin.

ORGANIZACIN DE GENES, TRANSCRIPCIN Y


TRADUCCIN EN EUCARIONTES
1) Los 5 genes que codifican
las enzimas requeridas para la
sntesis del triptofano en
levadura (Saccharomyces
cerevisiae) se encuentran en
cuatro cromosomas distintos
2) Cada gen es transcripto a
partir de su propio promotor
para producir un transcripto
primario que es procesado en
un mRNA funcional que
codifica una nica protena
(mRNA monocistrnico). La
longitud de los cromosomas de
la levadura se mide en
kilobases.

PROCESAMIENTO DEL RNA PARA PRODUCIR


mRNA FUNCIONAL EN EUCARIONTES
1) El gen de la -globina contiene
tres exones (rojos) codificadores de
protenas y dos intrones (azules)
2) Los intrones interrumpen la
secuencia de codificacin de
protenas entre los codones de los
aminocidos 31 y 32, y 105 y 106
3) La transcripcin de los genes
eucariontes codificadores de
protenas comienza antes de la
secuencia que codifica el primer aa
y se extiende ms alla de la
secuencia del ltimo aa, lo que da
lugar a regiones no codificantes
(gris). Estas regiones no traducidas
(UTR) son retenidas durante el
procesamiento
4) En los extremos del mRNA son
aadidos dos tipos de modificaciones
diferentes. El casquete en el
extremo 5 y la cola de poliA en el
extremo 3.

ELIMINACIN ESPECFICA DE INTRONES SEGN EL


TIPO DE CELULA DEL pre-mRNA DE FIBRONECTINA
EN FIBRIBLASTOS Y HEPATOCITOS

EL GEN DE LA FIBRONECTINA CONTIENE MLTIPLES EXONES. LOS


EXONES EIIIB Y EIIIA (VERDES) CODIFICAN DOMINIOS DE UNIN PARA
PROTENAS ESPECFICAS EN LA SUPERFICIE DE LOS FIBROBLASTOS. EL
mRNA DE LA FIBRONECTINA PRODUCIDO EN LOS FIBROBLASTOS
INCLUYE EIIIA Y EIIIB, MIENTRAS QUE ESTOS EXONES SON
ELIMINADOS DEL mRNA DE LA FIBRONECTINA DE LOS HEPATOCITOS. EN
ESTE DIAGRAMA LOS INTRONES (LNEAS NEGRAS) NO ESTN
DIBUJADOS A ESCALA; LA MAYORA DE ELLOS SON MUCHO MS LARGOS
QUE CUALQUIERA DE LOS EXONES.

EN LOS GENOMAS EUCARIONTES SE


ENCUENTRAN UNIDADES DE
TRANSCRIPCIN SIMPLES Y COMPLEJAS
A) UNIDAD DE TRANSCRIPCIN SIMPLE: Unidad
de transcripcin que incluye una regin que codifica
una protena, que se extiende desde el sitio de
casquete 5 hasta el sitio poli(A) 3, y las regiones
de control asociadas.
- Los intrones son eliminados durante el proceso de
transcripcin primaria, por lo tanto no aparecen en
el mRNA monocistrnico funcional
- Las mutaciones en las regiones de control de la
trascripcin (a,b) pueden reducir o evitar la
trascripcin, disminuyendo o impidiendo la sntesis
de la protena codificada.
- Una mutacin dentro de un exn (c) puede
producir una protena anormal con actividad
disminuida o nula.
- Una mutacin dentro de un intrn (d) que
introduce un nuevo sitio de corte y empalme
produce un mRNA con proceso de corte y empalme
anormal, que codifica una protena funcional

EN LOS GENOMAS EUCARIONTES SE


ENCUENTRAN UNIDADES DE
TRANSCRIPCIN SIMPLES Y COMPLEJAS
B) UNIDAD DE TRANSCRIPCIN COMPLEJAS:
Las unidades de transcripcin complejas producen
transcriptos primarios que pueden procesarse de
manera alternativa (arriba).
- Arriba: Si un transcripto primario tiene sitios de
corte y empalmes alternativos, puede ser procesado
en mRNA mensajero con los mismos exones 5 y 3,
pero con distintos exones internos
- Medio: Si un transcripto primario tiene dos sitios
poli(A) puede ser procesado en mRNA con exones
alternativos
- Abajo: Si los promotores alternativos (f o g)
estn activos en diferentes tipos de clulas, el
mRNA1, producido en un tipo de clulas en la cual f
esta activado, tiene un exn diferente (1A) del que
tiene el mRNA2, el cual es producido en un tipo de
clula en el cual g esta activado y donde se usa el
exn 1B.

EN LOS GENOMAS EUCARIONTES SE


ENCUENTRAN UNIDADES DE
TRANSCRIPCIN SIMPLES Y COMPLEJAS
B) UNIDAD DE TRANSCRIPCIN COMPLEJAS:

- Las mutaciones en las regiones de control (a y b)


y en las designadas c dentro de los exones
compartidos por los mRNA alternativos afectan las
protenas codificadas por los mRNA procesados
alternativamente
- En cambio, las mutaciones (designadas d y e)
dentro de exones nicos de uno de los mRNA
alternativamente procesados solo afectan la
protena traducida a partir de ese mRNA
- Para genes que se transcriben a partir de
diferentes promotores en diferentes tipos de
clulas (abajo), las mutaciones en diferentes
regiones de control (f y g) afectan la expresin
solo en el tipo de clula en la cual la regin de
control se activa

EL INT AR INT BOL INT VER INT DE


Ex1 O1 Ex2 O2 Ex3 O3 Ex4 O4 Ex5
EL AR BOL VER DE
Ex1 Ex2 Ex3 Ex4 Ex5
EL AR VER DE
Ex1 Ex2 Ex4 Ex5
EL AR DE
Ex1 Ex2 Ex5
EL VER DE
Ex1 Ex4 Ex5

ORGANIZACIN
CROMOSMICA DE
LOS GENES Y DEL
ADN NO
CODIFICADOR

LOS GENOMAS DE NUMEROSOS ORGANISMOS


CONTIENEN MUCHO ADN NO FUNCIONAL

DENSIDAD COMPARADA DE GENES EN REGIONES DE 80 Kb DEL ADN GENMICO


HUMANO Y DE LA LEVADURA S. CEREVISIAE. a) En el diagrama del grupo de genes de
la -globina en el cromosoma 11 humano, los cuadros verdes representan los exones
relacionados con el gen. Los exones cortados y empalmados juntos para formar un mRNA
estn conectados por pas similares a signos de intercalacin. El grupo de genes de la globina humana contiene dos seudogenes (blanca); estas regiones estn relacionadas con
genes simil-globina funcionales, pero no se transcriben. Cada flecha roja indica la
ubicacin de una secuencia Alu, secuencia repetida abundante en el genoma humano.
b) En el diagrama del DNA del cromosoma III de la levadura, los cuadros verdes indican
marcos de lectura abiertos (ORF). La mayora de estas secuencias codificadores de
protenas probablemente sean genes funcionales sin intrones. Ntese la proporcin de
secuencias no codificadoras, mucho mayor en el DNA humano que en el DNA de la
levadura.

EL TAMAO DEL GENOMA PUEDE VARIAR


GRANDEMENTE DE UN ORGANISMO A OTRO

HIV type 1 Virus


9 750 bp
Bacteria (E. coli) 4,600,000 million bp (Mbp)
Yeast
12 Mbp
Arabidopsis
150 Mbp
Banana
550 Mbp
Human
3 000 Mbp
Barley
5 500 Mbp
Wheat
17 000 Mbp
Fritillaria lily
130 000 Mbp

SOLO ENTRE EL 1.5-2 % DEL GENOMA


HUMANO CORRESPONDE A SECUENCIAS
CODIFICADORAS DE PROTENAS (EXONES)

EL TAMAO DEL GENOMA DE UN ORGANISMO NO


EST DIRECTAMENTE RELACIONADO CON SU
COMPLEJIDAD BIOLGICA

LOS GENES CODIFICADORES DE PROTENAS


PUEDEN SER SOLITARIOS O PERTENECER A
UNA FAMILIA DE GENES
GENES SOLITARIOS: AQUELLOS GENES QUE ESTAN
REPRESENTADOS UNA SOLA VEZ EN EL GENOMA. ESTOS
CONTITUYEN ENTRE EL 25-50 % DE LOS GENES QUE
CODIFICAN PROTENAS EN ORGANISMOS MULTICELULARES
GENES DUPLICADOS: SON REGIONES CON SECUENCIAS
CERCANAS, PERO NO IDENTICAS, QUE SUELEN
LOCALIZARSE DE 5-50 BASES UNA DE OTRA. EN LOS
GENOMAS DE LOS VERTEBRADOS LOS GENES DUPLICADOS
CONSTITUYEN LA MIDAD DE LAS SECUENCIAS DE ADN QUE
CODIFICA PROTENAS.
UN CONJUNTO DE GENES DUPLICADOS QUE CODIFICAN
PROTENAS CON SECUENCIAS DE AMINOCIDOS
SIMILARES, PERO NO IDNTICAS, SE LE DENOMINA
FAMILIA DE GENES. AS, LAS PROTENAS HOMLOGAS
CODIFICADAS, ESTRECHAMENTE RELACIONADA
CONSTITUYE UNA FAMILIA DE PROTENAS

DUPLICACIN DE GENES PRODUCIDA POR ENTRECRUZAMIENTOS


DESIGUALES. Cada cromosoma parental (arriba) contiene un gen ancestral de
-globina que contiene tres exones y dos intrones. Diversas secuencias
repetidas L1 homlogas no codificadoras se sitan en los extremos 5 y 3 del
gen de la -globina. Los cromosomas parentales se encuentran desplazados
entre s, de manera que las secuencias L1 estn alineadas. La recombinacin
homologa entre las secuencias L1 genera un cromosoma recombinante con dos
copias del gen de -globina y un cromosoma con una delecin del gen.
Mutaciones independientes posteriores en los genes duplicados pueden conducir a
cambios leves en la secuencia que pueden dar como resultado propiedades
funcionales levemente diferentes de las protenas codificadas. El
entrecruzamiento desigual tambin puede producir combinaciones raras entre
secuencias no relacionadas.

ALGUNOS EJEMPLOS DE GENES SOLITARIOS Y


FAMILIA DE GENES
GENES SOLITARIOS: LISOZIMA DE POLLO
FAMILIA DE GENES CON MS DE 100 COPIAS:
PROTENCINASAS, FACTORES DE
TRANSCRIPCIN INMUNOGLOBULINAS

FAMILIA DE GENES DE HASTA ALREDEDOR DE


30 COPIAS: PROTEINAS DEL CITOESQUELETO,
PROTENAS DEL SHOCK TRMICO DE 70 kDa,
CADENA PESADA DE LA MIOSINA, OLBUMINA
DE POLLO, y -GLOBINAS DE LOS
VERTEBRADOS

LOS GENES REPETIDOS EN TANDEM


CODIFICAN rRNA o RNA RIBOSOMAL

LOS GENES QUE CODIFICAN LOS rRNA APARECEN COMO REPETICIONES


EN TANDEM. ESTAS SE DISTINGUEN DE LOS GENES DUPLICADOS DE LAS
FAMILIAS DE GENES EN QUE LOS MLTIPLES GENES REPETIDOS EN
TANDEM CODIFICAN PROTENAS IDNTICAS O CASI IDNTICAS O RNA
FUNCIONALES. LAS COPIAS APARECEN UNAS DESPUS DE OTRA, A LO
LARGO DE UNA EXTENSIN DE ADN; Y ESTAS SON EXACTAMENTE
SIMILAR A LAS OTRAS (ALTAMENTE CONSERVADAS).
TODOS LOS EUCARIOTES CONTIENEN 100 O MS COPIA DE GENES QUE
CODIFICAN rRNA. TAMBIN APARECEN MLTIPLES COPIA DE tRNA Y DE
GENES DE HISTONAS, PERO GENERALMENTE NO ORDENADOS EN
TANDEM.

LOS GENES REPETIDOS EN TANDEM


CODIFICAN rRNA o RNA RIBOSOMAL
1) LOS GENES rRNA ESTAN SEPARADOS POR
REGIONES ESPECIADORA NO TRANSCRIPTA.
2) LAS REGIONES GENMICAS
CORRESPONDIENTES A LOS TRES rRNA
MADUROS ESTN SIEMPRE DISPUESTAS EN EL
MISMO ORDEN 5 3: 18S, 5,8S, 28S.
3) LOS rRNA 28S Y 5,8 S ASOCIADOS CON LA
SUBUNIDAD RIBOSMICA (60S), EL rRNA 18S
ASOCIADO CON LA SUBUNIDAD RIBOSMICA
MENOR (40S) Y LOS rRNA MS PEQUEOS
FUNCIONALMENTE EQUIVALENTE DE LOS
EUCARIONTES SUPERIORES; ESTN
CODIFICADOS POR UN NICO TIPO DE
UNIDAD DE TRANSCRIPCIN DE LOS PRErRNA.
4) EN TODAS LAS CLULAS EL GEN DEL PRErRNA CODIFICA Y EL TRANSCRIPTO PRIMARIO
CORRESPONDIENTE CONTIENE, REGIONES
QUE SE ELIMINAN DURANTE EL
PROCESAMIENTO Y SE DEGRADAN
RPIDAMENTE
5) TANTO LA SNTESIS COMO EL
PROCESAMIENTO DEL PRE-rRNA SE PRODUCEN
EN EL NUCLEOLO. ESTA ESTRUCTURA ES
RESULTADO DE PROCESAMIENTO DEL PRErRNA Y EL ENSAMBLAJE DE LAS
SUBUNIDADES RIBOSMICAS.

AUNQUE LAS PORCIONES TRANSCRIPTAS DE GENES


rRNA SON LAS MISMAS EN UN INDIVIDUO DADO, LAS
REGIONES ESPACIADORAS NO TRANSCRIPTAS, ENTRE
LAS REGIONES TRANSCRIPTAS, PUEDE VARIAR.

Anlisis comparativo de secuencias


de genes RNA ribosomal

1984

Primer trabajo de anlisis comparativo


de secuencia en molculas 5S rRNA
(Stahl et al. Science 224:409-411).

1986

Se propone el anlisis comparativo de


secuencias en molculas 16S y 23S
rRNA (Olsen et al. Annu. Rev.
Microbiol. 40:337-365).

1990

Se incorpora la tcnica de PCR para la


amplificacin de la molcula 16S rRNA
(Giovannoni et al. Nature 345:60-63).

1991

Primer trabajo aplicado a ambiente


marino usando el anlisis de secuencia
en la molcula 16S rRNA (Schmidt et
al. J. Bacteriol. 173:4371-4378).

Dominio
Reinos
Filo
o
Divisiones
Clases
Ordenes
Familias
Gneros
Especies

rbol filogentico construido a partir de 1800 secuencias 16S


rRNA de bacterias y algas disponibles en bases de datos,
usando oligonucletidos correspondiente a grupos superiores
(Dominio, Reinos, Filun, Divisiones, Clases y ordenes)
Una nueva especie se define para un valor de similitud < 95 %

rbol de la Vida

LOS ADN SATLITES SON SECUENCIAS


SIMPLES REPETIDAS EN EL GENOMA
APARTE DE LOS GENES DUPLICADOS CODIFICADORES DE
PROTENAS Y DE LOS GENES REPETIDOS EN TANDEM, LAS
CLULAS CONTIENEN MLTIPLES COPIAS DE OTRAS
SECUENCIAS DE ADN EN EL GENOMA DENOMINADO ADN
REPETITIVO.
ENTRE LOS TIPOS DE ADN REPETITIVO, EL ADN DE
SECUENCIA SIMPLE CONSISTE DE REPETICIONES PERFECTAS O
CASI PERFECTAS DE SECUENCIAS RELATIVAMENTE CORTAS
QUE REPRESENTAN ALREDEDOR DEL 3 % DEL GENOMA EN
HUMANOS.
EL ADN DE SECUENCIA SIMPLE SUELE TAMBIN DENOMINARSE
ADN SATELITE, NOMBRE DERIVADO DE LOS ESTUDIOS
INICIALES CON GRADIENTES DE ULTRACENTRIFUGACIN.
EXISTEN DOS TIPOS: LOS MINISATLITES (BLOQUES
REPETIDOS DE 15 A 100 pb) Y LOS MICROSATLITES (BLOQUES
REPETIDOS DE 1 Y 13 pb).

LA MAYORA DE LOS ADN DE SECUENCIAS


SIMPLES SE CONCENTRAN EN LOS CENTRMEROS
Y TELMEROS DE LOS CROMOSOMAS
LOS DNA DE SECUENCIA SIMPLE
SON MARCADORES
CROMOSMICOS TILES. Los
cromosomas metafsicos humanos,
teidos con un colorante
fluorescente se hibridaron in situ
con DNA de secuencia simple
particular marcado con un derivado
fluorescente de la biotina. Cuando
se visualizan bajo la luz de longitud
de onda apropiada, el DNA
aparece rojo y el DNA de
secuencia simple hibridado aparece
como una banda amarilla sobre el
cromosoma 16, localizando por
tanto esta particular secuencia
simple en un sitio del genoma.

EL FINGERPRINTING DEL ADN DEPENDE DE LAS


DIFERENCIAS EN LA LONGITUD DE LOS ADN
DE SECUENCIA SIMPLE
1) DENTRO DE UNA ESPECIE, LAS
SECUENCIAS DE NUCLETIDOS DE
UNIDADES REPETIDAS QUE COMPONEN
LAS DISPOSICIONES EN TANDEM DE
LOS DNA SATLITES ESTN
ALTAMENTE CONSERVADAS ENTRE
INDIVIDUOS. EN CAMBIO SON
BASTANTE COMUNES LAS
DIFERENCIAS EN EL NMERO DE
REPETICIONES Y POR ENDE, EN LA
LONGITUD DEL DNA SATLITE
2) SE PIENSA QUE ESTAS
DIFERENCIAS EN LONGITUD RESULTAN
DEL ENTRECRUZAMIENTO DESIGUAL
ENTRE REGIONES DENTRO DEL ADN
SATELITE DURANTE LA MEIOSIS.
COMO CONSECUENCIA DE ESTE
ENTRECRUZAMIENTO DESIGUAL, LAS
LONGITUDES DE ALGUNAS
DISPOSICIONES EN TANDEM SON
NICAS PARA CADA INDIVIDUO

EL FINGERPRINTING DEL ADN DEPENDE DE LAS


DIFERENCIAS EN LA LONGITUD DE LOS ADN
DE SECUENCIA SIMPLE
SONDAS PARA EL DNA MINISATLITE
PUEDEN REVELAR FRAGMENTOS DE
RESTRICCIN NICOS (FINGERPRINTING O
HUELLAS DACTILOSCPCIAS DE ADN) QUE
PERMITEN DISTINGUIR INDIVIDUOS. Las
muestras de DNA de tres individuos (1,2 y 3)
se sometieron a anlisis de Southern Blot
utilizando la enzima de restriccin HinF1 y
tres diferentes minisatlites marcados como
sondas (lneas a,b y c). El ADN de cada
individuo produjo un patrn de bandas nicos
con cada sonda. Las condiciones de
electroforesis pueden ajustarse para poder
resolver para cada persona al menos 50 bandas
con esta enzima de restriccin. Se distingue
con facilidad que las tres muestras no son
idnticas.

LOS ADN DE SECUENCIA SIMPLE SON TILES


PARA ESTIMAR LA DIVERSIDAD GENTICA
Dendrograma de variedades de aguacate
construidos sobre la base de descriptores
microsatlites

EL ALTO NIVEL DE
POLIMORFISMO
EXISTENTE EN LAS
SECUENCIAS
MICROSATLITES
PERMITE HACER ANLISIS
DE DIVERSIDAD GENTICA
DE UTILIDAD EN EL
MEJORAMIENTO
GENTICO DE PLANTAS
Patrones microsatlites obtenidos para variedades
cubanas de aguacatero usando combinacin AM8.

EL ADN
MOVIL

ADEMS DE LOS ADN SATLITES,


EXISTE UN SEGUNDO TIPO DE ADN
REPETITIVO QUE TIENEN LA
CAPACIDAD POCO COMN DE
MOVERSE EN EL GENOMA, MOTIVO
POR EL CUAL RECIBEN EL NOMBRE DE
ELEMENTOS MVILES DE ADN O
ELEMENTOS TRANSPONIBLES.
A DIFERENCIA DE LOS ADN
SATLITES, LOS ELEMENTOS
TRANSPONIBLES SON REPETICIONES
DISPERSAS EN EL GENOMA

EL MOVIMIENTO DE ELEMENTOS MVILES INVOLUCRA AL ADN O


A UN INTERMEDIARIO DE ARN
CLASIFICACIN DE
ELEMENTOS MVILES EN
DOS CLASES PRINCIPALES.

a) los transposones de ADN


eucariontes (naranja) se mueve a
travs de un intermediario de
ADN, el cual es escindido del sitio
donante.
b) Los retrotransposones (verde)
se transcriben primero a una
molcula de ARN que luego es
trascripta de manera inversa a
DNA de hebra doble.
En ambos casos, el intermediario
del ADN bicatenario es integrado
al ADN de sitio diana para
completar el desplazamiento.
Por lo tanto, los transposones de
ADN se desplazan mediante un
mecanismo de corte y pegado,
mientras que los
retrotransposones se mueven
mediante un mecanismo de copia y
pegado.

LOS ELEMENTOS MVILES QUE SE MUEVEN COMO ADN ESTN


PRESENTES TANTO EN PROCARIONTES COMO EN EUCARIONTES
SECUENCIAS DE INSERCIN
BACTERIANAS

ESTRUCTURA GENERAL DE LOS


SECUENCIAS DE INSERCIN (IS) EN
BACTERIAS

La regin central, que codifica una o dos


enzimas (Transposasas) requeridas para la
transposicin al nuevo sitio.
Flanqueando a la regin central, existe una
repeticin invertida de alrededor de 50 pb en
cada extremo. Las secuencias de las
repeticiones invertidas son casi idnticas, pero
estn orientadas en direcciones opuestas.
5-GAGC-------GCTC-3
3-CTCG-------CGAG-5
Adicionalmente, cuenta con una secuencia de
repeticin directa de entre 5 y 11 pb
dependiendo del elemento IS; y cuya secuencia
depende de su sitio diana

1) La transposicin de un
elemento IS es un evento raro
que solo tiene lugar en una de
105-107 clulas por generacin,
dependiendo del elemento IS
2) Se conocen alrededor de 20
elementos IS en bacterias
3) Los elementos IS se
trasponen ms o menos de
manera aleatoria, por lo que se
entiende que sus secuencias
dianas para la insercin pueden
encontrarse en diferentes
regiones del genoma

MODELO PARA LA TRANSPOSICIN DE SECUENCIAS DE


INSERCIN BACTERIANA
LA TRANSPOSICIN DE N
ELEMENTO IS ES SIMILAR AL
FUNCIONAMIENTO DE CORTAR Y
PEGAR EN UN PROGRAMA
PROCESADOR DE TEXTO. LA
TRANSPOSASA EJECUTA TRES
FUNCIONES EN ESTE PROCESO:
1) Extrae el elemento IS del ADN
donador
2) Realiza cortes escalonados en una
secuencia corta del ADN diana
3) Liga los terminales 3 del elemento
IS a los extremos 5 del ADN diana.

Por ltimo, una ADN Polimerasa de la


clula husped llena los espacios de
cada cadena y genera las repeticiones
directas cortas que flanquean a los
elementos IS y la Ligasa une los
extremos libres.

LOS ELEMENTOS MVILES QUE SE MUEVEN COMO ADN ESTN


PRESENTES TANTO EN PROCARIONTES COMO EN EUCARIONTES

EL ELEMENTO P DE
DROSOPHILA MELANOGASTER,
FUNCIONA COMO UN
TRANSPOSN DE ADN, Y SE
MUEVE MEDIANTE UN
MECANISMO DE CORTE Y
PEGADO SIMILAR AL
UTILIZADO POR LAS
SECUENCIAS DE INSERCIN
BACTERIANAS.

ALGUNOS RETROTRANSPOSONES
CONTIENEN LTR Y SE COMPORTAN
COMO RETROVIRUS
INTRACELULARES

ESTRUCTURA GENERAL DE LOS


RETROTRANSPOSONES CON LTR EN
CLULAS EUCARIOTAS

1) La regin central, que codifica todas la


protenas caractersticas de los retrovirus
(Transcriptasa inversa e Integrasa), excepto
las de la envoltura.
2) Flanqueando a la regin central, existe
regiones terminales largas (LTR) de entre 250
y 600 pb, que son repeticiones directas y
especficas del elemento.
3) Adicionalmente, cuenta con una secuencia de
repeticin directa de entre 5 y 10 pb
dependiendo del elemento; y cuya secuencia
depende de su sitio diana

GENERACIN DEL ARN GENMICO RETROVIRAL A


PARTIR DE ADN RETROVIRAL INTEGRADO

SE PIENSA QUE UN
MECANISMO SIMILAR
GENERA EL
INTERMEDIARIO DE ARN
DURANTE LA
TRANSPOSICIN DE LOS
RETROTRANSPOSONES

1) la LTR de la izquierda funciona como un promotor que dirige a la


ARN Polimerasa II de la clula husped para iniciar la transcripcin en
el nucletido 5 de la secuencia R.
2) Luego de transcripto el ADN Retroviral, la secuencia de ARN
correspondiente al LTR de la derecha, dirige las enzimas para el
procesamiento del ARN primario y para aadir una cola de poli(A) al
extremo 3 de la secuencia R.

MODELO DE LA TRANSCRIPCIN
INVERSA DEL ARN GENMICO
RETROVIRAL A ADN.
En este modelo se genera una
copia de ADN bicatenario a partir
del genoma de ARN monocatenario
de un retrovirus.
1) El ARN genmico se empaqueta
en el virin con tRNA celular
especfico del retrovirus hibridado
con una secuencia complementaria
denominada sitio de unin del
cebador (PBS).
2) El ARN retroviral tiene una
secuencia terminal corta R de
repeticin directa en cada extremo
3) La reaccin global la lleva a
cabo la Transcriptasa reversa, la
cual cataliza la polimerizacin. La
RNasaH digiere la hebra de ARN
del hbrido ADN-ARN.
4) El proceso completo produce una
molcula de ADN de doble hebra
que es ms larga que el ARN molde
y tiene una repeticin terminal
larga (LTR) en cada extremo.
Las diferentes regiones no se
muestran a escala.

LOS RETROTRANSPOSONES NO VIRALES CARECEN DE


LTR Y SE MUEVEN POR UN MECANISMO DISTINTO
EXISTEN DOS CLASES DE
RETROTRANSPOSONES NO
VIRALES:

1) Elementos Dispersos Largos


(LINE): Existen 3 familias principales
en humanos (L1, L2 y L3) con
mecanismos de transposicin
similares, pero que difieren en sus
secuencias. Solo la familia L1 se
transpone en el genoma humano
contemporneo. Estos elementos
constituyen el 21 % del total del
genoma humano.
2) Elementos dispersos cortos
(SINE): Con una longitud de 100 a
400 pb, estos retrotransposones no
codifican protenas, pero si la
secuencia 3 rica en A/T de los
LINE. Los SINE son transcripto por
la ARN Polimerasa III y se cree que
las protenas del ORF1 y ORF2 de
los LINE median la transposicin de
los SINE

ESTRUCTURA GENERAL DE UN LINE,


UNA DE LAS DOS CLASES DE
TRANSPOSONES SIN LTR EN EL ADN
DE MAMFEROS
1) La regin central, presenta dos ORF. El ms corto
(ORF1), de 1 Kb, codifica una protena de unin al
ARN. El ORF2, de 4 Kb, codifica una protena
bifuncional con actividad transcriptasa y endonucleasa
de ADN
2) Flanqueando a la regin central, existe regiones
ricas en A/T de tamao variable. Adicionalmente en
los extremos se encuentran las repeticiones directas
del sitio diana que varia para diferentes sitios de
insercin en el genoma. Aunque la secuencia L1
completa es de 6 Kb de largo, en ms del 90 % de
los sitios donde se halla este elemento movil estn
ausentes cantidades variables del extremo izquierdo.

MECANISMO PROPUESTO DE LA
TRANSCRIPCIN INVERSA E
INTEGRACIN DE LOS LINE
1) Luego que ocurre la trascripcin y
modificacin (poli(A)) del ARN LINE,
los productos ORF1 y ORF2 se unen a
este ARN formando un complejo que
transporta el ARN al ncleo. ORF2
realiza cortes escalonados en el ADN
cromosmico a cada extremo una
secuencia rica en A/T.
2) La trascripcin inversa del ARN
LINE por medio de ORF2 se ceba
mediante la secuencia rica en T, la
cual se hibrida con la cola de poli(A)
del RNA LINE
3) ORF2 transcribe de manera inversa
el ARN LINE

MECANISMO PROPUESTO DE LA
TRANSCRIPCIN INVERSA E
INTEGRACIN DE LOS LINE
4 y 5) La trascripcin de la hebra de ADN
por la protena ORF2 contina, cambiando
a la hebra de simple cadena cromosmica
6) Luego las enzimas celulares hidrolizan el
ARN y extienden el extremo 3 de la hebra
superior de DNA cromosmico,
remplazando la hebra de ARN LINE con
ADN.
7) Por ltimo, los extremos 3 y 5 de la
hebra de ADN se ligan y se completa la
insercin.
El proceso genera una repeticin directa
corta en el sitio de insercin debido a la
escisin escalonada inicial de las dos
hebras de ADN cromosmico.

ES PROBABLE QUE LOS ELEMENTOS DE ADN MVILES


HAYAN TENIDO UNA INFLUENCIA SIGNIFICATIVA
SOBRE LA EVOLUCIN
1) Existen claras evidencias que indican, que en algunos organismos, los
elementos mviles de ADN son responsables de un nivel importante de
mutaciones espontneas; como resultado de su insercin en un gen
funcional. Por ejemplo: Drosophila (50 %), Ratn (10 %), Hombre
(0.1-0.2 %)
2) Las recombinaciones homlogas entre elementos de ADN mviles
dispersos en todos los genomas ancestrales pueden haber generado
duplicaciones de genes y otras reestructuraciones durante la evolucin.
Por ejemplo el gen de la -globina

ES PROBABLE QUE LOS ELEMENTOS DE ADN MVILES


HAYAN TENIDO UNA INFLUENCIA SIGNIFICATIVA SOBRE
LA EVOLUCIN
3) El entrecruzamiento desigual entre elementos mviles localizados
dentro de los intrones de un gen pudo conducir a la duplicacin de
exones dentro de ese gen, proceso denominado combinacin de exones.
Dicho proceso pudo haber ocurrido durante la evolucin de los genes que
codifican el activador tisular del plasmgeno, el receptor Neu y el
Factor de crecimiento epidrmico, que contiene un dominio EGF.

PROCESO DE MEZCLA DE EXONES (EXON


SHUFFLING) A TRAVS DE RECOMBINACIN
ENTRE REPETICIONES DISPERSAS HOMLOGAS.
La recombinacin entre repeticiones dispersas de ADN
en los intrones de genes separados produce unidades
de transcripcin con una nueva combinacin de exones.

ES PROBABLE QUE LOS ELEMENTOS DE ADN MVILES


HAYAN TENIDO UNA INFLUENCIA SIGNIFICATIVA SOBRE
LA EVOLUCIN
4) Tanto los transposones de ADN como los retrotransposones LINE
pueden ocasionalmente llevarse secuencias flanqueantes no
relacionadas durante el proceso de transposicin.

PROCESO DE MEZCLA DE EXONES (EXON SHUFFLING) MEDIANTE


TRANSPOSICIN.
a) Transposicin de un exn flanqueado por transposones de DNA homlogo a un
intrn de un segundo gen.
b) b) Integracin de un exn con otro gen a travs de la transposicin LINE.
Algunos LINE tienen seales poli(A) dbiles. Si en tales casos, el LINE se
encuentra en el intrn prximo a un gen, la transposicin puede ocurrir a partir
de la cola de poli(A) del gen.

ES PROBABLE QUE LOS ELEMENTOS DE ADN MVILES


HAYAN TENIDO UNA INFLUENCIA SIGNIFICATIVA
SOBRE LA EVOLUCIN
5) Adems de causar cambios en las secuencias codificadoras de
genoma, la recombinacin entre elementos mviles y la transposicin
probablemente desempearon un papel significativo en la evolucin de
secuencias reguladoras que controlan la expresin gnica. Se sabe que
las regiones amplificadoras pueden funcionar a largas distancias de
decenas de cientos de bases. La transcripcin de muchos genes se
controla a travs de los efectos combinados de varios elementos
amplificadores

ES PROBABLE QUE LOS ELEMENTOS DE ADN MVILES


HAYAN TENIDO UNA INFLUENCIA SIGNIFICATIVA
SOBRE LA EVOLUCIN
RESUMIENDO, LOS ELEMENTOS MVILES DEBEN
HABER CONTRIBUIDO A LA EVOLUCIN DE
ORGANISMOS SUPERIORES AL PROMOVER:
1) LA GENERACIN DE FAMILIAS DE GENES POR
MEDIO DE LA DUPLICACIN DE GENES
2) LA CREACIN DE NUEVOS GENES POR MEDIO DEL
PROCESO DE COMBINACIN DE EXONES
3) LA FORMACIN DE REGIONES REGULADORAS MAS
COMPLEJAS QUE PROVEEN CONTROL
MULTIFACTICO DE LA EXPRESIN GENTICA

ORGANIZACIN
ESTRUCTURAL DE
LOS CROMOSOMAS
EUCARIOTES

COMO SE ORGANIZAN LAS


MOLCULAS DE ADN DENTRO DE
LAS CLULAS EUCARIONTES?
1) Durante la interfase, cuando las clulas
no se estn dividiendo, el material
gentico existe en forma de un complejo
de nucleoprotenas llamado CROMATINA,
el cual esta disperso en la mayor parte
del ncleo
2) El posterior plegamiento y compactacin
de la cromatina durante la mitosis produce
los CROMOSOMAS METAFSICOS.

EL ADN NUCLEAR DE LOS EUCARIONTES SE


ASOCIA CON PROTENAS PARA FORMAR
CROMATINA
LAS PROTENAS MS ABUNDANTES ASOCIADAS
A LA CROMATINA SON LAS HISTONAS, UNA
FAMILIA DE PROTENAS BSICAS (RICAS EN
AMINOCIDOS BSICOS CARGADOS
POSITIVAMENTE), QUE INTERACTUAN CON LOS
GRUPOS FOSFATOS DEL ADN CARGADOS
NEGATIVAMENTE. LOS 5 TIPOS PRINCIPALES SON:
H1: La secuencia de aminocidos vara de un organismo a
otro. En algunos tipos de clulas (eritrocitos nucleados
de las aves) es reemplazada por un tipo especial de
histona, la H5.
H2A,H2B, H3 y H4: Sus secuencias de aminocidos
presentan notable similitud an entre especies
remotamente relacionadas.

LA CROMATINA EXISTE EN LAS FORMAS


EXTENDIDA Y CONDENSADA

LA CROMATINA EXTRAIDA EN LAS FORMAS EXTENDIDAS Y


CONDENSADAS TIENE ASPECTOS MUY DIFERENTES EN LAS
MICROFOTOGRAFAS ELECTRNICAS. a) la cromatina aislada en un
buffer de baja fuerza inica tiene una apariencia de perlas de collar.
Las perlas de collar son nucleosomas (10 nm de dimetro) y el collar
es el ADN que conecta (conector). b) La cromatina aislada en un buffer
con una fuerza inica fisiolgica (0.15 M KCl, 0.004 M de Mg2+)
aparece como una fibra condensada de 30 nm de dimetro.

ESTRUCTURA DE LOS NUCLEOSOMAS


1) Un nucleosoma esta
formado por un ncleo de
protenas con ADN
enrollado alrededor de su
superficie (147 pares de
bases) que es
asegurado por otra
protena (histona H1)
2) El ncleo es un
hoctmero que contiene
dos copias de cada una
de las histonas: H2A,
H2B, H3 y H4
3) El ADN conector puede
alcanzar entre 15 y 55
pares de bases
dependiendo de la
especie.

ESTRUCTURA DEL NUCLEOSOMA SOBRE LA


BASE DE CRISTALOGRAFA DE RAYOS X

MODELO ESPACIAL DE UN NUCLEOSOMA MOSTRADO DE FRENTE (IZQUIERDA)


Y DE COSTADO (DERECHA). LA H2A ES AMARILLA, LA H2B ES ROJA, LA H3 ES
AZUL Y LA H4 ES VERDE. LA COLUMNA VERTEBRAL DE AZCAR-FOSFATO DE
LAS HEBRAS DE ADN SE MUESTRA COMO TUBOS BLANCOS.

ESTRUCTURA DE LA CROMATINA CONDENZADA

1) CUANDO SE EXTRAE
LA CROMATINA DE LAS
CLULAS EN UN
BUFFER ISOTNICO,
LA MAYORA APARECE
COMO FIBRAS DE 30
NM DE DIMETRO
CONOCIDO COMO
SOLENOIDE.

2) LA FIBRA DE 30 NM NO ES UN SOLENOIDE PERFECTO, SINO QUE


PUEDEN EXISTIR REGIONES QUE SE DESPLIEGAN Y PLIEGAN
3) LA CROMATINA EN REGIONES QUE NO ESTA SIENDO TRANSCRIPTA,
EXISTE PREDOMINANTEMENTE EN LA FORMA CONDENSADA DE
SOLENOIDE Y EN ESTRUCTURAS PLEGADAS DE ORDEN SUPERIOR CUYA
CONFORMACIN DETALLADA AN SE DESCONOCEN.

LA MODIFICACIN DE LAS COLAS DE LAS


HISTONAS CONTROLA LA CONDENZACIN
DE LA CROMATINA
DIAGRAMA DE CINTAS DE LAS
HISTONAS QUE MUESTRA LAS COLAS
DE HISTONAS (ENTRE 11 Y 37
RESIDUOS AMINOACDICOS)
NO VISIBLES EN LA ESTRUCTURA
DE CRISTAL. COLAS N-TERMINALES
DE H2A EN LA PARTE INFERIOR,
COLAS C-TERMINALES EN LA PARTE
SUPERIOR.
1) Las lisinas de las colas N-terminal de
las histonas son susceptible de
acetilizaciones y desacetilaciones. En las
formas acetiladas, la carga positiva del
grupo amino se neutralizan, eliminando la
interaccin con grupos fosfatos del ADN.
Por ende, mientras ms acetiladas estn
las histonas, menor ser la probabilidad
de que la cromatina forme fibras
condesadas de 30 nm y posiblemente
estructuras plegadas de orden superior

LA MODIFICACIN DE LAS COLAS DE LAS


HISTONAS CONTROLA LA CONDENZACIN
DE LA CROMATINA
2) La magnitud de las acetilizaciones en
las colas de las histonas adems
determina la resistencia relativa del
ADN de la cromatina a la digestin
mediante nucleasas. La cromatina
condensada (solenoide) es mas resistente
a la digestin por Dnasa I, que la
cromatina extendida o en forma de
perlas de collar.
3) En levaduras se ha demostrado que la
activacin de la transcripcin requiere de
la acetilacin de las histonas de la
cromatina. Se piensa que el control por
acetilacin de las histonas en regiones
cromosmicas especficas, contribuye al
control gentico mediante la regulacin
de la interaccin de las histonas con el
ADN y del plegamiento de la cromatina
en estructuras condensadas.

LAS PROTENAS NO HISTONAS


PROPORCIONAN UN ARMAZN ESTRUCTURAL
PARA LOS BUCLES LARGOS DE CROMATINA
CUANDO SE TRATAN LAS
CLULAS CON UN
DETERGENTE SUAVE,
PARA DISOCIAR LAS
HISTONAS DEL ADN, LOS
CROMOSOMAS SIN
HISTONAS EN METAFASE
REVELAN LARGOS BUCLES O
ASAS DE ADN ANCLADOS A
UN ARMAZN
CROMOSMICO (ZONA
OSCURA) COMPUESTO
DE PROTENAS NO
HISTONAS, CON LA MISMA
FORMA DEL CROMOSOMA
METAFSICO

MODELO DE EMPAQUETAMIENTO DE LA
CROMATINA Y DEL ARMAZN CROMOSMICO
EN LOS CROMOSOMAS EN METAFASE
1) En los cromosomas en interfase, largas
extensiones de cromatina de 30 nm forman
bucles hacia afuera de los armazones. En los
cromosomas metafsicos, el armazn se pliega
adicionalmente para formar una estructura muy
compacta cuya geometra precisa an no se ha
determinado.
2) En experimentos se demostr que sondas
marcadas, cuyas secuencias estn separadas por
millones de pares de bases en el ADN lineal,
aparecen muy prximas entre s en el ncleo
(Regiones Asociadas con el Armazn o SAR)

LA CROMATINA CONTIENE PEQUEAS


CANTIDADES DE OTRAS PROTENAS
ADEMS DE LAS HISTONAS Y DE LAS
PROTENAS DEL ARMAZN
FACTORES DE TRANSCRIPCIN
PROTENAS QUE REGULAN LA REPLICACIN DEL
ADN DURANTE EL CICLO CELULAR EUCARIONTE
PROTENAS NO HISTONAS DE UNIN AL ADN
CONOCIDAS COMO LAS HMG (high mobility group),
LAS CUALES MUESTRAN ALTA MOVILIDAD
ELECTROFORTICA. CUANDO SE ELIMINAN LOS
GENES QUE CODIFICAN PARA LAS HMG EN LAS
CLULAS DE LEVADURAS, SE ALTERA LA
TRANSCRIPCIN NORMAL EN LA MAYORA DE LOS
OTROS GENES ANALIZADOS.

LOS CROMOSOMAS EUCARIONTES CONTIENEN


UNA MOLCULA LINEAL DE ADN

MORFOLOGA Y
ELEMENTOS
FUNCIONALES DE
LOS CROMOSOMAS
EUCARIOTES

EL NMERO, EL TAMAO Y LA FORMA DE LOS


CROMOSOMAS EN METAFASE, CONSTITUYEN EL
CARIOTIPO, QUE ES DISTINTIVO DE CADA ESPECIE

FORMA DEL CROMOSOMA METAFSICO


EN METAFASE CADA CROMOSOMA
SE HA REPLICADO Y COMPRENDE
DOS CROMTIDAS HERMANAS
CADA UNA DE LAS CUALES
CONTIENE UNA DE MOLCULAS
DE ADN IDNTICAS.
EL CENTRMERO DONDE LAS
CROMTIDAS ESTN ADHERIDAS
ES REQUERIDO PARA SU
SEPARACIN AL FINAL DE LA
MITOSIS. LAS SECUENCIAS
TELOMRICAS ESPECIALES DE
LOS EXTREMOS TIENEN LA
FUNCIN DE EVITAR EL
ACORTAMIENTO DE LOS
CROMOSOMAS.

DURANTE LA METAFASE LOS CROMOSOMAS PUEDEN DISTINGIRSE


POR LOS PATRONES DE BANDAS Y LA COLORACIN
Ciertos colorantes (Giemsa)
tien selectivamente
algunas regiones de los
cromosomas y producen
patrones de bandas
especficos de cromosomas
individuales.
Las bandas G, se producen
cuando se someten los
cromosomas a calor suave o
proteolisis y luego se tien
con Giemsa. Estas bandas
corresponden a grandes
regiones del genoma
humano que tienen un
contenido muy bajo de G+C.

LA CUALIDAD DISTINTIVA DE ESTAS BANDAS PERMITEN IDENTIFICAR


PARTES ESPECFICA DE UN CROMOSOMA Y LOCALIZAR LOS SITIOS
DE ROTURAS Y TRANSLOCACIONES CROMOSMICAS

DURANTE LA METAFASE LOS CROMOSOMAS PUEDEN DISTINGIRSE


POR LOS PATRONES DE BANDAS Y LA COLORACIN

ALGUNAS TRANSLOCACIONES CROMOSMICAS ESTN ASOCIADAS CON


TRASTORNOS GENTICOS Y TIPOS ESPECFICOS DE CANCER. POR EJEMPLO,
EN CASI TODOS LOS PACIENTES CON LEUCEMIA MIELOIDE CRNICA, LAS
CLULAS LEUCMICAS CONTIENEN EL CROMOSOMA FILADELFIA, UN
CROMOSOMA 22 ACORTADO [der(22)] Y UN CROMOSOMA 9 ANORMALMENTE
LARGO [der(9)]. ESTO ES EL RESULTADO DE UNA TRANSLOCACIN ENTRE
LOS CROMOSOMAS NORMALES 9 Y 22. ESTA SE PUEDE DETECTAR MEDIANTE
ANLISIS DE BANDAS (a) Y POR FISH MULTICOLOR (b).

LOS CROMOSOMAS POLITNICOS EN INTERFASE


SURGEN POR AMPLICACIN DEL ADN

LAS GLNDULAS SALIVALES DE ALGUNAS ESPECIES DE INSECTOS CONTIENEN


CROMOSOMAS EN INTERFASE AGRANDADOS QUE SON VISIBLES CON EL
MICROSCOPIO PTICO; Y QUE SE CARACTERIZAN POR UN GRAN NMERO DE
BANDAS REPRODUCIBLES BIEN DEMARCADAS. ESTE PROCESO DENOMINADO
POLITENIZACIN, TIENE LUGAR CUANDO EL ADN SE REPLICA REPETIDAMENTE,
PERO LOS CROMOSOMAS HIJOS NO SE SEPARAN. EL RESULTADO, ES UN
CROMOSOMA COMPUESTO DE MUCHAS COPIAS PARALELAS DE SI MISMO.

LA HETEROCROMATINA CONSISTE EN REGIONES


CROMOSMICAS QUE NO SE DESENROLLAN

1) A medida que las clulas salen de la mitosis


y los cromosomas condensados se
desenrollan, ciertas secciones de los
cromosomas permanecen teidas de oscuro.
Dichas reas son conocidas como
Heterocromatina; mientras que las porciones
de cromatina con coloracin clara se llaman
Eucromatina.
2) La Heterocromatina aparece con mayor
frecuencia -pero no exclusivamente- en los
centrmeros y telmeros de los cromosomas
y la mayor parte es DNA de secuencia simple

LAS SECUENCIAS DE LOS CENTRMEROS VARIAN


ENORMEMENTE EN LONGITUD

COMPARACIN DE LA SECUENCIA CON DE LEVADURA Y


EL ADN DE SECUENCIA SIMPLE DE DROSIPHILA. a) la
secuencia consenso CEN de levadura, incluye tres regiones
conservadas. La regin II, aunque variable en secuencia, es
bastante constante en longitud y rica en residuos A y T. b)
Un DNA de secuencia simple Drosophila localizado cerca del
centrmero tiene una unidad de repeticin con cierta
homologa con la secuencia consenso CEN de levadura,
incluidas dos extensiones idnticas de 4 y 6 bp (rojo).

TELMEROS
LA FIGURA MUESTRA UN LAZO
EL CUAL ES FORMADO CUANDO
EL EXTREMO PROTUBERANTE
3OH DEL TELMERO (TTAGGG)n
DESPLAZA A UNA MISMA
SECUENCIA MAS ARRIBA EN EL
TELMERO.
HA ESTA REGIN SE UNEN
PROTENAS ESPECFICAS QUE
PROTEGEN LOS EXTREMOS DE
LOS CROMOSOMAS LINEALES
DEL ATAQUE DE EXONUCLEASAS
Y ASOCIAN LOS TELMEROS
EN DOMINIOS ESPECFICOS
DENTRO DEL NCLEO.

TELMEROS
1) A MEDIDA QUE LA
ORQUILLA DE REPLICACIN
SE ACERCA AL EXTREMO DE
UN CROMOSOMA LINEAL,
LA SINTESIS DE LA HEBRA
CONDUCTORA CONTINUA
HASTA EL FINAL DE LA
HEBRA MOLDE DE ADN,
COMPLETANDO UNA DOBLE
HLICE DE ADN HIJA
2) SIN EMBARGO, COMO EL MOLDE DE LA HEBRA SEGUIDORA SE COPIA
DE MODO DISCONTINUO, NO PUEDE REPLICARSE EN SU TOTALIDAD;
DADO QUE CUANDO SE ELIMINA EL LTIMO CEBADOR DE RNA, NO HAY
UNA HEBRA EN LA DIRECCIN 5`SOBRE LA CUAL LA ADN POLIMERASA
PUEDA POSISIONARSE PARA LLENAR LA HEBRA FALTANTE.
3) SIN LA EXISTENCIA DE ALGN MECANISMO ESPECIAL, LA HEBRA DE
ADN HIJA RESULTANTE DE LA SNTESIS DE LA HEBRA CONDUCTORA SE
ACORTARIA EN CADA DIVISIN CELULAR

TELOMERASAS
EL PROBLEMA DEL
ACORTAMIENTO DE TELMERO
SE SOLUCIONA MEDIANTE UNA
ENZIMA QUE AADE
SECUENCIAS TELOMRICAS EN
LOS EXTREMOS DE CADA
CROMOSOMA.
LAS TELOMERASAS CONTIENEN
UNA MOLECULA DE ARN QUE
SIRVE DE MOLDE PARA LA
ADICIN DE
DESOXIRRIBONUCLETIDOS A
LOS EXTREMOS DE LOS
TELMEROS.

MECANISMO DE ACCIN DE LA TELOMERASA

1) El extremo 3 de hebra simple del telmero


es extendido por la telomerasa por medio de
un mecanismo de transcripcin inversa
usando como molde la secuencia del ARN
contenido en el enzima
2) Las hebras del duplex de ADN-ARN
resultante se deslizan una respecto a la
otra, lo que conduce al desplazamiento de
una regin de la hebra de ADN telomrico y
a la puesta al descubierto de parte de la
secuencia del molde ARN
3 y 4) La secuencia telomrica de la hebra
rezagada vuelve a ser extendida hasta la
posicin 35 por la telomerasa, y el duplex
ADN-ARN sufre translocacin e hibridacin
como antes
5) Se repite el proceso. El resultado neto evita
el acortamiento de la hebra rezagada en
cada ciclo de replicacin de ADN