Citologa Cervical:

Manual de Tincin
e Interpretacin

Milagros Abad Licham

Mdico Patlogo-Onclogo
Instituto Nacional de Enfermedades Neoplsicas
Lima- Per

Manual de Tincin e Interpretacin en Citologa Cervical.

Primera Edicin 2009
Dra. Milagros Abad Licham
Instituto Nacional de Enfermedades Neoplsicas
Departamento de Patologa Servicio de Citologa
Avenida Angamos Este 2520- Surquillo
Telfono 7106900-1409 / 01-980573711
e-mail: milagros.abad@hotmail.com

Al amor simbolizado en dos nombres:

Arturo mi esposo y Renato mi hijo,
las razones ms importantes de ser mujer
y tener una misin en la vida

A la memoria de mi padre Jos Abad

Fuerza y Valor

A todas las mujeres peruanas,

una de ellas mi madre Amparo
por el empuje y coraje para salir adelante

Agradecimientos a:
Dios por la vida,
INEN por los conocimientos,
JICA y Mxico por la oportunidad,
Richard Dyer y Julia Rodrguez por la confianza,
Efran del Angel y Carmen Juregui por los consejos,
Los especializados por la amistad y paciencia.

INDICE
Capitulo I: Introduccin
1. Objetivo del manual
2. Alcance del Manual
3. Trascendencia del Manual
4. Revisin del Manual
Capitulo II: Citodiagnstico
1. Concepto de Laboratorio de Citologa
2. Contexto Programa de Control de Cncer de Cuello Uterino
3. Proceso de Citodiagnstico
4. Calidad del producto
5. Recurso humano
Captulo III. Procedimientos
1. Recepcin e identificacin de las muestras-solicitudes
2. Tincin y montaje de las lminas citolgicas
3. Lectura e interpretacin de las muestras de citologa cervical
4. Resultados finales
Captulo IV. Sistema Bethesda
1. Generalidades.
2. Descripcin
Captulo V. Control de Calidad Interno
1. Objetivo
2. Definicin
Anexos

CAPITULO I.
INTRODUCCIN
El Cncer de cuello uterino (CaCu) es un problema de salud pblica mundial; es la
neoplasia ms frecuente y mortal en la poblacin femenina, con una incidencia de
500,000 casos nuevos por ao. En el ao 2001, el 11.7% de todas las neoplasias en
las mujeres correspondieron a CaCu, y se reportaron 369,500 casos nuevos en pases en desarrollo, a diferencia de los pases desarrollados en los cuales slo se
diagnosticaron 96,100 casos. Uno de los grupos ms afectados son las mujeres latinoamericanas, consideradas como de alto riesgo para esta enfermedad. Segn
GLOBOCAN, se estima que en toda Latinoamrica se diagnostica CaCu a 72.000
mujeres cada ao y que 33.000 de ellas fallecern a causa de la enfermedad. No
obstante, es probable que se trate de estimaciones muy conservadoras ya que se
piensa que existen muchos casos sin diagnosticar, diagnosticados errneamente o
sin notificar. Nuestro pas Per, no es ajeno a esta realidad, se ha calculado una incidencia de 40 x 100,000, con una mortalidad aproximada de 15.8 x 100,000 habitantes, una de las ms altas de esta parte del continente.
A mas de 50 aos de postulada, la prueba de PAPANICOLAOU (PAP) se considera uno de los mayores xitos en procedimientos diagnsticos en la prctica
mdica, por haber sido el elemento central en los programas de prevencin y haber
reducido las muertes por cncer cervical en diversos pases industrializados en
ms de 70%. Sin embargo, este impacto no se ha logrado observar en pases en
desarrollo. Una de las razones es la falta de infraestructura adecuada y poca capacitacin del personal que labora en el laboratorio de citologa, pieza clave de todo
programa de control de CaCu. El Laboratorio de Citologa debe garantizar niveles
de alta calidad, por lo que es recomendable que sus procedimientos y resultados se
encuentren estandarizados. El PAP puede cumplir los lineamientos de validez y
reproductibilidad adecuada, slo si se establece un programa de control de calidad
en cada laboratorio de citodiagnstico, que garantice la efectividad y eficiencia en
la obtencin del espcimen, as como en la precisin diagnstica, las que se encuentran determinadas principalmente por un entrenamiento especializado, educacin continua y certificacin institucional previa (Alonso de Ruiz, 1985). De
acuerdo con la OMS (2002) un laboratorio debe procesar por lo menos 15 a 25 mil
citologas por ao o 50 lminas por citlogo en una jornada de ocho horas diarias,
en un tiempo estimado de interpretacin de seis minutos, cinco para lectura y uno
para escribir el reporte.
En la actualidad conocemos las causas de cncer cervicouterino, y el rol primordial que tiene el Papiloma virus humano (PVH) lo que ha hecho posible el desarrollo de novedosos mtodos de prevencin. Sabemos adems que el proceso es

asintomtico y de evolucin muy lenta, lo que permite diagnosticar y tratar oportunamente este padecimiento. Sin embargo, a pesar de la existencia de tcnicas
biomoleculares de alta precisin la fortaleza del mtodo de PAP se basa en dcadas de experiencia, bajo costo, y alta especificidad. El tamizaje probablemente sigue siendo la nica opcin razonable para las mujeres adultas de bajos recursos y
para las nias y adolescentes con pocas posibilidades de recibir vacunas profilcticas a tiempo. En este aspecto, los temas de costos y coberturas vuelven a ser esenciales.

1. Objetivo del Manual

Establecer los lineamientos generales operativos para que el personal administrativo, mdico patlogo, citlogo, citotcnologo y tcnico realice adecuadamente su
funcin en relacin con la tincin, montaje, lectura, interpretacin, archivo y control de calidad de las muestras citolgicas cervicouterinas de las mujeres atendidas
en los diferentes Establecimientos de Salud del pas.

2. Alcance del Manual

Este manual est diseado para aplicarse en el interior de cualquier Laboratorio de
Citologa del pas que cumpla con los estndares bsicos de calidad y tenga un
personal calificado para este fin. El tema central esta bsicamente dirigido al proceso de tincin e interpretacin de las muestras crvicouterinas.

3. Trascendencia del Manual

Mejorar la calidad de los resultados y procesos del Laboratorio de Citologa del
Instituto Nacional de Enfermedades Neoplsicas (INEN) como componente del
Programa de Control de Cncer de Cuello Uterino en el Per.

4. Revisin del Manual

El manual deber ser revisado peridicamente de acuerdo a los avances tecnolgicos y cientficos y a las modificaciones que experimentan los sistemas de atencin
de salud.

CAPITULO II.
CITODIAGNSTICO
1. Concepto de Laboratorio de Citologa
El laboratorio de Citologa es una estructura organizacional mdica responsable de
producir diagnsticos presuntivos ginecolgicos y no ginecolgicos basados en
criterios citolgicos internacionales ya estandarizados. Puede ser una organizacin
independiente o un servicio/unidad independiente, pero adjunta a un Departamento de Anatoma Patolgica de un hospital.

2. Contexto dentro del Programa Control de Cncer de

Cuello Uterino
El Cncer de cuello uterino es una de las neoplasias que puede ser detectada y tratada precozmente con una alta tasa de curacin, a diferencia si lo encontramos en
fase avanzada. La deteccin precoz se basa en examinar al microscopio las clulas
obtenidas por raspado del cuello uterino y extendidas sobre una lmina portaobjeto, mtodo propuesto por Papanicolaou en 1940 y que hasta hoy tiene vigencia.
Un programa de CaCu bien organizado puede disminuir las tasas de incidencia y
mortatlidad por esta enfermedad hasta en un 60 70% , por lo tanto un laboratorio
de Citologa bien equipado y con personal entrenado adecuadamente es una pieza
clave para el xito del programa. Esto sin desmerecer los nuevos adelantos cientficos como el reconocimiento de los virus PVH oncognicos, la creacin de vacunas teraputicas y preventivas que probablemente mejoren en un futuro no muy lejano el control del cncer crvicouterino.
Los objetivos de un laboratorio de Citologa integrado a un programa CaCu son:
a) Producir diagnsticos citolgicos de ptima calidad a partir de extendidos de cervix obtenidos para detectar oportunamente lesiones premalignas y malignas que permitan tomar decisiones clnicas adecuadas.
b) Brindar informacin epidemiolgica y administrativa til y veraz producto del anlisis de los resultados citolgicos cervicales.
c) Colaborar con la formacin y/o actualizacin del personal profesional
y tcnico el rea de citopatologa.
d) Producir peridicamente investigacin relacionada con el tema que
contribuya a mejorar la efectividad y eficiencia del programa CaCu.
e) Colaborar con el Programa Nacional de CaCu segn ste lo requiera.

3. Proceso de Citodiagnstico
3.1.-Definicin
El Laboratorio de Citologa es un sistema organizacional dinmico, abierto, que
puede ser considerado como un sub-sistema del programa de Cncer de cuello uterino. Proceso, es la agrupacin en serie de todas las acciones usadas por el sistema
para convertir las materias primas en un resultado particular.
El proceso principal del Laboratorio de Citologa, dentro del programa, es la produccin de diagnsticos citolgicos presuntivos de cncer de cuello uterino basado
en el exmen de Papanicolaou del grupo de mujeres consideradas como poblacin
objetivo. A este proceso se le llama Citodiagnstico y al resultado del mismo se
le denominar informe de resultado.

3.2.-Delimitacin
El Proceso de Citodiagnstico se inicia con la planificacin y organizacin respecto a la toma de muestras y el examen de Papanicolaou entre el Laboratorio de Citologa, los Centros de Salud y el Programa Nacional de Control de Cncer Cervicouterino. Este proceso termina con la elaboracin y entrega a las respectivas
instancias incluyendo la paciente, de un informe de resultado del examen citolgico. Se excluyen aquellos procesos de interfase, localizados fuera del Laboratorio
de Citologa.

3.3.-Etapas y Duracin
El nmero, secuencia y contenido de las etapas del Proceso de Citodiagnstico
vara entre los laboratorios de citologa. Un modelo ideal, aparte de tener insumos
y personal capacitado, debe contar fundamentalmente con un sistema de informacin computarizado, actualizado e integrado en donde se registren todos los casos
a nivel nacional, de tal manera que garanticen un seguimiento y tratamiento
adecuado. La tabla 01 y el grfico 01 presentados a continuacin resumen el
proceso, cuyo tiempo ideal de duracin es una semana.

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Tabla 01: Etapas del Proceso de Citodiagnstico

Da/Etapa
I
II
III
IV

1
2
3
4
5
6
7
8

Detalles del proceso

Recibir e identificar las muestras con sus respectivas solicitudes
Ingresar datos al sistema de informacin y recopilar antecedentes
Procesar las muestras
Realizar citodiagnstico preliminar considerando revisin de lminas
preevias de casos seleccionados
Realizar citodiagnstico definitivo y control de calidad
Recuperar y archivar las lminas positivas y negativas
Ingresar resultados al sistema de informacin
Elaborar y entregar los informes de los exmenes (resultados)

Grafico 01: Proceso de Citodiagnstico

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4. Calidad del Producto

Un proceso es de calidad si cumple con los siguientes requisitos:

4.1. Seguridad
Mantener durante todo el proceso la identidad de la relacin solicitud-muestraresultado sin confusin.

4.2. Efectividad
Debe existir una estricta correspondencia entre los resultados de PAP y las laminas procesadas. Esto quiere decir que si una muestra tiene clulas premalignas o
malignas, stas deben ser detectadas e informadas como POSITIVAS; en caso
contrario el informe emitido ser NEGATIVO.

4.3. Adecuacin
Los resultados deben reportarse en base a una clasificacin internacional universal (BETHESDA 2001).

4.4. Oportunidad
El tiempo ideal desde la llegada de la muestra hasta la entrega de resultado debe
ser el ptimo para tomar decisiones clnicas oportunas y satisfaccin de las pacientes.

4.5. Continuidad en el registro de la informacin

Los informes de resultados de PAP deben estar registrados en la base de datos del
laboratorio para apoyar el diagnstico de las pacientes, tener el historial citolgico
brindar informacin y mejorar la calidad del servicio.

4.6. Continuidad en el archivo de lminas

Los exmenes de PAP informados estn respaldados por el archivo ordenado de
lminas citolgicas debidamente identificadas, bien teidas, bien montadas, fcilmente ubicables cuando se requiera y mantenidas durante un tiempo apropiado
(cinco aos para las negativas y permanente para las positivas).

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4.7. Eficiencia
Los recursos del laboratorio se usan ptimamente para obtener xamenes de PAP
de mxima calidad.

4.8. Satisfaccin de los clientes

Los exmenes de Papanicolau reportados y las consultas realizadas al personal del
laboratorio relacionado con dichos exmenes, satisfacen las necesidades y expectativas de los usuarios internos y externos.

4.9. Bioseguridad
El proceso de citodiagnstico se realiza protegiendo la salud del personal del laboratorio y preservando el medio ambiente.

4.10. Confidencialidad
Las lminas y resultados de los exmenes de PAP son confidenciales, lo que garantiza el respeto por el paciente.

5 Del Recurso Humano

El equipo que trabaja en el Laboratorio de Citologa debe ser responsable, tico y
estar actualizado con los temas de inters para el mejor desempeo de su la labor.
Es un equipo multidisciplinario, dinmico que debe interactuar de acuerdo a las
necesidades del caso. Las funciones y su organizacin dependen de la cantidad de
trabajo y de la complejidad de los procesos que se realicen. Cada integrante del
equipo deber contar con los conocimientos necesarios para su puesto especfico y
con capacitacin especial en el resto de las reas por tratarse de un departamento
altamente especializado.

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CAPITULO III.
PROCEDIMIENTOS
1. Recepcin e identificacin de las muestrassolicitudes
1.1. Objetivo
Establecer cada una de las actividades que debe realizar el personal administrativo
y tecnolgico para recibir las muestras de citologa cervical de manera adecuada.

1.2 Definicin
El Laboratorio de Citologa debe recibir las muestras con sus respectivas solicitudes procedentes de los diferentes establecimientos de salud, incluyendo el hospital, revisarlas e identificarlas con un nmero nico correlativo para que ingresen
en la base de datos del servicio. Esta tarea es un trabajo combinado en el que participan el personal tcnico asignado por rol para este fin y la secretaria del servicio. Es tambin el cito-tcnico y/o tecnlogo mdico el responsable de la numeracin de la lmina despus de la foliacin.
Uno de los objetivos de la recepcin es lograr que las muestras citolgicas sean
representativas de los pacientes, adecuadamente recolectadas, preservadas, etiquetadas, transportadas y que las solicitudes estn correctamente llenas.
La hoja de solicitud de examen citolgico es la principal comunicacin entre el laboratorio y el profesional de salud responsable de la toma de muestra, la misma
debe llenarse con todos los datos requeridos y con letra legible. Esta debe ser rechazada junto con la muestra en los siguientes casos:
a) La solicitud del xamen citolgico no tiene identificacin completa de
la paciente
b) La solicitud del xamen citolgico tiene identificacin ilegible
c) La lmina carece de identificacin
d) La lmina est quebrada de un modo tal que es imposible de reparar

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e) Existe una diferencia entre el nombre de la paciente en la solicitud de

examen y las iniciales consignadas en la lmina.

1.3. Seguridad Laboral

La lmina del extendido citolgico contiene material biolgico proveniente del
cuello uterino y el personal de laboratorio debe tomar las precauciones necesarias
cuando retire el material de la caja, revise y enumere las muestras-solicitudes. Es
obligatorio el uso de guantes.

1.4. Etapas
Los pasos a seguir se resumen en la tabla 02.

Tabla 02: Recepcin e identificacin de muestras

N
1
2

3
4
5
6
7
8

Etapas del proceso

Recibir las muestras citolgicas crvicouterinas con sus respectivas
solicitudes
Abrir las cajas que contienen las muestras-solicitudes para verificar el nmero
total de unidades recibidas y contrastarlas con la orden de envio, en la cual se
consignan los nombres de las pacientes y el total de lminas enviadas
Verificar que la lmina adjunta a la solicitud corresponda a la paciente
Verificar que las solicitudes contengan los datos completos de identificacin
de la paciente, sean legibles y estn debidamente llenados
Rechazar las muestras citolgicas de acuerdo a los criterios descritos en el
punto 1.2.
Darle nmero correlativo a las muestras y solicitudes, verificando que ambas
correspondan al mismo paciente
Ingresar a la base de datos del Instituto las solicitudes de las muestras
aceptadas
Entregar al cito-tcnico o cito-tecnlogo las laminas y solicitudes para dar
inicio a la tincin

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2. Tincin y montaje de las lminas citolgicas

2.1. Objetivo
Establecer cada una de las actividades que debe realizar el cito-tecnolgo o citotcnico del laboratorio para realizar un proceso de calidad en cuanto a tincin y
montaje de las lminas se refiere.

2.2. Definicin
El procesamiento manual de las muestras de frotis cervical fijado comienza con la
reparacin ocasional de las lminas quebradas aceptadas y termina con la distribucin en bandejas de las lminas adecuadamente coloreadas. Esta etapa es exitosa
si todas las lminas aceptadas son procesadas, coloreadas y montadas correctamente en el tiempo establecido, manteniendo su integridad e identificacin. La coloracin es adecuada si obtenemos una buena definicin del detalle nuclear y
transparencia del citoplasma para poder observar la diferenciacin celular. El
montaje es correcto si el frotis est protegido de la sequedad, el encogimiento y de
desteirse por la oxidacin; adems que proporciona una imagen transparente al
microscopio.

2.2.1. Ubicacin Fsica

El rea de tincin debe ser un ambiente muy ventilado debido a los colorantes
qumicos que se utilizan y estar fsicamente separado del resto de ambientes. Como muchos de stos txicos son inflamables, deben estar sealizadas las medidas
a tomar en caso de accidentes.

2.2.2. Materiales, insumos y colorantes

Se recomienda que sean de buena calidad. En relacin con los colorantes se prefieren los que vienen listos para usar, pero teniendo en cuenta lo siguiente:
a) Verificar que las soluciones estn rotuladas indicando: fecha de compra, titulacin, concentracin, advertencias para su manejo y fecha de
vencimiento.

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b) Mantener los colorantes en envases oscuros, bien tapados porque son

sensibles a la luz y se oxidan a temperatura ambiente.
c) El tren de tincin debe cambiarse cada 2000 lminas teidas o cada 6 u
8 semanas.
En relacin al mantenimiento general y especfico de los colorantes se debe realizar lo siguiente:
a) Filtrar los colorantes con papel filtro de mediana velocidad cada ocho
das como mnimo, considerando que debe hacerse diario si la situacin
lo amerita. Esto se hace antes de usarlos con el objetivo de remover cualquier material celular que se haya desprendido de las lminas.
b) Limpiar las cajas de todo residuo de colorante.
c) Controlar diariamente el nivel de las soluciones del tren de tincin para asegurar que las lminas procesadas se coloreen totalmente.

2.3. Etapas
Los pasos generales de la tincin y montaje de lminas esta se presentan en la tabla 03.

Tabla 03: Tincin y montaje de lminas

N
1
2
3
4
5

Etapas del proceso

Reparacin ocasional de las lminas quebradas aceptadas
Preparacin y manejo de la batera de coloracin
Tincin de las lminas (figura 02)
Montaje de las lminas
Distribucin de las lminas en bandejas

2.4. Tincin de Papanicolaou

La tincin de PAP es un mtodo de coloracin policrmico con el que se busca
obtener contraste entre el ncleo y el citoplasma de las clulas. Se basa en tres
principios: afinidad qumica, concentracin y permeabilidad. Tiene como ventaja
una buena definicin del detalle nuclear, evidenciando el patrn de cromatina y un
aspecto transparente del citoplasma que permite apreciar los grados de diferenciacin celular y actividad metablica. El cito-tcnico y/o citotecnlogo debe teir y
montar al menos 700 lminas por jornada laboral.

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2.4.1. Colorantes
La tincin PAP utiliza tres colorantes: la Hematoxilina que tie selectivamente
los ncleos, el Orange G y la Eosina Alcohol 50 (EA50) que tien los citoplasmas. Aunque existen productos comerciales ya listos, muchos laboratorios compran los ingredientes y preparan sus reactivos (Anexo 01)

2.4.2. Pasos
Los pasos de la tincin estn entremezclados con soluciones que hidratan, deshidratan y enjuagan las clulas. La hidratacin antes de la inmersin en Hematoxilina puede ser gradual, usando alcohol en concentraciones decrecientes (80, 70,
50%) o abrupta, sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de
alcohol y el agua directamente. El enjuague se realiza con agua corriente y/o agua
destilada, pero siempre hay que verificar que el pH se encuentre entre 6,5 y 7. Se
identifican cuatro pasos principales:

a) Fijacin:
Se realiza inmediatamente despus de la toma de muestra. Tiene dos formas:
- Forma hmeda: Consiste en sumergir totalmente la lmina en un frasco de vidrio con alcohol corriente al 96% durante un tiempo de 15 a 20
minutos, retirar la lmina y dejar secar al aire. El alcohol debe ser preparado diariamente.
- Forma de cubierta: Consiste en la aplicacin de una mezcla de alcohol
y sustancias como el polietilenglicol y un bacteriosttico, los que forman
una pelcula delgada y protectora sobre las clulas; se debe mantener una
distancia aproximada de 25 a 30 cm. entre la lmina y el atomizador, dejando secar aproximadamente 7 minutos o el tiempo sugerido por el fabricante.

b) Tincin del ncleo:

La Hematoxilina es un colorante natural que tiene afinidad por la cromatina. Existen dos mtodos para teir el ncleo:
- Progresivo: Mtodo en el que se tie el ncleo con la intensidad del color deseado.

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- Regresivo: Mtodo en el que se sobretie el ncleo con una Hematoxilina no acidificada, removindose el exceso de tincin con cido clorhdrico diluido.
Despus de algunos minutos en hematoxilina las clulas son deshidratadas gradual
o abruptamente antes de efectuar las tinciones de contraste.

c) Tincin del citoplasma:

El Orange G es un colorante monocromtico que tie la queratina de un naranja
brillante y penetra rpidamente al citoplasma.
La queratina no se encuentra en condiciones normales en el epitelio
cervicovaginal, peo est presente en los carcinomas queratinizantes.
La Eosina A 50 es una tincin policroma compuesta de eosina, verde luz y caf
Bissmark. La Eosina tie el citoplasma de las clulas escamosas maduras, nucleolos y cilios. El verde luz colorea las clulas que son metablicamente activas, como las clulas parabasales, intermedias y columnares. Las clulas superficiales se
tien rosadas con la eosina y por ello se describen como eosinoflicas; las clulas
parabasales e intermedias se tien de verde azul, dependiendo de la tincin EA50
y se llaman cianoflicas.

d) Aclaramiento:
Es el paso final de la tincin y produce la transparencia celular. Se suele usar xilol
como solucin aclaradora.

2.4.3. Procedimiento
El mtodo a utilizar es el PAP modificado, que incluye 24 pasos que se presentan
en la tabla 04 y figura 02.
La batera de coloracin se ubicar en un lugar ventilado, lejos de exposicin solar
directa. Se recomienda que las cajas de coloracin sean de acero inoxidable o vidrio con tapa hermtica y capacidad para 60 lminas.
Todo el procedimiento se realizar bajo la campana de extraccin de gases y el responsable directo es el tecnlogo mdico o cito-tcnico entrenado para este fin.
Antes de iniciar el proceso hay que verificar que las lminas no tengan ms de 15
das de fijadas. Si esto sucediera, realizar un lavado con agua corriente o sumergir-

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las en etanol 96 durante una hora, seguido por un lavado de agua destilada para
retirar el fijador y obtener una buena coloracin.
Las lminas sern movilizadas utilizando una canastilla, la misma que se escurrir
en papel absorbente, cada vez que se pase de una caja de tincin a otra, para evitar
la dilucin de los colorantes o alteracin de los alcoholes, sin llegar al secado del
frotis, lo que causara una coloracin irregular. Es importante cuidar que las lminas no estn pegadas entre s y que sean totalmente cubiertas por los colorantes.
La inmersin de las lminas en las cajas de colorantes debe durar 1 2 segundos y
se efecta suavemente sin llegar a tocar la base de la caja, para que no se desprendan las clulas. Las cajas de colorantes se deben mantener tapadas el mayor tiempo posible durante el proceso de coloracin, y las lminas teidas permanecern
en una cubeta con xilol hasta el momento del montaje.

Figura 02: Pasos de la Tcnica de Papanicolaou Modificado

Extrado de: Manual de Procedimientos: Tincin e interpretacin de

la Muestra de Citologa Cervical. Centro Nacional de Equidad de
Gnero y Salud Reproductiva. Secretara de Salud. Mexico. 2006

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Tabla 04: Pasos de la Tcnica Papanicolaou Modificada

Pasos
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24

Proceso
Sumergir las lminas en Etanol 96 (retirar exceso fijacin)
Pasar la canastilla con lminas por agua corriente hasta que
sta aclare, luego dejar escurrir (hidratacin)
Sumergir las lminas en agua destilada
Sumergir las lminas en Hematoxilina
Pasar las canastilla con lminas por agua corriente hasta que
sta aclare, luego dejar escurrir
Sumergir las lminas en cido clorhdrico + etanol 96,
(fraccionamiento) ****
Sumergir las lminas en agua destilada,
Sumergir la canastilla con lminas en etanol 96
Sumergir la canastilla con lminas en etanol 96
Sumergir la canastilla con lminas en etanol 96
Sumergir la canastilla en Orange G y dejar escurrir
Sumergir la canastilla con lminas en etanol 96
Sumergir la canastilla con lminas en etanol 96
Sumergir la canastilla con lminas en etanol 96
Sumergir la canastilla en Eosina A 50 y dejar escurrir
Sumergir la canastilla con lminas en etanol 96
Sumergir la canastilla con lminas en alcohol etlico absoluto
Sumergir la canastilla con lminas en alcohol etlico absoluto
Sumergir la canastilla con lminas en alcohol etlico absoluto
Sumergir la canastilla en xilol
Sumergir la canastilla en xilol
Sumergir la canastilla en xilol y escurrir el excedente
Sumergir la canastilla en xilol
Sumergir la canastilla en xilol y escurrir el excedente

Inmersiones o
tiempo (min.)
10 inm*.
3 min**
10 inm
2 a 5 min***
3 min.
20 inm
10 inm
10 inm
10 inm
10 inm
1.5 a 6 min***
10 inm
10 inm
10 inm
1.5 6 min***
10 inm
10 inm
10 inm
10 inm
10 inm
10 inm
10 inm
10 inm
10 inm

* inm: inmersiones **min: minutos *** depende de la marca del colorante **** elimina HE sobrante

2.5. Montaje de las lminas

El montaje es la unin del portaobjetos con el cubreobjetos mediante resina sinttica con el fin de obtener una muestra cubierta y protegida contra el secado y arrugamiento del material celular; y sellada para evitar la oxidacin de la muestra.
La sustancia utilizada para el montaje debe tener un pH neutro, ser soluble en el
agente aclarante y tener un ndice de refraccin que coincida con la muestra y el
cubreobjeto, logrando una imagen lo ms transparente posible.

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Para realizar el montaje hay que revisar que la parte posterior de la lmina este seca; aplicar una gota de resina sobre el portaobjetos y colocar sobre ste el cubreobjetos. Tomar por el extremo esmerilado la lmina, apoyar el borde opuesto sobre
papel absorbente para que escurra y luego adosarla al cubreobjeto con resina. Cuidar que al realizar el montaje no se formen burbujas, ni se agregue resina en exceso.

2.6. Distribucin de las lminas

Deben distribuir las lminas teidas y montadas por orden numrico correlativo en
bandejas segn capacidad, evitando que se peguen entre s. Colocar junto a las
bandejas las solicitudes del examen citolgico siguiendo el mismo orden. Se ha
aceptado que pueden distribuirse hasta 56 lminas por cito-tecnlogo por da.

2.7. Problemas a presentarse en esta etapa (Anexo 02)

2.7.1. Tincin Inadecuada

Se puede deber a:

a) Coloracin nuclear demasiado plida:

Lquido de tincin deficiente.

Sequedad antes de la fijacin.
Tiempo insuficiente para la fijacin.
Tiempo insuficiente para la coloracin del ncleo.
Deterioro de la hematoxilina por dilucin.
Acido clorhdrico muy concentrado
Exceso de fraccionamiento con alcohol de cido clorhdrico.
Lavado en agua corriente con mucho cloro (blanqueacin nuclear)
Mezcla con el lquido de citospray para la fijacin.

b) Coloracin nuclear muy oscura

Uso de alcohol de alta concentracin durante la fijacin.

Exceso de tiempo para la tincin del ncleo.
Exceso de hematoxilina (falta de lavado).
Falta de fraccionamiento.
Frotis grueso o hemorrgico

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c) Coloracin plida del citoplasma

Lquidos de tincin deficientes.

Deterioro del lquido de tincin por dilucin.
Tiempo insuficiente de coloracin.
Exceso de fraccionamiento.
Exceso de tiempo en alcohol (despus de OG y EA).
Deshidratacin y aclaramiento inadecuado.
Lavado insuficiente.

d) Coloracin muy oscura del citoplasma

Exceso del tiempo de tincin.
Falta de fraccionamiento.
Concentracin de los colorantes.

e) Coloracin inadecuada del citoplasma (rosado naranja tenue)

Sequedad antes de la fijacin.
Tiempo Insuficiente para la fijacin.
Deficiencia del lquido de EA-50.

f) Citoplasma no transparente
Deshidratacin inadecuada (alcohol mezclado con agua)
Aclaracin inadecuada (xilol de baja pureza
Material inadecuado para el montaje.

2.7.2. Montaje Inadecuado

a) Espesamiento del medio de montaje
Evaporacin del solvente del medio de montaje
Material inadecuado

b) Burbujas en lmina
Tcnica deficiente de montaje.

c) Coloracin caf del ncleo o citoplasma

Sequedad del frotis antes del montaje con resina.

d) Hongos en lminas
Material contaminado.

23

2.7.3. Contaminacin cruzada de lminas

Desprendimiento de clulas de un frotis para adherirse a otro:
Filtracin inadecuada de los colorantes.
Agitacin brusca de las canastillas

2.8. Seguridad Laboral

2.8.1. Riesgos Biolgicos

Los frotis contienen material biolgico y todo material de este tipo debe ser tratado con las precauciones estndares, de acuerdo a los niveles de bioseguridad, para
evitar enfermedades infecciosas.

2.8.2. Riesgos Qumicos

En el paso de procesamiento de muestras el cito-tcnico y/o cito-tecnlogo estn
expuestos a sustancias qumicas riesgosas como por ejemplo xilol. Esto obliga al
laboratorio a contar con todos los materiales necesarios (campana de extraccin,
mascarillas, guantes, mandilones, etc) para evitar daar la salud de los trabajadores. Los solventes utilizados en la batera de coloracin no deben arrojarse al alcantarillado pblico porque contaminan el medio ambiente.

2.8.3. Incendios
La sala de procesamiento de muestras contiene lquidos inflamables que representan un riesgo de incendio, por lo tanto ste debe ser un ambiente en el que no se
fume y en el que estn fcilmente ubicables los extintores y las salidas de emergencia.

24

3. Lectura e interpretacin de las muestras de citologa

cervical
3.1. Objetivo
Establecer cada una de las actividades que debe realizar el citotecnlogo, citlogo
o citopatlogo, para la lectura e interpretacin de muestras de citologa exfoliativa
crvicouterina.

3.2. Definicin:
Este paso consiste en proporcionar una interpretacin o resultado citolgico preliminar (screening) y/o definitivo (citopatlogo), que distinga entre los frotis inadecuados, insatisfactorios, negativos y los anormales, mediante la observacin al microscopio de las lminas procesadas.
El resultado citolgico incluye los siguientes aspectos:
a) Validacin de la calidad de la muestra.
b) Deteccin de cambios premalignos.
c) Deteccin de malignidad.
d) Otros: Diagnstico de infecciones y organismos asociados; y valoracin hormonal.
Este paso finaliza de manera exitosa: si se produce un resultado citolgico exacto
y oportuno, expresado de acuerdo con la clasificacin diagnstica vigente y correlacionado con lo antecedentes de la paciente. El laboratorio de citologa debe responsabilizarse del resultado final o interpretacin preliminar y retroalimentar sobre la calidad de la toma de la muestra a las unidades mdicas, para mejorar el
proceso.

3.2.1. Ubicacin Fsica

El rea de lectura debe ser un ambiente ventilado muy iluminado, que cuente con
mesas de tamao adecuado para poner y operar el microscopio, colocar la charola
de lminas y poder registrar los resultados en los formatos de solicitud.

25

3.2.2. Materiales
Microscopios con oculares 10X de campo amplio y objetivos de 10x 20x 40x y
100x. El cito-patlogo debe tener por lo menos un microscopio binocular para
apoyar la educacin continua. Adems se necesitan lpices para registrar el citodiagnstico en la solicitud y plumones punta fina de tinta indeleble para marcar las
lminas positivas o sospechosas.

3.3. Proceso
Al iniciar la jornada, se debe recibir la charola de lminas con sus respectivas solicitudes. Se realizar la revisin de las lminas previas en los casos que ameriten,
para realizar la correlacin y retroalimentacin. Para el resultado final se utilazar
el Sistema Bethesda el cual se desarrollar en el capitulo IV. Los pasos del proceso se resumen en la tabla 05.

Tabla 05: Pasos a seguir para iniciar la lectura de las lminas

Proceso
1
2
3
4
5
6
7
8

9
10

Preparar el microscopio para iniciar la observacin y colocar las lminas sobre la platina
del mismo.
Revisar cada lmina sistemticamente con un barrido de forma lineal sobre todo el
extendido, aumentando a 40x en reas detectadas como anormales. (Anexo III)
Leer las laminas de acuerdo al orden de sus nmeros asignados, para disminuir la
probabilidad de errores de identificacin.
Con un plumn de tinta indeleble marcar con un punto (puntear) o rodear con un circulo
el lugar de la lmina donde se observan clulas alteradas.
Leer al menos nueve laminillas por hora, lo que equivale a leer ocho mil citologas por ao,
en promedio 56 lminas /da. Cada lmina se debe leer en un tiempo entre 5 a 8 minutos.
Iniciar evaluando las caractersticas generales del frotis, como: coloracin, transparencia y
cantidad de material celular a travs del objetivo panormico.
Valorar si la muestra es adecuada o inadecuada.
Identificar los cambios morfolgicos celulares, considerando:
- Clulas del epitelio endocervical y exocervical.
- Clulas con alteraciones de tipo inflamatorio y cambios secundarios.
- Agentes patgenos.
- Cambios sugerentes de infeccin por virus del papiloma humano.
- Clulas con alteraciones correspondientes a lesin de alto o bajo grado.
- Clulas con alteraciones correspondientes a malignidad.
Registrar los hallazgos citolgicos en cada uno de los rubros correspondientes del Formato
de Reporte de Resultados. (Anexo IV)
Todas aquellas lminas positivas debern registrarse en una libreta y archivarse por
separado, para ser revisadas y analizadas en las reuniones de retroalimentacin.

26

4. Resultados Finales
4.1. Objetivo
Establecer cada una de las actividades que debe realizar el personal administrativo, para transcribir, registrar y entregar los resultados finales del estudio de las
muestras de citologa exfoliativa crvico uterina.

4.2. Definicin
Este paso consiste en: a) registrar los citodiagnsticos de las lminas en el sistema
de informacin del laboratorio, ya sea manual o computarizado; b) generar los informes desagregados de resultados de los exmenes de Papanicolau correspondientes y c) generar los informes consolidados pertinentes para retroalimentar el
proceso de citodiagnstico. En la etapa de generar los informes desagregados de
resultados de los exmenes de PAP, existen dos modalidades que suelen combinar
informes individuales y listados de resultados individuales de las pacientes.
Este paso finaliza exitosamente s:
a) Los resultados PAP contenidos en la solicitud son ingresados al sistema de informacin de una manera vlida, confiable, oportuna, preservando la identidad de la unidad muestra-solicitud-paciente y registrando los
profesionales y la fecha que generaron el diagnstico.
b) Los informes desagregados de resultados PAP se producen oportunamente en un formato estandarizado que conservan la identidad de la unidad muestra-solicitud-paciente y que llegan en el tiempo justo al usuario,
mdico y/o centro de salud referente.
c) La informacin diagnstica se maneja en forma segura y confidencial
respetando los derechos de los pacientes.

4.3 Problemas a presentarse en esta etapa

4.3.1. Error de digitacin

Este es un error con graves consecuencias. Para prevenirlo al mximo es importante que el informe trascrito en la solicitud sea claro y legible, el digitador trabaje

27

cmodamente, el programa de computacin tenga controles de entrada de datos de

modo que slo acepte cdigos preestablecidos y se verifique la redaccin final.

4.3.2. Prdida de informes de resultados durante el tipeo

Se produce, cuando hay desorden en el manejo de los informes de resultados desagregados, ya sea de informes individuales o de listados. Significa generar una
nueva copia del informe, prdida de tiempo y recursos y una demora en la entrega
de resultados.

4.3.3. Demora o simplemente ausencia de produccin de informes

de resultados consolidados
Esto genera una alteracin en el proceso de retroalimentacin cito-diagnstica.

28

CAPITULO IV.
SISTEMA BETHESDA
1. GENERALIDADES
El sistema de Bethesda para informar la citologa cervical fue desarrollado por un
grupo de expertos en citologa, histopatologa y ginecologa en 1988 y ha sido objeto de dos revisiones posteriores (1991 y 2001).
Este sistema se realiz con el propsito de informar la citologa cervical de una
manera clara, proporcionar informacin relevante al mdico y fomentar la comunicacin eficaz entre el mdico y el laboratorio. En l se introduce una nueva nomenclatura que en contraste con las nomenclaturas tradicionales (NIC o displasias), hace una interpretacin descriptiva de los hallazgos y emplea el trmino
citologa cervical en vez de citologa cervico vaginal (anexo III)
El Sistema de Bethesda vigente es el del ao 2001, y define tres puntos a evaluar:
calidad del espcimen, clasificacin general (opcional) e interpretacin de resultados.

2. DESCRIPCIN
2.1. Calidad de la Muestra
Es uno de los indicadores ms importantes en la evaluacin de la citologa y permite brindar informacin al mdico remitente sobre el material que ha obtenido.
Las categoras que se han utilizado son:
- Adecuada: Aquella lmina que contiene alrededor de 8000 a 12000 clulas epiteliales escamosas. Es importante informar si est presente el componente de la
zona de transformacin, es decir, si se observan al menos 10 clulas endocervicales bien conservadas o clulas escamosas metaplsicas bien identificadas. Tambin debe considerarse adecuada cualquier muestra con clulas anormales, es decir, lminas con escaso contenido celular, exceso de sangre o abundante material
inflamatorio, pero que contienen clulas alteradas, las mismas que se reportarn
como atpicas o positivas segn sea el caso

29

- Inadecuada: Aquella lmina en la que se observa necrosis, artificios, sangre, inflamacin o mala fijacin en ms del 75% de la muestra. Tambin se incluyen en
esta categora la muestra que no tiene solicitud, lmina no rotulada y lmina rota
imposible de reparar.

2.2. Clasificacin General:

Es el componente opcional de la clasificacin del Sistema Bethesda Incluye tres
categoras
- Negativo para Lesin Intraepitelial o Malignidad: Cuando existen cambios
celulares benignos y no se identifica ninguna anormalidad de clulas epiteliales.
- Anormalidades en Clulas Epiteliales: Cuando se identifican alteraciones celulares de lesiones premalignas o malignas en las clulas escamosas o en las clulas
glandulares.
- Otros: Ausencia de anormalidades morfolgicas en las clulas per se, sin embargo, puede existir indicadores de incremento de riesgo, por ejemplo presencia
de clulas endometriales en mujeres mayores de 40 aos.

2.3. Interpretacin de resultados:

2.3.1. Negativo para Lesin Intraepitelial o Malignidad.

a) Microorganismos:

Tricomonas vaginalis
Hongos morfolgicamente compatibles con especies de Candida
Cambios en la flora sugestiva de vaginosis bacteriana
Bacterias morfolgicamente compatibles con especies de Actinomyces
Cambios morfolgicamente compatibles con infeccin por Herpes virus

b) Cambios reactivos secundarios a:

Inflamacin
Radiacin
Dispositivo intrauterino (DIU)
Regeneracin
Atrofia

30

Status post-histerectoma

2.3.2. Anormalidades en Clulas Epiteliales (Anexo V).

a) Anormalidades de Clulas Escamosas:

Clulas Escamosas Atpicas (ASC)

En esta categora se consideran los cambios celulares que pueden relacionarse
con varios factores etiolgicos, pero en los que no se logra determinar una
causa definitiva sobre la base de los hallazgos citolgicos. Se incluyen dos categorias, cuyos criterios diagnsticos se resumen en la tabla 5.
o
o

De significado no determinado (ASC-US)

No se puede excluir una lesin de alto grado (ASC-H)

Tabla 05: Diferencias citomorfolgicas entre ASC_US y ASC-H

Definicin
Descamacin
Aspecto
Aumento del tamao
nuclear
Relacin ncleo
citoplasma
Membrana nuclear
Cromatina
Hipercromasia nuclear
Citoplasma
Pleomorfismo nuclear

ASC-US

ASC-H

Clulas atpicas sugestivas

de LEIBG
Clulas aisladas

Clulas atpicas que no

excluyen LEIAG
Clulas aisladas y en
pequeos grupos
Inmaduro
3 veces mayor en relacin a
clula intermedia)

Maduro
2.5-3 veces mayor (en
relacin a clula
intermedia)
Ligeramente aumentada
Uniforme o ligeramente
irregular
Fina y bien distribuda
Leve
Halos mal definidos y sin
condensacin perifrica
Leve

Moderadamente aumentada
Uniforme o ligeramente
irregular
Granular fina
Moderada
Generalmente denso
Moderado

Extraido de: Alonso de Ruiz P. Cancer Cervico Uterino: diagnstico, prevencin y control.
Editorial Mdica Panamericana. Mexico 2006.

31

Lesin Escamosa Intraepitelial (LEI)

Se incluyen dos categoras, basndose en los criterios clnicos de decisin teraputica (seguimiento o colposcopa) y en que un menor numero de categoras disminuye la posibilidad de la variabilidad entre observadores en la interpretacin de resultados. Las dos categoras son:

Lesin Intraepitelial Escamosa de Bajo grado (LIEBG), que incluye infeccin por HPV y NIC I (displasia leve). Los criterios citolgicos son:
- Clulas agrupadas o aisladas
- Afectan clulas superficiales o maduras
- Agrandamiento nuclear, por lo menos tres veces en relacin con clula intermedia
- Incremento en la relacin ncleo/citoplasma
- Moderada variacin en forma nuclear
- Binucleacin o multinucleacin
- Hipercromasia, concromatina uniformemente distribuda
- Nucleolo raramente presente
- Membrana nuclear levemente irregular

Lesin Intraepitelial Escamosa de Alto Grado (LIEAG), que incluye NIC

II y NIC III (displasia moderada, displasia severa y carcinoma in situ). ).
Los criterios citolgicos son:
- Clulas agrupadas en forma de mantos, sincicios hileras o aisladas
- En general el tamao celular es menor que en las LEIBG
- Marcado agrandamiento nuclear,, con disminucin del rea citoplsmatica
- Mayor incremento en la relacin ncleo/citoplasma
- Marcada hipercromasia, con cromatina granular, gruesa y de distribucin irregular
- Nucleolo generalmente ausente
- Bordes nucleares irregulares, algunas veces con identaciones

Carcinoma de clulas escamosas:

Tumor maligno de clulas escamosas. Puede ser queratinizante y no queratinizante, aunque esta diferenciacin no es necesaria para el Sistema Bethesda.
Los criterios citomorflogicos son:

32

Tabla 06: Diferencias citomorfolgicas entre Carcinoma escamoso queratinizante y no queratinizante

Carcinoma Escamoso No
Queratinizante
Clulas aisladas o en
sincitios
Semejante a LIEAG
Variable
Aumentada

Carcinoma Escamoso
Queratinizante
Clulas aisladas o formando
grupos
Variable
Variable
Aumentada

Macronuclolo
Cromatina
Citoplasma

Uniforme o ligeramente
irregular
Prominente, presente
Irregular, gruesa
Generalmente basfilo

Uniforme o ligeramente
irregular
Muy ocasional
Irregular, gruesa
Denso, eosinoflico

Diatesis tumoral

Presente

Presente

Descamacin
Aspecto
Nucleolo
Relacin ncleo citoplasma
Membrana nuclear

b) Anormalidad de Clulas Glandulares

Clulas Glandulares Atpicas (AGC). Pueden ser:

o
o
o

AGC Endocervicales
AGC Endometriales
AGC NOS

Nota: Especificar si son sugestivas de neoplasia

Los criterios citolgicos para esta categora son:
- Grupos conformados por cinco a diez clulas (favorece endometrio) o
distribuidos en lminas, hileras o pseudorosetas (favorece endocervix)
- Escaso agrandamiento nuclear
- Hipercromasia leve
- Pequeos nucleolos
- Escaso citoplasma, a veces vacuolado
- Bordes celulares mal definidos
- Ocasionales figuras mitticas

Adenocarcinoma endocervical in situ (AIS):

Lesin glandular endocervical de alto grado con ausencia de invasin que tiene como caractersticas:citomorfolgicas:

33

Prdida de la disposicin normal en panal de abeja debido a la sobreposicin y agrandamiento nuclear

Tiras celulares aisladas, que se desprenden de conglomerados celulares
Rosetas,
Pseudoestratificacin nuclear
Empalizadas nucleares en los bordes de los grupos
Formaciones glandulares
Emplumado (desflecado)
Ncleos grandes e hipercromticos
Nucleolos pequeos
Mitosis y cuerpos apoptsicos
Fondo limpio

Adenocarcinoma endocervical:
Los criterios citolgicos se superponen a los descritos por AIS, pero que pueden presentar caractersticas de invasin. Se deben considerar:
- Abundancia de clulas cilndricas anmalas
- Presencia de clulas aisladas, lminas en dos tres dimensiones y agregados sincitiales.
- Ncleos pleomrficos, hipertrofiados
- Cromatina irregular
- Pueden haber macronuclolos
- Citoplasma finamente vacuolado
- Ditesis tumoral necrtica

Adenocarcinoma endometrial:
Se consideran criterios de esta entidad a:
- Tpicamente las clulas estn aisladas o en grupos laxos pequeos
- En las formas bien diferenciadas ncleo ligeramente aumentado de tamao, pero cuanto mas alto es el grado tumoral, mayor es la hipertrofia nuclear
- Perdida de la polaridad nuclear
- En los tumores de alto grado mayor es la hipercromasia nuclear, distribucin irregular de cromatina y reas de paracromatina. Asimismo el nucleolo se vuelve prominente
- Citoplasma escaso, cianfilo y a menudo vacuolado
- Diatesis tumoral finamente granular

Adenocarcinoma extrauterino:
Presencia de clulas diagnsticas de adenocarcinoma que tienen fondo limpio
y transparente.

34

CAPITULO V.
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
1. Objetivo
Establecer cada una de las actividades que debe realizar el Mdico patlogo o cito-patlogo, para el control de calidad interno de las muestras de Citologa cervical.

2. Definicin
Este paso consiste en observar una o ms veces un conjunto de lminas que ya tienen un resultado prelimar y dar un resultado definitivo con el objetivo de reducir
el error de interpretacin. Esta etapa ser exitosa si:
a) Se mantiene la identidad de la muestrasolicitud, al registrar el resultado definitivo en la solicitud respectiva, identificndose al responsable del
diagnstico
b) Se produce un resultado definitivo correcto, oportuno, usando los antecedentes y la historia citolgica previa de la paciente
c) Se comunica a los cito-tecnlogos las discrepancias encontradas entre
el resultado preliminar y el definitivo, y se realiza una revisin conjunta o
retroalimentacin para mejorar las habilidades diagnsticas de los citotecnlogos
El control de calidad interno se puede realizar a travs de los siguientes mecanismos:
a) Supervisin directa: Se realizar por parte de los citotecnlogos efectuando la revisin de todos aquellos casos de citologas dudosas y positivas que existan. Deber hacerse el mismo da de la lectura rutinaria de las
lminas.
b) Evaluacin de la consistencia del resultado: Se realizar por el personal que efecta el control de calidad, cuando en el total de lminas se
tenga una proporcin grande de resultados anormales. Esta evaluacin se
efecta mediante la comparacin de los resultados dados a la o a las
lminas por dos o ms individuos o por el mismo citotecnlogo, en ocasiones diferentes.

35

c) Monitoreo estadstico del resultado: ste es un procedimiento sencillo y poco costoso, y se hace confrontando el porcentaje de casos sospechosos y positivos diagnosticados por un citotecnlogo, con el porcentaje
promedio del mismo tipo de diagnstico en el volumen general del laboratorio.
d) Revisin aleatoria de las muestras negativas: Revisar el 10% de las
lminas negativas, seleccionadas aleatoriamente.
e) Revisin absoluta de las muestras positivas: Revisar el 100% de las
lminas positivas..
f) Correlacin cito-histolgica. En este procedimiento el patlogo deber validar o invalidar el resultado emitido por el citotecnlogo. Posteriormente deben realizarse reuniones sobre correlacin cito-histolgica.
g) Revisin rpida: Se aplica a todos los casos negativos. El procedimiento se efecta recorriendo toda la superficie de la lmina utilizando
un recorrido estndar.en un tiempo de 30 a 50 segundos y utilizando el
objetivo de 10x.

36

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1.- Alonso de Ruiz P. Cancer Cervico Uterino: diagnstico, prevencin y control. Editorial
Mdica Panamericana. Mexico 2006.
2.- Centro Nacional de Equidad de Gnero y Salud Reproductiva. Secretara de Salud. Manual de
Procedimientos. Tincin e interpretacin de la Muestra de Citologa Cervical. Primera
edicin. Mexico 2006.
3.- Salomon D y Nayar Rita. El Sistema Bethesda para informar la citologa cervical. Editorial
Mdica Panamericana. Argentina 2005.
4.- Organizacin Panamericana de la Salud. Manual de procedimientos del laboratorio de
citologa. OPS.Washington DC 2002.
5.- Takahashi. Atlas, Color Citologa del Cncer, Takahashi. 2. Edicin 1982/1985. Buenos
Aires, Argentina: Ed. Panamericana.
6.- Fernando E. de la Torre Rendn*Lesin premaligna escamosa del cuello uterino, un enfoque
actualizado Patologa 2008;46(4):332-42
7.- Varela Martnez S. Citologa cervical. Rev Med Hondur 2005; 3: 131-136.
8.- Olivares K y Alonso de Ruiz P. Citologa cervical. GAMO 2006; 5(4): 94-98.
9. Ferlay J, Bray P, Pisani P and Parkin DM. GLOBOCAN 2002. Cancer incidence, mortality in
prevalence worldwide. IARC. Cancer Base N5, version 2.0. IARC Press. Lyon 2004.
10.- Curso Internacional de Prevencin y Control de Cancer de Cuello Uterino. Segunda Edicin.
Mexico 2008.

37

ANEXO I: TINCION PAP: PREPARACION DE LOS

COLORANTES BASICOS
1.- HEMATOXILINA DE HARRIS
Es un colorante cido, muy estable que tiene una duracin aproximada de 6-12
meses. Los ingredientes varan segn la formula a utilizar y el mtodo de tincin
nuclear seleccionado (para este manual el tipo regresivo)
Reactivos (para 100 ml.):

Hematoxilina cristales oscuros

Etanol 100% (alcohol absoluto)
Sulfato de aluminio y amonio
Agua destilada
Oxido de mercurio (HgO)

5
50
100
1000
2,5

gr.
ml.
gr.
ml
gr.

Procedimiento:

Disolver los cristales de Hematoxilina en etanol.

Calentar el agua destilada y disolver el sulfato de amonio y aluminio.
Aadir la solucin de Hematoxilina a la solucin de sulfato.
Hacer que la mezcla anterior alcance la temperatura de 95C.
Retirar de la llama, aadir lentamente y agitando el xido mercrico.
Enfriar en bao mara.
Filtrar y guardar la solucin en frascos oscuros bien tapado.

2.- ORANGE G
Reactivos (para 100 ml.):

Cristales de Orange G
Etanol 95%
Agua destilada
Acido fosfotngstico

10
1000
100
0,15

gr.
ml.
ml
gr.

Procedimiento:
Solucin Madre 1 (10%): Disolver 10 gr. de cristales de Orange G en 100
ml. de agua destilada. Agitar bien y dejar en reposo durante una semana
Solucin Madre 2 (0,5%): Tomar 50 ml. de la Solucin Madre 1 y aadir
etanol al 95% hasta un volumen de 1000 ml.
Colorante final: Tomar 1000 ml. de la Solucin Madre 2 y aadir 0,15 gr.
de cido fosfotngstico. Mezclar bien. Conservar en frasco oscuro bien
tapado.

38

3.- EOSINA ALCOHOL 50 (EA50)

Reactivos (para 2000 ml.):

Eosina Y (amarillenta)
Pardo Bismarck Y (amarillento)
Verde luz SF amarillento
Agua destilada
Etanol al 95%
Acido fosfotngfstico
Carbonato de litio saturado

10
10
10
300
2000
4
20

gr.
gr.
gr.
ml.
ml.
gr.
gotas

Procedimiento:
Soluciones acuosas madres: Preparar soluciones al 10% separadas de
cada uno de los colorantes del siguiente modo:
a) Disolver 10 gr. de Eosina Y en 100 ml. de agua destilada.
b) Disolver 10 gr. de Pardo Bismarck Y en 100 ml. de agua destilada.
c) Disolver 10 gr. de Verde luz SF en 100 ml. de agua destilada.
Colorante Final: Soluciones alcoholicas preparadas en base a las
soluciones acuosas
a) Tomar 50 ml de solucin madre de Eosina Y, 10 ml de soplucin
madre de Pardo Bismarck Y y 12,5 ml. de solucin madre de Verde Luz
SF y aadir etanol al 95% hasta obtener un volumen de la mezcla de3
2000ml.
b) Aadir 4 gr de cido fosfotngstico y 20 gotas de carbonato de litio
saturada. Mezclar bien y guardar la solucin en frascos oscuros bien
tapados.
4.-ACIDO CLORHIDRICO AL 0,5%
Reactivos (Solucin 1N):
Acido clorhdrico
Agua destilada (completar)

60
1000

ml.
ml.

Procedimiento:
Agregar 60 ml. de cido clorhdrico 1N, a una probeta graduada de 1000
ml. con 700 ml. de agua destilada aproximadamente, deje enfriar y
agregue agua destilada adicional a la probeta para completar un volumen
de 1000 ml.

39

ANEXO II: ERRORES EN LA TINCION Y MONTAJE

DE MUESTRAS CERVICOUTERINAS

FIG. 3: PROBLEMAS EN LA TINCION: A.- Coloracin nuclear demasiado

plida; B.- Coloracin nuclear muy oscura; C.- Coloracin plida del citoplasma;
D.- Coloracin muy oscura del citoplasma; E.- Coloracin inadecuada del
citoplasma; F.- Citoplasma no transparente.
Fuente: Curso internacional de Control y Prevencion de CaCu. Mexico 2008.

40

ANEXO III: FORMA DE EXAMINAR LOS EXTENDIDOS

CERVICOUTERINOS

Revisar cada lmina sistemticamente con un barrido de forma lineal sobre

toda la superficie, para evitar dejar reas sin leer, aumentando a 40x las
reas detectadas como anormales.

Para el control de calidad observar con el objetivo de 10x la lmina con

movimientos ordenados en zigzag horizontales o verticales.

Extrado de: Centro Nacional de Equidad de Gnero y Salud Reproductiva.

Secretara de Salud. Manual de Procedimientos. Tincin e interpretacin de la
Muestra de Citologa Cervical. Mxico. Primera edicin. 2006

41

ANEXO IV: FORMATO DE REPORTE DE RESULTADOS

(CASO POSITIVO)

42

ANEXO V: ESQUEMA DE LAS CLASIFICACIONES

CITOLGICAS

Extraido de: Olivares K y Alonso de Ruiz P. Citologa cervical. GAMO 2006; 5(4): 94-98.

43

ANEXO VI: EXTENDIDOS CITOLGICOS CERVICALES

POSITIVOS

ASC-US

ASC-H

LIE BG

LIE AG

LIE AG: CIS

Servicio de Citologa INEN. Lima Per.

44

Servicio de Citologa INEN. Lima Per 2009.