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Unidad de Gentica y Biologa del Desarrollo, Departamento de Biologa, Pontificia Universidad Javeriana, Cra. 7 N 43-82. Laboratorio 240, Bogot-Colombia. Correo electrnico: rmaestre22@yahoo.com
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Abstract
The enzymatic activity of L-lactate: NAD+ oxide-reductase (LDH; EC. 1.1.1.27) isoenzymes in
each of the embrionic development stages of Betta splendens was determined. Were taken 200 eggs
in each embrionic stage (fertilized oocite, cleavaje, blastula, gastrula and neurula) from four sexualy
mature fish additionally, unfertilized oocites were collected from two other females. Each sample
(200 embryoes or 200 unfertilized eggs) was homogenized and spund 15 minutes at 10000 rpm. The
flotant was run by electrophoresis in agarose gels and total LDH activity mas measured
spectrophotometrically. The electrophoregrams were spun at 540 nm in a densitometer to calculate
the LDH isoenzyme specific activity. During the embryonic period, LDH-3 and LDH-4 were
characterized by presenting the most enzymatic activity. LDH-2 was expressed in all stages of
gastrula and neurula stages but showed less activity.
Key words: Enzimatic activity, Betta splendens, isoenzyme, lactate dehydrogenase.
Introduccin
Los rganos, tejidos y compartimentos celulares de
los diversos organismos pueden contener diferentes formas moleculares de una enzima que catalizan la misma
reaccin bioqumica. Estas mltiples formas moleculares
se denominan isoenzimas, las cuales, estn codificadas
por genes diferentes y poseen propiedades fsicas, qumicas y cinticas especficas que facilitan su caracterizacin (Dallos et al., 1994; Porras, 1996).
La expresin particular de las isoenzimas en etapas especficas del desarrollo, reflejan los cambios bioqumicos
y metablicos que se llevan a cabo durante el proceso de
embriognesis. Adems, la medicin de su actividad
enzimtica permite correlacionar los cambios bioqumicos,
con los estados de diferenciacin morfolgica propios de
la embriognesis y organognesis (Frankel, 1980; Frankel
& Wilson, 1984). La expresin, concentracin y actividad
enzimtica de estas isoenzimas, cambia en forma programada durante el curso de la ontogenia en los distintos organismos, aspecto an no determinado en la especie Betta
splendens. Por tal motivo, se considera importante identificar cundo aparecen las isoenzimas, cules son sus concentraciones y actividad enzimtica, en los diferentes
estados del desarrollo embrionario temprano de la mencionada especie, para ampliar su conocimiento en el rea
bioqumica y taxonmica.
+
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Tabla 1. Isoenzimas y su concentracin promedio en cada etapa del desarrollo embrionario temprano de Betta splendens.
Estadio de desarrollo
Nmero de bandas
Oocito fertilizado
Clivajes
Blstulas
Gstrula
Neurula
LDH4
LDH3
LDH4
LDH3
LDH4
LDH3
LDH4
LDH3
LDH4
LDH3
LDH2
LDH4
LDH3
LDH2
1000
Actividad Enzimtica de Isoenzimas de LD
1400
1200
Concentracin
bandas (%)
26,9
73,1
24,4
75,6
26,1
73,9
27,7
72,3
18
76
6
18,3
74,2
7,5
Isoenzimas
1000
800
600
400
200
LDH-4
900
LDH-3
LDH-2
800
700
600
500
400
300
200
100
0
O. sin F. O. Fert.
0
O. sin F. O. Fert. Cliv.
Blst.
Gst.
Estados de Desarrollo Embrionario
Neur.
Cliv.
Blst.
Gst.
Neur.
rio temprano como se puede comprobar al analizar la figura 1, donde se aprecian tres patrones bsicos en la actividad total de LDH: Incremento en la actividad enzimtica
de LDH entre oocito sin fertilizar y oocito fertilizado.
Disminucin y relativa uniformidad, en la actividad
enzimtica de LDH durante los estadios de clivajes y
blstula. Incremento en la actividad enzimtica de LDH
durante los estadios de gstrula y neurula.
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durante gstrula y neurula, como proliferacin celular, diferenciacin, morfognesis, e induccin embrionaria.
Segn Whitt (1981), el tiempo de aparicin de las
isoenzimas puede concordar con eventos morfogenticos
especficos. Lo anterior, se observ con la expresin de la
isoenzima LDH-2 en los estadios de gstrula y neurula,
que puede estar asociada con la diferenciacin de
mesodermo. Durante la etapa de gstrula, cuando se detect por primera vez la isoenzima LDH-2, se produjo la
diferenciacin de esta capa germinativa. Aqu, dicha
isoenzima mostr baja actividad y se increment moderadamente durante el estadio de neurula; lo que puede estar
relacionado, con la especializacin de la capa germinativa
en mesodermo epimrico, mesodermo intermedio y
mesodermo hipomrico caractersticos de la neurulacin.
Conclusiones
La enzima lactato deshidrogenasa, se encuentra
metablicamente activa y sufre importantes cambios en
su actividad total, durante el desarrollo embrionario temprano de Betta splendens. Las isoenzimas LDH-4, LDH-3 y
LDH-2, sufren importante cambios en su actividad, durante
las diferentes etapas. La isoenzima LDH-3, se caracteriz
por presentar la mayor actividad enzimtica, seguida de
la isoenzima LDH-4 durante todo el periodo. La isoenzima
LDH-2 se expres durante las etapas de gstrula y neurula,
mostrando un constante aumento en su actividad
enzimtica; lo cual puede estar relacionado, con un posible incremento en los requerimientos energticos para llevar a cabo la diferenciacin y posterior especializacin
del mesodermo en estas etapas del desarrollo.
Agradecimientos
Expresamos nuestros agradecimientos a las profesoras
Irma Colmenares de Escamilla, Edilma Guevara y Lucia
Jimnez, por el apoyo brindado en el desarrollo de esta
investigacin. Tambin agradecemos a las Doctoras Ofelia
Diez y Martha Guerra, por su colaboracin en el desarrollo de las tcnicas utilizadas, as como a quienes realizaron aportes para llevar a feliz trmino esta investigacin.
Bibliografa
Basaglia, F. 1989. Some aspects of isozymes of lactate dehydrogenase,
malate dehydrogenase and glucosephosphate isomerase in fish.
Comp. Biochem. Physiol. 92B (2): 213-226.
Boulekbache, H. 1981. Energy metabolism in fish development. Amer.
Zool. 21:377-389.