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Resumen.

Citrus se ve afectada por cuatro enfermedades causadas por Alternaria spp. Mancha
marrn de mandarinas, mancha de la hoja de limn rugoso, poscosecha rot negro de
la fruta se produce ampliamente en reas citrcolas del mundo y son causadas por
diferentes patotipos de A. alternata. Mancha foliar se produce slo en limn mexicano
en el oeste de Mxico y es causada por A. limicola. Mandarina y limn rugoso
patotipos producen toxinas especficas de servidor que afectan a las membranas y la
respiracin, respectivamente. Rot Negro siempre se asocia con heridas y es causada
por la mayora de los aislados de ctricos asociado de A. alternata que producen
endopoligalacturonasa. Alternaria mancha marrn es una enfermedad grave de
mandarinas y sus hbridos susceptibles en climas mediterrneos semiridos, as como
en las zonas ms hmedas. Los conidios, produjo sobre las lesiones en las hojas
maduras y senescentes y tallos en condiciones de humedad, son dispersadas por el
viento, e infectar a todos los tejidos juveniles de cultivares susceptibles cuando las
condiciones de temperatura y humedad de la hoja son favorables. Se estn
desarrollando cultivares comercialmente aceptables resistentes a la mancha marrn.
Gravedad de la enfermedad se puede reducir mediante la plantacin libre de
enfermedades de vivero en distancias ms amplias, poda faldas del rbol, y la
reduccin del riego y la fertilizacin nitrogenada. Sin embargo, fungicidas tales como
ditiocarbamatos, triazoles, estrobilurinas, iprodiona, o fungicidas de cobre se utilizan
en la mayora de las reas de control de enfermedades. Un modelo de la enfermedadla previsin, la Alter-Evaluador, se ha desarrollado en la Florida para ayudar en la
sincronizacin fungicidas.
Introduccin
Tipos de Alternaria causan cuatro enfermedades distintas de ctricos, es decir,
Alternaria mancha marrn de mandarinas y sus hbridos, hoja Alternaria de limn
rugoso, Alternaria rot negro de la fruta, y Mancha foliar en limn mexicano. La
Alternaria mancha marrn patgeno "patotipo mandarina" afecta a muchas
mandarinas y sus hbridos y produce lesiones en la fruta y las hojas inmaduras, induce
la hoja y fruta cada, y produce manchas y lesiones de corcho en la fruta madura. La
mancha foliar por Alternaria patgeno "patotipo rough lemon" produce sntomas
similares en hojas de limn speras ya detectar posibles lesiones en la fruta y slo
afecta a limn rugoso y lima Rangpur. Los dos ltimos agentes patgenos producen
toxinas especficas de servidor (HSTS) y la gama de huspedes de cada uno est muy
restringido (Kohmoto et al, 1979;. 1991). Alternaria rot negro es una enfermedad postcosecha que se produce en todo el mundo y produce la decadencia interna de todos
los ctricos comercial. Los hongos Alternaria que provocan las enfermedades
anteriores son pequeas esporas, son morfolgicamente similares, y todos se
consideran variantes intraespecficas de A. alternata (Peever et al., 2003). Se
requieren pruebas de patogenicidad, ensayos de la toxina, la deteccin de los genes
de la biosntesis de la toxina, u otros marcadores genticos para distinguir estos
hongos. Mancha foliar se caracteriza por la produccin de pequeas lesiones en las
hojas de mexicana cal y algunas otras variedades de ctricos en el oeste de Mxico.
Esta enfermedad es causada por una especie de gran esporas, Alternaria limicola
(palma y Civerolo, 1994) y no se asocia con la produccin de un HST.

Las enfermedades
Mancha marrn Alternaria de mandarinas
El patotipo mandarina de A. alternata afecta a muchas mandarinas e hbridos (Timmer
et al., 2000a) y afecta a las hojas, ramas y frutos. En las hojas jvenes, la enfermedad
produce minutos marrn a los puntos negros. Los sntomas pueden aparecer en tan
slo 24 horas despus de la infeccin. Las lesiones por lo general continan
expandindose y grandes reas de la hoja pueden ser asesinados por la ACT-toxinaanfitrin selectiva (Kohmoto et al., 1993) incluso sin la colonizacin de tejidos. La
clorosis y necrosis puede extenderse a lo largo de las venas como la toxina se
transloca acropetalmente. En las hojas maduras, la enfermedad aparece como
lesiones marrones distintas rodeadas por un halo de color amarillo (. Fig 1A). Las
hojas afectadas menudo abscisa. Los brotes jvenes tambin estn infectadas
producir lesiones marrones de 1 a 10 mm de dimetro. Ramitas infectadas mueren
espalda sobre todo si las hojas han cado.
En la fruta, de color marrn a negro lesiones puede variar desde manchas minutos
hasta grandes lesiones de crter (Figura 1D)..
Erupciones Corky veces se forman y pueden desprenderse formando un pockmark en
la superficie. Afectado gravemente abscisa fruta reduciendo el rendimiento, y manchas
en la fruta restante disminuyendo en gran medida de comercializacin.
Hoja Alternaria de limn rugoso
Esta enfermedad afecta solamente limn rugoso y lima Rangpur, que son patrones
comunes en algunas zonas citrcolas. Por lo tanto, esta enfermedad slo es importante
en el comercio en los viveros y los bloques de produccin de semillas. Los sntomas
en las hojas son muy similares a los producidos en tangerinas (figura 1B) (Timmer et
al., 2000a). La toxina producida por este patotipo es distinta de la patotipo mandarina,
y se llama ACR-toxina o ACRL-toxina (Kohmoto et al, 1979.) (Gardner et al, 1985;.
Nakatsuka et al, 1986a.). Los sntomas no aparecen en hojas de limn speras por
unos 3 das despus de la inoculacin en comparacin con 24 h de la enfermedad de
la mancha marrn. Los sntomas en las frutas no son ms que pequeas manchas
marrones (Timmer et al., 2000a) y son bastante reducidas en relacin con el patotipo
mandarina.
Mancha foliar
Mancha foliar es una enfermedad que afecta principalmente a limn mexicano y se
produce slo en el oeste de Mxico (Becerra et al, 1988;. Timmer et al, 2000a.). El
limn mexicano, Mancha foliar produce lesiones pequeas y de color marrn rojizo en
las hojas que estn rodeados por halos clorticos (Figura 1C).. Las hojas afectadas
menudo abscisa y ramitas pueden morir de vuelta. Pequeas lesiones elevadas se
producen en la fruta, pero los sntomas desaparecen a medida que se desarrolla el
fruto.
Mancha
foliar
tambin
se
produce
en
el
pomelo,
ombligo naranjas y lima Tahit, pero rara vez causa un dao significativo. La mayora
de otros ctricos es resistente a la enfermedad.

rot negro
Rot Negro afecta la columela central de la fruta y puede afectar a todas las especies
de ctricos (Brown y McCornack, 1972). Los sntomas externos a menudo no son
evidentes y, si est presente, aparecen como una pequea marrn a punto negro en el
extremo estilar del fruto (Brown y Eckert, 2000) (Fig. 1E). Frutos afectados son ms de
colores brillantes de la fruta normal debido al etileno generado en respuesta a la
infeccin. Parece que la mayora de pequeas esporas de Alternaria aislamientos son
capaces de causar la pudricin de negro. Estos incluyen aislamientos saprfitos que
colonizan los tejidos muertos o senescentes, epfitas de hojas sanas, as como las de
mandarina y limn rugoso patotipos (Bhatia, Peever y Timmer, sin publicar).
Se requiere una herida o una grieta natural para la penetracin del hongo. La
capacidad de producir endopoligalacturonasa parece esencial para aislar las cepas
para causar la putrefaccin negro (Isshiki et al., 2001).
Ninguna de las cepas de la pudricin negra probados hasta la fecha producen HST.
Los patgenos
Morfologa, taxonoma y clasificacin
Los primeros tipos de Alternaria ctricos-asociado que permita describir formalmente
fue A. citri, el agente causal de la pudricin de la fruta ctrica negro (Pierce, 1902).
Mancha marrn y patgenos foliares limn speras fueron identificados posteriormente
como A. citri en base a su similitud morfolgica a la podredumbre hongo negro
(Doidge, 1929; Ruehle, 1937; Kiely, 1964; Pegg, 1966). Sin embargo, las manchas y
manchas foliares hongos marrones son conocidos por ser biolgicamente y
patolgicamente distinta de la pudricin de hongos negro, porque los primeros son
capaces de infectar a las hojas jvenes y frutos y producir toxinas especficas de
servidor (Kiely, 1964; Whiteside, 1976). Las manchas y manchas foliares patgenos
marrones se consideraron A. alternata por Kohmoto et al. (1979) sobre la base de una
descripcin publicada de la morfologa de conidios y las mediciones de A. alternata
(Simmons, 1967). Solel (1991) design el patgeno mandarina como A. alternata pv.
citri. Sin embargo, esta nomenclatura no aborda la situacin del patgeno limn
rugoso.
Los trminos "patotpicas mandarina" y "patotpicas limn rugoso" se han aplicado
para designar los atributos patolgicas nicas del patgeno mancha marrn y
patgenos foliares limn rugoso, respectivamente, y preferimos estas designaciones.
Investigacin morphotaxonomic reciente ha intentado aclarar la identidad de pequeas
esporas de Alternaria aislamientos asociados con una mancha marrn y mancha foliar
de los ctricos. Ciento treinta y cinco cepas de la coleccin mundial de LW Timmer y
T.L. Peever, incluyendo los aislados de lesiones en las hojas de limn en bruto y
lesiones de manchas marrones en las mandarinas e hbridos de mandarina, fueron
examinados y diez especies morfolgicas fueron descritos (Simmons, 1999), ninguno
de los cuales se consider representativa de A. alternata o A. citri.
Un anlisis filogentico de pequeas esporas, Alternaria ctricos asociada aislamientos
se complet recientemente e incluy las diez especies morfolgicas descritas
recientemente por Simmons (1999), varios rot negro asla, y las especies de referencia
pequea esporas de otros hosts (Peever et al., 2003). Uso de la de tipo ex asla de

Simmons (1999), fue posible asignar directamente a las especies morfolgicas en una
filogenia estimada a partir de un conjunto de datos combinado que consta de una
secuencia parcial de la regin de codificacin de un endopoligalacturonasa (endoPG)
gen (Isshiki et al. , 2001; Peever et al, 2002) y dos regiones annimos del genoma.. El
anlisis revel ocho clados wellsupported que podran interpretarse como ocho
especies filogenticas. Los clados fueron ampliamente congruente con las especies
morfolgicas; Sin embargo, tres clados contenan ms bronceado una especie
morfolgicos y una especie morfolgicas (A. citrimacularis) era polifiltico.
Aislamientos podredumbre negra se distribuyeron a lo largo de la filogenia combinado
en tres clados. Un aislado rot negro se encontr en el mismo linaje filogentico como
dos saproftica A. alternata asla, otro fue encontrado en un linaje filogentico con
varios mancha marrn y mancha foliar aislados y un tercero fue encontrado en un
linaje con A. arborescens, un host- especfica patgeno que produce la toxina del
tomate (Peever et al., 2003). Estos resultados demuestran claramente que
filogenticamente distinto pequeas esporas taxones Alternaria puede estar asociada
con la pudricin negro y plantean interrogantes sobre la validez de A. citri como un
taxn
filogentico.
Nos encontramos con que muchas especies de Alternaria-pequeas esporas son
capaces de causar la putrefaccin negro. Filogenticamente diversos aislados de
podredumbre negro, mancha marrn y spera mancha foliar limn de ctricos y
adicionales
pequea spored aislados de no ctricos anfitriones eran capaces de inducir la pudricin
de negro cuando se inocula en heridos ctricos (Bhatia, Peever y Timmer, sin publicar).
La falta de correlacin entre el linaje filogentico y fenotpica nico, caracteres
ecolgicos o patolgicas entre la Alternaria pequeas esporas ctricos asociada
plantea preguntas acerca de la utilidad prctica tanto de las especies morfolgicas y
especies definidas con criterios slo filogenticos. La aparicin de mltiples especies
morfolgicas en varios clados y la polyphyly de al menos una especie morfolgicos
indican claramente que las especies morfolgicas no reflejan relaciones evolutivas
entre estos hongos. Hasta que se pueda demostrar que los caracteres ecolgicos,
biolgicos o bioqumicos nicos se pueden asociar a un linaje filogentico especfica,
abogamos por el colapso de todo, Alternaria pequeas esporas ctricos asociada asla,
incluyendo la mancha marrn, spero mancha de la hoja de limn y la podredumbre
negro aislados, en una sola especie, A. alternata. Mancha foliar es causada por A.
limicola Simmons y Palm, la nica especie de gran esporas de Alternaria se sabe que
afectan a los ctricos (Palm y Civerolo, 1994). En contraste con las cepas no
patgenas de Alternaria y los que causan la mancha marrn, mancha de la hoja, o la
putrefaccin negro, A. limicola es claramente distinguibles morfolgicamente y
mediante mtodos moleculares (Peever et al., 2003). Los conidios de esta especie son
grandes (16-22_140-190 m) con picos de largo (60-90 m). A. limicola produce varias
toxinas en la cultura, pero no se acoger especfico como son la ACT y ACR-toxinas
(Becerra et al, 1988;.. Timmer et al, 2000a).
Especificidad del hospedador
Hay un alto grado de especificidad de hospedador entre los aislados de mandarina y
los de limn rugoso (Kohmoto et al, 1979, 1991;. Peever et al, 1999.). En Florida, la
gran mayora de los aislamientos obtenidos de Minneola tangelo fueron patognicos a

ese host y slo el 3% eran no-patgena y ninguno era patgeno para el limn rugoso
(Peever et al., 1999). La mayora de los aislados de limn rugoso fueron patognicos
en el host de origen, pero algunos fueron patognicos en Minneola tangelo y no limn
rugoso. Una porcin sustancial, 44%, no eran patgenos para cualquiera de acogida.
Cuando los sntomas de la enfermedad se encontraron por primera vez en la toronja y
mandarina en Sunburst en la Florida, la posibilidad de la especificidad del hospedador
dentro del patotipo mandarina fue levantado (Timmer y Peever,
1997). El uso de ADN polimrfico amplificado al azar, los aislados de pomelo y el
hbrido de mandarina Nova poda distinguirse de los de Robinson, Sunburst, Minneola,
Orlando, y Murcotts (Peever et al., 2000). Sin embargo, los estudios de inoculacin
cruzadas sobre los diferentes anfitriones no apoyaron la especificidad de husped
visto con marcadores moleculares. En las inoculaciones, Minneola fue
consistentemente los ms susceptibles seguido por Orlando, Sunburst, Nova, y
pomelo con el fin de disminuir la susceptibilidad independientemente de la fuente de
acogida de los aislamientos.
Ciclo y epidemiologa de las enfermedades
Alternaria mancha marrn de mandarina es la nica enfermedad Alternaria de ctricos
para la cual no es una cantidad apreciable de informacin sobre la epidemiologa.
Desde mancha de la hoja de limn rugoso es relativamente poco importante en el
comercio, la ecologa y la epidemiologa de este patgeno han sido poco estudiados.
El ciclo de la enfermedad es simple ya que no hay teleomorfo conocido para A.
alternata (Timmer, 1999). Los conidios se producen principalmente en la superficie de
las lesiones en las hojas maduras o senescentes (Fig. 2,3) y en las ramas afectadas.
Relativamente pocas, si alguna, se producen en lesiones jvenes sobre hojas o
lesiones maduras frutas. Produccin conidium es mayor cuando las hojas estn
ligeramente humedecido o retenidos a la alta humedad, con menos produccin donde
las hojas son muy hmeda (Timmer et al., 1998). Casi no hay conidios se forman a
humedades relativas bajas o moderadas si las hojas estn libres de humedad. La
produccin de conidios, la dispersin, y la infeccin se presume que son similares a
los de la patotipo mandarina. Asimismo medidas de control no se han establecido para
esta enfermedad. La liberacin de conidios de esporulacin lesiones de mancha
marrn se activa por la lluvia o por los cambios bruscos de humedad relativa (Timmer
et al., 1998). La lluvia es probablemente ms importante para la liberacin de esporas
en las zonas hmedas como Florida (EE.UU.) o Brasil. Sin embargo, en las zonas
mediterrneas, donde cae poca lluvia durante el perodo de susceptibilidad, la
liberacin de esporas puede ser desencadenada por una fuerte disminucin de la
humedad relativa (HR) cuando el roco se seca. Las esporas son dispersadas por las
corrientes de viento y son finalmente depositados en la superficie de los tejidos
susceptibles. Con el roco de la noche siguiente, los conidios germinan y
eventualmente infectar las hojas o frutos. La penetracin de la hoja puede ocurrir
directamente oa travs de los estomas y en estudios en Israel est consistentemente
asociada con la formacin de apresorios (Solel y Kimchi, 1998). Observaciones
preliminares en Florida indican que la penetracin se produce a travs de los estomas
en la superficie inferior de la hoja sin appressorium formacin (Bhatia et al., 2002).
La temperatura ptima para la infeccin es 27C (Canihos et al., 1999). Cuando las
temperaturas bajan, se requieren perodos de humectacin ms largo para que se

produzca la infeccin. En 32C, poco infeccin se produce incluso con abundante


humedad. Pequeas cantidades de infeccin puede ocurrir con la hoja duraciones de
humedad de 4-8 h, pero por lo general 10-12 h de humedad son necesarios para la
infeccin sustancial (Canihos et al, 1999;. Timmer et al, 2000b.). En muchas zonas
semiridas, las temperaturas son fras por la noche cuando se produce el roco y
pueden estar por debajo del ptimo. Por lo tanto ya perodos humectantes pueden ser
requeridos para la infeccin. Como con Alternaria spp. de otros cultivos, conidios
germinados pueden sobrevivir al calor del da y continuar el desarrollo de la siguiente
noche (Rotem, 1994). En las zonas hmedas como Florida, Colombia o Brasil, las
temperaturas siguientes precipitaciones pueden estar cerca del ptimo durante el
perodo de susceptibilidad.
En Mxico, Mancha foliar se presenta principalmente en los inviernos fros y secos
disminuye con el clima clido y hmedo en verano (Stapleton y Garca-Lpez, 1988).
Los conidios germinan en 4 h e infectar las hojas en aproximadamente 12 h. En el
campo, los niveles de infeccin son ms altas cuando las temperaturas caen por
debajo de 24C. La esporulacin comienza alrededor de una semana despus de que
aparecen los sntomas.
Fungicidas ditiocarbamatos son efectivos para el control de la enfermedad. Se
necesitan aplicaciones de una semana despus de la emergencia de brotes y de
nuevo dos semanas ms tarde (Timmer et al., 2000a).
En el campo, ocurrencia rot negro es espordica. La enfermedad es ms comn en
reas semi-ridas porque Alternaria es ms frecuente como epfita, endfitos, y
saprofito all que en las zonas hmedas. Se produce comnmente en naranjas navel
porque de aberturas naturales creadas por el crecimiento del ombligo (Brown y Eckert,
2000). Tambin se observa con frecuencia en los limones, especialmente donde la
fruta se mantiene en el almacenamiento en fro durante largos perodos. Preand
aplicaciones de fungicidas poscosecha ofrecen muy poco control de la enfermedad. Si
rot negro se produce en la arboleda, cosecha debe retrasarse hasta que la mayora de
la fruta afectada ha cado. Hormonas, tales como 2, 4-D postcosecha aplicado, pueden
retrasar la senescencia y reducir la incidencia de la enfermedad.
Distribucin y diversidad geogrfica
Alternaria enfermedad de la mancha marrn se inform por primera vez sobre el
Emperor mandarina en Australia en 1903 (Cobb, 1903) y el agente causal fue
identificado como una especie de Alternaria en 1959 despus de una serie de
organismos fueron investigados como patgenos Posible (Kiely, 1964; Pegg, 1966 ).
La enfermedad apareci ms adelante en los EE.UU. (Whiteside, 1976), y ahora se
produce en Israel (Solel, 1991), Sudfrica (Schutte et al., 1992), Turqua (Canihos et
al., 1997), Espaa (Vicent, 2000 ), y Brasil y Argentina (Va et al, 2001;.. Peres et al,
2003). Debido a la similitud morfolgica entre las manchas y pudricin negro
patgenos marrones, el primero fue originalmente identificado como A. citri
Ellis y Pierce (Pegg, 1966; Whiteside, 1976), un hongo que haba sido descrito por
primera vez como la causa de pudricin negro de los ctricos. Hoja Alternaria de limn
rugoso
fue
reportado
por
primera
vez
en
Sudfrica
(Doidge, 1929). Alternaria rot negro, tambin conocida como la pudricin del

pednculo, se inform ya en la dcada de 1900 en California (Pierce, 1902; Roger y


Earle, 1917; Bartholomew, 1926; Bliss y Fawcett, 1944).
Los aislamientos de A. alternata fueron recogidos de Minneola tangelo en los Estados
Unidos, Colombia, Australia, Israel, Turqua y Sudfrica para inferir la estructura de la
poblacin en todo el mundo y filogeografa del patgeno (Peever et al., 2002). Ambos
marcadores RAPD y datos de la secuencia de un endoPG revelaron que los aislados
de la Florida y Colombia eran distintos de los aislados de la muestra en las otras
partes del mundo. Los datos endoPG separados aislados en tres linajes filogenticos
que se correlacionaban con el pas de origen. Asla de los Estados Unidos, Australia,
Sudfrica e Israel se encuentran en un segundo clado mientras que no se encontraron
aislados de Australia, Israel, Sudfrica y Turqua en un tercer clado. Peever et al.
(2003) especularon que estos tres linajes filogenticos fueron introducidos de forma
independiente en cada regin citrcola de una poblacin de origen comn en material
vegetal.
Esta poblacin de origen puede haber sido el sudeste de Asia, el centro de origen de
los ctricos, aunque poco se sabe acerca de la enfermedad o del agente patgeno en
esta regin. Los aislamientos se realizarn las pruebas de patogenicidad en hojas
desprendidas de Minneola tangelo y las cepas de la Florida fueron significativamente
ms virulentas que las cepas de otros lugares. Los aislados de la Florida puede ser
ms virulenta, ya que tienen ms copias de los genes que controlan la biosntesis de la
toxina (ACTT) y producen ms ACT-toxina que asla de otros lugares. Un pequeo
porcentaje de los aislamientos internacionales se identificaron como no patgeno o
tener muy reducida virulencia y estas cepas estn siendo examinados para la
produccin de toxinas y la presencia de secuencias de ACTT.
Patognesis
Mancha marrn y hoja enfermedades de las manchas
La especificidad de husped de la mandarina y el limn rugoso patotipos de A.
alternata depende de la produccin de trenes de alta velocidad que poseen las
mismas selectividades como los patgenos (Kohmoto et al., 1979, 1991). La toxina del
patotipo limn rugoso fue nombrado ACR o ACRL-toxina, y que desde el patotipo
mandarina fue nombrado ACTtoxin. La estructura de la forma principal de ACRtoxin,
ACRL-toxina I (496 MW), se caracteriz como un anillo dihidropirona con una cadena
lateral polialcohol (Gardner et al, 1985;. Nakatsuka et al, 1986a.). ACR-toxina causa la
congestin de agua, necrosis venal (Kohmoto et al, 1979;. Akimitsu et al, 1994.),
inhibicin de la incorporacin de 14C-prolina (Gardner et al, 1985.), e induce un rpido
incremento de las fugas de electrolito (Kohmoto et al, 1979;. Akimitsu et al slo en las
especies de ctricos, limn toxinsensitive spera y Rangpur cal., 1994). Curiosamente,
la irradiacin de luz puede suprimir la necrosis inducida por toxina, as como fugas de
electrolito (Akimitsu et al., 1994), y un periodo de oscuridad de ms de 3 h durante la
irradiacin de luz supera el efecto supresor de la luz (Akimitsu et al., 1994 ).
La forma principal de HST producido por el patotipo mandarina fue designada como
ACT-toxina I (Kohmoto et al., 1993). La estructura de ACT-toxina est estrechamente
relacionado con AK- y AF-toxinas, que son los producidos por los trenes de alta
velocidad de pera y fresa patotipos japonesas de A. alternata, respectivamente
(Nakashima et al, 1985;.. Nakatsuka et al, 1986b, 1990;. Kohmoto et al, 1993). Estas

toxinas comparten un resto de cido 9,10-epoxi-8-hidroxi-9-methyldecatrienoic comn


(Nakashima et al, 1985;.. Nakatsuka et al, 1986b;. Kohmoto et al, 1993). ACT-toxina
causa necrosis venal y un rpido aumento en la prdida de electrolitos de las hojas
susceptibles, pero la toxina no tiene ningn efecto en las hojas resistentes (Kohmoto et
al., 1993). El modo de accin de ACTtoxin es todava incierto, pero una rpida prdida
de electrolitos a partir de tejidos de la hoja y los cambios ultraestructurales de las
clulas tratadas con la toxina indic que el sitio de accin principal de ACT-toxina era
probable la membrana plasmtica (Kohmoto et al., 1993).
Un grupo de genes que controlan la biosntesis de ACT-toxina se identific utilizando
sondas heterlogas de secuencias de AKT que controlan la biosntesis de un resto de
cido 9,10-epoxi-8-hidroxi-9-metil-decatrienoic en AK-toxina de la patotipo pera
japonesa de A. alternata (Tanaka et al., 1999). Las porciones de estos genes utilizados
como sondas heterlogas detectaron homloga en varios aislamientos de A. alternata
patotipo mandarina, pero no a partir de aislados que no producen ACT-toxina tal como
la patotipo spera limn, saprfitos, o aislamientos podredumbre negra (Masunaka et
al., 2000 ). El sitio diana de ACR-toxina fue identificada como la mitocondria. Electron
examen microscpico de las clulas tratadas con toxina mostr que del 10 al 18% de
las mitocondrias se rompe dentro de una hora despus del tratamiento con la toxina.
Crista estaban hinchados, menores en nmero y vesiculadas con una densidad de la
matriz inferior. La interrupcin de las funciones mitocondriales por ACR-toxina se
examin tambin mediante el control de una fosforilacin oxidativa y el potencial de
membrana mitocondrial usando aislados mitocondria ctricos fisiolgicamente activos
(Akimitsu et al., 1989). ACR-toxina causada desacoplamiento similar a protonforos
clsicos, tales como 2,4-dinitrofenol o cianuro de carbonilo m-clorofenil hidrazona, con
una prdida de potencial de membrana, pero los efectos difieren ligeramente de otros
desacopladores porque la toxina tambin provoca la fuga de co-factor , NAD + en el
ciclo del cido tricarboxlico (Akimitsu et al., 1989). Estos efectos de la ACR-toxina son
especficas de mitocondria aisladas a partir de cultivares susceptibles. Dancy
mandarina, emperador mandarina, y pomelo, que son susceptibles a ACT-toxina, son
completamente insensibles a ACR-toxina I (Akimitsu et al., 1989).
Las respuestas de defensa de ctricos inoculadas con patgenos foliares Alternaria no
se han examinado en detalle hasta la fecha. Los patrones de expresin de varios
genes relacionados con la defensa, incluyendo lipoxigenasa (RlemLOX), liasa
hyperperoxide, chalcona sintasa (Gotoh et al, 2002 (Gomi et al, 2002a). (Gomi et al,
2003.);.. Nalumpang et al, 2002a ), protena inhibidora de poligalacturonasa (Gotoh et
al, 2002;.. Nalumpang et al, 2002a, 2002b), quitinasas (Gomi et al, 2002b) genes se
han caracterizado en limn rugoso en respuesta a estos patgenos.. Todos estos
genes son altamente inducible en hojas de limn en bruto por la infeccin con A.
alternata no patgeno, y la expresin de estos genes se detect dentro de 2 h despus
de la herida o la inoculacin de limn rugoso deja con conidios del patotipo mandarina
A. alternata (aislar SH20), que es patgeno para las tangerinas y mandarinas pero no
a limn rugoso (. Gomi et al, 2002a, 2002b; Gotoh et al, 2002;.. Nalumpang et al,
2002a, 2002b). Otra cepa no patgena de A. alternata (aislar O-94), que no es
patgeno para los ctricos ensayadas (Akimitsu et al, 1989;.. Kohmoto et al, 1991),
tambin indujo la expresin de estos genes dentro de 2 h, pero la intensidad de las
bandas no era tan fuerte como los inducidos por SH20. Debido a que no hay
diferencias morfolgicas o bioqumicas aparentes entre SH20 y O-94, excepto que

SH20 produce ACTtoxin (Kohmoto et al, 1979, 1991, 1993;.. Masunaka et al, 2000), la
toxina podra tener un papel como inductor en el mayor acumulacin de los transcritos.
En contraste, la induccin de la expresin gnica estos defenserelated se retrasa o se
suprime cuando se inocul patgena A. alternata patotipo limn rugoso (AC325) en
hojas de limn en bruto (Gomi et al, 2002a, 2002b;.. Gotoh et al, 2002; Nalumpang et
al ., 2002a, 2002b).
Este sistema, utilizando ya sea un HST-producir o una cepa de A. alternata no
productores, que llev a una respuesta sensible o resistente claro en hojas de limn
speras, puede ser un buen modelo para una nueva evaluacin de la funcin de otros
genes relacionados con la defensa, incluyendo PR-protenas.
Alternaria pudricin negro
Aunque el patgeno podredumbre negro ha sido conocido para producir varias toxinas
tales como el cido tenuaznico, ter metil alternariol, y alternariol (Logrieco et al.,
1990), estas toxinas tienen ningn papel conocido en la patognesis. La patogenicidad
de este hongo depende de la produccin de una enzima extracelular que puede
degradar polmeros pcticas en las paredes celulares durante la infeccin. El papel
Posible de enzimas que degradan la pared de clulas en la patogenicidad, incluyendo
la penetracin, maceracin, nutrientes adquisicin, la induccin de defensa de la
planta, y la expresin de sntomas han sido investigados (Cooper, 1983, 1984; Walton,
1994). Los endoPGs se han purificado y clonado los genes tanto de un patgeno
podredumbre negro y un patotipo aislado de limn rugoso (Isshiki et al., 1997, 2001).
Las secuencias de estos genes y las caractersticas bioqumicas de las enzimas que
codifican son muy similares. Sin embargo, estos genes en los respectivos patgenos
fueron interrumpidas por la direccin de genes, los fenotipos de los mutantes eran
completamente diferentes (Isshiki et al., 1997, 2001). Un mutante del patgeno
endoPG podredumbre negro se redujo significativamente en su capacidad para causar
sntomas de la pudricin negro y penetracin en los ctricos as como en la maceracin
de tejido de patata y no podra colonizar segmentos de cscara de ctricos (Isshiki et
al., 2001). En contraste, un mutante endoPG del patotipo limn rugoso se mantuvo sin
cambios en la patogenicidad en hojas de limn en bruto (Isshiki et al., 2001). Por lo
tanto, un endoPG no era necesario para la patogenicidad del patotipo limn rugoso y
que desempe diferentes funciones en la patogenicidad de estos dos hongos
estrechamente relacionados.
Control de enfermedades
Resistencia Host
Son relativamente pocas las especies de ctricos y variedades son susceptibles a
Alternaria mancha marrn y la mayora de la susceptibilidad se produce en la progenie
de Dancy mandarina. Muchos de los cultivares susceptibles como Minneola, Orlando,
Nova, Lee, y del resplandor solar tienen Dancy mandarina entre sus parentales.
La enfermedad ocurre en otras variedades no se sabe que tienen Dancy en su fondo
como Murcott, Emperador, y Ponkan. Lugar Alternaria Brown ha sido observado en
Ellendale y Idith mandarinas, calamondin y pomelo rojo en Israel (Solel y Kimchi, 1997)
y el pomelo en la Florida (Timmer y Peever, 1997). Mancha marrn en el pomelo se

asocia por lo general con graves enfermedad en las plantaciones cercanas de


mandarinas y sus hbridos susceptibles. Muchas otras especies de ctricos pueden ser
infectados por inoculacin artificial o se ven afectados por la toxina pero no se ven
afectados en el campo (Kohmoto et al, 1979;. Solel y Kimchi, 1997).
Con base en el patrn de susceptibilidad de diferentes cultivares e hbridos de ctricos,
Kohmoto et al. (1991) concluyeron que la sensibilidad fue heredado de los padres
Dancy como un rasgo dominante. Dalkilic (1999) encontraron que la segregacin de
un
cruce
de
mandarina
Clementina,
una
especie
resistente,
y Clementine _ Minneola hbrido producido una proporcin 1: 1 de susceptibles: la
progenie resistente.
El cruzamiento recproco, sin embargo, produjo una proporcin de 3: 1 de resistente a
la descendencia susceptible. Lleg a la conclusin de que la resistencia era recesivo
pero el fenotipo puede haber sido afectada por los rasgos paternos citoplsmicamente
heredados. Dalkilic (1999) identific marcadores RAPD que se asociaron
consistentemente con la resistencia.
Dancy mandarina es la fuente de gran parte de la susceptibilidad a Alternaria mancha
marrn y fue seleccionado en la Florida y se utiliza como uno de los padres en gran
parte del programa de cra de nuevas tangelo y
hbridos ms complejos.
Curiosamente, Alternaria mancha marrn apareci en Australia el emperador mandarn
(Cobb, 1903) mucho antes de su aparicin en Florida (Whiteside, 1976). Punto de
Brown tambin ha aparecido en Ponkan mandarina en Brasil (Va et al., 2001), pero se
sabe poco acerca de la susceptibilidad de este cultivar. Estudios filogenticos
moleculares de los patgenos mancha marrn recogidos de todo el mundo indican que
la poblacin de Florida es ancestral a las otras poblaciones (Peever et al., 2002). Los
autores
especulan
que
el
patgeno
se
origin
con
ctricos
en el sudeste asitico y la poblacin ms ancestral se introdujo en la Florida. Sin
embargo, sigue existiendo la posibilidad de que el patgeno de ctricos puede tener su
origen en otras partes de otras poblaciones de Alternaria productoras de toxinas en
otros huspedes.
Desde relativamente pocas variedades son susceptibles a la mancha marrn,
seleccin o produccin de cultivares comercialmente aceptables resistentes marrnpunto parece factible. Esto podra lograrse mediante la cra clsica o inducida en
varios cultivares existentes mediante tcnicas moleculares, la irradiacin, o
mutagnesis inducida. Un cultivar-Alternaria tolerante similar a Minneola se dar a
conocer el hijo de la Universidad de Florida (FG Gmitter, comunicacin personal).
Prcticas culturales
Hay poca investigacin sobre los efectos de las prcticas culturales en la gravedad de
la infeccin mancha marrn. Sin embargo, los estudios sobre el efecto de los factores
ambientales que afectan la gravedad de la enfermedad (Canihos et al, 1997;.. Timmer
et al, 1998, 2000b) proporcionan algo de informacin para sugerir ciertas prcticas
culturales que podran ser tiles. Evitar el riego por aspersin y el uso de sistemas de
riego en rboles en Florida ha reducido la gravedad de la enfermedad en algunas
arboledas. Espaciamiento ms amplio y rodapi de rboles permiten una mejor
ventilacin y parecen reducir la gravedad de la enfermedad. Evitar el exceso de riego y

la fertilizacin nitrogenada se han recomendado desde hace tiempo para evitar la


produccin de grandes cantidades de tejido susceptible (Whiteside, 1976;. Timmer et
al, 2001). Aunque tal vez til, es difcil reducir el riego y la fertilizacin suficiente sin
poner en peligro la produccin de fruta. Programacin de cobertura y cobertura justo
antes de la estacin seca en Florida permite el desarrollo de la consiguiente oleada de
crecimiento con un mnimo de infeccin y la produccin de inculo. La plantacin de
nuevos huertos con-Alternaria libre de vivero ha sido de gran ayuda en la reduccin de
la mancha marrn en los primeros aos (Timmer, 2003). Groves inicia utilizando una
poblacin sana en la Florida se han mantenido relativamente libre de la enfermedad
durante un tiempo sorprendentemente largo, a veces hasta 6-8 aos, incluso cuando
el inculo est presente en un radio. Esto puede indicar que la dispersin a larga
distancia de los conidios ocurre raramente. Guardera saludable stock se puede
producir mediante la seleccin de esquejes de plantas madres sanas y el cultivo de
rboles en invernaderos con riego subterrneo (Timmer, 2003). Si bien las medidas
culturales solo rara vez son suficientes para el control comercial, pueden reducir en
gran medida los niveles de inculo y gravedad de la enfermedad y mejorar la eficiencia
de los programas de control de fungicidas.
El control qumico
Aplicaciones de fungicidas foliares son generalmente necesarios para producir fruta de
buena calidad externa en reas donde Alternaria mancha marrn es comn.
Dependiendo del clima en las diferentes reas, de 3 a 15 aplicaciones puede ser
necesaria. En los primeros aos despus del descubrimiento de la enfermedad en
Florida, captafol fue ampliamente utilizado y muy eficaz para el control de
enfermedades (Whiteside, 1976; Timmer y Zitko, 1997). Desde captafol tiene una larga
residual y se redistribuye, fueron necesarias algunas aplicaciones para un buen control
de la enfermedad. Sin embargo, este producto ya no est registrado en la mayora de
reas debido a problemas de salud. Iprodione tambin es muy eficaz para el control de
enfermedades (Timmer y Zitko, 1992, 1994, 1997;. Solel et al, 1997), pero la
resistencia desarrollada en Israel limita su utilidad en algunos bosques (Solel et al.,
1996). Fungicidas de cobre son ampliamente utilizados para el control de Alternaria en
Florida (Timmer et al., 2003) y cuando se aplica sobre una base oportuna
proporcionan un buen control de la enfermedad. Sin embargo, los productos de cobre
causan punteado de la fruta cuando se aplica a altas temperaturas y se debe utilizar
con precaucin. Otros fungicidas que son eficaces e inscrita en Israel son los
ditiocarbamatos, triazoles y famoxadon (Sadowsky et al., 2002a). Recientemente los
fungicidas a base de estrobilurinas se han evaluado y demostrado su eficacia para el
control de mancha marrn (Bhatia et al, 2002a, 2002b;.. Sadowsky et al, 2002a;
Timmer, 2002). Azoxistrobina y piraclostrobina son generalmente ms eficaz que la
trifloxistrobina. Las estrobilurinas son solo sitio de fungicidas de accin (Sierotski et al.,
2000a, 2002b) y por lo tanto, propensos al desarrollo de la resistencia y debe ser
alternado o mezclado con otros productos.
Numerosos productos que inducen resistencia en el husped han sido evaluadas para
el control de Alternaria mancha marrn (Agostini et al., 2003). Los productos que
contienen o producen fosfitos o cido saliclico reducir significativamente la severidad
de la enfermedad.

Estos materiales tienen alguna promesa en un programa solo o tal vez en combinacin
con fungicidas estndar (Sadowsky et al., 2002b).
Fruit debe protegerse de la cada de ptalos hasta mediados de verano, pero alguna
infeccin puede ocurrir despus de ese tiempo. Niveles de la enfermedad son
generalmente bajas y las lesiones suelen ser pequeos, pero algunos grandes
lesiones negras pueden ocurrir como resultado de la infeccin tarda en Israel y
pueden inducir la cada de frutos (Sadowsky et al., 2002a). Adems a menudo es
necesario para proteger la primavera follaje enrasadas para evitar la acumulacin de
altos niveles de inculo antes de la fructificacin. En las zonas de alta precipitacin,
puede que no sea Posible para controlar la enfermedad de manera adecuada. En
Colombia, una produccin pequea, pero altamente rentable de tangelo Minneola fue
eliminado cuando Alternaria se introdujo en plantas de vivero de Florida.
La produccin de fruta de alta calidad es tambin difcil en Florida y Brasil ahora que
A. alternata est bien establecido en esas zonas.
El Alter-Evaluador, un sistema para medir el tiempo de aplicacin de fungicidas fue
desarrollado en Florida (Timmer et al., 2000b). Los factores utilizados en el modelo
son: 1) la ocurrencia de lluvias ms de 2,5 mm; gravedad de la enfermedad est
relacionada con la ocurrencia pero no la cantidad de lluvia; 2) el total de horas de
humedad de las hojas; cerca de 10 h se necesitan para la infeccin significativa, y 3) la
temperatura media diaria; temperatura entre 20 y 32C son ptimas.
Los puntos se asignan a cada da basado en el tiempo y se acumulan hasta que un
preasignado
umbral se alcanza y, a continuacin una aplicacin de fungicida se hizo (Tabla 1). Los
umbrales se asignan sobre la base de la historia de la enfermedad en la arboleda y la
susceptibilidad del cultivar. El sistema ha demostrado ser exitoso en Florida, siempre y
cuando el umbral se selecciona adecuadamente (Bhatia et al., 2003). El sistema
tambin parece funcionar bien en Brasil (NAR Peres y LW Timmer, sin publicar). En las
zonas semiridas donde ocurre norainfall despus de la floracin, el sistema es
probable que sea menos til. Dado que las temperaturas y perodos de roco son a
menudo uniforme de da a da, momento de la pulverizacin probablemente no difiere
sustancialmente de un programa de aplicaciones de calendario.
Observaciones finales
Enfermedades de Alternaria de ctricos representan algunos patosistemas
interesantes. El patotipo mandarina produce una toxina-host especfico y est
estrechamente relacionado con los hongos similares que afectan japonesa de pera,
manzana, fresa, y otros huspedes. El patotipo limn rugoso produce otro especfico
de acogida toxina que difiere qumicamente, as como en su modo de accin de la
patotipo mandarina. El genes para la produccin de toxinas se encuentran en un muy
corto del cromosoma en el patgeno. La historia evolutiva de estos patgenos podra
ser fascinante si puede ser dilucidado. Alternaria alternata es un saprofito comn en
las hojas de ctricos en el bosque, pero estas cepas son capaces de causar la
pudricin de negro de la fruta despus de la cosecha. Tales saprfitos son
comnmente aislados de lesiones en las hojas de limn rugoso, pero rara vez de
Minneola tangelo. La relacin ecolgica de los diversos aislados en la superficie de la
hoja necesita ms investigacin para aclarar los roles de los diferentes aislados de la

misma especie. En contraste con muchas enfermedades de los ctricos, el desarrollo


de cultivares resistentes mediante la cra clsica o manipulacin gentica parece
factible. La resistencia de los ctricos al punto Alternaria Castao se hereda como un
rasgo recesivo. Ms investigacin de la epidemiologa, la actividad fungicida, y el
momento deben mejorar el control de la enfermedad en el corto plazo.
Agradecimientos
Esta investigacin fue apoyada por la Estacin Agrcola Experimental de Florida, y
aprobado para su publicacin como Journal Series No. N-02402.