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FORMA: P-GC-01/6

UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA
Escuela de Ingeniería Civil
Manual de Prácticas
Laboratorio Ingeniería Sanitaria

VIGENCIA

01 - 11 - 04

VIGENCIA

Tinción Gram y manejo del microscopio óptico

APROBADO:
CARGO

FIRMA:

FIRMA:

REVISIÓN

01 – NnnnnN°
07-14 No.

MMmmfff
fLIIPFQ0
2:

REVISADO:

No.

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DOCUMENTO

CÓDIGO

CARGO:

REVISION

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LICPIS-02

Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias. en la práctica.04 REVISION 07 . La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía. son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamado de tinción simple. o por ligeras modificaciones en la ejecución de la técnica. siendo la primera teñida por cristal violeta y lugol. denominado tinción diferencial. Por ejemplo. Por este motivo. los cultivos viejos de algunas bacterias grampositivas. INTRODUCCIÓN El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. las bacterias pueden dividirse en dos grupos: grampositivas y gramnegativas. Aquí se pueden ver las diferencias estructurales y químicas de los dos tipos de pared bacteriana: REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las células. mientras la segunda es teñida por la safranina.Uno muy usado en microbiología es la tinción Gram. El modo más simple de aumentar el contraste es con la utilización de colorantes.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . pierden la propiedad de retener el cristal violeta. es preciso atenerse. y en consecuencia se tiñen por la safranina apareciendo como gramnegativas.11 . Basándose en su reacción a la tinción de Gram. Hay casos donde los microorganismos grampositivos pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son gramlábiles).11 . CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico 1. al procedimiento establecido. Las bacterias Grampositivas tienen una pared celular mas gruesa mientras que las Gramnegativas tienen una pared celular más delgada. Para explicar el mecanismo de la tinción de gram se han propuesto varias hipótesis fundadas en la naturaleza química de las paredes celulares de los microorganismos. Análogo efecto se produce en ocasiones por cambio en el medio del organismo. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No.11 No. Mediante esta técnica de tinción se pueden diferenciar las bacterias de tipo Gramnegativas (se tiñen de color rosado) y Grampositivas (se tiñen de color morado). Sin embargo.

11 . La disposición de los desechos peligrosos o no peligrosos en el laboratorio es muy importante porque ayudan a proteger la salud. previo tratamiento mínimo de neutralización u otro. Los desechos que no son peligrosos a la salud y/o al ambiente se recolectan y se vierten en el desagüe que descarga a la planta de tratamiento de agua de la Universidad. a mantener la seguridad y minimizar las amenazas inmediatas y a largo plazo sobre el ambiente. personas. tinción y morfología. cuando así se requiera.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . bienes e instalaciones. REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: .04 REVISION 07 . mientras que los desechos con características de peligrosos (según Decreto Ambiental 2.11 . OBJETIVOS  Iniciación en las técnicas del estudio de microorganismos: cultivo.635) se recolectan en envases o recipientes y se almacenan en el laboratorio para su posterior manejo de tratamiento o hasta su disposición final por empresas gestores de residuos y/o desechos avaladas por el organismo competente. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico Pared Gram + capa densa y uniforme de 200 a 800 A) glicopéptido (50% del peso seco) Pared Gram capa interna delgada de 20 a 30 A cubierta por capas externas de densidad menor) lipopolisacáridos lipoproteínas proteínas glicopéptido (10% del peso seco) En el laboratorio de Sanitaria los desechos que se generan son desechos químicos y biológicos porque están constituidos o provienen de la reacción de sustancias químicas.11 No. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. 2.

 Recolectar los desechos generados de las soluciones preparadas durante la práctica.  Lugol (1 g de iodo en 2 g de ioduro potásico en 100 cc de agua destilada).11 .1 Equipos y material       Microscopio Portaobjetos Asas de cultivo Mechero Cápsulas de Petri Tubos de ensayo.  Efectuar una adecuada gestión de desechos peligros generados en el laboratorio: recolección. levaduras. Gramnegativos de los Grampositivos. PARTE EXPERIMENTAL 3. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico  Diferenciar morfológicamente los grupos de bacterias.2 Reactivos. tratamiento y disposición final. 3.11 .11 No. REVISADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: .  Alcohol de 95° (decolorante)  Safranina ó Fuscina básica (1 g de Safranina APROBADO: básica en 100 cc de agua destilada).04 REVISION 07 .  3.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 .  Cristal violeta (1 g de cristal violeta en 100 cc de agua destilada). vino agriado. Tratar (cuando sea factible) los desechos generados del proceso para su disposición final. mediante la tinción de Gram  Uso del microscopio como herramienta para la diferenciación de bacterias Grampositivas de las Gramnegativas. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. Medios de Cultivo  Cultivo de bacterias.

porque puedes golpear el portaobjeto y romperlo o romper la lente.04 REVISION 07 . para evitar salpicaduras que puedan afectar a usted mismo o a sus compañeros. ácido sulfúrico) con agua.  Los alumnos deberán utilizar bata de laboratorio.  Si tiene que mezclar algún ácido (por ejemplo.  El alumno que este manipulando el mechero no deberá usar guantes y deberá tener cuidado al manipular el porta objetos. añade el ácido sobre el agua. pues el ácido «saltaría» y podría provocarle quemaduras en la cara y los ojos. REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: .11 .  Tome exactamente la cantidad necesaria del reactivo a utilizar y no deje destapados los frascos ni aspires su contenido. evitando quemaduras. ya que la mayoría son corrosivos y. nunca al contrario. gafas de protección y en caso de requerirse. Lávese las manos con jabón después de tocar cualquier producto químico.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . MANIPULACIÓN DE SUSTANCIA QUÍMICAS.  Antes de usar un reactivo químico o una solución lea cuidadosamente la etiqueta para identificar el contenido y en los signos de peligrosidad que parecen en los frascos. guantes durante el tiempo de permanencia en el laboratorio. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No.  No bajes la lente mientras estas mirando por el microscopio.  La manipulación de ácidos concentrados debe efectuarse dentro de la campana de extracción.  Los ácidos y las bases fuertes han de manejarse con mucha precaución.  Evite el contacto de las manos con los ojos y otras mucosas mientras realiza los análisis.11 . si caen sobre la piel o la ropa. pueden producir heridas y quemaduras importantes. 4.11 No. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico  Aceite de inmersión.

Solución de Lugol Sustancia No Peligrosa. Tras ingestión: beba agua (máximo 2 vasos). Contacto con los ojos: lave con abundante agua. Solución de Cristal Violeta Sustancia altamente inflamable. Contacto con la piel: aclare con abundante agua. Contacto con los ojos: lave con abundante agua. Si ocurre cualquiera de los casos anteriores acuda al médico (muestre la etiqueta). Tras inhalación: tomar aire fresco. evite el vómito (peligro de perforación).11 No. APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . Tras inhalación: tomar aire fresco.11 . Tras inhalación: tomar aire fresco. Contacto con los ojos: lave con abundante agua manteniendo abierto el parpado (mínimo 10 minutos). elimine la ropa contaminada. Tras ingestión: beba agua (máximo 2 vasos). Contacto con la piel: aclare con abundante agua.04 REVISION 07 . evite el vómito (peligro de perforación). IDENTIFICACIÓN DE PELIGROS Y MEDIDAS DE PRIMEROS AUXILIOS DE LOS REACTIVOS QUE SE UTILIZARÁN EN LA PRACTICA: Reactivos Peligro Solución de Safranina Sustancia altamente inflamable. elimine la ropa contaminada.11 .FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. Tras inhalación: tomar aire fresco. Si ocurre cualquiera de los casos anteriores acuda al médico (muestre la etiqueta). Etanol Sustancia altamente inflamable. elimine la ropa contaminada. Si ocurre cualquiera de los casos anteriores acuda al médico (muestre la etiqueta). Contacto con la piel: aclare con abundante agua. Tras ingestión: beba agua (máximo 2 vasos). REVISADO: Primeros auxilios Contacto con los ojos: aclarar con abundante agua. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico 5. evite el vómito (peligro de perforación).

Tras ingestión: beba agua (máximo 2 vasos). teñidas de color violeta. Guía de respuestas a emergencias. El complejo CV-I no sale de las células que continúan Eliminación por extracción de grasas de las paredes celulares. Disminuye la permeabilidad. elimine la ropa contaminada. Si ocurre cualquiera de los casos anteriores acuda al médico (muestre la etiqueta). 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No.11 No. se tiñen color violeta. PROCEDIMIENTO 6. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico Contacto con la piel: aclare con abundante agua. Se contraen los poros. Se deshidratan las paredes celulares.04 REVISION 07 . Las células continúan teñidas de color violeta. quedan teñidas de Células decoloradas. 6.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . continúan teñidas de color violeta.1 El mecanismo de la tinción Gram es reseñado en el siguiente esquema: Reacción y coloración de las bacterias Productos que se utilizan GRAM + 1) Cristal violeta(CV) Células color violeta 2) Lugol (solución iodada (I)) 3) Alcohol GRAM - Células color violeta Se forma el complejo CV-I. Nota: Para cualquier otra información consultar las fichas de seguridad de cada reactivo ubicadas en el laboratorio y también pueden consultar la norma Covenin 2670: 2001 Materiales Peligrosos. de color rosado. 4) Safranina Células no decoloradas.11 . El complejo CV-I se separa de la célula. REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: .11 . Aumenta la porosidad. Las células Se forma el complejo CV-I.

CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico 6.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . El calor deseable es aquel que sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No.11 .04 REVISION 07 . 1: Técnica para realizar un frotis 6.2 Tinción Agregue violeta cristal con un gotero de manera que cubra toda la muestra deje actuar por 1 minuto.11 No. Esperar que se seque al aire libre o ayudarse con la llama de un mechero para fijar la muestra teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo ( solo se pasa por la llama ) puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfología celular de las bacterias de la muestra.11 . de manera que al final obtengamos como producto una espiral .1 Fijar un frotis Con la ayuda de una asa previamente flameada tomar una muestra y colocarla en portaobjeto bien limpio ( con alcohol y flameado ) con el asa conteniendo la muestra proceder a realizar la extensión en el portaobjeto mediante movimientos giratorios.2. dar vueltas sobre la parte media de la lámina.2 PASOS A SEGUIR PARA REALIZAR TINCIÓN GRAM Fig. Esta tinción viene dada para fijarse a temperatura de 25 °C REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . 6.2.

04 REVISION 07 . CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico 6.Alcohol.2. 6.2.2.7 Tinción de contraste REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: .2. el enjuague se debe realizar poniendo la lámina en posición inclinada hacia abajo.11 .2.3 Enjuague Al transcurrir un minuto enjuague la muestra con un chorro de agua. se realiza igual con la lámina inclinada. Para realizar el lavado. se aplica como mordiente Yodo o Lugol durante un minuto con un gotero. el chorro debe ser delgado y suave. este debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. El mordiente cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con colorante y determine su fijación a las bacterias.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . 6. se debe de tener en cuenta que el chorro de agua no debe caer directamente sobre la muestra. 6.4 Mordiente Una vez enjuagado el portaobjeto.11 .6 Lavado y secado Lavar con agua para quitar los restos del residuo del decolorante y esperar que seque la lámina al aire libre o con la ayuda del mechero como en el primer paso.5 Decoloración Pasado el minuto de haber actuado el mordiente se decolora con Etanol al 95 %. Acetona ó Acetona.11 No. se agrega con el decolorante en un gotero en cantidades suficientes hasta que ya no escurra mas líquido azul y salga transparente 6.

3 GESTIÓN DE DESECHOS GENERADOS EN LA PRÁCTICA Durante la realización de práctica se generan los desechos de las soluciones preparadas.11 . no puede ser dispuesto en forma definitiva sin previo tratamiento que pueda minimizar sus efectos.Preparación de un frotis 6. al medio ambiente y personas. pero las soluciones contienen la sustancia de cristal violeta son inflamables y pueden dañar al medio ambiente. poner una gota muy pequeña de aceite de cedro y observar al microscopio con el objetivo de inmersión (ver Anexo a la práctica manual de uso del microscopio) Fig .3. estos desechos se catalogan como peligrosos y no peligrosos según el Decreto 2635. a enjuagar la lámina con agua como se describió en el paso 3. para ello lo siguiente: 6.y su ficha de seguridad. Se considera un desecho peligroso. dejar actuar por un minuto.04 REVISION 07 . CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico Una vez que la lámina ya se secó.. G. (basado en su ficha de seguridad). se deja secar.O N° 5245 del 3 -08 – 1998 .FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 .11 .2.2.11 No.1 Desechos de soluciones de cristal violeta: Los desechos de las soluciones de cristal violeta no son catalogados como desechos peligrosos según el decreto 2635. Una vez que la preparación esté totalmente seca. aunque en menor grado. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. Para eso se procede a su debido tratamiento: REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: .8 Nuevo enjuague Pasado el minuto correspondiente se procede. pero esta vez se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina o Fucsina. procedemos a teñir nuevamente. 6.

FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 .1 Una vez terminada la práctica se recolectan todos los desechos de la solución de safranina y se diluye en una relación aproximada de 1:20 con agua y se proceda a verter la solución en el desagüe que descarga a la planta de tratamiento de agua de la Universidad. aunque en menor grado.3. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No.3. pero las soluciones contienen la sustancia de etanol son inflamables y se considera un desecho peligroso (basado en su ficha de seguridad). Se considera un desecho peligroso. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico 6.3.1 Una vez terminada la práctica se recolectan todos los desechos de la solución de etanol y se diluye en una relación aproximada de 1:20 con agua y se proceda a verter la solución en el desagüe que descarga a la planta de tratamiento de agua de la Universidad. 6.4 Desechos de Solución de Etanol: Los desechos de las soluciones de Etanol no son catalogados como desechos peligrosos según el decreto 2635.3.11 . 6. al medio ambiente y personas. No son necesarias medidas especiales para su eliminación (basado en su ficha de seguridad).1 Una vez terminada la práctica se recolectan todos los desechos de la solución de cristal violeta y se diluye en una relación aproximada de 1:20 con agua y se proceda a verter la solución en el desagüe que descarga a la planta de tratamiento de agua de la Universidad. no puede ser dispuesto en forma definitiva sin previo tratamiento que pueda minimizar sus efectos.3. 6.2 Desechos de Solución de Safranina: Los desechos de las soluciones de Safranina no son catalogados como desechos peligrosos según el decreto 2635.4.1.3.3. Para eso se procede a su debido tratamiento: 6. Para eso se procede a su debido tratamiento: 6. Nota: Si durante la realización de la práctica algún material de vidrio se rompe o se daña.2.1 Una vez terminada la práctica se recolectan todos los desechos de la solución de lugol y se diluye en una relación aproximada de 1:20 con agua y se proceda a verter la solución en el desagüe que descarga a la planta de tratamiento de agua de la Universidad. APROBADO: REVISADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . aunque en menor grado.3. no puede ser dispuesto en forma definitiva sin previo tratamiento que pueda minimizar sus efectos. se deberá descartar en el recipiente especial para ello.3 Desechos de Solución de Lugol: Los desechos de las soluciones de Lugol no son catalogados como desechos peligrosos según el decreto 2635 ni su ficha de seguridad. pero las soluciones contienen la sustancia de etanol son inflamables (basado en su ficha de seguridad). al medio ambiente y personas.11 No.04 REVISION 07 . 6.11 .

Venezuela. 8. Arias.11 . Autores: Bayona. MERCK. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico 7. Muñoz. REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. Asapchi. CÁLCULOS Y RESULTADOS Debe utilizarse el objetivo de inmersión (el de mayor alcance con el aceite de inmersión. preferentemente con el micrométrico. Equipos y Dispositivos de Protección Personal.04 REVISION 07 .  Norma COVENIN 2670:2012. Guía de respuestas de emergencia. Bogotá. Medidas de Seguridad e Higiene Ocupacional en Laboratorios.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . Después de utilizar el objetivo de inmersión debe limpiarse con xilol. Poutoi. Observaciones realizadas: anótalas en tu cuaderno ¿Qué forma tienen las bacterias observadas? ¿Las bacterias aparecen aisladas o agrupadas? En caso de que aparezcan agrupadas indicar el tipo de asociación. Materiales Peligrosos. Antonio Seijas: Universidad Católica Andrés Bello Guayana. Colombia.11 No.  Fichas de seguridad de reactivos. Se enfoca. Pontificia Universidad Javeriana.  Norma COVENIN 2340-1:2001.11 . Preparado por: Ing.  Norma COVENIN 2237-89. Serrano. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA  Manual de laboratorio de microbiología básica. Parte 1. Indica tipo de Gram. Ropa. Caracas. Se coloca una gota de aceite de cedro sobre la preparación. Selección de acuerdo al Riesgo Ocupacional. Universidad Católica Andrés Bello.  Manual de prácticas de Ingeniería Sanitarias.

La luz procedente del objeto penetra en el microscopio por el objetivo. que es una lamina de vidrio de 1 mm de espesor y a continuación se cubre con un cubreobjetos. Practica hasta que tengas la certeza de saber para que lado debes mover la perilla de enfoque. En el microscopio óptico este aumento tiene un límite.11 . células animales o vegetales. etc. El objeto que se quiere estudiar se coloca en la platina. En algunos microscopios. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. el ocular.04 REVISION 07 . selecciona siempre la lente de menor aumento que te permite ver mejor el objeto y encontrar fácilmente la parte que más te interesa observar.) debe colocarse en un portaobjetos. Para comenzar. REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . Debes colocar tu microscopio en una mesa fija. para hacer subir o bajar las lentes. al mover el tornillo toda la platina sobe o baja.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . Utiliza los broches para fijar el portaobjeto en su sitio. insectos. El aumento final conseguido es igual al producto de los aumentos del objetivo por los del ocular. en vez de hacerlo el puente. Coloca el portaobjeto sobre la platina de manera tal que la parte que quieres observar se encuentre bajo la lente. Esta imagen se modifica mediante otro sistema de lentes. Trata que la mesa sea lo suficientemente grande como para colocar sobre ella todo el material que necesites para trabajar. que desempeña la función de una lupa. Recomendaciones para principiantes: Debes colocar tu microscopio en una mesa fija. un cuadrado de 2 cm de lado o un circulo con esa medida diámetro.11 No. es decir. plantas. de modo tal que puedas sentarte con comodidad para ver el ocular sin estirarte o apoyarte. que se denomina "poder de resolución" y que es aproximadamente de 1200 aumentos. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico ANEXOS Manual del microscopio óptico (para uso del laboratorio de Ingeniería Sanitaria de la UCAB-Guayana) El microscopio Óptico: El microscopio normal u óptico está formado por dos lentes. El objeto que se desea examinar (líquidos. produce una imagen muy ampliada del objeto.11 .

Ten cuidado!!! No bajes la lente mientras estas mirando por el microscopio. 5 * Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador. sobre el que se coloca la preparación.11 .FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . 9 * Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque.04 REVISION 07 . FIG. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la preparación de REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . 3 * Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. 7 * Tubo: es una cámara oscura unida al brazo mediante una cremallera. porque puedes golpear el portaobjeto y romperlo o romper la lente. Amplía la imagen del objetivo.11 . mueven la platina hacia arriba y hacia abajo. que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo. 8 * Revólver: Es un sistema que coge los objetivos. 10 * Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central. Amplía la imagen de ésta. 3 Partes del microscopio óptico 1 * Ocular: lente situada cerca del ojo del observador.11 No. 2 * Objetivo: lente situada cerca de la preparación. El macrométrico lo hace de forma rápida y el micrométrico de forma lenta. luego mira a través del microscopio y sube las lentes girando la perilla de enfoque hasta que el objeto entre en foco y su imagen se vuelva nítida y clara. 6 * Lente ocular: Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. 4 * Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico Observa desde un costado la platina y mueve la perilla de enfoque para acercar la lente. y que rota para utilizar un objetivo u otro.

ya debería estar en esas condiciones. cuando se observe algo nítido la muestra. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia del objeto a observar. ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico delante hacia atrás o de izquierda a derecha y viceversa. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 .11 . tienen una distancia focal muy pequeña y además la primera lente del objetivo es de pequeño diámetro. b. Algunos rayos incluso sufren reflexión total en la interface vidrio-aire REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . empleando el tornillo macrométrico. 4. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. 3. b) Los rayos que desde la muestra se dirigen al objetivo atraviesan el vidrio del cubreobjeto y al pasar al aire se separan de la normal.11 No. es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3.04 REVISION 07 . En la parte posterior de uno de los laterales se encuentra un nonius que permite fijar las coordenadas de cualquier campo óptico. y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión. a través de los oculares. 5. Para realizar el enfoque: a. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación. Manejo del microscopio óptico 1. ahora sí. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. 2. Nota: ¿Por qué se utiliza aceite de inmersión cuando se emplea el objetivo de mayor aumento de un microscopio óptico (100x)? Respuesta: a) Los objetivos de mayor aumento. Mirando. ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.11 . de esta forma se puede acudir a él cuando interesa. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen. Pasar al siguiente objetivo.

f. REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . 6.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . consiguiendo así que una mayor cantidad de luz llegue al objetivo. los rayos emergentes ya no se apartan de la normal. subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. e. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.04 REVISION 07 . si desea enfocar otro campo. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio. g.11 . Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. c. Al finalizar el trabajo. Bajar totalmente la platina. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación. hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación. Ceuta (España). sino que continúan su camino sin desviación. entre el objetivo y el cubreobjeto una gota de aceite de cedro. b. Por tanto. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. pues se mancharía de aceite. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.11 . h. "Física General". La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima. Joaquín Catalá de Alemany. hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. d. j. Empleo del objetivo de inmersión: a. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. de índice de refracción casi igual al vidrio. asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. d) Al intercalar. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico c) Solo llega al microscopio una pequeña parte de la luz que parte de la muestra. mejorando notablemente la visión. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.11 No. con el problema que conlleva para la visión. Valencia 1961 Antonio Gros. i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. Mirando directamente al objetivo. Mantenimiento y precauciones 1. ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.

FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción. hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Nunca hay que tocar los lentes con las manos. Objetivos acromáticos 4x/N. se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo. secarlo con un paño. 40x(r)/N. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico 2.11 . limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o. Si se mancha de aceite. Si no se va a usar de forma prolongada. 3. No hay que abusar de este tipo de limpieza.25. Características del microscopio Optima XSZ-207(Laboratorio de Ingeniería Sanitaria UCAB-Guayana) Cabeza binocular tipo Seidentopf con inclinación a 45º. 7.57 mm. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra.A 0.A1.A 0.04 REVISION 07 . 4. Si se ensucian. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y. limpiarla con un paño humedecido en xilol. 10x/N. Oculares 1 par 10xWF.10. hay que limpiarlo con una mezcla de alcoholacetona (7:3) o xilol. revólver y condensador).25 Ocular / objetivo 4X 10X 40X 100X 10X 40X 100X 400X 1000X REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: . con un papel de óptica. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico.65 y 100x(r)/N.A 0. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. 5. platina. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.11 No. micrométrico. rotatorio 360º. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No. mejor. En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. 8. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido.11 . Cuando no se está utilizando el microscopio. Después de utilizar el objetivo de inmersión. Portaoculares con distancia interpupilar variable entre 55 . hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). al acabar el curso. 6. 9.

Bacterias .11 .04 REVISION 07 . CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico Fig.Bacterias Grampositivas y Gramnegativas Grampositivas REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: Fig. 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No.Manejo del microscopio Fig..11 .FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 .6..5.11 No.. 4.

04 REVISION 07 .11 No.FORMA: P-GC-01/6 UNIVERSIDAD CATÓLICA ANDRÉS BELLO – GUAYANA Escuela de Ingeniería Civil Manual de Prácticas Laboratorio Ingeniería Sanitaria VIGENCIA 01 . 02 DOCUMENTO VIGENCIA REVISIÓN N° 01 – NnnnnN° 07-14 No.11 .8. CÓDIGO LICPIS-02 MMmmfff fLIIPFQ0 2: Tinción Gram y manejo del microscopio óptico Fig.11 ...7.Bacterias Gramnegativas Fig.Bacterias Grampositivas y Gramnegativas REVISADO: APROBADO: CARGO: CARGO FIRMA: FIRMA: .