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DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA

La hemoglobina es una protena pigmentada de color rojo transportadora de oxgeno que se


encuentra solo en los eritrocitos de los vertebrados. Es un tetrmero con dos pares de
cadenas polipeptdicas diferentes. Cada una de ellas posee un derivado de la porfirina
llamado grupo hemo, que a su vez contiene hierro.
Las dos principales funciones de la hemoglobina son el transporte de oxgeno y
amortiguador del pH.
Las concentraciones de hemoglobina estn influidas por variaciones fisiolgicas como la
edad, sexo, deshidratacin, postura y altitud, y por procesos patolgicos. Se encuentran
valores patolgicos en anemias y en policitemias.
La determinacin de la concentracin de hemoglobina se ha convertido en una de las
pruebas ms importantes en el diagnstico y tratamiento de la anemia. Las tres causas
principales de anemia son: alteracin en la sntesis de los eritrocitos en la mdula sea,
prdidas de sangre excesivas y transporte alterado de eritrocitos hacia sangre perifrica.
Se observan valores de hemoglobina elevados en policitemia vera, eritrocitosis,
deshidratacin, recin nacidos, cianosis congnita o adquirida, enfermedad renal y
pulmonar crnica, quistes renales y en una serie de tumores productores de eritropoyetina.
El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico
ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio.
FUNDAMENTO DEL MTODO
El in ferroso de la hemoglobina se oxida a in frrico por accin del ferricianuro potsico
formndose hemiglobina (metahemoglobina). La hemiglobina reacciona con el cianuro para
formar cianhemiglobina (cianmetahemoglobina) que se puede medir por
espectrofotometra.
MTODO
1.- Colocar en un tubo de ensaye de 13 x 100 mm. 5
ml. de reactivo de cianometa.
2.- Agregar 0.020 ml de sangre perfectamente bien
mezclada con un pipeta de salh y mezclar por
inmersin.

3.-Dejar reposar por


diez minutos a
temperatura ambiente.

4.- Leer en espectrofotmetro a


una longitud de onda de 540 nm.
Ajustando a 100 % con blanco de
cianometa.

CLCULOS
La concentracin de hemoglobina en la muestra se calcula a partir de la frmula:
Con Patrn:

Factor de conversin
F= (conc. Patrn)/(A) Patrn
F= (ST)/ Abs = 20/ 497= 40.2

RESULTADOS
La concentracin de hemoglobina para las siguientes absorbancias en el espectrofotmetro
a longitud de onda de 540 nm es:
Absorbancia
0.257
0.284
0.478
0.260
0.476
0.556

Valores normales g/100 ml.

Concentracin de Hb en g/dl
10.33
11.4
19.2
10.4
19.1
22.3

Adultos

Mujeres

12.0 a 15.0

Hombres

13.0 a 17.0

Ancianos

10.0 a 17.0

Nios

Recin Nacidos 14.0 a 24.0

Neonatos

11.0 a 20.0

Lactantes

10.0 a 15.0

Nios

11.0 a 16.0

Las concentraciones de hemoglobina de la muestra sangunea no coinciden con los valores


normales. Las causas de error pueden ser las siguientes:
Errores en la obtencin de la sangre. La estasis prolongada causada por usar ms de
un minuto el torniquete en el brazo del paciente, origina resultados falsamente
elevados de hemoglobina en las muestras de sangre venosa. En sangre capilar
ocurre lo contrario cuando se ejerce una presin excesiva en el sitio de puncin y
aumenta el flujo de los lquidos tisulares diluyendo la muestra de sangre.
La muestra no se mezcla bien. Para evitarlo, invertir el tubo varias veces o, de
preferencia, usar un mezclador mecnico.
Errores de pipeteo o de dilucin.
Muestra de sangre con coagulo.
Sangre lipemia.
Recuento de leucocitos muy elevado (50.0 x109/L).
Instrumento incorrectamente calibrado.

HEMATOCRITO

Con el valor hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y


patologas, como es el caso de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la
cantidad de eritrocitos de la sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el
porcentaje de clulas que transportan oxgeno frente al volumen total de sangre,
determinado por proceso de centrifugacin. En este proceso, se pueden apreciar dos
niveles, los elementos formes que se sedimentan, y el plasma total que flota. En definitiva
es la relacin porcentual entre ambos lo que representa el valor hematocrito.
Los valores altos de hematocrito puede deberse a afecciones tales como:
Cardiopatas
Hemoconcentracin o eritrocitosis
Deshidratacin
Eclampsia durante el embarazo
OBJETIVO:

Determinar la concentracin de hematcrito en una muestra de sangre con


anticoagulante.

MATERIAL BIOLGICO:

Muestra de sangre con anticoagulante EDTA.

MTODO:

Llenar un tubo de Wintrobe con sangre utilizando una cnula una pipeta Pasteur
de punta larga.

Tpelo con un tapn de hule o con tela adhesiva.

Ponga el tubo vertical en una gradilla de sedimentacin por un lapso de 60 minutos.

Lea en la escala descendente de la izq. Mida el nivel en que se encuentra la zona


de separacin entre el plasma y los eritrocitos sedimentados.

Informe el resultado en mm por hora.

Estos datos deben de ser corregidos con el hematocrito, por lo que ambos estudios
deben realizarse juntos.

Cuando el hematocrito es menor de 47 % en hombre y 42 % en mujeres debe


realizarse la correccin en tablas de sedimentacin.

RESULTADOS

La muestra arroja un valor de 43% correspondiente a una mujer, por lo tanto entra en el
valor normal.
Valores normales:
Adultos.
Mujeres
Hombres
Ancianos
Mujeres
Hombres
Nios
0 a 3 das
4 a 8 das
9 a 13 das
14 das a 2 meses
3 a 5 meses
6 meses a 3 aos
4 a 10 aos
11 a 15 aos

36 a 45 %
39 a 51 %
30 a 50 %
36 a 56 %
48 a 70 %
42 a 62 %
39 a 59 %
35 a 49 %
29 a 43 %
30.5 a 40.5 %
32 a 42 %
34 a 44%

VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (VSG)

La eritrosedimentacin globular es una prueba que se usa ampliamente para estudiar la


actividad de diversas enfermedades. La velocidad de sedimentacin de los glbulos rojos se
refiere al tiempo que tardan en separarse del plasma. Se le mide en MILIMETROS POR
HORA.
La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido en el
desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su gran
sensibilidad, pues resulta anormal en las enfermedades funcionales, as como en los
procesos inactivos o estrictamente locales.
FUNDAMENTO:
La eritrosedimentacin depende de la formacin de ROULEAUX, de la concentracin de
fibringeno y de la concentracin de globulinas alfa y beta en el plasma. La concentracin
de las diversas protenas plasmticas afecta la eritrosedimentacin y en muchas
enfermedades se altera la relacin entre las protenas, con la consiguiente aceleracin de la
eritrosedimentacin. Una disminucin en el nmero de glbulos rojos tambin la acelera y
en algunos laboratorios se corrige su resultado en los casos de anemia. Adems de las
elevaciones producidas en procesos infecciosos e inflamatorios, se producen elevaciones
fisiolgicas en el embarazo y durante la menstruacin. La VSG disminuye en la anemia
falciforme y en las 39fibringeno39 severas.
FENOMENO DE ROULEAUX:
El ROULEAUX o formacin de pilas de monedas, es un fenmeno que consiste en que
los glbulos se aglomeran en masas. Las causas de este fenmeno radican en el plasma o en
el suero y no estn influidas por la temperatura. La administracin de algunos
medicamentos puede producir este fenmeno. Otras veces se trata de una causa intrnseca al
paciente, que tiene un desequilibrio de sus protenas (aumento del 39fibringeno o
aparicin de protenas anormales).
Observado en el microscopio, el fenmeno de Rouleaux es caracterstico: se ven los
glbulos reunidos en filas, apilados por sus caras planas, varias filas se entrecruzan en
diversos planos, produciendo un grumo el cual puede ser visto de forma macroscpica (a
simple vista)
INTERPRETACION CLINICA:
La VSG es un buen ndice de la presencia de procesos infecciosos activos como la
tuberculosis o la endocarditis bacteriana subaguda, el lupus eritematoso diseminado, las
carditis reumticas, ciertas neoplasias, embarazo ectpico, etc. Sirve igualmente para
controlar la actividad evolutiva de las infecciones mencionadas.
MATERIAL:
Tubos de Wintrobe
Pipetas Pasteur

Gradilla de wintrobe
Reloj cronometro
Papel secante
Guantes

PROCEDIMIENTO (METODO DE WINTROBE):


1. Mezclar la muestra de sangre
2. Llenar de sangre una pipeta Pasteur
3. Introducir la punta de la pipeta Pasteur hasta el fondo del tubo de Wintrobe
4. Lentamente vaciar la sangre e ir retirando la pipeta arrastrndola por la pared interna del
tubo EVITANDO la formacin de burbujas de aire.
5. El tubo se llena hasta la marca cero y se coloca en una gradilla en posicin vertical.
6. INMEDIATAMENTE activar el cronometro que indique 1 hora, durante la cual ocurrir
el fenmeno de Rouleaux
7. Transcurrida la hora se leern los milmetros que haya sedimentado la muestra de sangre
8. La escala se lee hacia abajo, representando cada numero 10 mm o 1 cm.
VALORES DE REFERENCIA:
Hombres: 0 9 mm/hr
Mujeres y nios: 0 15 mm/hr
Los resultados obtenidos arrojan un valor de 5mm/hr de un individuo mujer, por lo tanto es
un valor normal, y no hay infecciones activas
CAUSAS DE ERROR:
1. Uso de anticoagulante incorrecto (heparina aumenta el resultado).
2. Exceso de anticoagulante (aumenta)
3. Posicin inadecuada del tubo (que este ladeado el tubo)
4. Aglomeracin anormal de los glbulos rojos en pilas de monedas.

CUENTA DE RETICULOCITOS
FUNDAMENTO:

La investigacin de reticulocitos es una de las pruebas ms tiles en la investigacin de la


causa de la anemia, pues nos d idea del estado de la produccin de glbulos rojos por la
mdula sea.
Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teir con el
azul de cresil brillante. Este colorante en combinacin con una misma cantidad de sangre
anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura (bao mara) se produce la
coloracin de estos eritrocitos jvenes visualizndose en los frotices sanguneos por
microscopa
REACTIVOS:
Azul brillante de cresilo
MATERIAL:
Tubos de ensaye 13 X 75 mm
Papel parafilm
Plumn sharpie
Portaobjetos
Contador celular (pianito)
Aceite de inmersin
Microscopio
Reloj cronometro

PROCEDIMIENTO:
1. En un tubo de ensaye chico se depositan tres gotas de sangre con EDTA
2. Se agregan 3 gotas de reactivo
3. Mezclar el tubo y tapar con parafilm
4. Incubar a 37oC por 10 minutos.
5. Hacer frotis en un portaobjetos
6. Leer en el microscopio con el objetivo de inmersin (100X)
7. Se leern varios campos, contando 300 eritrocitos en total, incluyendo a los reticulocitos
8. Se har un clculo de regla de tres simple para obtener el valor

porcentual de los reticulocitos encontrados


VALORES DE REFERENCIA:

Recin nacidos: 3 6 %
Adultos: 0.5 1.5 %
INTERPRETACION CLINICA:
Causas de aumento
El nmero de reticulocitos aumenta en todas las circunstancias en las que existe un incremento de la
eritropoyesis, tales como en la hemlisis, como respuesta a sangrados o tras el inicio de un
tratamiento antianmico que ha resultado eficaz.
Causas de disminucin
Como la produccin de reticulocitos es necesaria para compensar las prdidas fisiolgicas de
glbulos rojos maduros, una disminucin de su nmero es la expresin de un estado arregenerativo
o hiporregenerativo de la serie roja. Esta circunstancia es tpica de anemias aplsicas, anemias
carenciales y enfermedades inflamatorias y neoplsicas.