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Actualizacin en

Inmunohematologa Fundacin
Hemocentro Buenos Aires
Noviembre 2011

El estudio de los antgenos y anticuerpos presentes


en la sangre, tanto en condiciones normales como
patolgicas

Es el estudio de los marcadores antignicos


propios de los glbulos rojos, plaquetas y
leucocitos, como as tambin de las respuestas
inmunolgicas que estos provocan
Slo los antgenos
de los sistemas
RH, KELL MNS y LW, son especficos de la
lnea eritroide

Tiene dos etapas

01/11/2011

La aglutinacin es la agregacin, mediada


por anticuerpos, de las partculas que
expresan antgenos de superficie.

Sensibilizacin
Formacin de puentes entre las
clulas sensibilizadas.

Dr. Silvio Rosell

La hemlisis es la destruccin de los glbulos rojos,


con liberacin de la hemoglobina intracelular
La hemlisis no ocurre si los antgenos interactan
con los anticuerpos en sueros sin complemento o
plasma con anticoagulante
La hemlisis constituye un resultado positivo

La centrifugacin promueve el acercamiento fsico de las clulas

La prueba antiglobulnica indirecta emplea suero


antiglobulnico
Otros mtodos actan:
reduciendo la carga negativa de las molculas

superficiales
disminuyendo la capa de hidratacin que rodea a las
clulas
introduciendo macro molculas con carga positiva
que las agregan

Albmina Humana
LISS (Low ionic saline solution)
PEG (Polietilenglicol)
POLYBRENE (BHDM)
Tcnicas con enzimas proteolticas

Disminuye el potencial Z, favoreciendo la 2 fase de


la aglutinacin.
En concentraciones de 30% o >favorece la
aparicin de rouleaux

En la PCI no aumenta la sensibilidad de la prueba

Por falta de ventajas objetivas est en desuso

Ante estos polmeros los GR normales exhiben


agregacin espontnea, que puede dispersarse con
sales neutras como el citrato de sodio
El BHDM es un polcatin de amonio cuaternario
que neutraliza las cargas negativas de los GR.

Favorecen la aglutinacin por Ig G

El Polybrene se aade a los GR incubados con


anticuerpos a baja potencia inica y bajo pH

Si se adiciona citrato de sodio, se restablece la


carga del GR

Si el aglutinado se disocia prueba negativa

Si el aglutinado persiste prueba positiva (aglutinacin


irreversible a los GR sensibilizados con Acs)

Tiene sensibilidad disminuida en la deteccin de


anticuerpos del sistema Kell

El PEG es un polmero lineal hidrosoluble que se usa como


aditivo para incrementar la captacin de anticuerpos

Su accin principal es eliminar el agua intercelular


favoreciendo el acercamiento de los GR
No debe centrifugarse el PEG con el suero y GR

Se lavan las clulas con solucin salina y luego se efecta


la prueba antiglobulnica

El reactivo AGH de eleccin en las


pruebas con PEG suele ser el anti-IgG

evita las reacciones falsas positivas con algunos


agentes poliespecficos
Precipitados podran interpretarse como

reacciones

positivas
Potenciador de eleccin para la absorcin de Ac

calientes

Potencia mucho la captacin eritrocitaria de


anticuerpos en la fase I de la aglutinacin

La cantidad de iones +/- del LISS (0,03 M) es menor al de


la SF (0.17M)

En la actualidad la mayora de los profesionales


usa diluyentes o aditivos LISS

Contiene macromolculas adems de sales


inicas y amortiguadores

Puede aumentar hasta 1000 veces la afinidad


entre Ags y Acs
El aumento del volumen de suero acrecienta la
potencia inica del sistema LISS aditivo
Se deben respetar estrictamente las instrucciones
del fabricante

LISS

Ventajas:

Aumenta la sensibilidad de la PCI


para detectar Acs clnicamente
significativos

Detecta Acs en baja


concentracin y los de baja
afinidad que pueden perderse
con los lavados

Reduce el tiempo de incubacin

Desventajas:

Debe ser sometido a estricto


control de osmolaridad para
evitar la fijacin inespecfica
de C

Los GR suspendidos el LISS


deben ser procesados dentro
de las 24 hs

Menor sensibilidad para antiK. (1 fase de aglutinacin)

Bromelina, ficina, papana y tripsina

(Las ms usadas)

Desnaturalizan ciertos antgenos eritrocitarios, en


especial M, N, S, Fya y Fyb, XG
Disminuyen la carga superficial de los GR por
clivaje de las molculas de cido silico de las
cadenas polisacridas
El tratamiento enzimtico lleva a la formacin de
espculas en los GR y aumenta as el nmero
potencial de puntos de contacto