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Parasitologa al da
Print version ISSN 0716-0720
Parasitol. da vol.25 n.1-2 Santiago Jan. 2001

http://dx.doi.org/10.4067/S0716-07202001000100011

Validacin del examen en fresco, coloraciones de May

Grunwald-Giemsa y Gram y medios de cultivo para el
diagnostico de Trichomonas vaginalis
SIXTO RAUL COSTAMAGNA* y MARIA PRADO FIGUEROA*

VALIDATION TEST OF CONVENTIONAL WET MOUNT

EXAMINATION, MAY GRUNWALD-GIEMSA AND GRAM STAINING,
AND CULTURE MEDIUM TESTS FOR THE DIAGNOSIS OF
Trichomonas vaginalis
The goal of the present study was to determine the validity of the following five methods used for
the diagnosis of Trichomonas vaginalis in vaginal secretions at the clinical laboratory: Gram
staining; Conventional wet mount examination; May Grunwald-Giemsa staining; Culture in a
modified Diamond (Menarini) medium; Culture in an OXOID CM 161 medium. We used 89
vaginal-secretion samples extracted with sterile cotton swabs of female subjects between the
ages of 25 and 55 at the laboratory of the Hospital de Evacuacin 181 of the city of Baha
Blanca, Province of Buenos Aires, Argentina. The samples were stained with Gram and May
Grunwald-Giemsa; observed by conventional wet mount examination; and cultured in Diamond
(Menarini) and OXOID CM 161 media and incubated for 5 days at 37C in an anaerobic
condition. Results showed that, for a prevalence of disease (Trichomonosis) of 29.21%, the
Diamond (Menarini) culture medium and the immediate conventional wet mount examination
at our diagnostic lab have similar sensitivities, predictive negative values, and global values:
80.7%, 92.64%, and 94.38%, respectively. When the four tests were conducted in parallel, the
resulting sensitivity was 99.76% with a predictive negative value of 99.90%. As for the OXOID
CM 161 medium, even though the global value of the test was similar, its sensitivity was 76.92%,
slightly lower than the results from the conventional wet mount examination, but without a
significant statistical difference. The Gram staining showed a diagnostic sensitivity of 19.23%.
We conclude that the Diamond (Menarini) and the OXOID CM 161 culture media do not
improve the etiological diagnosis of Trichomonas as compared to the conventional wet mount
examination and May Grunwald-Giemsa staining tests. While we do not recommend using Gram
staining for the study of T. vaginalis, we consider that, if the flagellate were to be identified by
this method, its finding could be reported without further testing.
Key words: Trichomonas vaginalis; Trichomonosis; Culture of Trichomonas; Diagnostic.
* Ctedra de Parasitologa Clnica. Departamento de Biologa, Bioqumica y Farmacia. Universidad Nacional del
Sur. San Juan 670. 8000- Bahia Blanca. Argentina. E-mail: rcostama@criba.edu.ar

INTRODUCCION
La trichomonosis, parasitosis del tracto genitourinario producida por el protozoo Tricho-monas
vaginalis1 es una de las enfermedades de transmisin sexual (ETS) ms difundidas en todo el

mundo. No obstante an no existe un mtodo para el diagnstico de laboratorio til para todas
las circunstancias, de bajo costo, rpido, sencillo y con valores de predictibilidad, tanto negativos
como positivos, aceptables.
Los medios de cultivos para T. vaginalis, por lo menos en nuestro medio, no han tenido el xito
que autores europeos y norteamericanos han obtenido. Los mayores inconvenientes que
restringen su uso son el costo de los mismos y el hecho de que todos necesitan el agregado de
suero de caballo, antibiticos y antimicticos, en el momento de su uso, deben ser incubados en
anaerobiosis, o bien no se encuentran disponibles en el mercado.2-8
Para evaluar la utilidad de los mismos en nuestra ciudad, es que procedimos, en este ensayo, a
validar las siguientes metodologas comnmente utilizadas para el diagnstico de T. vaginalis en
flujo vaginal, por el laboratorio de Anlisis Clnicos: 1) Coloracin de Gram, 2) Examen en
fresco entre porta y cubreobjetos 3) Coloracin de May Grunwald-Giemsa. 4) Cultivo en medio
de Diamond modificado (Menarini) y 5) Cultivo en medio OXOID CM-161.
MATERIAL Y METODOS
Se procesaron 89 muestras de flujo vaginal de mujeres que concurrieron al Servicio de
Laboratorio del Hospital de Evacuacin 181 de la ciudad de Baha Blanca (Argentina), cuyas
edades oscilaban entre los 25 y 55 aos, y sintomatologa compatible con vaginitis.
Las muestras fueron extradas para ser procesadas simultneamente por los cinco mtodos
sealados, para lo cual se extrajo flujo vaginal de fondo de saco, evaluando que fuese suficiente
y significativo, con hisopos estriles.
Primeramente se efectuaron extendidos para coloraciones de Gram y de May Grunwald-Giemsa
(dos extendidos para cada uno). Posteriormente se extrajo nueva muestra para efectuar el examen
en fresco entre porta y cubreobjetos (de 24 x 24 mm) y el hisopo fue colocado en un tubo que
contena 0,5 cc de solucin fisiolgica de cloruro de sodio, el cual se mantuvo en un bao
termostatizado a 37C hasta el momento de su observacin: menos de cinco minutos para todos
los casos. Se observ con 400 aumentos por espacio de cinco minutos cada preparado, y se
inform la presencia o ausencia del protozoo.9
Finalmente se procedi a la extraccin de muestras para los cultivos: un hisopo con flujo vaginal
fue colocado en cada uno de los tubos que contenan 10 ml del medio de cultivo correspondiente.
Los medios de cultivos utilizados fueron:
a. Medio de cultivo Diamond2 (Menarini). Cod Tric-20. Ref 1038. Barcelona-Espaa
b. Medio OXOID CM 161, Hampshire, England. Este medio fue suplementado con suero de
caballo y antibitico-antimictico, de acuerdo a instructivos del fabricante.
Ambos medios fueron incubados durante cinco das 37C, en anaerobiosis.

Para el anlisis estadstico de los resultados, en estas experiencias utilizamos el siguiente

software: Epidat, versin 2.0. OPS-OMS, 1997, para anlisis de datos tabulados para pruebas
diagnsticas simples y para combinacin de pruebas.
Definimos, para esta experiencia: los siguientes terminos:
- Sensibilidad: la proporcin de individuos con la enfermedad que tienen una prueba positiva.
- Especificidad: la proporcin de sanos que tienen una prueba negativa.
- Valor Predictivo del Resultado Positivo: la probabilidad de que un individuo con resultado
positivo en la prueba, tenga la enfermedad.
- Valor Predictivo del Resultado Negativo: la probabilidad de que un individuo con resultado
negativo en la prueba, no tenga la enfermedad.
- Valor Global de la Prueba: la probabilidad de que un individuo sea clasificado correctamente
por la prueba.
RESULTADOS
Los resultados, para un nivel de confianza del 95%, fueron los que se muestran en la Tabla 1.
Si las cinco pruebas se efectuaran en serie, es decir que a los sujetos con resultado negativo en
una prueba ya se los considera negativo y por lo tanto no se lo somete a una segunda prueba,
mientras que a los positivos s se les realiza otra prueba (o la misma), para confirmar el caso,
los resultados seran los mostrados en la Tabla 2.
Si las cinco pruebas se efectuaran en paralelo, es decir que a los sujetos con resultado positivo
en una prueba ya se consideran como positivos y por lo tanto no se someten a una segunda
prueba, mientras que a los negativos se les efecta otra prueba diagnstica, hasta llegar a la
quinta en este caso, buscando de esta manera aumentar la sensibilidad del diagnstico del
laboratorio, los resultados seran los mostrados en la Tabla 3.
La prevalencia de la enfermedad en el grupo estudiado, fue del 29,21%, artificialmente
aumentada ya que las pacientes fueron seleccionadas en funcin de la sintomatologa que
manifestaban presentar al momento de la realizacin del examen de flujo, en el laboratorio.
Tabla 1. Sensibilidad, especificidad, VPRP, VPRN y valor global de la
prueba (VGP) obtenida para el diagnstico de Trichomonas vaginales
mediante cinco pruebas

Tabla 2. Resultados de las Sensibilidades y

VPRN de las pruebas diagnsticas para
Trichomonas vaginalis cuando son efectuadas en
serie

Tabla 3. Resultados de Sensibilidad y VPRN

de las pruebas dignsticas para Trichomonas
vaginalis cuando son efectuadas en paralelo

Sensibilidad 36,65% (Intervalos de confianza:

(en serie)
19,49-57,57)

Sensibilidad 99,76% (intervalos de confianza:

(en paralelo) 83,61-99,74)

VPRN
(en serie)

VPRN
99,90% (intervalos de confianza:
(en paralelo) 92,68-99,89)

79,27% (Intervalos de confianza:

68,42-87,24)

DISCUSION
Del anlisis de los resultados obtenidos en esta experiencia, podemos concluir que el medio de
cultivo Diamond (Menarini), para una prevalencia de enfermedad (Trichomonosis) del 29,21%,
en nuestro laboratorio de diagnstico, presenta una sensibilidad, valor predictivo del resultado
negativo y valor global de la prueba, similar al examen en fresco; por esta razn es que hasta
tanto se disponga de mejores medios de cultivo comerciales, no recomendamos la utilizacin de
los mismos en la prctica diaria en nuestros laboratorios de diagnstico microbiolgico, en
contraposicin con lo expresado por otros investigadores quienes aseguraban que si no cultivan
los flujos vaginales, perdan la mitad de los diagnsticos positivos de T. vaginalis.3
Con respecto al medio de Oxoid, si bien el valor global de la prueba es similar, presenta una
sensibilidad del 76,92%, ligeramente inferior al examen en fresco, aunque con diferencia
estadstica no significativa.
Con referencia a la coloracin de Gram, no consideramos una coloracin recomendable para
investigar T. vaginalis como nica prueba. Simplemente fue incluida en esta validacin ya que es
una coloracin que rutinariamente efectan los bacterilogos en el estudio del flujo vaginal, y
que en caso de visualizarse el flagelado en la misma, puede informarse su hallazgo y no se
necesitaran efectuar otros exmenes.

Si bien nuestros hallazgos son coincidentes con los de otro artculo,10 es pertinente sealar que en
351 muestras estudiadas en otro estudio, se detect T. vaginalis por examen en fresco en el 6%
de los casos mientras que si se utilizaba cultivos acelulares anaerbicos la deteccin llegaba al
13%.11
Un autor12 otorga una eficiencia relativa del 100% al cultivo del flujo vaginal en medio de
Diamond incubado durante siete das a 37C, sin embargo, el mismo autor manifiesta una
sensibilidad del 76,9% al medio de Kupferberg13 igual a la hallada por nosotros en esta
experiencia, pese a que las muestras son diferentes. El mismo autor,6 si bien reconoce el valor del
medio de Diamond, seala que es solamente en condiciones de anaerobiosis y con una
incubacin de siete das, lo que dificulta an ms su utilizacin en los laboratorios comunes, ya
que no todos disponen de jarras para anaerobiosis, llegndose, luego de un anlisis de
costo/beneficio, a ser descartado su uso en forma rutinaria por la mayora de los Laboratorios de
Anlisis Clnicos.
Por lo expuesto creemos que el medio de Diamond (Menarini) podra ser recomendable para
estudios de cepas axenizadas, para mantenimiento de las mismas en laboratorio para
investigacin, pero no est disponible en nuestro medio, y su preparacin en el laboratorio
insume demasiado tiempo.
Es pertinente recordar aqu, que en otros estudios14 los autores demostraron que la coloracin
fluorescente con naranja de acridina15 tena una sensibilidad muy superior al examen en fresco,
por lo que, teniendo en cuenta que los medios de cultivo aqu ensayados no mejoran
significativamente la sensibilidad respecto del examen en fresco, los resultados aqu presentados
confirman que el algoritmo para el diagnstico de T. vaginalis por el laboratorio de Anlisis
Clnicos es el que incluye: examen en fresco, coloracin de May Grunwald-Giemsa y coloracin
fluorescente con naranja de acridina, efectuados "en paralelo".14
RESUMEN
En el presente estudio se efectu la validacin de las siguientes metodologas utilizadas para el
diagnstico de Trichomonas vaginalis en flujo vaginal, en el laboratorio de Anlisis Clnicos: 1)
Coloracin de Gram, 2) Examen en fresco entre porta y cubreobjetos 3) Coloracin de May
Grunwald-Giemsa. 4) Cultivo en medio de Diamond modificado (Menarini) y 5) Cultivo en
medio OXOID CM-161.
Se utilizaron 89 muestras de flujo vaginal extrado con hisopo estril de fondo de saco, de
mujeres que concurrieron al Servicio de Laboratorio del Hospital de Evacuacin 181, de la
ciudad de Baha Blanca (Provincia de Buenos Aires) Argentina y cuyas edades oscilaban entre 25
y 55 aos.
Las muestras se colorearon con Gram, May Grunwald-Giemsa, se efectuaron observaciones en
fresco entre porta y cubreobjetos, y fueron sembradas en los medios de Diamond (Menarini) y
OXOID CM-161 e incubadas durante cinco das a 37C, en anaerobiosis.

Los resultados obtenidos mostraron que el medio de cultivo Diamond (Menarini) y el examen
en fresco inmediato, para una prevalencia de enfermedad (Trichomonosis) del 29,21%, en
nuestro laboratorio de diagnstico, presentan una sensibilidad, valor predictivo del resultado
negativo y valor global de la prueba
similares: 80,7%; 92,64% y 94,38% respectivamente. Si las cuatro pruebas son efectuadas en
paralelo, la sensibilidad que se obtiene es del 99,76%, con un valor predictivo del resultado
negativo del 99,90%.
Para el medio OXOID, si bien el valor global de la prueba es similar, presenta una sensibilidad
del 76,92%, ligeramente inferior al examen en fresco, aunque con diferencia estadstica no
significativa.
La coloracin de Gram present una sensibilidad diagnstica de 19,23%.
Concluimos que los medios de cultivo Diamond (Menarini) y OXOID CM 161 no mejoran el
diagnstico etiolgico de trichomonosis con relacin al examen en fresco y coloracin de May
Grunwald-Giemsa. La coloracin de Gram no la recomendamos para investigar T. vaginalis, no
obstante, de visualizarse el flagelado por la misma, puede informarse su hallazgo y no se
necesitaran efectuar otros exmenes.
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