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Sala Especializada 7: Manejo da ramulria e das viroses

ENFERMEDAD AZUL TPICA Y ATPICA EN LA ARGENTINA. RESULTADOS OBTENIDOS EN LOS


LTIMOS AOS.
Ana Julia Distfano1
1

Instituto de Biotecnologa, CICVyA, INTA. Buenos Aires, Argentina (adistefano@cnia.inta.gov.ar)

El algodn es un cultivo clave para el Noreste de Argentina (NEA) siendo la cadena


agroindustrial del algodn muy importante en el aspecto econmico y social de la regin. La
enfermedad de origen viral ms importante en el cultivo de algodn en Sudamrica es la
enfermedad azul. La enfermedad fue reportada en la Argentina durante la campaa agrcola
1982/83 y actualmente causa importantes prdidas en el cultivo si no se implementan medidas
adecuadas de control. La enfermedad es producida por el Cotton leafroll dwarf virus (CLRDV) y el
virus es transmitido exclusivamente por un insecto vector, el pulgn del algodn Aphis gossypii
Glover. Los sntomas caractersticos de esta enfermedad son enanismo, enrollamiento de las hojas
y textura coricea con coloracin verde oscura-azulada y amarillamiento de las nervaduras. Nuestro
grupo obtuvo recientemente la secuencia completa del virus asociado a la enfermedad azul del
algodn en Argentina confirmando que el virus CLRDV debe clasificarse como una nueva especie
dentro del gnero Polerovirus, familia Luteoviridae. El CLRDV posee un genoma de RNA de simple
cadena (ssRNA) positivo de 5,866 kb. Los Polerovirus se caracterizan por su modo de propagacin y
su tropismo celular. El CLRDV est limitado a las clulas acompaantes del floema de su planta
husped y es transmitido nicamente por el fido vector no siendo posible su transmisin en forma
mecnica a nuevas plantas de algodn. Nuestro grupo ha desarrollado una estrategia alternativa de
infeccin, mediante la obtencin de un clon infectivo de cDNA del virus y un mtodo eficiente de
inoculacin va agroinfeccin, independizndose de la transmisin por el insecto vector. Este
sistema es importante para el estudio de la interaccin plata-virus-vector a nivel molecular y para la
evaluacin y seleccin de plantas tolerantes y/o resistentes al virus en los programas de
mejoramiento gentico del algodn. El clon infectivo del CLRDV logr establecer la infeccin en
plantas de algodn susceptibles, que desarrollaron los sntomas tpicos de enfermedad azul,
detectndose la presencia del virus en las hojas sistmicas por Northern y Western blot. Por otro
lado nos propusimos desarrollar un sistema de infeccin sencillo en el cul se pueda evaluar un
volumen de plantas mayor con respecto al sistema tradicional de evaluacin con el fido. Para ello
desafiamos variedades de algodn en las cuales se conoce su respuesta ante la infeccin
(variedades susceptibles y resistentes al CLRDV) con el mtodo tradicional de infeccin no natural
por el fido y con el clon infectivo para analizar si hay diferencias en la respuesta de las variedades
estudiadas. Los diferentes cultivares estudiados no mostraron diferencias frente a la infeccin
utilizando ambos sistemas y fueron consistentes con lo esperado (los cultivares resistentes y los
susceptibles lo fueron por ambos mtodos). A partir de los resultados concluimos que el clon
infectivo del CLRDV podra implementarse como sistema de infeccin de rutina en los programas de
mejoramiento gentico de algodn, siendo un mtodo ms sencillo y procesivo que el sistema de
fidos infectivos.
Durante las campaas algodoneras 2009/10/11/13 en varias regiones de la provincia de
Chaco se detect una virosis similar a enfermedad azul, pero con algunas diferencias en la
sintomatologa, en cultivares de algodn susceptibles y resistentes a CLRDV, produciendo el primer

Brasilia, 3-6 Setembro 2013

quiebre de resistencia del germoplasma. Los sntomas se caracterizaban por enrollamiento de las
hojas y deformaciones foliares en la zona apical con aspecto arrosetado. Para la identificacin de
la posible virosis se realizaron ensayos de PCR para intentar amplificar virus pertenecientes a cuatro
familias virales: Luteovirus, Geminivirus, Ilavirus y Potyvirus. Cuando se utilizaron primers
diagnsticos para el grupo taxonmico de los Luteovirus se logr amplificar una regin del genoma
viral de 1400 pb (una regin de la polimerasa, la regin intergnica y la cpside viral) indicando que
el virus desconocido pertenecera a esta familia. Se secuenci la regin amplificada y se observ
identidad de secuencia con el Cotton leafroll dwarf virus. Cuando se utilizaron los primers
diagnsticos para las otras familias virales no se observ amplificacin descartando, en principio,
una co-infeccin. A esta nueva enfermedad se la denomin enfermedad azul atpica. Realizamos
la secuenciacin completa de esta variante virulenta del CLRDV, analizamos su organizacin
genmica y estudiamos el origen evolutivo y las relaciones filogenticas de esta nueva virosis. El
RNA genmico est formado por seis marcos abiertos de lectura (ORFs) y presenta la organizacin
tpica de los Polerovirus. Las diferentes protenas mostraron una identidad de secuencia con las
protenas codificadas por el CLRDV que vara entre el 88% y el 98%. Siguiendo el criterio establecido
por el comit internacional de taxonoma viral (ICTV) para definir una nueva especie dentro del
gnero Polerovirus (donde la diferencia de identidad en la secuencia de aminocidos de alguno de
los productos de los genes sea mayor al 10% con respecto a los virus relacionados), proponemos
que esta nueva variante del CLRDV debe ser considerada una nueva especie del gnero Polerovirus
y sugerimos denominarla Cotton leafroll bushy virus (CLRBV). Finalmente, el estudio del patgeno
es de vital importancia para desarrollar estrategias antivirales efectivas o perfeccionar las que se
emplean en la actualidad, tanto por ingeniera gentica como por mejoramiento convencional
asistido por biotecnologa.

Brasilia, 3-6 Setembro 2013