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14 de septiembre de 2011

BIOTECNOLOGA AGRCOLA
Combustibles fsiles formados a partir del depsito de materia orgnica proveniente de
organismos fsiles. Es la unin de carbono e hidrgeno.

Petrleo: restos de microorganismos depositados en el fondo del mar.

Carbn: generado por la acumulacin de materia vegetal por millones de aos.

Gas natural: principalmente metano; formado por el depsito de microorganismos


y poco explotado.
Se requieren fuentes alternas de combustible por la escasez de combustibles fsiles y
porque contaminan.
Procesos de formacin de petrleo: roca, materia orgnica en descomposicin, lodo.
Su utilidad se descubri a principios del siglo XIX.
Porcentajes
Petrleo
Carbn
Gas
Biomasa
Hidroelctrica
Nuclear
Nuevas renovables

35.03%
24.59%
20.44%
8.48%
1.73%
6.33%
3.40%

Torre de destilacin del petrleo y familia del petrleo.


Aceites, gasolina, esencias, gasleo, keroseno, diesel.
Impacto ambiental

Carbn: emisin a la atmsfera de xidos de azufre y nitrgeno y de CO 2, provocan efecto invernadero y lluvia cida.

Petrleo: derrames, lluvia cida y efecto invernadero.

Gas. Efecto invernadero y lluvia cida, pero en menor medida.


BIOCOMBUSTIBLES
Produccin de combustible a partir de biomasa (biogs, biodiesel, alcohol) a partir de biomasa de aceite vegetal, grasa
animal, que puede sustituir combustibles fsiles. La produccin de etanol necesita del uso de azcares fermentables y
enzimas.
2 caractersticas de generaciones de biocombustibles:
Materia prima y Tecnologa de proceso adoptada
Ventajas de biocombustibles

Menor impacto ambiental, fuente de energa renovable (mayor disposicin), desarrollo agrcola

Bioetanol (mejor combustin de motor y mayor lubricacin)

Biodiesel (punto de inflamacin superior y mayor octanaje a menor costo)


Demanda de biocombustibles a nivel mundial
Brasil es actualmente pionero en la produccin de etanol en Amrica del Sur

Biodiesel blending exist within country: Brasil, EUA, Europa, Canad


Trials, plots or studies underway: India, China
No blends or data not available: Mxico
Uso actual biodiesel

EtOH blending
Program being developed (Mxico)
No blends
Biomass energy sources
Energy crops, byproducts and residues, organic waste
Harvesting/Collecting/Provision
Pretreatament Transport Storage
Termochemical conversion
Physical Chemical
Biochemical conversion
-Carbonizacin
-Gasificacin
-Pirlisis
PRIMERA GENERACIN
Utilizando tecnologa estndar y granos originalmente destinados al consumo humano: maz, caa, soya
Se producen principalmente biodiesel, bioetanol y biogs mediante
Transesterificacin, fermentacin
Aceite de girasol, remolacha, caa, papa, maz. Con lignocelulosa es ms complicado porque la lignina es de difcil
degradacin.
Produccin

Fermentacin de azcares y carbohidratos


o Etanol, metanol y n-butanol

Transesterificacin de aceites vegetales


o Biodiesel, gasoil. El glicerol es un producto secundario del proceso, pero su produccin excesiva est causando
problemas porque no hay salida al mercado.

Digestin anaerobia de desperdicios orgnicos


o Biogs (mezcla de metano y anhdrido carbnico)
SEGUNDA GENERACIN
Produccin mediante el uso de oleaginosas, grasa animales y aceites usados.
Semilla de colza, soya, jatropha, girasol y crtamo
Biodiesel, bioetanol y biogs
Paja de agricultura
TERCERA GENERACIN
Utilizacin de mtodos similares a los anteriores.
Uso de materia prima modificada (OGM) para tener cultivos bioenergticos de mejor rendimiento.
Permite eficientemente la bioconversin de biomasa a energticos.
rboles con bajo contenido en lignina (que cubre celulosa y hemicelulosa). Evita tratamiento severo.
Algas: INECOL
Se producen en grandes cantidades
Cosecha Compactacin, transporte, almacenamiento Pretratamiento Detoxificacin y neutralizacin Separacin
slido/lquido 2 rutas
1. Produccin de enzimas en biorreactores Hidrlisis enzimtica de celulosa Fermentacin de celulosa Producto
Etanol y residuos
2. Fermentacin de azcares y hemicelulosa Producto Etanol y residuos

Granos como maz, trigo, cebada, sorgo: Almidones Hidrlisis

Remolacha, caa de azcar, sorgo: Azcares Fermentacin/Destilacin Etanol hidratado Deshidratacin Etanol
Grano, Etanol, DDG
Parte de la salida se retorna para incrementar el rendimiento
Produccin de biodiesel
Aceites vegetales
convencionales
Aceite de girasol
Aceite de colza (canola)
Aceite de coco
Aceite de soya
Aceite de palma

Aceites vegetales alternativos


Aceite de Brassica carinata
Aceite de Cynara curdunculus
Aceite de Camelina sativa
Aceite de Crambe abyssinica
Aceite de Pogianus
Aceite de Jatropha curcas

Aceites de semillas modificadas


genticamente (aceite de girasol de alto
oleico)
Grasas animales (vaca, bfalo, pollo,
pescado)
Aceites de microalgas
Aceites de producciones microbianas
Aceites de fritura usados

Tratamiento clarificacin filtrado Evaporacin Cristalizacin Centrifugacin Secado Fermentacin Destilacin


Rectificacin Deshidratacin
20 de septiembre de 2011
BIOCOMBUSTIBLES
Existen discrepancias sobre cmo clasificar la tercera y cuarta generacin.
TERCERA GENERACIN

Vegetales no alimenticios.

Alta densidad energtica.

Pastos perennes, rboles y plantas de crecimiento rpido, algas verdes y azules.

Proceso en fase de desarrollo hasta hace algunos aos.

Ventajas. Secuestro de CO2 (insumos y balances positivos en emisin de gases tipo invernadero).

Desventaja. Uso de tierras de cultivo para alimento.


CUARTA GENERACIN
Bacterias modificadas utilizan CO2 para obtener biocombustibles.
El proceso es llevado completamente por el microorganismo.
El uso de ingeniera gentica ha permitido el diseo de un solo microorganismo que realice todas las funciones necesarias
por s mismo.

2006
Biomasa: materia orgnica orgnica originada de forma inmediata de un proceso industrial.
Biomasa natural: producida en los ecosistemas naturales.
Biomasa resiudal: residuos procesos productivos en sectores agrcola, forestal e industrial.
Composicin del material lignocelulsico
Polisacridos

Carbohidratos de alto peso molecular

Celulosa: polmero lineal de -D-glucosa con enlaces (14)

Hemicelulosa: formada por anhicroazcares (pentosas y hexosas) cuya funcin es la unin entre lignina y celulosa.
o Xilanos
o Glucomananos
Lignina: polmero amorfo formado por la polimerizain deshidrogenativo de unidades de fenilpropano. Se hidroliza a 600C
y es degradada por algunos hongos de pudricin blanca.
Desechos lignocelulosicos

Delignificacin: qumicos industriales.

Pirlisis: furfural, carbn bioactivado?, bioabsorbentes, intercabiadores de iones.

Cultivos microbianos: alimento humano, ganado, medicina.

Hidrlisis: azcares reductores Fermentacin: enzimas y cidos carboxlicos. bioetanol

Transesterificacin: biodiesel.

Combustin/Bioconversin: biohidrgeno.

Acidognesis: cidos grasos voltiles Metano. Biogs.

Humificacin: biofertilizantes.

Fermentacin simultnea y sacarificacin: bioetanol.

MTODOS GENERALES
Residuos de lignocelulosa son madera, grano, desechos slidos municipales, papel, etc. que mediante molido o picado
mecnico pueden ser materia prima para obtener productos de valor agregado (renovables, reciclables, biodegradables).
La idea es que mediante procesos costo-efectivos se produzca energa eficiente y ecoamigable.
Pretratamientos para la materia prima con residuos de lignocelulosa

Fsicos: microondas, pirlisis, irradiacin gamma.

Fsico-qumicos: explosin de vapor, explosin de amoniaco (ALEX), agua caliente (LHW)

Qumicos: agentes oxidantes, alcalinos, cidos orgnicos e inorgnicos concentrados o diluidos, procesos con
organosolventes.

Biolgicos. Hongos perfectos e imperfectos, bacterias aerobias y anaerobias, enzimas oxidativas e hidrolticas,
microorganismos modificados, procesos con bio-organosolventes.
Ms all del impacto ambiental las industrias toman en cuenta los costos derivados para decidir qu tratamiento utilizar.
Procesos de obtencin

Hidrlisis cida: desde 1819 mediante el uso de cidos sulfrico, clorhdrico, ntrico, frmico, con el inconveniente de
inhibicin de crecimeinto en condiciones cidas.

cidos concentrados: usan bajas temperaturas y es necesario neutralizar el medio previo a la fermentacin para evitar
inhibidores.

cidos diluidos: implican bajos costos de operacin, uso de altas temperaturas (240C) y dan una produccin final de
1% (p/v)
Proceso en dos etapas
1. Primera etapa: hidrlisis de hemicelulosa (170-190C).
2. Segunda etapa: hidrlisisde la celulosa (200-230C)
Deventajas: produccin de sustancias que degradan azcares, disminucin del rendimiento y efecto negativo en la
fermentacin.
Proceso CASH

Uso de dixido de azufre y cido clorhdrico diluido.


Hidrlisis enzimtica
Celulasas
Endo--glucanasas (20%)
o (14) gucanglucanohidrolasa ataca al azar, DMC, celulosa amorfa.
Exo- -glucanasas
o Celobiohidrolasa (CBH 50-80%). Extremos no reductores Celobiosa, celulosa cristalina, celodextran.
o Glucohidrolasa (GGH). Extremos no reductores Glucosa
-Glucosidasa. Evita inhibicin de la celobiosa en las endo y exoglucanasas.
Pretratamiento

Reduccin de la cristalinidad de la celulosa.

Disociacin del complejo lignina-celulosa.

Incremento del rea superficial mediante fraccionamiento o molienda.


FSICO
a) Trituracin mecnica: molinos de bolas, martillo, cuchillas, rodillos.
b) Radiacin de alta energa: ataca enlaces -glicosdicos, celulosa y lignina.
FSICO-QUMICOS
a) Explosin por vapor 190-230C Vapor directo

Alteraciones fsicas: degradacin y ruptura.

Qumica: depolimerizacin, ruptura de enlaces.

Tiempo de residencia, tamao de partcula, humedad.

Destruccin de xilanos, incompleta ruptura de complejo celulosa-lignina y generacin de compuestos txicos.


b) Explosin de vapor con amoniaco (ALEX)

Impregnacin con amoniaco (1-2 kg/kg biomasa seca).

90C durante 30 minutos.

No genera solubilidad de hemicelulosa.

Altamente efectivo en materiales con contenido de lignina 15% (rendimientos superiores al 90%)
c) Explosin con CO2

Formacin de cido carbnico.

En alfalfa hay rendimiento de 75%.

Proceso econmico.
TRATAMIENTOS QUMICOS
a) Agua caliente lquida

200C

Recuperacin de la mayora de xilanos.

No genera inhibicin.
b) Oxidacin hmeda

Agua caliente y oxgeno.

No genera furfural e hidroximetilfurfural.


c) Tratamiento con ozono

Utilizado en paja de trigo, bagazo, pino, algodn, aserrn.


Mtodo muy usado por relacin consto-beneficio
Ataque directo a la lignina, parcialmente a hemicelulosa.
No hay generacin de productos txicos.
d) Hidrlisis con lcalis

NaOH diluido favorece aumento del rea superficial interna.

Disminucin de la cristalinidad.

Separacin del comlejo lignina-azcares y rompimiento de la primera.

Efectivo en sustratos lignina 18%.


e) Organosolventes

Mezcla de solventes orgnicos o acuosos

Metanol, etanol, acetona, etilenglicol.

cidos orgnicos: oxlico, acetilsaliclico, saliclico.

Lo ideal al momento de disear un proceso es combinar los pre-tratamientos para tener el mejor rendimiento posible
Hay tres tipos de hongos que participan en la degradacin de lignina y que empezaron a estudiarse en los 70s
Hongos de pudricin blanda
Hongos de pudricin parda
Hongos de pudricin blanca (Phanerochaete chrysosporium, Pleurotus, Coriolus, Phlebia, Penyophora)
Tipos de enzimas principales: lignina peroxidasa, manganeso peroxidasa y lacasa (del rbol de la laca japons en
1900s). Tienen un metabolismo mediado por perxido de hidrgeno
27 de septiembre del 2011
1. Cultivo de tejidos en plantas tiene distintos objetivos
Vegetales (5): diagnstico de enfermedades, insecticidas naturales, tcnicas de cultivo de tejidos, mapeo
gentico, tcnicas de micro propagacin
Alimentacin (5): desarrollo de nuevos alimentos (ms funcionales, mejor distribucin), enzimologa y
bioconversin de productos (procesos industriales eficientes), aromatizantes, saborizantes y aditivos
alimentarios, nuevos mtodos de procesamiento de alimentos, nuevos alimentos por procesos fermentativos.
Usos no alimenticios (5): produccin de biomasa / fermentacin, tcnicas de propagacin forestal, tcnicas de
cultivos celulares, tcnicas enzimticas para extraer y procesar productos, expresin y extraccin de
especialidades qumicas y metabolitos de alto valor agregado (antimicrobianos, insecticidas, aditivos de
alimentos).
*Tcnica colorimtrica, extraccin por cromatografa. Aditivos, frmacos antimicrobiano, insecticida.
Se pueden usar diversos tejidos de las plantas para la extraccin de sustancias en las plantas y tambin se usan
diversos solventes para los compuestos obtenidos.
2. Cultivo de tejidos en plantas
Concepto (punto de vista): tecnologa sustentable; produccin bajo condiciones controladas para obtener un
efecto determinado. Ejemplo: cactceas
Desarrollo histrico: comenz con la teora celular, concepto darwiniano de regulacin hormonal, en 1930s:
factor de crecimiento auxinas que favorecen crecimiento; organognesis a partir de races; micro propagacin
Importancia: subsistencia, evolucin y economa. Tratar de incrementar produccin de alimentos
3. Cultivo de tejidos en plantas
rganos + tejidos + clulas + protoplastos producen o conforman las tcnicas de cultivo de tejidos
4. Conocimiento, mejora y productividad de cultivos de tejidos
Implica la aplicacin de conocimientos de las siguientes areas:

Biotecnologa vegetal

Fundamentos

Tcnicas de cultivo in vitro

Biologa molecular

Ingeniera gentica
5. Tipos de cultivo de tejidos en plantas
Liquido (tanques): mayor contacto y transferencia, clulas en suspensin, mayor produccin, diferentes
condiciones. Desventaja es que el lquido se modifica hacindose ms viscoso, por lo que las propelas gastan ms
energa al tratar de combatir la resistencia del medio (esfuerzo de corte mayor) porque es lo que ms incrementa
costos en un fermentador.
Agitado: invertir ms en el fermentador, mayor crecimiento por mayor contacto con nutrientes.
Estacionario:
Medio semislido: menos costo, pero menos produccin
6. Germoplasma
1. Cualquier parte de la planta que puede ser usada para hacer una nueva planta.
2. La variabilidad gentica intraespecfica o los materiales genticos que pueden perpetuar una especie o una
poblacin de organismos
a. Bancos creados con semillas, tallos u hojas para llevar un record y para mantener el material gentico
intacto.
b. Utiliza hoja, tallo o semilla con el fin de perpetuar la especie
c. Con los avances tecnolgicos (maz transgnico) se va perdiendo especies criollas.
7. Mtodos de conservacin

Dependen de la naturaleza del material vegetal (no se puede aplicar en todos los casos):
Duracin de ciclo de vida
Modo de reproduccin
Tamao de sus individuos
8. Mtodos de conservacin in situ y ex situ
In situ: la planta se mantiene en su hbitat natural; conservacin de especies en parques nacionales y reservas
ecolgicas. Implica espacios amplios, de donde las especies son nativas, pero la alta deforestacin y el trfico y
migracin ha minado dichas reservas.
Ex situ: mantenimiento en banco de semillas; cultivo in vitro; colecciones de plantas. El riesgo es la alta
contaminacin que se puede dar debido a la riqueza del medio donde crecen bateras y hongos
9. Bancos de semillas

Presentan gran variabilidad gentica y su conservacin es econmica y prctica porque ocupan


espacios pequeos.

Condiciones de humedad de 3.7% para evitar crecimiento de hongos y temperaturas a -18C. Se


pueden meter de forma directa al nitrgeno lquido y se usan crioprotectores.

Hay semillas resistentes a la desecacin, pero no todas.

Semillas ortodoxas: arroz, trigo, avena, tabaco, tomate, lechuga.


10. Cultivo in vitro

Partiendo del hecho de la totipotencialidad de la clula.

Desarrollo a partir de explantes.

Aplicado a semillas recalcitrantes, que no pueden ser conservadas por desecacin.

Cambios en el medio de cultivo.

Aumentar el mximo periodo de trasferencia de cultivo, es decir, hacer un nmero mnimo de pases.
11. Qu partes puedo usar en un cultivo?

Meristemos

Semillas

Embriones somticos

Protoplastos

Yemas, polen, anteras, callos

Embriones cigticos

Hojas, tallos, races


12. Factores que juegan papel importante en conservacin de cultivos

Temperatura

Luminosidad

Medio de cultivo

Inhibidores osmticos

Retardadores del crecimiento

Deshidratadores de tejido

Modificacin de fase gaseosa


13. Crioconservacin en 6 pasos
o Seleccin

Obtencin de plantas completas

Tipo de propagacin
o Deshidratacin

CRUCIAL

Cmara a 0C

Aire estril

Presencia de slica gel, glicerol 5-10%


o Aclimatacin

Rpida: explante pasa directo al nitrgeno lquido.

Lenta: disminucin gradual (0.1-3C / min).

Adicin de azucares o compuestos como el DMSO.


o Almacenamiento

En sistema seco se usan tejidos resistentes endgenamente o tolerantes.

En sistema hidratado se necesita proteccin endgena: crioprotectores.


o Descongelamiento o rehidratacin

Rpido: a bao mara por 1-2 min, 3-40C

Lento: a temperatura ambiente.


o Tests de viabilidad

Comprobacin de zonas de tejido muerto.

Visual

Recultivo

Capacidad de regeneracin

Conductividad

4 de octubre de 2011
SANEAMIENTO VEGETAL: MERISTEMOS
1. Plantas libre de patgenos
Propagacin vegetativa usando semillas
-Problemas de contaminacin
-Tratamientos qumicos ineficientes
-Causa prdidas econmicas de cultivos atacados por virus aunque se vea sana porque los frutos estn infestados.
Sistemas de saneamiento
-Eliminacin de microorganismos
-Termoterapia
-Incubacin de especmenes a altas temperaturas (30-40C)
-Alta humedad
-Periodos de 20-das a meses
Tcnicas de cultivo in vitro
-Meristemos
-Termoterapia
-Uso de microinjerto: Injertar en una ms grande libre de patgenos
-Formacin de tallos adventicios
2. MERISTEMOS
Grupo de clulas indiferenciadas que retienen la capacidad de dividirse durante todo el ciclo de vida de una planta.
Micropropagacin de especies vegetales.
Explante ideal para liberar patgenos in vitro a plantas infectadas por virus, hongos o bacterias.
Ampliamente utilizados como explante para criopreservacin y conservacin de germoplasma.
Generalidades: son los responsables del crecimiento permanente de la planta
Clulas meristemticas
-Presentan las caractersticas citolgicas de las clulas indiferenciadas
-Totipotenciales, continua divisin (mitosis)
-Diferenciacin
Primarios
-Crecimiento longitudinal de la planta
-Apicales
--pice del tallo y cada rama: primordios foliares
--pice de raz principal y secundaria da como origen a la cofia
Secundarios
-Responsables del crecimiento en espesor de la planta
-Las clulas se dividen en planos periclinales/longitudinalmente
-Cmbium vascular: Origina los tejidos conductores secundarios (xilema y floema secundarios).
-Cmbium suberoso o felgeno: origina la epidermis
Florales
-Derivan de la transformacin de los meristemos apicales
-Se limitan a la produccin de rganos florales
Intercalares
-En el curso del desarrollo de la planta, persisten restos de los meristemos apicales intercalados en los tejidos maduros.
-Determinan el crecimiento del largo de tallos y races.
Diagrama
Zona de divisin celular
Zona de elongacin
Zona de diferenciacin
Tejidos permanentes
Meristemo, meristemo axilar, primordio hojas, epidermis, haz vascular, crtex, mdula
Herramienta para saneamiento de plantas infectadas
-Domo meristemtico no vascularizado para tener un nmero mnimo de patgenos, sobretodo virus.
-El nmero de partculas virales es menor.
-La velocidad de divisin celular es mayor que la velocidad de replicacin de virus.
-Identificacin y caracterizacin de los patgenos.
--Mtodos inmunolgicos: relativamente costoso.
--Injerto sobre especies marcadoras.
--Microscopa electrnica es el mtodo ms caro.
Aspectos tcnicos del cultivo de meristemos
1. Equipo
-Elementos generales para cultivo in vitro
-Lupa estereoscpica
-Instrumental de diseccin
2. Etapas del cultivo
-Eleccin del explante
--Meristemo y 2-3 pares primordios
--0.5 mm
-Esterilizacin

-Diseccin
-Transferencia al cultivo
-Regeneracin de yemas, subcultivo
-Propagacin
-Rusticacin
Alcances
-Propagacin vegetativa rpida y a gran escala.
-Uniformidad seleccionada de material clonado.
-Multiplicacin de plantas recalcitrantes a las tcnicas convencionales.
-Reduccin del tiempo de multiplicacin y espacio requerido.
-Mayor control sobre la sanidad: frutales y ornamentales.
-Conservacin de germoplasma.
-Intercambio internacional de material gentico.
Microinjertos
Desarrollada en Espaa para la obtencin de plantas de ctricos libres de virus.
Injertacin de un pice meristemtico sobre una plntula de un patrn (condiciones aspticas).
-Preparacin de patrn
--Pelado de semillas. Los embriones se siembran en medio de cultivo. Se corta el epictilo nacimiento de primeras
hojas. ---Incisin longitudinal (apertura en corteza).
--Preparacin de la pa: brotes terminales tiernos o varetas con yemas. Brota en laboratorio se toma 1/10 mm. Coloca
patrn.
--Cultivo in vitro de la planta.
--Injerto sobre un plantn de vivero. Se hace un corte en T sobre el patrn y bisel en la planta microinjertada.
Dibujo: Plntula especialmente acondicionada -> Ubicacin del pice en la plntula -> 2-4 semanas
Cultivo de anteras
-Polen inmaduro en medios adecuados para la formacin de embriones o callos.
-Descubierto en 1964 por Guha y Maheshwr.
-Arroz, tomate, tabaco, cebada, geranio
Ventajas:
-Tcnica relativamente simple.
-Fcil induccin de divisin celular.
-Obtencin de un nmero grande de haploides de forma rpida.
Desventajas
-En algunas especies las plantas obtenidas no son haploides.
-En cereales se obtienen pocas plantas normales (con clorofila) la mayora de la plantas son albinas o quimeras
(albina-normal).
-Tediosa la remocin de anteras sin ocasionarle dao a las mismas.
Dibujo: anthers cultures nutrient medium + haploid plantlet + ambryoid + callus + haplid plant
Cultivo de protoplastos
-Cultivo de clulas vegetales que han sido aisladas y desprovistas de pared celular.
-Es la parte viva de una clula vegetal (citoplasma y ncleo).
-Cultivadas en medio nutritivo pueden ser inducidas a reformar la pared celular y dividirse.
Aislamiento
Medios mecnicos
-Cortando
-Rompiendo pared celular
Digestin de la pared celular va enzimtica
-Pectinasas
-Celulasas
-Hemicelulasas
-Mezcla de ellas
Combinacin
Usos
-Estudios fisiolgicos, bioqumicos y morfognicos
-Transformacin gentica por hibridacin o fusin somtica
-Introduccin, absorcin de protenas, DNA y otras macromolculas.
-Estudio de la etiologa en virus, su absorcin, procesos inefectivos, replicacin, inespecificidad y modo de actuacin de
hongos y bacterias patgenas.
Evaluacin de toxinas
Obtencin y seleccin de clones resistentes a diversos patgenos y productos fitosanitarios para la mejora gentica.

11 de octubre de 2011
MARCADORES
Marcadores genticos

Morfolgicos
Factores ambientales: Temperatura, humedad y suelo
Nivel de la planta: Sanidad
Estado adulto

Moleculares
Fenotpicamente neutros
Mayor segregacin polimorfismo
Primeros estados
Cualquier tipo de material
poca del ao
Libre de efectos epistticos
Marcadores moleculares

Detectar cualquier diferencia fenotpica controlada genticamente.

Cualquier molcula orgnica propia de un organismo o proceso.

Cualquier molcula de protena, RNA o DNA, para monitorear o calibrar la separacin utilizando PAGE o
cromatografa.

DNA. Cualquier fragmento que se encuentre muy cerca del gen o de la secuencia de inters y no afecte al carcter
del estudio.
Marcador gentico

Regin cromosomal o alelo que permite rastrear una regin especfica del DNA.

Una pieza especfica de DNA con posicin conocida en el genoma.

Gen cuya expresin perite un efecto genotpico.

Fcilmente detectado (gen que ocasiona resistencia a algn antibitico).


Clases

Aquellos basados en rasgos visualmente asentables o reconocibles.

Aquellos basados en un producto (marcadores bioqumicos).

Aquellos detectados mediante una prueba de DNA (marcadores moleculares).


Marcador gentico

Gen cuya expresin permite un efecto fenotpico.

Es visual y fcilmente detectable.


Anteriormente se utilizaban los mtodos de mejora convencional, por medio de los cules se seleccionaban las
mejores plantas; despus, con las tcnicas de ingeniera gentica se pudieron hacer plantas transgnicas mediante
la insercin de genes exgenos,
Isoenzimas (bioqumicos)
Variantes (sustrato comn).
Polmeros de subunidades producidas por diferentes alelos en el mismo locus.
Diferentes individuos pueden tener diferentes formas moleculares de la misma protena.
Anlisis

Extraccin

Separacin por electroforesis.

Tincin con colorantes especficos.

Limitantes: Escaso nmero de colorantes enzimticos.

Improbabilidad de contar con suficientes marcadores para cubrir todo el genoma.


Aplicacin

Mejoramiento en poblaciones rurales.

Plantaciones de rboles.

Estudios a gran escala de estructura poblacional.

Relacin con la resistencia a plagas y enfermedades.

Anlisis
Marcadores moleculares

Modo de transmisin
o Herencia nuclear biparental
o Herencia nuclear materna
o Herencia materna orgnulo
o Herencia paterna orgnulo

Modo de accin del gen


o Marcadores dominantes
o Marcadores co-dominantes

Mtodo de anlisis
o Hibridacin
o Basado en PCR

Marcadores de DNA

Basados en PCR
o RFLP
o Nmero variable de repeticiones en tndem

Iniciadores arbitrarios o semiarbitrarios


o Iniciadores de PCR mltiples arbitrarios

RAPD

RAMPO (Polimorfismo microsatlite aleatorio amplificado)

PCR con sitio objetivo especfico


o SSI. Insercin sitio seleccionado
o ISSR. Microsatlites o secuencias sitio repetidas
RFLP

Ms utilizado como marcador molecular.

1975. Secuencia polimrficas de serotipos de adenovirus.

1980. Genoma humano.

1985-86. Genoma de plantas.


Fundamento. Enzimas de restriccin que revelan diferencias entre el patrn de fragmentos de DNA en organismos
individuales.
Diferencias detectadas

Mutacin puntual

Translocacin

Duplicacin

Insercin- delecin

Inversin

Ventajas

Altamente reproducible.

Herencia codominante.

Buena transferencia de informacin entre laboratorios.

Provee de marcadores especficos que permiten conservar el orden de genes entre organismo seleccionados.

Limitantes

Requiere de alta cantidad y calidad de DNA.

Depende del desarrollo de libreras y sondas por especie.

La tcnica no es amigable para la automatizacin.

El nivel de polimorfismo es bajo y pocos locus son detectados por el ensayo.

Consumo de tiempo laborioso y caro.

Requiere de sondas marcadas radiactivamente.

PCR

Fundamento

Replicacin enzimtica.

Amplificacin de pequeas cantidades de DNA sin el uso de organismos vivos.

Ventajas
Pequeas cantidades de DNA requerido.
Eliminacin de radioistopos.
Amplificacin DNA tejidos conservados.
Accesibilidad en equipo facilidad y costo.
Alto polimorfismo.
Evaluacin de mltiples genes de forma simultnea.

Marcadores
RADPs
ISSR
AFLPs
SCARs (regiones amplificadas de secuencias caracterizadas)
SAMPLs (amplificacin selectiva de los loci polimrficos)
RAF (amplificacin azarosa de los fragmentos de DNA)
DAMD (amplificacin directa con DNA microsatlites)

Amplificacin azarosa de DNA polimrfico (RAPD)


Solo iniciador.
Secuencia arbitraria.
Amplificacin de secuencias al azar de un patrn complejo de DNA.
Resultado de cualquier cambio en secuencia o sitio de unin del iniciador.
Producto de cambios que alteren el tamao o impidan la amplificacin del molde de DNA.
Nmero inmensa de marcadores.
No requieren sondas especficas para cada especie.
Cantidad de DNA necesario para su anlisis en menor.
Eficiencia.
Nmero de ciclos por amplificacin.
Cantidad de DNA inicial.
Longitud de DNA iniciador.
Temperatura.

Microsatlites o secuencia simples repetidas


Regiones secuencia pequeas, repetidas arregladas en serie
Distribucin azarosa por el DNA
Altamente variable: hongos plantas animales
La repeticin no codifica para formar protena alguna.
Pueden recombinarse y expandirse ms frecuentemente
tiles para mediar el polimorfismo entre especies o variedades relacionadas
Loci altamente mutables

Desventajas: Sistema laborioso (identificacin de genes y secuenciacin de regiones genmicas concretas).

Polimorfismo en la longitud de fragmentos amplificados


Marcadores de alta eficiencia.
Anlisis de loci por experimento.
Dominante y altamente reproducible.
Combina la digestin por enzimas de restriccin con PCR.
Simultneo sondeo de regiones con DNA representativo distribuido aleatoriamente.

Ventajas: Puede ser utilizado DNA parcialmente degradado, altamente seguro y reproducible, no requiere
informacin de la secuencia de DNA del organismo bajo estudio.
Desventaja: Uso de geles de poliacrilamida con nitrato de plata (+ costo) radiactividad.
Principales caractersticas de los marcadores

Caractersti
ca

ISOE
NZIM
AS

RFLP

Bajo

Medio

Usual
mente
codom
inante

Codo
minan
te

Nivel de
polimorfism
o
que detecta

Dominancia

Numero de

loci

Abundancia

en el
genoma

Multilo
ci

Multilo
ci

Baja

Media

RA
PD

AFLP

ISSR

Me
dio

Medio

Alto

Do
min
ant
e
Mul
tilo
ci
Mu
y
alta

SELECCIN

Disponibilidad del sistema marcador.

Simplicidad y disponibilidad del tiempo.

Nivel anticipado de polimorfismo en la poblacin.

Cantidad y calidad del DNA disponible.

Transferencia entre laboratorios, poblacin, pedigr, especie.

Tamao y o estructura de la poblacin.

Disponibilidad adecuada de equipo y habilidad.

Costo y financiamiento.

Herencia del marcador (dominante, codominante).

Mejoramiento vegetal

Fenotipo

Genotipo

Ambiente
o Suelo
o Nutrientes
o Temperatura
o Humedad
o Competidores
o Enfermedades

Mejoramiento convencional
o Cruzamiento
o Seleccin intra e interespecfica
o Utilizado desde la antigedad

Mutaciones inducidas y seleccin


o Ciclotrones (aceleradores lineales)
o Bombardeo de los vegetales
o Mutaciones genticas al azar
o Seleccin de aquellos con caractersticas inducidas

Biotecnologa moderna
o Basada en ingeniera gentica
o Modificacin de uno o ms genes
o Plantas transgnicas

DIAGNSTICO VEGETAL
Alteracin del agrosistema
o Evolucin de las plantas
o Organismos asociados
Tcnicas de monocultivo

Codominante/domi
nante

Multiloci

Alta

Codomi
nante

Multiloc
i

Media

Mejoramiento gentico de las plantas


Uso intensivo de plaguicidas

Diagnstico oportuno
Deteccin del agente causal
Generacin de medidas de control efectivo
Optimizacin de recursos
Reduccin de los efectos negativos del medio ambiente
Generacin de informacin de la interaccin patgeno-hospedero

TIPOS DE DIAGNSTICO
Presuntivo
o Examen del campo y alrededores.
o Identificacin de la especie o variedad enferma.
o Patrones de anormalidad, distribucin geogrfica de la enfermedad en el campo y comparacin de plantas.
o Examen de las plantas individuales, posicin de sntomas y signos.
o Prcticas agrcolas del cultivo: fertilizacin, riesgo y control qumico.
Confirmacin
o Macroscpico

Observacin de sntomas.

Requiere experiencia y conocimiento de las variables que inciden en la enfermedad, tipo de cultivo, suelo, clima y
patgeno.
o Microscpico

Observacin de estructuras del microorganismo fitopatgeno.

Tcnicas clsicas para el diagnstico

Medios selectivos.

Determinacin cuantitativa de la poblacin.

Basados en las posibilidades de las bacterias para el uso de sustratos especficos.

Presencia o ausencia de crecimiento y color.

Microscopa ptica y electrnica

Limitada a la observacin directa de las estructuras de patgeno

Tcnicas serolgicas

Aglutinacin

Reaccin Ag y Ac (formacin de grnulos)

Menos especfica

Dependen de pH, Temperatura y tiempo

Precipitacin

Geles o lquidos

Ag-Ac (precipitacin)

Mtodo de ltex (aglutinacin)

Inmunofluorescencia. Conjugacin de Ac especficos con molculas teidas para productos

Inmunoenzimtica. ELISA. Interaccin especfica Ag (patgeno) y Ac (protenas inmunoglobulinas producidas por el


conejo)

Tcnicas avanzadas para el diagnstico

PCR
o Deteccin de patgenos en semillas, cultivo de tejidos, deteccin de toxinas.
o Relaciones filogenticas (anlisis de biologa de las poblaciones)

RFLP
o Costosa y laboriosa
o Uso de radioistopos

RAPD