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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

Practica #3
Identificacin de
carbohidratos POR METODO DE
CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA
INTEGRANTES:
Cristhian Medina
Mnica Crdova
Sergio Mendoza
Kevin Crespn
Jos Miranda

OBJETIVO
Identificar el carbohidrato desconocido mediante el mtodo de
cromatografa en capa fina.
Realizar los clculos requeridos en la identificacin de carbohidratos.

CONCEPTOS BASICOS
CARBOHIDRATOS
Los carbohidratos, tambin llamados glcidos o hidratos de carbono, se
pueden encontrar casi de manera exclusiva en alimentos de origen vegetal.
Constituyen uno de los tres principales grupos qumicos que forman la materia
orgnica junto con las grasas y las protenas
Pan y galletas aportan mayormente solo carbohidratos. Los carbohidratos son
los compuestos orgnicos ms abundantes de la biosfera y a su vez los ms
diversos. Normalmente se los encuentra en las partes estructurales de los
vegetales y tambin en los tejidos animales, como glucosa o glucgeno. Estos
sirven como fuente de energa para todas las actividades celulares vitales.
Aporte energtico de los carbohidratos
Aportan 4 kcal/gramo al igual que las protenas y son considerados macro
nutrientes energticos al igual que las grasas. Los podemos encontrar en una
innumerable cantidad y variedad de alimentos y cumplen un rol muy

Mnica Crdova

Laboratorio de bioqumica II

Grupo D

importante en el metabolismo. Por eso deben tener una muy importante


presencia de nuestra alimentacin diaria.
CANTIDAD EN LA DIETA DIARIA
En una alimentacin equilibrada aproximadamente 300gr./da de hidratos de
carbono deben provenir de frutas y verduras. En una alimentacin variada y
equilibrada aproximadamente unos 300gr./da de hidratos de carbono deben
provenir de frutas y verduras, las cuales no solo nos brindan carbohidratos, sino
que tambin nos aportan vitaminas, minerales y abundante cantidad de fibras
vegetales.
Otros 50 a 100 gr. diarios deben ser complejos, es decir, cereales y sus
derivados. Siempre preferir a todos aquellos cereales que conservan su
corteza, los integrales. Los mismos son ricos en vitaminas del complejo B,
minerales, protenas de origen vegetal y obviamente fibra.
CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA
En la cromatografa analtica en capa fina, la fase estacionaria o tambin
llamada, absorbente, se encuentra colocada uniformemente, formando una
finsima capa de un espesor en torno a 0.1 mm, sobre un soporte o placa de
vidrio o metal. La mezcla que deseamos analizar se colocar a una corta
distancia del borde inferior de la mencionada placa, la cual introduciremos en
una cubeta o recipiente que contendr la fase mvil, o tambin llamado,
eluyente. La fase mvil ir ascendiendo poco a poco sobre la placa de la fase
estacionaria a travs de capilaridad, desplazando a los diferentes
componentes de la mezcla a analizar, a distintas velocidades, lo que
provocar la separacin de la mezcla. Cuando el frente del disolvente se site
prximo a la parte superior de la placa, sacaremos la placa de la cubeta con
la finalidad de dejarla secar para poder ver las manchas de los diferentes
componentes.
La relacin de las distancias recorridas por el compuesto y por el disolvente,
desde el punto de origen del cromatograma, se conoce como Rf (rate factor),
el cual posee un valor constante para cada compuesto en condiciones
determinadas.
Estas condiciones pueden ser el tipo de absorbente utilizado, el tamao de la
cubeta, la temperatura, el disolvente, etc. Es poco factible reproducir
exactamente las condiciones experimentales, as que se suele comparar una
muestra con otra, eluyendo ambas dentro de la misma placa. As, para poder
calcular el Rf, se sigue la siguiente frmula:
Rf = Distancia recorrida por el compuesto / Distancia recorrida por el disolvente
La distancia que recorre el compuesto se suele medir desde el centro de la
mancha, por lo cual se suelen hacer unas marcas en la placa, si dichas
manchas son extremadamente grandes, el valor del Rf ser errneo. As
realizamos unas marcas en la placa donde depositaremos con ayuda de una
pipeta un mnimo de muestra.
Mnica Crdova

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Cuanto ms polar sea el compuesto, ms retenido estar en el absorbente, y


por tanto ir ms lento y el Rf ser tambin menor. Por otra parte, los
compuestos poco polares, se consiguen desplazar a ms distancia desde el
origen. La polaridad del disolvente influye en el valor del Rf, por lo que
deberemos tenerlo en cuenta. As, para un mismo tipo de compuesto, un
aumento de la polaridad del disolvente har aumentar su desplazamiento en
la placa y por lo tanto tambin aumentar su Rf.
Para elegir un eluyente, se recomienda elegir un disolvente en el que los
componentes que formen la mezcla presenten un Rf de entorno a un 0.3 un
0.5. Para encontrar el eluyente ideal, es necesario probar con diferentes
disolventes con distintas polaridades o con mezclas de varios de ellos. En estos
casos, debemos cambiar a disolventes ms o menos polares.
En el caso de compuestos poco polares, los cuales se desplazan del origen
con bastante facilidad, se utiliza un disolvente apolar, generalmente el
hexano. Cuando se trata de compuestos con una polaridad media, es
aconsejable usar mezclas de hexano/ acetato de etilo en diferentes
proporciones segn la polaridad. Los productos ms polares de todos, los
cuales quedan muy retenidos en el absorbente, necesitan un disolvente ms
polar como pueden ser el metanol o distintas mezclas de cloruro de
metileno/metanol en diferentes proporciones.
FUNDAMENTOS
La cromatografa de capa fina es un procedimiento que se utiliza para
separar molculas como azcares simples, lpidos, aminocidos,
nucletidos, metabolitos.
Mediante la aplicacin del RF se podr identificar el tipo de
carbohidrato haciendo comparacin con la muestra estndar.

MATERIALES

REACTIVOS

Placa de vidrio (con silica gel)

Solvente de desarrollo (propanol,


butanol, cido brico)

Cmara cromatografca

Silica gel

capilares

Muestra estndar

Guantes

Reactivo de Molisch

Mandil
Estufa

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PROCEDIMIENTO
Realice una lnea punteada
a 2 cm del borde inferior de
la placa silica gel
(previamente preparada) y
coloque sobre ella azucares
y la muestra desconocida.

Roci el revelador (Molisch)


y lleve a la estufa por 2 a
5min.

Coloque la placa en la
cmara con el solvente 50
ml (propanol, butanol, cido
brico) y deje hasta que
eluya 1cm e borde superior
de la placa.

Coloque la placa en la
estufa 110C-130C por 5 a
10 min.

IMGENES DE LOS APARATOS Y MONTAJES:

Fructosa, Galactosa,Glucosa, maltosa,


sacarosa, xilosa, lactosa, muestra

Frasco de capilares

Estandares y Muestra de
Carbohidratos

8 Capilares

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Grupo D

Medicion 2 cm borde inferior

Despues llevarlo a la estufa por 5-10min

Aplicacin de los Estandares y


Muestra

Placa dentro de la Camara


Cromatografica

Rociar el revelador y llevarlo a la


estufa 2-5min

Placa con sus carbohidratos revelados

Identificacion de
Carbohidratos

Reacivo de Molisch

RESULTADOS
Carbohidratos

Color

Rf

Fructosa

Morado

0.64 mm

Galactosa

Rosado

0.62 mm

Glucosa

Rosado

0.66 mm

Maltosa

Rosado

0.61 mm

Sacarosa

Rosado

0.60 mm

Xilosa

Morado

0.68 mm

Mnica Crdova

Laboratorio de bioqumica II

Grupo D

Lactosa

0.35 mm

Muestra
desconocida

0.69 mm

CONCLUSION
Mediante procedimientos establecidos, se realiz la prctica haciendo
uso de la muestra y estndares en cmara del solvente y se hizo uso del
reactivo de molisch el cual realizo la funcin del revelado.
Comparando la muestra desconocida y los estndares sacando el Rf de
cada una, llegamos a la conclusin que la muestra a identificar es
Fructosa.

Mnica Crdova

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Grupo D