INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

NOMBRES: MEDINA GARCA DANIELA BERENICE;
VZQUEZ MARTNEZ JULIO CSAR.
QUMICO FARMACUTICO INDUSTRIAL
3FV1 SECCIN #2
PRACTICA: I. Curva tipo de azcares reductores;
II. Efecto de la concentracin de enzima
sobre la velocidad de reaccin.
permite que las enzimas incrementen la
INTRODUCCIN
velocidad de la reaccin es la reduccin de
Uno de los mtodos ms acordes y con
la energa libre de activacin requerida
mejor resultados en la determinacin de
para transformar un sustrato al producto
los azcares con carcter reductor, es el
correspondiente, sin afectar la constante
mtodo (DNS), el procedimiento se basa en
de equilibrio.
una reaccin redox que ocurre entre el
DNS y los azcares reductores presentes
en la muestra, su principal ventaja radica
en su alta sensibilidad y productividad
debido
a
que
es
un
mtodo
espectrofotomtrico.
La
actividad de
La determinacin de azcares reductores a
una enzima se evala de acuerdo con la
partir de una solucin patrn, que
velocidad de la reaccin. La cintica
permitir realizar y ajustar una curva de
enzimtica estudia la velocidad de la
calibracin.
reaccin enzimtica, los factores que la
modifican y el mecanismo de la reaccin.
Una curva de calibracin (curva tipo) es la
Los factores fisicoqumicos que modifican
representacin grfica de una seal que
la actividad de la enzima son los
se mide en funcin de la concentracin de
siguientes:
un analito. La calibracin incluye la
1. Concentracin del sustrato.
seleccin de un modelo para estimar los
2. Concentracin de la enzima.
parmetros que permitan determinar la
3. pH.
linealidad
de
esa
curva
y,
en
4. Temperatura.
consecuencia, la capacidad de un mtodo
5. Fuerza inica.
analtico para obtener resultados que sean
6. Inhibidores.
directamente
proporcionales
a
la
concentracin de un compuesto en una OBJETIVOS
muestra, dentro de un determinado
-Realizar
curva
tipo
de
azcares
intervalo de trabajo.
reductores.
Las enzimas son protenas con capacidad
-Obtener e interpretar resultados en el
de
catalizar
espectrofotmetro.
T
P1
P2
P3
P4
P5
reacciones
-Expresar la actividad
Glucosa 0.005M
biolgicas. Al igual Fructosa
0.2
de
la
enzima
0
0.1
0.4
0.8
1.0
que
los 0.005M (mL)
invertasa en unidades
Sacarosa 0.2M
catalizadores
internacionales (UI).
(mL)
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
inorgnicos,
las Regulador
-Comprobar
si
la
enzimas aumentan Acetatos 0.05M, 0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
concentracin
es
pH 4.7 (mL)
la velocidad con Agua (mL)
1.0
0.9
0.8
0.6
0.2
0
proporcional
o
que se alcanza el 3,5 DNS (mL)
inversamente
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
equilibrio de la
proporcional
a
la
Absorbencia
0
.120
.151
.354
.702
.940
reaccin.
El (A)
velocidad
de
6
6
6
6
5
mecanismo
que Azcar reductor
1
x
10
2
x
10
4
x
10
8
x
10
1
x
10
reaccin.
(micromoles)/2
mL

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NOMBRES: MEDINA GARCA DANIELA BERENICE;
VZQUEZ MARTNEZ JULIO CSAR.
QUMICO FARMACUTICO INDUSTRIAL
3FV1 SECCIN #2
PRACTICA: I. Curva tipo de azcares reductores;
II. Efecto de la concentracin de enzima
sobre la velocidad de reaccin.
-Comprender la importancia biolgica y
Dnde:
qumica de las enzimas.
y= absorbancia: x= [azcar reductor]

RESULTADOS

x=

I.- Curva tipo de azucares reductores

T= testigo o blanco P= problema

VI= [A.R]/10

II.- Efecto de la concentracin de enzima

sobre la velocidad de reaccin
Sacarosa
0.2M (mL)
Regulador
Acetatos
0.05M, pH
4.7 (mL)
Agua (mL)
Enzima
(mL)
3,5 DNS
(mL)

P1

P2

P3

P4

P5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5
0

0.9
0.1

0.8
0.2

0.7
0.3

0.6
0.4

0
0.5

0.5 +
0.5
enzim
a
0

0.0
6

4.1252 x3.3321
10
4.1040
x 10 6.22565
x 10 1.1529
x 10 x 10
7

0.0

1.04

2.08

3.12

4.16

Concentra
cin de
La enzima

5.1
2

CLCULOS
Concentracin glucosa fructosa:

0.01 M 1000 ml

1 x 106 0.1 ml

Concentracin azcar reductor y velocidad

de la enzima VUI)

y=919983 x0.0065

Concentracin Enzima:

10.4 g 1 ml

1.04 0.1ml

GRFICAS
Anexadas en pginas G1, G2, G3.
REACCIN ENZIMATICA

0.5 a cada tubo

Absorbenci
.373
.300
.371
.569
1.05
a (A)
4
Azcar
0.0
reductor
(micromole4.1252 x 3.3321
1 06 4.1040
x 106 6.22565
x 106 1.1529
x 106 x 105
s)/2mL
Velocidad
(UI)

y+ 0.0065
91983

DISCUSIN
La absorbancia medida de los azucares
reductores se obtuvo mediante la hidrolisis
de la sacarosa en presencia de la enzima
invertasa
(reaccin
enzimtica),
obteniendo as glucosa y fructosa y
posteriormente por la reaccin qumica con
el reactivo 3,5 DNS, ya que si bien la
fructosa como tal no es un azcar reductor,
el 3,5 DNS favorece el equilibrio cetoenlico de fructosa a glucosa, es decir, la
fructosa se interconvierte en un ismero
de la glucosa en medio alcalino, y ya que
la glucosa contiene un grupo hemiacetal
(aldehdo) y en consecuencia un grupo
carbonilo reactivo, el cual se oxida con
facilidad, obteniendo as los dos azcares
reductores. El cambio fsico observable es
la evolucin de color en las disoluciones de
los tubos problemas, pasando de un

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NOMBRES: MEDINA GARCA DANIELA BERENICE;
VZQUEZ MARTNEZ JULIO CSAR.
QUMICO FARMACUTICO INDUSTRIAL
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PRACTICA: I. Curva tipo de azcares reductores;
II. Efecto de la concentracin de enzima
sobre la velocidad de reaccin.
amarillo mate traslucido, a un marrn
-Comprobamos que la concentracin de la
rojizo traslucido.
enzima es directamente proporcional con
la velocidad de reaccin enzimtica.
Las grficas expresan el cambio de
absorbancia de acuerdo al cambio de
-La lectura de absorbancia aumenta de
concentraciones de azcares reductores
acuerdo a la cantidad de azcares
(primera grfica de la primera prctica y
reductores.
primera grafica de la segunda prctica), y
el cambio de velocidad de acuerdo a la
-La velocidad de reaccin aumenta
concentracin de la enzima (segunda
proporcionalmente con el aumento de
grfica
segunda
prctica).
concentracin de la enzima invertasa.
En la primera se tiene un aumento gradual
de la absorbancia por cada micromoles de
azcar reducto involucrados por datos, es
decir, al aumentar los micromoles del
azcar, la absorbancia aumenta.
Presentando una tendencia casi lineal, por
lo cual se puede decir, que nuestra
representacin de la curva tipo es correcta.
La segunda grfica, con ayuda de la
interpolacin de la primera, presenta un
crecimiento exponencial gradual, de la
velocidad de reaccin de acuerdo al
aumento de la concentracin de la enzima,
y no un comportamiento lineal como se
debera de haber obtenido, por lo cual se
debe
tomar
en
cuenta
el
error
experimental del mismo, factor que reluce
en las diferentes posiciones 2 y 3 de los
datos tomados y clculos del mismo. Aun
as se puede determinar, que la velocidad
aumenta,
mientras
haya
mayor
concentracin de la enzima en la
disolucin.
CONCLUSIONES

-El reactivo 3,5 DNS acta como un

indicador
de
azucares
reductores,
mediante el cambio de coloracin de
amarillo-rojo marrn.
Favorece el equilibrio ceto-enlico de
fructosa a glucosa en medio alcalino.
Detiene la reaccin enzimtica.

BIBLIOGRAFA
Bioqumica, la base molecular de la
vida, Trudy Mckee, McGraw Hill, tercera
edicin, 2005. Pag. 165-170, 180-192.
Harper, Bioqumica ilustrada, Robert K.
Murray, McGraw Hill, 28 edicin, pag. 6273.
https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/
miembros/Web_Sofia/GRUPOS/Tema
%207.pdf