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PRUEBAS DE CMO SE BUSCA SENSIBILIDAD:

MECANISMO DE RESISTENCIA:

Existen diversas definiciones del concepto de resistencia de acuerdo a los

diferentes autores u organizaciones:
La resistencia a insecticidas es la capacidad de una poblacin de insectos de
tolerar dosis de insecticidas que seran letales para la mayora de los individuos en
una poblacin normal de la misma especie y se genera por presin de seleccin
del insecticida sobre genes que se encontraban a bajas frecuencias(WHO, 1957).
Respuesta disminuida de la poblacin de una especie de animales o plantas a un
plaguicida o agente de control como resultado de su aplicacin (FAO, 1970)
Los genes de resistencia se encuentran normalmente en las poblaciones a unas
frecuencias muy bajas, una vez se empiecen a hacer presiones qumicas con
insecticidas, los individuos susceptibles comienzan a desaparecer y predominan
los individuos que portan los genes de resistencia, ocasionando un aumento de
individuos resistentes dentro de la poblacin (Paroonagian et.al 1994).
4.1Factores que influyen en el desarrollo de la resistencia
La aparicin de la resistencia est determinada por caractersticas genticas
intrnsecas de los vectores tales como la frecuencia y dominancia de los alelos R,
penetracin, donde la composicin del exoesqueleto llega a ser modificada
inhibiendo la penetracin del insecticida, expresividad e interaccin entre los alelos
R y seleccin por otros productos qumicos, as como factores biolgicos tales
como ciclo de vida, nmero de descendientes por generacin, aislamiento,
movilidad y migracin y aspectos operativos como calibracin de equipos,
aplicacin de dosis sub letales o excesivas de insecticida, personal poco
capacitado y desarrollo de actividades no regulares (Bisset et. al, 2002).
Los factores ms influyentes en el desarrollo de la resistencia son: frecuencia de
aplicacin, tasa de reproduccin y dosis y persistencia del efecto del insecticida:

Frecuencia de aplicacin: la tasa de aumento de la resistencia de cualquier

poblacin de insectos puede incrementarse ante una presin de seleccin
frecuente de un mismo insecticida.
Tasa de reproduccin:especies deinsectos que presentan altas tasas de
reproduccin y ciclos de vida cortos pueden desarrollar resistencia a una
velocidad mayor a comparacin de las especies que tienen una menor tasa
de reproduccin, debido a que los genes de resistencia pueden propagarse
rpidamente a toda la poblacin (IRAC,2011)
Dosis y persistencia del efecto insecticida: la propiedad que tienen los
insecticidas para persistir en el tiempo depende de la qumica fsica de
estos, de su formulacin y la tasa de disipacin del insecticida en el medio
ambiente, de tal manera que los insecticidas persistentes pueden estar
proporcionando una presin de seleccin constante sobre las poblaciones
de mosquitos en este caso.(IRAC, 2011).

La disipacin de un insecticida persistente ocurre lentamente, sin embargo por

algn tiempo existe una dosis efectiva pequea, es decir una dosis subletal
que puede estar influyendo en el desarrollo de la resistencia. Adicionalmente
se considera que un insecticida que persiste en el tiempo puede eliminar
individuos susceptibles inmigrantes, evitando de esta manera que la
inmigracin sea efectiva. (Bisset et.al 2002).
4.2 Mecanismos involucrados en la resistencia
Existen cuatro clases de mecanismos de resistencia de acuerdo a la
categorizacin de Miller 1988: resistencia por comportamiento, resistencia por
penetracin disminuida, resistencia metablica y resistencia por modificacin en el
sitio qumico de accin.
1. Cambios en la estructura de los canales de sodio.
2. Modificacin en el sitio qumico de accin, la AChE por su modificacin no se
une al insecticida y sigue estando disponible para descomponer las molculas de
acetilcolina despus de la neurotransmisin en la sinapsis.
3. Detoxificacin de enzimas que degradan o secuestran el insecticida antes de
alcanzar su sitio de accin en el sistema nervioso.
4.2.1 Resistencia por comportamiento
En este tipo de mecanismo el insecto no entra en contacto con el depsito del
insecticida, debido a la modificacin del comportamiento del insecto, lo cual le
permite evadir los efectos letales de los insecticidas.

4.2.2 Resistencia por penetracin disminuida

Este tipo de mecanismo, conocido tambin como mecanismo fsico ocurre por
modificaciones en la composicin del exoesqueleto del insecto lo cual inhibe la
penetracin del insecticida. Las propiedades del tegumento del insecto y las
caractersticas moleculares del insecticida afectan la velocidad de penetracin de
este ltimo, por ejemplo una demorada penetracin requiere un tiempo mayor para
la detoxificacin de la dosis aplicada.
De tal manera, que el incremento en la cantidad de lpidos puede provocar que la
liberacin de los compuestos lpo-solubles en el cuerpo del insecto sea lenta, lo
que permite un mayor tiempo para que ocurra la detoxificacin de los insecticidas.
4.3 Modificacin en el sitio qumico de accin
Este es el segundo mecanismo de resistencia ms comnmente encontrado en los
insectos, ocurre cuando el insecticida no logra unirse a su sitio de accin ya sea
porque hay disminucin en la sensibilidad del sitio blanco o modificacin de este
(Hemingway et. al, 2000).
A continuacin se citan dos ejemplos de este mecanismo:

Reduccin de sensibilidad de la acetilcolinesterasa AchE

Esta resistencia mediada por AchE est relacionada con cambios cualitativos y
cuantitativos en la enzima y con mutaciones puntuales acompaadas por
modificacin de los parmetros cinticos de la hidrlisis de acetilcolina. Tales
mutaciones involucran sustituciones de aminocidos en el sitio activo de la enzima
(Walshet.al2001, Fonseca et.al, 2005).

Canales de sodio dependientes de voltaje mutacin tipo kdr

El blanco de accin de insecticidas organoclorados y piretroides son los canales

de sodio dependientes de voltaje en el sistema nervioso (Scott et.al 1990, Liu et.al
2000).

La resistencia Knockdown (kdr) hacia los piretroides es causada

frecuentemente pormutaciones no sinnimas en la protenatransmembranal
del canal de sodio dependientede voltaje (para), la cual reduce la unin de
lospiretroides.
El gen que codifica para el canal de sodio en insectos, se denomina para y
fue identificado en Drosophila spp (Loughney et.al 1989). La secuencia de
aminocidos de las subunidades alfa codificados por el gen paraanalizados

en conjunto tienen una gran similitud. Cada uno de los genes consiste de
cuatro dominios homlogos repetidos (I-IV) con seis segmentos
transmembranales (S 1-6) en cada dominio.
Estudios recientes demostraron que mutaciones de punto en la secuencia del gen
para del canalde sodio son responsables de la resistencia a insecticidas tipo kdr y
sper kdr (la cual posee una mutacin adicional que le confiere mayor nivel de
resistencia) en insectos (Miller y col 1999). Por su parte, Metcalf (1989), menciona
que la modificacin del sitio de accin a DDT y piretroides en los canales de sodio
del axn nervioso es controlado por un gen en el cromosoma (dominio) II.
De tal forma, que una amplia variedad de estudios de investigacin reportaron
como causa de insensibilidad del sitio de accin a mutaciones de punto en el
dominio II del canal de sodio en varios insectos (Liu et. al 2000).
4.3.1 Resistencia metablica
Este es el mecanismo de resistencia ms comnmente observado en los insectos.
Este mecanismo es producto de la accin de enzimas capaces de detoxificar los
insecticidas antes de que stos alcancen sus sitios de accin. Existen tres
categoras de enzimas que cumplen esta funcin: las Oxidasas de Funcin
Mltiple (OFM), Esterasas y Glutatin STransferasas(GST).

Oxidasas de Funcin Mltiple (OFM):monoxigenasas del grupo P450

Estas enzimas ubicadas en el retculo endoplasmtico liso pertenecientes a una

superfamilia de hemoprotenas, son responsables del metabolismo oxidativo de
componentes xenobiticos y se encuentran presentes en plantas, animales,
bacterias, levaduras y especies de insectos de los rdenes Dptera (Scott J, 1999),
Lepidptera (Rose et.al, 1997) y Coleptera (Sharf et.al, 2001).
Una de las caractersticas ms significativas de los P-450 que metabolizan
xenobiticos es su baja especificidad, lo que permite que sean capaces de
metabolizar un nmero casi ilimitado de substratos, principalmente a travs de
reacciones de oxidacin, pero tambin de reduccin e hidrlisis.
El sistema P-450 presenta una enorme versatilidad funcional que se refleja tanto
en la gran variedad de procesos que puede catalizar, como en el elevado nmero
de substratos que es capaz de metabolizar. Este sistema est constituido por la
coenzima NADPH, una flavoprotena (NADPH-citocromo C reductasa), una
ferroprotena y el citocromo P-450 (Sotolongo et. al 1988, Bisset J, 2002).
El factor implicado en muchos de los casos de resistencia metablica a
carbamatos y detoxificacin de organofosforados, piretroides y DDT es el

citocromo P-450. Estudios en mosca domstica demostraron que cepas

resistentes con niveles de oxidasas altos presentaban una mayor cantidad de P
450 a diferencia de las cepas susceptibles.
Durante la fase I, las oxidaciones catalizadas por el P-450 son reacciones de
monooxigenacin dependientes de NADPH y para las que utiliza oxgeno
molecular, como consecuencia de estas reacciones el P-450 acelera la eliminacin
del organismo de gran nmero de compuestos txicos, pero tambin es el
responsable de la activacin de toxinas.
En la fase 2 los xenobiticos, o los metabolitos generados por las reacciones de
la fase 1, se combinan con molculas endgenas de carcter polar para formar
productos de conjugacin que son rpidamente excretados. En general, los
enzimas de fase 1 son capaces de transformar mltiples substratos y catalizar
reacciones diferentes.

Esterasas

Las esterasas son enzimas que catalizan reacciones de hidrlisis (fase I de la

biotransformacin) de steres carboxlicos (carboxiesterasas), amidas (amidasas),
steres de fosfato (fosfatasas) entre otras.Tanto los insecticidas organofosforados
como los carbamatos presentan una estructura qumica de esteres y son
hidrolizados por estas enzimas(Karunaratne, et. al 1998)
De acuerdo a la capacidad que tengan estas enzimas de hidrolizar los diferentes
tipos de sustratos, se clasifican en alfa esterasas y beta esterasas, el primer
tipo hidroliza al sustrato 1- naftilacetato y el segundo tipo al sustrato 2naftilacetato (Bisset J, 2002).
Generalmente en ms del 90% de los casos de resistencia a insecticidas, se
encuentran niveles elevados de esterasas (Ranson et. al 2000).
La esterasas se codifican como un grupo de genes ubicados en el mismo
cromosoma, en el que cada uno de sus miembros puede sufrir modificaciones que
confieren resistencia a insecticidas en insectos del orden Dptera, estas
modificaciones pueden obedecer a cambios en un aminocido que alteran la
especificidad del sustrato, presencia de copias gnicas mltiples que son
amplificadas en insectos resistentes, mutaciones o sobreproduccin enzimtica
(Ranson et. al 2000).

Glutatin S transferasas

La familia de las enzimas glutatin S transferasas (GST) es uno de los mayores

grupos de enzimasde gran importancia en mecanismos de desintoxicacin celular,
eliminando xenobiticos o substancias nocivas para las clulas.
Estas enzimas catalizan la conjugacin del glutatin endgeno a una variedad de
compuestos electroflicos, protegiendo las macromolculas biolgicas como las
protenas y los cidos nucleicos de las consecuencias txicas de una reaccin
covalente con el insecticida.
Se conocen 4 clases de enzimas GTS: alfa (A), mu (M), pi (P) y teta (T) (Castillo
et.al 2007), esta ltima ha sido identificada en insectos, se ha propuesto a esta
clase como precursora de las clases alfa,muypi, basados en la distribucin
aparente de esta en un rango diverso de organismos que incluyen bacterias,
levaduras, plantas e insectos (Daz et.al 2004).
Diferentes estudios han correlacionado la resistencia a insecticidas con elevados
niveles de actividad GST (Ku et.al 1994 y Ranson et.al 2002). Este sistema
enzimtico generalmente est involucrado en la resistencia a insecticidas
organofosforados y proveen la forma ms importante de resistencia metablica al
organoclorado DDT a travs de la dehidroclorinacin a DDE, en insectos (Ortelli
et.al 2003 y Rodrguez et.al 1998).
4.3.2 Resistencia cruzada
La resistencia cruzada (RC) es el mecanismo que utilizan especies de insectos
resistentes para sobrevivir a la exposicin de insecticidas relacionados
qumicamente, usando un patrn de detoxificacin genrico (Metcalf et.al 1989).
Por ejemplo el insecticida organoclorado DDT y los piretroides no se relacionan
qumicamente, sin embargo ambos actan en el mismo sitio de accin: el canal de
sodio dependiente de voltaje. El uso prolongado durante aos de DDT ha dado
lugar a varias especies de insectos resistentes a este insecticida debido a la
mutacin delgen kdren el sitio de destino. (WHO 1957). Cuando estas mutaciones
se han mantenido en la poblacin, los insectos tienen una cierta resistencia a
todos los piretroides, adems del DDT.
La resistencia cruzada tambin puede ocurrir entre organofosforados y
carbamatos cuando se presentan resultados de resistencia por AchEalterada
(IRAC 2011).
4.3.3 Resistencia mltiple
La resistencia mltiple (RM) se define como la utilizacin de varios mecanismos
hacia la accin de varias clases de insecticidas no relacionados qumicamente
(Metcalf et.al 1989).

Esta definicin no necesariamente involucra el trmino de resistencia cruzada

debido a que un insecto puede desarrollar resistencia a dos insecticidas por
diferentes mecanismos.