Universidad Nacional San Luis

Gonzaga de Ica

Curso: Anlisis Bioqumicos

Facultad de Farmacia Clnicos
y Bioqumica
II

MEDIOS DE CULTIVO Y
ESTERELIZACION

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Y ESTERILIZACION

2015
Alumna: Amao
Canchari Yanina
Ciclo: X

Objetivos:

Que el alumno
aprenda a:

Conocer, diferenciar, clasificar y preparar (pesada, preparacin esterilizacin y conservacin) los

diferentes medios de cultivo utilizados en el laboratorio de microbiologa.

FUNDAMENTOS TERICOS

Medios de Cultivo

Gran parte de la microbiologa depende de la capacidad de cultivar y mantener microorganismos en un

laboratorio, y esto slo es posible si se dispone de los medios de cultivo adecuados.

Un medio de cultivo es un sustrato o solucin de nutrientes, en los que crecen y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar las diferentes especies bacterianas, proceder a su
identificacin y llevar a cabo estudios complementarios.
Los medios especiales son imprescindibles para aislar e identificar los microorganismos, evaluar la
sensibilidad a los antibiticos, analizar agua y alimentos, en microbiologa industrial y otras actividades.
Aunque todos los microorganismos
necesitan fuentes de
energa, carbono, nitrgeno, fsforo, azufre y
varios minerales, la
composicin precisa de un medio adecuado
depender
de
la
especie que se quiere cultivar, porque las
necesidades
nutricionales varan considerablemente. El
conocimiento
del
hbitat normal de un microorganismo es a
menudo til para elegir un
medio de cultivo apropiado, porque sus necesidades
de nutrientes reflejan su
ambiente natural. Un medio se utiliza frecuentemente
para seleccionar y cultivar
microorganismos especficos o para facilitar la
identificacin de una especie
en particular. En estos casos, la funcin del medio estar tambin determinada por su composicin.
Agentes gelificantes.

El agar es un polmero sulfatado de azcares, obtenido de algas marinas, compuesto principalmente

por D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa y cido D-glucurnico. Es un buen agente solidificador porque, una vez
que se funde en agua hirviendo, puede enfriarse hasta una temperatura de 40 a 42 c, sin endurecerse, y no
fundir de nuevo hasta que no se alcance una temperatura de 80 a 90C. Es tambin excelente porque la
mayora de los microorganismos no pueden degradarlo. Puede utilizarse para diferentes fines, aunque los ms
importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriolgico, agares purificados y agarosa,
utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce se utiliza en
trabajo microbiolgico, por lo que es importante la ausencia de metales txicos.

La gelatina es una protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada
por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque su punto de fusin es bajo (licua a
temperatura ambiente) razn por la que no puede utilizarse para cultivos a 37C, que es la temperatura ptima
de crecimiento para muchos microorganismos.

Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los ms importantes son
aquellos que se basan en:

1. Segn su consistencia
Medios
Son
los
en este estado,
por ello caldos.
nutrientes antes
adicin de algn
mantener el pH
utiliza

Consistencia

Lquidos
Slidos
Semislido
Complejos

Composicin

Sintticos

Lquidos.
que se presentan
denominndose
Contienen
los
citados,
con
tampn, capaz de
adecuado.
Se

Semisintticos

Enriquecimiento o Multiplicacin
Selectivos o Inhibidores
Enriquecidos
Diferenciales
Utilizacin o funcin

Identificacin
Transporte

fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana de una determinada

concentracin.
Ejemplos: caldo nutritivo, caldo tioglicolato, agua peptonada, etc.

Medios Slidos.
Se prepara aadiendo un agente gelificante a un medio lquido determinado. Los ms usados son
gelatina y agar.
Este conjunto, convenientemente esterilizado, se vierte en una placa de Petri o en tubos. Las exigencias
nutritivas y las condiciones fsico-qumicas son similares a las de los medios lquidos. Pero, a diferencia de ellos,
presentan la posibilidad de obtener colonias aisladas, siempre que la cantidad de inculo est suficientemente
diluida. En este caso se puede observar la existencia de colonias separadas unas de otras, y cada una
constituye un clon (conjunto de bacterias que provienen de una clula madre, con el mismo patrimonio
hereditario y las mismas caractersticas fisiolgicas).
Ej.: agar nutritivo, agar EMB, CLDE y todos los medios de aislamiento primario y de identificacin.

Medios Semislidos.
Se preparan a partir de medios lquidos, agregando un agente solidificante en una proporcin menor que
para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias.
Ej.: agar cepa, SIM, medios base para utilizacin de aminocidos.

2. Segn su composicin.
Medios complejos.
Son aquellos que contienen ingredientes cuya composicin no es exactamente definida, y por
consiguiente no es rigurosamente constante. Adems, no se conoce exactamente la proporcin de cada uno de
sus componentes. Esto tiene ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproducibilidad
no podr ser exacta. En la prctica estos medios dan excelentes resultados y son los ms empleados.
Ejemplo: caldo nutritivo.
Medios Sintticos
Son aquellos que poseen exclusivamente componentes qumicos definidos (se conocen todos los
componentes) disueltos en agua destilada, donde la proporcin de cada uno de sus componentes es conocida
exactamente. Entre ellos se encuentran los medios mnimos, pues en ellos se intenta comprobar el crecimiento
de una bacteria determinada, con muy pocos nutrientes. Los medios definidos son ampliamente usados en
investigacin, pues a menudo se quiere conocer qu est metabolizando el microorganismo experimental.
Ejemplos: medio basal de sales y una fuente de carbono determinada.
Medios Semisintticos.
Cuando alguno de sus componentes no tiene composicin definida. En estos casos, se aaden factores de
crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo, extracto de levaduras, peptona
cono fuente de nitrgeno, glucosa como fuente de carbono.
3. Segn su utilizacin o funcin.
Medios de Enriquecimiento.
Se basan en la libre competencia por los sustratos. Son siempre lquidos que favorecen o permiten la
multiplicacin de unas bacterias, inhibiendo parcialmente la de otras. Pueden ser: de enriquecimiento
propiamente dichos, que se basan en las propiedades metablicas del microorganismo, o de
enriquecimiento selectivo, en cuyo caso se agrega un agente de seleccin que puede ser, un colorante, un
antibitico, etc. Este agente de seleccin no favorece el desarrollo del microorganismo a enriquecer, sino que
inhibe a la flora acompaante.
Ejemplos:

agua peptonada alcalina, se utiliza para V cholera (donde el pH alcalino inhibe a todas las
enterobacterias menos al Vibrio)
caldo selenito, acta inhibiendo el desarrollo de casi todas las enterobacterias menos de Salmonella y
Shigella.
caldo tioglicolato
caldo infusin cerebro corazn (BHI)

Medios Selectivos (o Inhibidores)

Pueden ser slidos o lquidos, a los que se les agrega uno o ms agentes de seleccin. Favorecen el
crecimiento de microorganismos particulares, en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones
fsicas del medio o aadiendo compuestos qumicos, que sean nocivos para las bacterias cuyo crecimiento no
interesa. Los medios inhibidores pueden considerarse una variante ms restrictiva de los medios selectivos. Las
posibilidades de seleccin son infinitas y existen decenas de medios selectivos especiales disponibles.
Ejemplos:
-

Agar Endo, eosina azul de metileno (EMB o Levine), agar MacConkey. (Las sales biliares o colorantes como la
fucsina bsica y el cristal violeta, componentes de estos medios, favorecen el crecimiento de bacterias
gramnegativas, al inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas).
Agar salmonella-shigella (SS): medio selectivo para recuperar Salmonella spp y Shigella spp. (Las sales
biliares, el citrato de sodio y el verde brillante son inhibidores de los grampositivos y de algunos
gramnegativos. Las posibles colonias de Shigella aparecen amarillas y las posibles de Salmonella aparecen
negras).
Agar Tayer Martin: el medio base es agar chocolate con agregado de antibiticos para inhibir el desarrollo de
bacterias contaminantes:
- trimetroprima para inhibir Proteus spp y otros gramnegativos,
- vancomicina para inhibir grampositivos y
- nistatina para inhibir levaduras.
Medios Diferenciales.
Son siempre slidos y se utilizan para diferenciar colonias. Son medios que diferencian entre grupos
distintos de bacterias e incluso permiten una identificacin tentativa segn las caractersticas biolgicas del
microorganismo. A estos medios se les agrega, por ejemplo, un indicador de pH que permite diferenciar a
microorganismos que fermentan un determinado hidrato de carbono.
Ejemplos:
-

Eosina azul de metileno (EMB- Levine): permite diferenciar bacilos gram negativos fermentadores y no
fermentadores de lactosa. Las bacterias no fermentadoras dan colonias transparentes y las
fermentadoras rosa o rojas, y E coli da colonias con brillo verde metlico. Estas coloraciones son
producidas por la presencia del indicador de pH eosina amarilla y del colorante azul de metileno (ste
inhibe el desarrollo de la mayora de los gram positivos y junto a la eosina sirve como indicador de
fermentacin ya que a pH cido los colorantes precipitan).
El agar MacConkey es tanto diferencial como selectivo, contiene lactosa y colorante rojo neutro, las
colonias fermentadoras de lactosa aparecen de color rosa a rojo y son fcilmente distinguibles de las no
fermentadoras.
Agar MacConkey-sorbitol. Es un medio diferencial que permite sospechar en 24 hs la presencia de E coli
O157 en materia fecal, dado que esta especie no fermenta el sorbitol.
El agar Xilosa-lisina-desoxicolato (XLD) sirve para diferenciar patgenos entricos. La mayora de los no
patgenos fermentan lactosa, sacarosa o xilosa y producen colonias amarillas. Shigella spp. no fermenta
estos azcares y da colonias rojas. Salmonella spp y Edwarsiella spp fermentan xilosa pero producen
lisina decarboxilasa produciendo cadaverina que neutraliza los cidos de la fermentacin y dan colonias
rojas con centros oscuros porque producen cido sulfrico.
Agar cistena lactosa deficiente en electrolitos (CLDE), contiene lactosa y permite diferenciar las
bacterias fermentadoras de lactosa (colonias amarillas) de las no fermentadoras (colonias incoloras).

Medios Enriquecidos.
Son medios a los que se le agrega un nutriente extra (adems de las sustancias nutritivas normales,
incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes). Pueden
ser lquidos o slidos. En estos medios no crece un determinado grupo de bacterias sino todas. Este
enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis,

lquido asctico, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los
medios para producir un enriquecimiento del mismo, por ejemplo Polivitex, Isovitalex, etc.
Ejemplos: agar sangre, agar chocolate, caldo infusin cerebro-corazn, caldo tristona-soya.
Medios de Identificacin.
Son los medios destinados a comprobar alguna cualidad especfica que puede servirnos para reconocer
la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el
crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico
que vaya a ser metabilozado y el indicador que
nos muestre el resultado.
Ejemplos.: agar citrato de Simons,
(SIM), agar manitol salado, agar DNAsa, agar
general, cualquier medio al que se le haya
diferencial, son medios utilizados para

agar sulfhdrico-indol-movilidad
triple azcar hierro (TSI), y en
aadido
un
elemento
identificacin.

Actualmente estn apareciendo en el mercado

una gran cantidad de medios
especficos de identificacin para ciertos microorganismos, con lo cual se consigue simultneamente identificar
los grmenes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos especficos.
Medios de Transporte.
Se usan para transporte de aquellas muestras que no van a procesarse de inmediato o que deban ser
trasladadas de un laboratorio a otro, y que puedan contener microorganismos fastidiosos para su desarrollo
por lo que se debe impedir el sobrecrecimiento de bacterias que colonizan con frecuencia piel y mucosas.
Estos medios son generalmente semislidos, tamponados y sin sustancias nutritivas. Ejemplos: Stuart-Amies,
Cary-Blair, etc

PARTE EXPERIMENTAL

Materiales:

Agares
Vaso precipitado
Cocinilla

AGAR TSA
PREPARACION:

Disolver 40 g en 1lt de agua

Calentar en un bao de agua hirviendo
Luego llevar al autoclave x 15min a 121 C
Ph 7.3

AGAR MUELLER HILTON

PROCEDIMIENTO:

Disolver 34 g en 1lt de agua calentando en un bao de agua hierviendo

Llevar al autoclave x 15 min a 121 C
Ph 7.4

AGAR

MACCONKEY

PROCEDIMIENTOS

Disolver 50 g en un 1 lt de agua calentando en un bao de agua hirviendo

Llevar al autoclave x 15 min a 121 C
Ph 7.4

MANITOL SALADO

PROCEDIMIENTO:

Disolver 108 g en un 1 lt de agua calentando en bao de agua hirviendo

Llevar al autoclave x 15 min a 121 C
Ph 7.4

ESTERILIZACION
La esterilizacin es un proceso a travs del que se puede lograr la destruccin total de los microorganismos
viables presentes en un determinado material. este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo
farmacutico, ya que existen muchos procesos que requieren la utilizacin de materiales estriles. entre stos
podemos destacar:
La esterilizacin de equipos quirrgicos y otros materiales de uso mdico con el propsito de reducir el riesgo
de infecciones en pacientes.
El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de petri, pinzas, etc.) que va a ser utilizado en los
laboratorios de microbiologa.
La preparacin de medios de cultivo que sern empleados con diferentes propsitos (cultivo de
microorganismos, control de ambiente, equipos o personal, anlisis microbiolgico de medicamentos,
cosmticos, alimentos, etc.)

Bibliografa.

1.

2.

3.
4.
5.
6.
7.

Microbiologa
Clnica.
Mdulo
1.
Fisiologa Microbiana. Recoleccin y
muestras
para
el
diagnstico
de
AAM- Colegio de Bioqumicos de la Provincia
Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas
Nacional del Litoral. 1997.
Microbiologa
Clnica.
Mdulo
2.
Procesamiento inicial de las muestras para el diagnstico mocrobiolgico. AAM- Colegio de
Bioqumicos de la Provincia de Entre Ros- Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas Universidad
Nacional del Litoral. 1997
Prescott L, Harley J, Klein D. Microbiologa. Cuarta Edicin. 1999.
Fumarola A, Rodrguez-Torres A, Garca-Rodrguez JA, Piedrota-Angulo G. Microbiologa y
Parasitologa Mdica. Segunda Edicin. 1987.
Daz Martn GA. Fundamentos y tcnicas de anlisis microbiolgico. Medios de
cultivo. Apuntes. Segundo curso: Laboratorio de Diagnstico Clnico Unidad Temtica 14-1, Bloque
temtico III. 2004-2005.
Vullo D, Waschman M, Alche L. Microbiologa en prctica. Manual de tcnicas de
laboratorio para la enseanza de la microbiologa bsica y aplicada. Ed. Atlante. 2000. Cap. 7, 4750.
http://biotecnologia9.bligoo.com.co/esterilizacion-de-material-y-preparacion-de-medios-decultivo#.VmEOT3YrLIU
Taxonoma
y
transporte de
infecciones.
de Entre RosUniversidad