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ARN POLIMERASA Y TRANSCRIPCION:

La principal enzima responsable de la sntesis del ARN es el ARN POLIMERASA,


que cataliza la polimerizacin de los ribonucleosidos 1 5Trifosfatos (NTP)
dirigida por un molde de ADN.
La ARN Polimerasa cataliza el crecimiento de la cadena de ARN en direccin
53 a diferencia del ADN Polimerasa esta no requiere de un cebador
preformado para iniciar la sntesis del ARN. En lugar de ello, la transcripcion
empieza de novo en secuencias especificas al principio de los genes.
La ARN Polimerasa es una enzima compleja compuesta de multiples cadenas
polipeptidicas
Esta se compone de 4 tipos de subunidades:
Alfa,beta,beta,gamma,sigma
Sigma: Ya que el nucleo de la polimerasa es totalmente capaz de catalizar la
incorporacin de NTP al ARN, la subunidad sigma no es necesaria para la
actividad catalitica bsica de la enzima, sin embargo el nucleo de la polimerasa
no se une especficamente a las secuencias que sealizan la iniciacin normal
de la transcripcin por tanto, subunidad sigma es necesaria para identificar los
lugares adecuados para iniciar la transcripcin.
Promotor: Es la secuencia de ADN a la que se le une la ARN Polimerasa para
iniciar la transcripcin de un Gen.
Sitio de inicio de la transcripcin: +1
Region corriente arriba 5 del sitio de iniciacin de la transcripcin
Region corriente abajo 3 del sitio de iniciacin de la transcripcin
Estas regiones comnmente abarcan 6 nucleotidos cada una y aprox a 10 y 35
bases corriente arriba del sitio de inicio de la transcripcin .
Secuencias promotoras -10 y -35 indican su posicin relativa respecto al sitio de
inicio de transcripcin. Su importancia funcional :
1 lugar los genes con promotores que difieren en las secuencias consenso son
transcritos de una forma menos eficiente que aquellos genes cuyos
promotores se asemejas mas a las secuencias consenso .
2 Las mutaciones introducidas en cualquiera de las 2 secuencias consenso
tienen un gran efecto en la funcin motora.
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3 Lugar los sitios de unin de la ARN polimerasa a los promotores han sido
identificados mediante la tcnica footspringting de ADN, utilizada de forma
habitual para determinar los sitios en los que se unen las protenas al ADN.

Trancripcion mediante la ARN Polimerasa de E.Coli:


Transcripcion mediante la ARN polimerasa en la E.Coli:
La polimerasa se une inicialmente al ADN de forma no especifica y recorre la
molecula hasta que la subunidad sigma se une a los promotores 35- y 10-,
dando lugar a un complejo cerrado.Entonces la polimerasa va separando las 2
cadenas de ADN alrededor del sitio de iniciacin, y comienza la transcripcin
mediante la polimerisacion de los NTPs libres . la subunidad sigma se separa
del nucleo de la polimerasa y se desplaza a lo largo del ADN y va alargando la
cadena de ARN en crecimiento.
La polimerasa se une inicialmente al ADN de forma no especifica y recorre la
molecula hasta que la unidad sigma se une a los promotores -35 y -10, dando
lugar a un complejo promotor cerrado.Entonces la polimerasa va separando las
2 cadenas de ADN alrededor del sitio de iniciacin, y comienza la transcripcin
mediante la polimerizacin de los NTP libres. La subunidad sigma se separa del
nucleo de la polimerasa, que se desplaza a lo largo del ADN y va alargando la
cadena de ARN en crecimiento.La sntesis del ARN continua hasta que la
polimerasa encuentra una seal de terminacin, tras la cual se detiene la
transcripcin, se separan el ARN y la polimerasa y la enzima se disocia del
molde de ADN. Exiten 2 mecanismos activos para la terminacin de la
transcripcion de la E.Coli:
la terminacin mas simple y comn es una secuencia palindromica rica en
GC seguida de 4 o mas residuos de A. La transcripcin de la region rica en GC
da lugar a un segmento del ARN que forma una horquilla estable por
apareamiento complementario de bases. La formacin de una estructura
autocoplementaria en el ARN altera su unin al molde de ADN y finaliza la
transcripcion.
La transcripcin de algunos genes se termina mediante una protena
especifica de terminacin (Denominada Rho) que se une a los segmentos
extendidos (Mayores de 60 nucleotidos) de ARN de hebra sencilla. Puesto que
los ARNm de bacterias se asocian con ribosomas y son traducidos mientras
son transcritos , dichas regiones extendidas de ARN de hebra sencilla estn
expuestas solo en el extremo de un ARNm.
Las subunidades B y B forman una estructura de forma de pnza de cangrejo
que sujeta el molde de ADN. Un canal interno entre las subunidades B y B

acomoda aprox 20 pares de bases de ADN y contiene el centro activo de la


polimerasa.
ARNm : sirve de molde para la sntesis de protinas
ARNr y ARNt: participan en la traduccin del ARNm
Tecnica del footprinting del ADN:
Se divide en 2 una muestra que contiene fragmentos de ADN marcados
radiactivamente en un extremo, y una mitad de la muestra se incuba con una
protena que se une a una secuencia especifica de ADN dentro del fragmento .
Ambas muestras son dirigidas con una ADNasa , de tal forma que la ADNasa
introduzca una media de un corte por molcula. La regin de ADN unida a la
protena esta protegida de la digestin por la ADNasa. Los complejos ADNProteina son desnaturalizados, y se analiza mediante electroforesis el tamao
de los fragmentos de ADN obtenidos por la ADNasa y marcados
radiactivamente (igual para la secuenciacion de ADN). En la muestra de ADN
que fue incubada con la protena estn ausentes los fragmentos de ADN
resultantes de la digestin por la ADNasa de la regin protegida por la unin de
dicha protena.
Control Negativo de la transcripcin y represores:
La expresin de las enzimas implicadas en el metabolismo de la lactosa, que es
una fuente de carbonos y energa tras ser hidrolizada a glucosa y galactosa. La
B-galactosidasa enzima que cataliza esta reaccion y otras enzimas implicadas
en el metabolismo de la lactosa estn presenten nicamente cuando existe
lactosa en el medio.En caso contrario la bacteria es capaz de economizar no
invirtiendo energa en la sntesis innecesaria de ARN y protenas. Por lo tanto,
la lactosa induce la sntesis de la enzimas implicadas en su metabolismo. En el
metabolismo de la lactosa intervienen otras 2 enzimas cuyos genes se
encuentran muy ligados al de la B-galactosidasa: son la galactosido permeasa,
que transporta lactosa al interior de la celula y una transacetilasa cuya funcin
en esta via se desconoce. Los genes que codifican la B-galactosidasa,
permeasa y la transacetilasa, se expresan en una unidad nica, denominada
operon .
En el estudio de mutaciones se identificaron 2 loci distintos, denominados o e
i que controlaban la expresin del operon . El locus o (el operador) situado
junto al inicio de la transcripcin, controla la transcripcin del operon .El gen
ique no se encuentra dentro del operon codifica una protena que regula la
transcripcin al unirse al ADN del operador. Los mutantes no sintetizan un
producto funcional del gen i se caracteriza por la expresin constitutiva del
operon incluso en la ausencia de galactosa. Este dao seala que el producto
normal del gen i actuaria como un represor que inhibira la transcripcin al

unirse a o . La adicion de lactosa supone la induccin del operon como


consecuencia de la unin de este nutriente al represor, lo que impedira su
asociacin con el ADN del operador.
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