Resistencia de bacterias respiratorias y entricas a antibiticos

Introduccin
Las enfermedades respiratorias y diarreicas ocupan los primeros lugares de
morbilidad y mortalidad en los pases en vas de desarrollo. Debido a la
frecuencia con que se presentan estas enfermedades, la prescripcin y la
automedicacin de antibiticos para las mismas se ve favorecida. Se ha
considerado que el uso inapropiado o excesivo de antibiticos genera la
aparicin de cepas resistentes, fenmeno que se ha hecho muy evidente en el
mbito hospitalario,1 a pesar de que existen guas o normas para el manejo de
los mismos.2 Aunado a ello, la resistencia bacteriana secundariaal uso
indiscriminado de antibiticos para el tratamiento de infecciones comunes ha
sido
poco
investigada.
Levin y colaboradores3 concluyeron en un estudio que con la cesacin del uso
de los antibiticos se reducira la frecuencia, la diseminacin y la evolucin de
plsmidos y genes mediadores de resistencia. Sin embargo, en la prctica
clnica esto no es viable, ya que los antibiticos no pueden dejar de usarse. Es
innegable que al administrar un antibitico, adems de que se acta contra el
patgeno supuesto, tambin se afecta a los grmenes comensales de la
nasofaringe y el intestino, as como a otros hbitats bacterianos presentes en
el humano. A partir de un modelo matemtico se ha demostrado la influencia
que puede tener un antibitico sobre la gentica de poblaciones bacterianas y
su resistencia a antibiticos.3 Ello permite sugerir que, a pesar de que se haga
un juicioso uso de los antibiticos, la disminucin de los porcentajes de
resistencia en poblaciones bacterianas comensales y patgenas es moderada;
inclusive, si se deja de usar un antibitico, no es de esperarse que las bacterias
regresen a los niveles de sensibilidad del pasado. Por lo anterior, la nica
medida para retrasar la multirresistencia bacteriana es el uso prudente de los
antibiticos.
En este trabajo nos proponemos describir el comportamiento de la resistencia
bacteriana a los antibiticos en los principales patgenos que causan
infecciones respiratorias y entricas, destacando algunos aspectosesenciales en
cada grupo bacteriano. Por la extensin del manuscrito no se describirn los
detalles finos sobre los mecanismos de esta resistencia.Entre las bacterias de
importancia clnica que con mayor frecuencia causan infecciones respiratorias
destacan, en los casos de infecciones respiratorias altas, el Streptococcus
pyogenes y, en los de infecciones respiratorias altas y bajas, el Streptococcus
pneumoniae
y
el Haemophilus
influenzae.
Streptococcus pyogenes ( Streptococcus beta hemoltico del grupo A
Tradicionalmente se ha considerado que estos estreptococos mantienen una
elevada sensibilidad a los viejos y nuevos antibiticos; sin embargo, existen
algunas evidencias de fallas bacteriolgicas. A los clnicos les ha inquietado la
posibilidad de que se generen cepas de estreptococo beta hemoltico del grupo
A (SGA) resistentes a los antibiticos, particularmente por el resurgimiento de

infecciones graves y de complicaciones supurativas (sndrome de choque

txico, fascitis necrosante) y no supurativas (fiebre reumtica). Desde la
creacin de la penicilina, los SGA presentaron una excelente susceptibilidad
ante la misma, de tal modo que se notificaron porcentajes de curacin
superiores a 90%; las fallas para erradicar los microrganismos de las vas
respiratorias altas eran muy raras hasta la dcada de los setenta, cuando se
describieron casos de falla bacteriolgica durante los tratamientos. 4 Por esta
poca se llegaron a describir cepas mutantes producidas en el laboratorio,
pero que no tenan ningn significado clnico. 5 Los ltimos estudios, que han
incluido una serie grande de aislamientos, demuestran que los SGA son
altamente susceptibles a la penicilina G con una CMI 90 de 0.012 g/ml y que
menos de 5% de las cepas son resistentes a la eritromicina. Otros macrlidos
(azitromicina y claritromicina) mostraron tambin muy buena actividad
bacteriana in vitropero, por otra parte, se requirieron mayores concentraciones
de quinolonas (ciprofloxacina).6 Los sistemas de vigilancia sobre resistencia
bacteriana en el mbito mundial han demostrado que en la actualidad an no
existen cepas de SGA resistentes a penicilina, la cual contina siendo el
frmaco de eleccin. En las infecciones sistmicas graves, donde se ha
demostrado o se sospecha la participacin de SGA, se sugiere la asociacin con
otros antimicrobianos. El uso inapropiado de cefalosporinas orales de segunda
o tercera generacin favorece la induccin de resistencia en la flora comensal,
y el beneficio real que stas aportan en el manejo de infecciones respiratorias
altas
no
es
superior
al
de
la
penicilina
natural.
Streptococcus

pneumoniae

Las infecciones causadas por S. pneumoniae son un problema de salud tanto

en pases desarrollados como en aquellos en vas de desarrollo. En Estados
Unidos de Amrica (EUA) estos patgenos son causa de alrededor de 500 000
casos por ao de neumonas comunitarias con una letalidad de 5%. 7 En
Mxico, las neumonas son la segunda causa ms comn de mortalidad entre
nios menores de cinco aos (290.5 casos/ 1 000 personas en menores de un
ao y 17.2/1 000 en nios de 1 a 4 aos); 8 alrededor de 50% de los casos
presentan neumonas de origen bacteriano, los agentes ms comunes son S.
pneumoniae y H. influenzae. Desde que se empez a emplear la penicilina, las
cepas de S. pneumoniae se mostraron muy sensibles a ella, pues para
erradicarlas slo se requeran concentraciones inhibitorias menores a
0.01 g/ml, por lo que este antibitico fue considerado como el frmaco
frmaco de eleccin. El primer aislamiento clnico de S. pneumoniaeresistente
a penicilina se notific en 1967, en Papua, Nueva Guinea, y durante los
siguientes 10 aos hubo informes espordicos de casos clnicos con cepas
resistentes a peniclina en diversas partes del mundo. A partir de 1977 se
detect un brote de infecciones por neumococos multirresistentes en
Sudfrica.9 Ms adelante, Soares inform de la diseminacin de una clona
multirresistente desde Espaa en la dcada de los aos ochenta, 10 y Muoz y
colaboradores sealaron la evidencia de una diseminacin intercontinental de
una clona del serotipo 23F 11 multirresistente y con alta resistencia a la
penicilina.

En Mxico, desde 1981, fueron notificadas las primeras cepas resistentes in

vitro, con una concentracin mnima inhibitoria (CMI) de entre 1.25 y
2g/ml,12 aisladas de nios sanos. En 1993 se inform sobre una resistencia
de 43.2% en portadores asintomticos de una guardera, y de 12.8% en nios
hospitalizados.13 Como parte de un sistema nacional de vigilancia regional, se
ha podido evaluar un nmero representativo de cepas, cuyo origen se ha
ubicado predominantemente en nios enfermos hospitalizados; en estos casos
se encontr que 16% de los aislamientos a partir de lquido pleural y aspirado
bronquial tuvieron alta resistencia (es decir, una CMI mayor a 2 mg/ml de
penicilina), y alrededor de 20%, una resistencia intermedia. 14 En este mismo
informe, 13% de las cepas fueron resistentes a eritromicina; 43%, a
cloranfenicol, y 10%, a cefotaxima. Por otra parte, en portadores
nasofarngeos de una poblacin rural del estado de Tlaxcala, Mxico, 3% de los
S. pneumoniae tuvieron alta resistencia, y 12.6%, resistencia intermedia, con
bajos porcentajes de resistencia para el cloranfenicol (4%), la cefotaxima
(1.5%) y la ceftriaxona (3%). El principal mecanismo de resistencia de S.
pneumoniae a la penicilina es la alteracin en las protenas fijadoras de
penicilina
(PBPs)
De acuerdo con los hallazgos anteriores, la Alianza para el Uso Prudente de
Antibiticos (APUA) sugiere que, en los casos de infecciones respiratorias bajas
por neumococos con resistencia intermedia, se contine utilizando penicilina
con la recomendacin de incrementar la dosis por kilogramo de peso; para las
cepas resistentes, la alternativa es el uso de ceftriaxona. 15Con base en
nuestros hallazgos,13 tanto en el rea rural como en aislamientos de nios
hospitalizados con neumona, consideramos que an en este momento la
penicilina G sdica a 50 000 UI/kg/dosis contina siendo el frmaco de
eleccin para tratar la neumona comunitaria. En los casos con evolucin no
satisfactoria, las alternativas son ceftriaxona o cefotaxima, o bien,
vancomicina.
Haemophilus

influenzae

H. influenzae es una bacteria gramnegativa que causa meningoencefalitis e

infecciones de vas areas, entre otras enfermedades graves. H. influenzae
puede ser recuperado con mucha frecuencia de la nasofaringe, la cual
representa su hbitat natural; peridicamente, a lo largo de la vida, se
adquiere y se pierde el estado de portador.16 Las cepas que colonizan la
nasofaringe difcilmente son erradicadas por la accin del tratamiento
antimicrobiano. Segn diversos estudios, la frecuencia de portadores
asintomticos es de alrededor de 30%, 17-19 y en los aislamientos, los H.
influenzae no tipificables han sido predominantes; tambin se ha podido
encontrar H. influenzae tipo b, con una frecuencia menor a 10%.
En forma tradicional se ha considerado que la ampicilina y el cloranfenicol son
los fmacos de eleccin para el manejo de las infecciones causadas por este
microrganismo. Al inicio de la dcada de los aos ochenta, se observ un

incremento paulatino en la resistencia antimicrobiana, 20,21 y hacia el final de la

dcada se presentaron en el mundo varios brotes por cepas multirresistentes;
actualmente
en
Espaa
ste
es
un
fenmeno
prevalente. 22-24
En 1981 se encontr en Mxico que 14% de las cepas de H. influenzae tipo b
eran resistentes a la ampicilina, y no se hallaron cepas resistentes al
cloranfenicol.25 Hasta 1986 se notificaron las primeras dos cepas con
multirresistencia, fenmeno que contina siendo espordico en la
actualidad.26
En estudios recientes hechos con portadores farngeos asintomticos, los
porcentajes de resistencia a ampicilina y cloranfenicol han sido variables
dependiendo de la poblacin estudiada, pero en general se encuentra alrededor
de 20% de resistencia a ampicilina y una nula o muy baja resistencia al
cloranfenicol; en los estudios realizados en Mxico, la resistencia hacia
macrlidos
ha
sido
elevada.17,19,27
En general se recomienda utilizar la ampicilina o la amoxicilina como frmaco
de primera eleccin para el tratamiento de la otitis media, ya que son las que
garantizan una mejor penetracin en el lquido del odo medio. Por otra parte,
es conocido que en un alto nmero de casos de otitis media aguda hay
resolucin espontnea sin uso de antibiticos, por lo que no se requiere de
utilizar otros medicamentos de amplio espectro; en este caso, como frmaco
alternativo se tiene el trimetoprim-sulfametoxazol (PMP/SMZ). En casos de
neumona confirmada o sospechosa por H. influenzae, se recomienda el uso de
cloranfenicol; algunos investigadores, considerando los posibles efectos
colaterales del mismo, sugieren utilizar cefalosporinas de segunda generacin.
Los mecanismos bsicos de resistencia de H. influenzae se originan en la
produccin
de
betalactamasas
y
acetiltranferasa
del
cloranfenicol.
Resistencia antimicrobiana en organismos causantes de enfermedades
diarreicas
En los pases en vas de desarrollo las infecciones entricas se encuentran an
entre las principales causas de muerte, sobre todo en menores de cinco aos.
El tratamiento antimicrobiano ha aportado un claro beneficio al manejo de
algunas enfermedades diarreicas, entre las que se incluyen: shigelosis, clera,
diarrea del viajero (ms frecuentemente causada por Escherichia coli
enterotoxignica ETEC) y diarrea por Clostridium difficile. Aunque la fiebre
tifoidea no es una enfermedad diarreica, en ocasiones puede presentarse como
diarrea aguda, y la va de entrada del agente es el tubo digestivo, por lo que se
integra a las enfermedades entricas. En las infecciones por Salmonella no
typhi, la prescripcin de antimicrobianos se ha justificado para evitar una
progresin de la infeccin, as como complicaciones severas en pacientes
inmunocomprometidos.28
La resistencia antimicrobiana es un problema creciente en el tratamiento de las
infecciones entricas. En los pases en desarrollo la aparicin de

microrganismos multirresistentes se facilita debido al mayor nmero de casos

de enfermedades entricas y al uso de antimicrobianos que no son prescritos
por el mdico.29 Entre los bacilos gramnegativos que causan diarrea, los
mecanismos de resistencia bacteriana ms comunes son: inhibicin
enzimtica; alteraciones de la membrana de la bacteria, y alteracin de sitios
blanco como los ribosomas, los precursores de la pared y las enzimas. Existen
varios cambios genticos que pueden presentarse en la evolucin microbiana:
una mutacin puntual que ocurre en un par de bases; un segundo cambio que
resultara en un rearreglo del material gentico en grandes segmentos de ADN
en un solo evento, y finalmente, un tercer cambio que involucrara la
adquisicin de ADN extrao transportado por plsmidos, bacterifagos o
transposones.30 Estos cambios permiten a la bacteria adquirir un nmero
ilimitado de mecanismos de resistencia. Una vez que aparece, un gen de
resistencia puede diseminarse a otras bacterias por transformacin,
transduccin, conjugacin o transposicin. Algunas clonas seleccionadas
pueden proliferar en la flora de pacientes que reciben antimicrobianos. 30-31
Shigella
Como consecuencia de la dosis infectante reducida (10 a 100 bacterias
deShigella dysenteriae tipo 1 o unos pocos miles de S. flexneri) y su
resistencia al pH cido del estmago, estas bacterias se transmiten
fcilmente por
contacto
directo
de
persona
a
persona. 32
Shigella puede llegar tambin a la comida o al agua y diseminarse de manera
eficaz en nuevos hospederos. Las especies de Shigella son organismos
invasivos que, en las ltimas dcadas, han mostrado un desarrollo progresivo
de resistencia a los antimicrobianos de bajo costo y uso amplio. Alrededor del
mundo
se
han
utilizado para
su
tratamiento
sulfonamidas,
tetraciclinas, ampicilina, TMP/SMZ y cido nalidxico. Los perfiles de resistencia
que se han encontrado en Bangladesh son representativos de muchas reas de
pases en desarrollo.32 La tasa de resistencia ha incrementado con el tiempo,
y S. dysenteriae tipo I es la especie ms problemtica, pues durante los aos
noventa ha presentado porcentajes de resistencia mayores a 60% para
ampicilina, TMP/SMZ y cido nalidxico. S. flexneri contina siendo sensible al
cido
nalidxico.33
En 1976 se notific en Mxico la existencia de brotes epidmicos por S.
dysenteriae tipo 1 multirresistente, con patrones de resistencia similares a los
de brotes ocurridos en otros pases de Latinoamrica. 34 Posteriormente se
encontraron, durante los aos ochenta, resistencias de 25 a 30% para
ampicilina,
cloranfenicol y
TMP/SMZ.
La
sensibilidad
fue
adecuada
35
parafurazolidona y cefalosporinas de tercera generacin. Los perfiles de
resistencia
son
semejantes
en
la
actualidad.
Vibrio

cholerae

El clera es una enfermedad diarreica aguda, causada por la toxina de Vibrio

cholerae, que puede tener una evolucin grave relacionada con la prdida
excesiva de lquidos y electrolitos. A partir del inicio de la dcada de los
noventa se ha presentado como una enfermedad comn en nuestro pas. Como
en otras enfermedades diarreicas, las fuentes de infeccin son el agua
contaminada de pozos, riachuelos y cisternas, as como los alimentos
contaminados,
principalmente las
hortalizas
y
los
mariscos.36
Aunque lo fundamental en el tratamiento del clera es la terapia de
rehidratacin, los antimicrobianos disminuyen la excrecin del microrganismo
por medio de las heces y la diseminacin del mismo. Durantelos ltimos 30
aos, las tetraciclinas han sido el frmaco de eleccin, aunque tambin se ha
utilizado furazolidona, eritromicina y TMP/SMZ. La resistenciaque se ha
encontrado es mediada por plsmidos que se pierden muy fcilmente; por
tanto, los patrones de resistencia no son uniformes. A pesar de que se haba
encontrado en Bangladesh V. cholerae 01 resistente a tetraciclina en
porcentajes de 50 y 60%, para 1994, 80% de los aislamientos eran sensibles.
La resistencia para TMP/SMZ es mayor a 70%; para furazolidona, de 20 a
47%, y para eritromicina, doxiciclina y ciprofloxacina, menor a 5%.28
Escherichia coli enterotoxignica Las cepas de ETEC elaboran dos tipos
diferentes de toxinas; la primera es una protena dimrica de alto peso
molecular (86 500), similar en estructura qumica, funcin y antigenicidad a la
toxina producida por V. cholerae 01; sta se inactiva con calor (100 C
durante 10 min) y se denomina termolbil. La otra familia de enterotoxinas
producidas por cepas ETEC son las denominadas termoestables (ST).37 Esta
bacteria
es
la causa
ms
comn
de
la
diarrea
del
viajero.
Inicialmente, la doxiciclina fue el frmaco de eleccin, pero con el incremento
de cepas de ETEC y Shigella resistentes, TMP/SMZ y, ms recientemente,
las luoroquinolonas la han sustituido. Los genes plasmdicosque codifican para
resistencia son los mismos que contienen la informacin de dos enterotoxinas,
por lo que el incremento en la resistencia podra estar ligado a la transferencia
de los genes de enterotoxinas a otros organismos entricos. Para casos de
diarrea aguda por ETEC en la infancia, no se han demostrado beneficios con el
tratamiento
antimicrobiano.29
En Mxico, en cepas aisladas de pacientes peditricos durante 1960-1980, la
resistencia para la ampicilina se increment de 35 a 80%; para la tetraciclina,
se mantuvo en ms de 90%; para el cloranfenicol, aument de 57 a 68%, y
para
el
TMP/SMZ,
de
52
a
72%. 38
Clostridium

difficile

Es un microrganismo oportunista que, en condiciones normales, es inhibido por

componentes de la flora normal, como los enterococos, los lactobacilos y
algunas cepas de E.coli. Cuando este microambiente se altera, C.
difficilecoloniza y se multiplica principalmente en el colon. Puede producir una
diarrea acuosa benigna, colitis inespecfica o colitis pseudomembranosa. La

diarrea se presenta generalmente relacionada con el uso de antimicrobianos de

amplio espectro. Las reas alrededor de un paciente con diarrea o colitis son
contaminadas de modo habitual por el bacilo, lo mismo que las manos del
personal
mdico
y
paramdico, lo
que
puede
ocasionar
brotes
intrahospitalarios.39 Los frmacos utilizados en el tratamiento son vancomicina
y metronidazol; sin embargo, ya se ha notificado resistencia al primero, por lo
que
se
deben
buscar
nuevas
alternativas
teraputicas. 40
Campylobacter

jejuni

A pesar de que Campylobacter es susceptible a la accin bactericida del cido

gstrico, la ingestin de la bacteria en vehculos que mantienen un rpido
trnsito por el estmago como el agua y la leche y que, por tanto, evaden la
barrera natural de la acidez gstrica, permite el paso de la bacteria al intestino.
El periodo de incubacin vara de 1 a 7 das, y los pacientes excretan de 106 a
109 Campylobacter por gramo de materia fecal; si no son tratados, la
excrecin
puede
llevarse
de
2
a
3
semanas. 41
La infeccin entrica por Campylobacter es semejante a la causada por
Salmonella. Se trata de una zoonosis y se encuentra en las vas
gastrointestinales de una gran variedad de animales. Hay varios mecanismos
de transmisin bien definidos, incluyendo la ingestin de agua y alimentos de
origen animal contaminados como aves y otras carnes mal cocidas, y leche
sin pasteurizar, as como el contacto con animales, entre los que se
encuentran las mascotas. La enfermedad por este microrganismo no es tan
severa,
aun
cuando
ste
sea
invasivo.
En pases desarrollados la incidencia de casos de diarrea por este germen es
mayor en nios de 0 a 5 aos y en adultos de 21 a 30 aos. En pases en
desarrollo, la prevalencia de diarrea por este microrganismo es mayor, aunque
la infeccin se presenta casi exclusivamente en nios. La forma ms comn de
transmisin es la ingestin de agua o alimentos contaminados con la bacteria,
y las epidemias de Campylobacter notificadas en estos pases se han asociado
al
consumo
de
leche
o
de
agua
para
beber.41
Algunos estudios han demostrado que el tratamiento antimicrobiano puede
disminuir el periodo de enfermedad. Se ha demostrado que eritromicina,
tetraciclina, furazolidona y clindamicina son tiles en su tratamiento. 42 Sin
embargo, su identificacin en el laboratorio no es tan rpida como para
permitir el inicio de un tratamiento temprano. Recientemente se han descrito
cepas resistentes a fluoroquinolonas, eritromicina y tetraciclinas. 42
Salmonella

typhi

Existen varios frmacos disponibles para el tratamiento de la fiebre tifoidea. El

cloranfenicol contina siendo utilizado ampliamente, y como alternativas estn
la ampicilina y el TMP/SMZ. Sin embargo, se ha observado un incremento en la
resistencia durante los ltimos cinco aos, con porcentajes cercanos a 40%

para las tres drogas mencionadas; en estos casos es necesario utilizar

fluoroquinolonas
para
el
tratamiento
de
la
enfermedad. 43
En los aos setenta se identific en Mxico y Centroamrica un brote debido
a S. typhi multirresistente. La resistencia a cloranfenicol en Mxico, durante
1972, fue mayor a 75%, y ms de 92% de las cepas resultaron resistentes,
adems, a tetraciclina, estreptomicina y sulfonamidas. Posteriormente hubo un
franco descenso en la resistencia para ampicilina, cloranfenicol y TMP/SMZ (510, 5 y 10%, respectivamente), el cual se ha mantenido. 35,38
Salmonella

no

typhi

Entre 1960 y 1987, en un hospital peditrico de Mxico se encontr que la

resistencia de Salmonella increment para ampicilina (7 vs 30%) y tetraciclina
(26 vs 42%). La resistencia a TMP/SMZ se mantuvo menor a 15%, y al igual
que para Shigella, la furazolidona demostr ser un frmaco altamente
efectivo.38 Sin embargo, en otro centro peditrico, durante 1982-1985 la
resistencia para ampicilina, cloranfenicol y TMP/SMZ fue muy elevada (3050%), lo que se atribuy a la existencia de brotes epidmicos en el
hospital.35,38
Salmonella

entrica

serotipo

tiphimurium

En aos recientes una cepa de Salmonella conocida como tipo 104 (DT 104) ha
cobrado importancia debido a su multirresistencia. Los primeros casos se
notificaron en el Reino Unido, y durante los ltimos cinco aos este
microrganismo se ha encontrado con frecuencia creciente en EUA. Esta cepa es
resistente a ampicilina, cloranfenicol, estreptomicina, sulfonamidas y
tetraciclina. La decisin de utilizar un tratamiento antimicrobiano en casos de
infeccin por Salmonella no typhi depende de la severidad de la enfermedad.
Este patrn de multirresistencia debe tomarse en cuenta al decidir los
esquemas teraputicos en caso de enfermedades invasivas; por lo general, se
recomiendan las fluoroquinolonas o una cefalosporina de tercera generacin
como
la
ceftriaxona.44
Para disminuir este problema de resistencia es necesario el uso prudente de
antimicrobianos en la comida de animales y limitar, sobre todo, los frmacos
que se empleen en humanos para el tratamiento de enfermedades. El
descubrimiento de nuevos medicamentos hace parecer que estamos un paso
adelante de las bacterias; sin embargo, en muchos casos, la evolucin de estas
ltimas ha sido ms rpida, por lo que la efectividad de un frmaco contra
ciertos patgenos especficos se ha ido limitando. No hay duda de que los
nuevos antimicrobianos han permitido disminuir la morbilidad y la mortalidad
humanas; sin embargo, para maximizar estos beneficios, nos corresponde
establecer la vigilancia del uso adecuado de los antimicrobianos y cuidar
minuciosamente
la
forma
en
que
son
prescritos.

Solicitud de sobretiros: Dr. Fortino Solrzano Santos. Departamento de

Infectologa, Hospital de Pediatra, Centro Mdico Nacional Siglo XXI, Instituto
Mexicano del Seguro Social. Av. Cuauhtmoc 330, Col. Doctores, 06720
Mxico, D.F., Mxico.

Qumicos vegetales: alternativa contra los agentes patgenos

Francisco Marcelo Lara Viveros
y Nadia Landero Valenzuela
Las plantas, adems de tener la funcin de proveer oxgeno para todos aquellos
organismos aerobios, deben enfrentar constantemente a todos sus depredadores. Por el
hecho de ser incapaces de moverse estn obligadas a vivir toda su vida en el mismo lugar
donde germinaron, por lo cual constituyen una presa fcil. Esta no es razn suficiente
para que detengan su ciclo de vida, y evitarn a toda costa a sus enemigos, ya sea
apartndolos o incluso matndolos.
Los principales predadores a los que se enfrentan las plantas son los animales
herbvoros, capaces de acabar con una planta en cuestin de segundos al arrasar sus
hojas, frutos, flores y tallos. Los hongos, bacterias y virus forman otro grupo; son tan
pequeos que cabran cientos o miles en un poro de nuestra piel, pero ese tamao no
est en relacin con su peligrosidad; estos microorganismos parsitos invaden cada
clula de la planta, colonizndola de la raz a la punta.
Tomemos el ejemplo de un tipo de hongo que ocasiona una enfermedad en las papas
conocida como tizn tardo; esta enfermedad provoc la gran hambruna de Irlanda entre
los aos 1845 y 1849, que caus la muerte de aproximadamente dos millones de
personas en ese pas, y la huida a diversos pases de otros dos millones. En total, Irlanda
perdi ms de un cuarto de su poblacin en solo cuatro aos. Este fenmeno fue de tal
magnitud que dio lugar al nacimiento de la fitopatologa moderna.
Esta disciplina se encarga del diagnstico y control de las enfermedades de las plantas y
ha permitido producir alimentos en una mayor cantidad y a un precio ms accesible. Aun
hoy, los hongos ocasionan enormes prdidas, por lo que se han creado programas
gubernamentales en todo el mundo cuyo objetivo es evitar su diseminacin en los
cultivos.
Una de las principales estrategias (si bien no la nica) para el control de los hongos que
producen enfermedades en las plantas, es el uso de compuestos fungicidas. Estos
compuestos, en su mayora sintticos, representan hoy en da la primera lnea de defensa
contra los hongos fitopatgenos. Tan solo hace doce aos se aplicaban 23 millones de
kilos de fungicidas en frutas y verduras en el mundo, y se acepta generalmente que la
produccin y comercializacin de tales productos no sera posible sin el uso de aquellos.

Tal situacin no ha cambiado mucho desde entonces, aunque hoy en da hay una
preocupacin cada vez mayor en el pblico consumidor por adquirir alimentos libres de
plaguicidas debido a que se conocen los enormes riesgos a la salud humana que el
consumo prolongado de estos compuestos puede ocasionar. Adems, el uso irracional de
fungicidas contamina aguas y suelos, ante lo cual las empresas productoras de estos
compuestos estn actualmente obligadas a sintetizar compuestos cada vez ms inocuos
pero igualmente efectivos que los primeros compuestos que se utilizaron, que si bien eran
muy efectivos tambin eran mucho ms peligrosos.
Hoy se observa una tendencia a adquirir alimentos frescos y cada vez menos procesados
porque se conocen las sustancias benficas que tales alimentos contienen, como los
antioxidantes, que ayudan a disminuir los efectos de la edad, o bien ciertas sustancias
que previenen muchas enfermedades, como el cncer, cuando se les consume
habitualmente. Este hecho ha creado una discrepancia entre la necesidad de los
agricultores de proteger sus cultivos de las enfermedades, y la exigencia cada vez mayor
de los mercados por disponer de alimentos ms saludables. Por una parte, los
consumidores enfrentan el riesgo de ingerir cantidades mayores de fungicidas, con los
riesgos a la salud que esto implica y, por la otra, los agricultores se ven obligados a utilizar
cada vez en mayor escala estos compuestos debido a la necesidad de incrementar sus
rendimientos y obtener mrgenes de ganancia aceptables. Dicha confrontacin de
intereses ha llevado a cientficos de todo el mundo sobre todo de unos aos a la fecha
a buscar nuevas estrategias para solucionar el conflicto.
Aproximadamente a mitad del siglo pasado los fisilogos vegetales se dieron cuenta de
que las plantas, adems de sintetizar azcares y otros compuestos vitales para su
crecimiento, sintetizaban otros elementos a base de carbono. Cabe mencionar que, al
menos al principio, esos cientficos cometieron el error de pensar que se trataba de
desechos del metabolismo, esto es, compuestos que se formaban sin objetivo especfico;
en fin, simples productos basura, por ello les dieron el nombre de metabolitos
secundarios. En ese entonces los cientficos que se dedicaban a estudiar tales
compuestos eran qumicos, por lo que les fue difcil establecer la importancia de esos
metabolitos secundarios. Fue hasta la dcada de 1970 cuando el creciente inters por las
interrelaciones de las plantas con el medio dieron lugar a un nmero muy grande de
experimentos que sugeran que dichos compuestos, menospreciados hasta ese momento,
desempeaban un papel de vital importancia en el desarrollo de las plantas en su
ambiente natural. La idea de que las plantas sintetizaban compuestos basura cambi casi
de inmediato y se empez a comprender que esos compuestos se desarrollaban en las
plantas a lo largo del ciclo evolutivo para defenderse de sus depredadores, como los
insectos o los hongos que les ocasionaban enfermedades. Hoy se conocen
aproximadamente 200 mil compuestos diferentes provenientes del metabolismo
secundario de las plantas y se cree que an faltan muchos ms por descubrir. As, la idea
de que eran compuestos basura ha sido totalmente descartada con mltiples evidencias
cientficas; por ejemplo, se sabe que la sntesis de estos compuestos est controlada por
genes especficos; en muchas ocasiones esos genes se expresan solamente en
condiciones en las cuales la planta est siendo atacada por alguna plaga o enfermedad.
Adems, en muchas ocasiones estos compuestos resultan ser sumamente txicos para
los organismos que atacan a las plantas.

Es lgico pensar que las plantas han evolucionado con genes especficos para la sntesis
de estos compuestos si consideramos que, a diferencias de los animales, las plantas no
pueden huir cuando las amenaza un peligro. La idea de las plantas corriendo nos
resultar graciosa, pero huir sera de gran beneficio ya que son el primer eslabn de la
cadena alimenticia de todo el planeta. En los esquemas de la cadena trfica que
estudiamos en las universidades, todas las flechas apuntan hacia las plantas, directa o
indirectamente.
Ante el escenario que se ha planteado veremos que han desarrollado defensas tan
efectivas que les han permitido desarrollarse y evolucionar en un mundo donde el nmero
de depredadores es demasiado grande. Solo hasta pocas recientes, y gracias a la
estrecha colaboracin de qumicos, fisilogos y fitopatlogos, hemos empezado a
comprender el increble funcionamiento de esas defensas y los posibles usos que
podemos dar a este conocimiento.
Adems de ser txicos para los depredadores de las plantas, muchos de los mencionados
compuestos son txicos para la propia planta, por lo que se encuentran unidos a otras
molculas que los hacen inofensivos cuando estn dentro de la clula vegetal. Sin
embargo, cuando una planta es atacada por un insecto o un hongo que rompe las
estructuras celulares, se sintetizan enzimas capaces de romper las uniones entre el
metabolito y la molcula que los hace inofensivos, dando lugar a una nueva molcula
capaz de intoxicar a los intrusos; esta respuesta de defensa suele ser rpida y efectiva y
ahuyenta o incluso mata a cualquier posible predador.
El que las plantas lograran evolucionar a pesar de tantos enemigos naturales se debe,
pues, a los compuestos del metabolismo secundario que tienen una actividad
antimicrobiana y que las protegen del ataque de los hongos fitopatgenos o de los
insectos. Su sntesis requiere en muchas ocasiones de grandes cantidades de energa del
metabolismo primario, pero tal inversin en energa es recompensada con creces, ya que
gracias a la sntesis de estos compuestos las plantas logran completar su ciclo de vida.
Los metabolitos secundarios, al igual que las armas, son muy diversos y reciben los
siguientes nombres: voltiles, que son gases con olores desagradables; terpenos, que
dan un sabor amargo a la planta; alcaloides, que alteran el sistema nervioso y
cardiovascular del depredador, y muchos ms que son txicos. A continuacin se
describen los grupos que conforman estos compuestos:
Flavonoides. Son un grupo grande y muy importante de compuestos presentes en
muchas plantas. Por ejemplo, las antocianinas pintan de colores rojos o azules a las
flores, que sirven para atraer polinizadores; de hecho, algunos insectos son capaces de
reconocer este espectro de colores para llegar a las plantas en floracin; adems se ha
encontrado que, en las leguminosas, las flavonas actan como seales para atraer ciertas
bacterias con las cuales estas plantas establecen una relacin simbitica para fijar al
suelo el nitrgeno ambiental. Otros flavonoides son veneno para los hongos, con lo cual
proporcionan a las plantas resistencias contra las enfermedades.

Taninos. Son compuestos muy txicos para una amplia variedad de insectos; este hecho,
aunado a que la sntesis de dichos compuestos aumenta en las plantas sometidas a
estrs, ha sido el causante de que se les relacione con una estrategia de defensa en
muchas plantas. Los taninos que hay en las frutas inmaduras producen una sensacin de
resequedad en la boca (efecto astringente) debido a la interaccin de estos compuestos
con las protenas de la saliva, lo que sin duda ahuyenta a cualquier depredador y ayuda a
la planta a completar su ciclo de vida. Recientemente se ha encontrado que, en ciertas
dosis, los taninos pueden ayudar a reducir las enfermedades cardiacas y el cncer. Por
esa razn se dice que el vino, en cantidades moderadas, puede ser benfico para la salud
ya que tiene un gran contenido de taninos, especialmente el vino tinto.
Terpenoides y esteroides. Son compuestos voltiles que tienen una amplia gama de
actividades biolgicas. Una de las ms importantes es la fuerte actividad antisptica en
contra de un gran nmero de organismos patgenos para las plantas y animales. El aceite
de canela, la menta o el tomillo son los ejemplos ms representativos de estos
compuestos.
Compuestos de azufre. Las plantas con un gran contenido de tales compuestos son, por
ejemplo, la cebolla o el ajo. Hay un gran nmero de ensayos clnicos que muestran que
pequeas cantidades de polvo de ajo reducen significativamente el colesterol sanguneo,
la presin arterial y la agregacin plaquetaria de la sangre. Adems, hay compuestos
azufrados que muestran una alta efectividad biolgica en contra de bacterias u hongos
patgenos de plantas o animales.
Alcaloides. Constituyen uno de los primeros metabolitos secundarios de plantas
conocidos por el hombre, debido principalmente a que en dosis muy bajas muestran
efectos farmacolgicos muy marcados. El ejemplo ms conocido de este grupo de
compuestos es la morfina, que se aisl del opio en 1817. Despus, por esa misma poca,
un gran nmero de investigadores separ muchos alcaloides ms, como la cafena. En las
plantas, los alcaloides desempean un papel importantsimo como defensas ante los
depredadores; sin embargo, el ser humano utiliza estos compuestos como analgsicos o
anestsicos. En muchos casos estos compuestos causan adicciones intensas, como la
morfina o la cocana.
Aminocidos no proteicos. En este grupo de compuestos se encuentran venenos muy
poderosos, conocidos desde pocas remotas, muchos de los cuales actan como
neurotoxinas. Por ejemplo, las semillas de varias especies de Lathyrus ocasionan
debilidad muscular generalizada que puede conducir a una parlisis irreversible e incluso
a la muerte. Estos compuestos resultan ser una defensa muy eficaz en contra de algunas
aves, ya que estos animales son muy sensibles a tales compuestos.
La lista de compuestos es larga y muchos de ellos ya se utilizan en la actualidad con fines
farmacolgicos. De hecho, de algunos aos a la fecha se ha puesto muy en boga la
utilizacin de medicamentos cuyos principios activos son metabolitos secundarios de
plantas que contribuyen a mejorar la salud humana. Si los metabolitos secundarios de
plantas se utilizan para curar enfermedades humanas, por qu no emplearlos para curar
las enfermedades de las propias plantas? Teniendo en cuenta que existen hoy normas

muy estrictas respecto del uso de compuestos qumicos sintticos, los productos
naturales representan una excelente alternativa para el control de algunos
microorganismos que ocasionan enfermedades y que pueden llegar a ser muy
destructivos. Entre ms riesgos de predacin existan para la planta, mayor ser la
cantidad y composicin de metabolitos secundarios que ponga en su defensa, o bien
puede diferirlos segn le convenga. Es importante mencionar que el tipo de planta, el
ambiente en el que se encuentre, la cantidad de predadores, la poca del ao o la hora
del da influirn en la produccin de ciertos metabolitos, considerndose por ello que una
planta es ms o menos resistente dependiendo de la rapidez con que despliegue sus
armas qumicas.
Sin embargo, en muchas ocasiones los hongos patgenos han desarrollado resistencia a
los referidos compuestos, pues logran infectar a las plantas al superar sus defensas. Por
ello, los investigadores realizan actualmente diversos estudios para identificar y aislar los
compuestos defensivos con la finalidad de extraerlos de las plantas y usarlos contra los
hongos sensibles, lo que abre la posibilidad de que los productores de alimentos puedan
controlar las enfermedades que afectan sus cultivos por medio de productos muy
efectivos y de baja peligrosidad para el ser humano. Los avances de la ciencia en cuanto
a la extraccin, separacin y cuantificacin de esos compuestos ha hecho posible que
cada vez ms cientficos tengan acceso a la tecnologa necesaria para sus
investigaciones; adems, la necesidad de encontrar nuevas alternativas para el control de
enfermedades los ha impulsado a que se involucren ms todava en la bsqueda e
identificacin de compuestos con propiedades antimicrobianas que pudieran servir como
un control biolgico de aquellas.
Muchos de los compuestos con actividad en contra de los hongos fitopatgenos son
benficos para el ser humano, por lo que su uso puede contribuir a conservar la salud. As
que el estudio y uso de compuestos de metabolismosecundario de plantas tiene adems
la ventaja de tener un impacto nulo en el medio ambiente, puesto que son compuestos
que desde hace miles de aos existen en la naturaleza. El reto actual de los cientficos
consiste en estudiar y comprender la diversidad y funcin de estos compuestos, as como
dar un uso racional a esta nueva alternativa, para lo cual se requiere de un esfuerzo
colectivo e interdisciplinario de muchas especialidades de la ciencia (fisilogos,
fitopatlogos, fitoqumicos, eclogos, etc.). Los actuales problemas ambientales que
enfrenta la humanidad exigen hoy ms que nunca la colaboracin estrecha de los
investigadores. Si bien hoy da el uso de los fungicidas sintticos es una de las estrategias
ms comunes para controlar las enfermedades de las plantas, la tendencia en todo el
mundo es buscar nuevas alternativas, sin que por ello haya que satanizar el uso de
aquellos, ya que el problema de desabasto alimentario por la creciente poblacin humana
sera peor de lo que es ahora. No obstante, es tiempo de aplicar las tecnologas y
conocimientos actuales para encontrar nuevas opciones ms amigables con el medio
ambiente, y curiosamente son las propias plantas las que nos pueden dar esas opciones,
permitindonos obtener una mayor produccin en los cultivos, de mejor calidad y que
satisfagan los requerimientos de la sociedad.
Para el lector interesado

Ragsdale, N.N. y Sisler, H.D. (1994). Social and political implications of managing
plant diseases with decreased availability of fungicides in the United States. Annual
Review of Phytopathology, 32, 545-557

Deteccin de bacterias benficas en suelo con banano (Musa AAA

Simmonds) cultivar 'Gran enano' y su potencial para integrar un
biofertilizante
INTRODUCCIN
El banano Musa AAA Simmonds es un cultivo de regiones tropicales y subtropicales del
planeta. En Mxico existe una superficie sembrada de 72 000 ha, distribuida en los
estados de Tabasco, Veracruz, Colima, Michoacn y Chiapas, ocupando el sptimo lugar
a nivel mundial con 2 361 144 ton que constituye el 4% de la produccin mundial
(SAGARPA 2005). La productividad de las plantaciones de banano es regulada por la
disponibilidad de nutrimentos, lo que ha inducido a la aplicacin de fertilizantes
inorgnicos en cantidades de 200 kg de nitrgeno (N) ha1 ao1 y 400 kg de potasio
(K) ha1 ao1 (Colque et al. 2005). Sin embargo, la aplicacin excesiva de estos
fertilizantes no es sustentable debido a que son econmicamente no viables y poco
amigables con el ambiente (Rajendran & Devaraj 2004), inducen la disminucin de la
poblacin de bacterias benficas para la planta (Deb & Bora 1996) y de bacterias
fijadoras de N de vida libre que viven en asociacin con la raz de muchas plantas
cultivadas (gt et al. 2005). La asociacin plantabacterias fijadoras de nitrgeno ha
sido estudiada en plantas anuales y perennes debido a que contribuyen en el efecto
directo del crecimiento de la planta, por la produccin de fitohormonas, en la
disponibilidad de nutrimentos y en la reduccin de las poblaciones de patgenos de la
raz (Rao & Krishna 2006). Azospirillum y Azotobacter son fijadoras de N de vida libre,
llamadas tambin diazotrficas debido a que dos moles de amonio producen un mol de
nitrgeno gaseoso (Philippot & Germon 2005). La densidad de poblacin
de Azospirillum en rizsfera y en suelo ha sido determinada en plantas de banano
(Abdul et al. 2005), garbanzo, haba (Hamaoui et al. 2001), lechuga, pasto (Daz
Vargas et al. 2001) y arroz (Velazco & Castro 1999); mientras que la
de Azotobacter en plantas de algodn, avena, cebada, maz, papa, remolacha
azucarera, tomate, trigo y zanahoria (Alexander 1994). La utilizacin de bacterias
fijadoras de N de vida libre como Azotobacter y Azospirillum en sustratos es una
prctica en la agricultura sustentable (Tripathy & Ayyappan 2005).

El potencial natural de Azotobacter y de Azospirillum en la nutricin de la planta y en la

fertilidad del suelo es recomendable utilizarla en la agricultura (Mrkovacki & Milic
2001). Las bacterias reguladoras del crecimiento, sostenidas en sustratos orgnicos
nativos de regiones tropicales hmedas, tienen grandes posibilidades para el desarrollo
de biofertilizantes para la produccin de banano. Los biofertilizantes son sustancias que
contienen microorganismos vivos que, cuando son aplicados a la semilla, a superficies
de la planta o al suelo, colonizan la rizsfera o el interior de la planta y promueven el
crecimiento aumentando el suministro o disponibilidad de nutrimentos primarios de la
planta (Vessey 2003). En el presente estudio las bacterias fueron evaluadas en suelo y
en rizsfera de banano, aisladas e inoculadas en acarreadores como suelo, pollinaza
(estircol de pollo) y pinzote (raquis central del racimo del banano). Se determin la
densidad de bacterias de los gnerosAzotobacter y Azospirillum a travs del tiempo as
como los contenidos de nitrgeno en los sustratos inoculados, con el fin de proponerlo
como biofertilizante formulado.

MATERIALES Y MTODOS
Rizsfera, suelo y perfil agrolgico
Se seleccion un sitio cultivado con plantacin de banano (Musa AAA Simmonds) cv.
'Gran enano' con una edad de 15 aos, propiedad de AGRISNA S. P. R. de R. L. El sitio
se localiza en el km 6.5 de la carretera federal 180, tramo CrdenasVillahermosa, en
el estado de Tabasco, Mxico. Se delimit en el interior de la plantacin bananera una
superficie de una hectrea, se realiz el conteo del total de plantas, la poblacin fue 1
466 plantas. Se seleccionaron completamente al azar 30 plantas, como referencia de
los puntos de muestreo de suelos rizosfrico y no rizosfrico. Se realizaron
barrenaciones agrolgicas para identificar el sitio con la morfologa del perfil
representativo del suelo. El perfil agrolgico se excav en el sitio ubicado en las
coordenadas geogrficas 17 59' 03" latitud norte y 93 18' 48.35" longitud oeste. Se
colectaron cinco submuestras de cada horizonte, se mezclaron homogneamente y se
formaron muestras compuestas de cada horizonte. Las muestras compuestas para los
anlisis de las propiedades fsicas y qumicas se introdujeron en bolsas de plstico. Las
muestras de suelo para determinar las poblaciones de bacterias de horizontes, suelo
rizosfrico y de suelo no rizosfrico, se metieron en frascos esterilizados de vidrio
mbar, se taparon con papel aluminio y se cerraron con la tapa con rosca, se
preservaron en campo en hielera con hielo y despus se almacenaron durante una
semana en refrigeracin a 4 C en el laboratorio. La caracterizacin morfolgica de los
perfiles agrolgicos se realiz de acuerdo con Cuanalo (1981), la nomenclatura del
suelo se bas en el sistema de clasificacin de ISSSISRICFAO (2002).
Anlisis de las propiedades fsicas y qumicas del suelo
Las muestras para la medicin de las propiedades fsicas y qumicas del suelo se
secaron a temperatura ambiente a la sombra y se molieron con mazo de madera; las
muestras orgnicas se fragmentaron con rodillos de madera y se tamizaron en malla
10 (2 mm). Las rutinas analticas para medir N total (%), P aprovechable y K
intercambiable (Cmol+k1), capacidad de intercambio catinico (CIC) (Cmol+k1),

materia orgnica (MO) (%), pHH20 1:2,5, conductividad elctrica (CEH20 1:2,5) (dSm1),
textura (%) y contenido de humedad son las indicadas en la NOM021RECNAT2000
(DOF 2002).
Anlisis microbiolgico
La evaluacin de la densidad de poblaciones de bacterias de los
gneros Azotobacter y Azospirillum en suelos rizosfrico, no rizosfrico y en el suelo de
horizontes del perfil se realiz con el mtodo de conteo viable de clulas vivas por
siembra en superficie (Madigan et al. 2004). Se utilizaron diluciones seriadas con base
en 10, se diluyeron 10 g de suelo en 90 ml de agua estril, hasta 1/10 8. Se tom 0.1
ml de cada dilucin y se coloc en el centro de la caja Petri con medios de cultivos
slidos especficos, distribuyndose con esptula trigalsqui. El procedimiento se realiz
por triplicado. El conteo de clulas viables se efectu contando las unidades
formadoras de colonias (UFC) que crecieron en la superficie del medio de cultivo de la
caja Petri, luego se transform a UFC g1 de suelo seco. El conteo se efectu con
contador de colonias Darkfield Quebec (Cia American Optical). Los medios de cultivos
utilizados fueron: carbn combinado para bacterias totales fijadoras de N (BFNT),
solucin A (0.9 g K2HPO4, 0.2 g KH2PO4, 0.1 g KCl, 0.025 Na2MoO4.2H2O, 4.9 g
Na2FeEDTA, 15 g agar y 1.0 ml agua destilada), y solucin B (0.2 g MgSO4.7H2O, 0.06
g CaCl2.H2O, 100 ml agua destilada) (Rennie 1981). El medio de cultivo para bacterias
del gnero Azospirillum fue rojo congo DDbereiner (D) (5 g cido mlico, 0.5 g
K2HPO, 0.2 g MgSO4.7H2O, 0.1 g NaCl, 0.5 g extracto de levadura, 0.015 g FeCl3.6H2O,
4.8 g KOH, 15 ml de rojo congo, 15 g de agar y 1.0 ml agua destilada, pH 7.0)
(Holgun et al. 1996). Azotobacter se estableci en medio de cultivo Ashby (5 g
manitol, 5 g K2HPO4, 0.2 g MgSO47H2O, 0.5 g NaCl, 0.1 g K2SO4, 5 g CaCO3, 15 g de
agar y 1.0 L de agua destilada, pH 7.0) (Rao 1999).
Aislados de bacterias
Las colonias fueron purificadas, aislando cada una de ellas a travs de la tcnica de
estra en cuadrante sobre medio de cultivo slido. Estas colonias se caracterizaron por
su morfologa externa e interna. La primera se evalu con los parmetros dimetro,
color, consistencia, forma, elevacin y borde. La segunda se caracteriz por
microscopa, para esto a cada aislado se le realiz la tincin de Gram (Ramrez
Gama et al. 1998).
Preparacin de sustratos e inculo bacteriano Los sustratos secos (pollinaza,
pinzote, pollinaza + suelo, pinzote + suelo y suelo) fueron molidos y tamizados en una
malla de 2 mm de abertura, se pesaron 500 g para cada unidad experimental, despus
se colocaron en bolsas de papel, las cuales se cubrieron con papel aluminio y se
esterilizaron en autoclave a 180 C y 1.3 kg cm1 durante 30 min (Ingraham &
Ingraham 1998). Se realizaron las determinaciones de contenido de humedad, pH,
nitrgeno total, fsforo aprovechable y potasio intercambiable (Tabla 1). Segn los
parmetros de fertilidad qumicos de referencia establecidos en la NOM021RECNAT
2000 (DOF 2002), el pH para la pollinaza y pollinaza + suelo es neutro, el pinzote y
pinzote + suelo es fuertemente alcalino y el suelo es ligeramente alcalino. El contenido
de materia orgnica en todos los sustratos agrcolas es mayor que 6%, clasificado
como valor muy alto (DOF 2002) excepto para el suelo que vara de 1.6 a 3.5 %,

clasificado en la clase media. El nitrgeno total tiene contenidos bajos (10 a 20 mg kg

1
) en los cinco sustratos. El fsforo aprovechable es alto (mayor de 30 mg kg1 ) en
sustratos neutros y cidos y tambin alto (mayor de 11 mg kg1 ) en sustratos
alcalinos. El contenido de potasio intercambiable es alto (mayor de 0.6 Cmol (+) kg 1)
en los sustratos y en el suelo (DOF 2002).
El inculo de bacterias se prepar de manera individual con cada una de las seis cepas
aisladas, en la Tabla 2se reportan la nomenclatura y caractersticas macroscpicas y
microscpicas de cada cepa. Se utilizaron los medios de cultivo lquidos especficos
para Azospirillum y Azotobacter, indicados en el apartado de anlisis microbiano. Cada
aislado bacteriano se hizo crecer durante 72 h en medio de cultivo slido especfico,
despus se resuspendi la colonia en medio de cultivo lquido y se incub a 28 C y
agitacin a 180 rpm durante seis das. En este tiempo se evalu a travs del mtodo
de cuenta viable por dilucin seriada, el tamao de la poblacin de cada una de las
bacterias contenidas en los inculos. Los resultados mostraron una poblacin de
106 UFC ml 1 tanto de Azotobacter como de Azospirillum.
Establecimiento de experimento para biofertilizante
Para probar el potencial de los sustratos como soporte de los consorcios
de Azospirillum y de Azotobacter, que permita seleccionar la mejor combinacin
sustrato + consorcio e integrar el biofertilizante, se estableci un experimento con 15
tratamientos y tres repeticiones por tratamiento. Se utilizaron dos factores, tipo de
sustrato [suelo, pollinaza, pinzote, pollinaza + suelo, pinzote + suelo)] y tipo de
consorcio de bacteria [sin consorcio (S/C)], con Azospirillum (C/Azop),
con Azospirillum+Azotobacter (C/Azosp+Azot) y con Azotobacter (C/Azot)]. En total se
establecieron 45 unidades experimentales, cada una fue una bolsa negra de polietileno
de 27x28 cm con 500 g de sustrato agrcola e inoculado y no inoculado segn
tratamiento, manteniendo 32 % de humedad. Las caractersticas fsicas y qumicas de
los sustratos y del suelo se reportan en la Tabla 1. Los consorcios estuvieron
integrados por tres aislados de Azospirillum (FBAzop1, FBAzop2, FBAzop3) y tres
de Azotobacter(FBAzot1, FBAzot2, FBAzot3), procedentes del suelo y rizsfera de
plantas de banano de la plantacin seleccionada. Los tratamientos fueron: suelo +
C/Azopirillum (Bio1), pollinaza + C/Azopirillum (Bio2), pollinaza + suelo +
C/Azopirillum (Bio3), pinzote + C/Azopirillum (Bio4), pinzote + suelo +
C/Azopirillum (Bio5), suelo + C/Azospirillum + C/Azotobacter (Bio6), pollinaza +
C/Azospirillum + C/Azotobacter (Bio7), pollinaza + suelo +
C/ Azospirillum + C/Azotobacter (Bio8), pinzote+
C/Azospirillum + C/Azotobacter (Bio9), pinzote + suelo + Azopirillum
+ C/Azotobacter (Bio10), suelo + C/Azotobacter (Bio11), pollinaza
+C/Azotobacter (Bio12), pollinaza + suelo + C/Azotobacter (Bio13), pinzote
+ C/Azotobacter (Bio14) y pinzote + suelo + C/Azotobacter (Bio15).
Anlisis microbiolgico del biofertilizante
A los das 1, 30 y 60 despus de establecido el experimento, se tomaron muestras de
20 g de cada unidad experimental con el fin de evaluar la densidad poblacional de
bacterias inoculadas y el contenido de humedad. Para ello se utiliz el mtodo de

cuenta viable por dilucin seriada en placa de agar slido en medio de cultivos
especficos para bacterias Azotobacter y Azospirillum.
Nitrgeno total en biofertilizante
Muestras de cada uno de los 15 biofertilizantes fueron colectados el da 60 despus de
establecido el experimento y se analizaron mediante microKjeldhal para determinar el
contenido de nitrgeno total (Keeny & Nelson 1982).
Clasificacin del suelo
La clasificacin del suelo se realiz con la nomenclatura de la ISSSISRICFAO (2002).
Anlisis de la informacin
Se realiz el anlisis de varianza y la prueba de medias Tukey (p < 0.05) a las
variables densidad de poblacin de bacterias fijadoras de nitrgeno de vida
libre, Azotobacter y Azospirillum evaluadas en horizontes del perfil agrolgico, suelo y
suelo rizosfrico de banano y en las unidades experimentales que integran el
bioensayo del biofertilizante, as como nitrgeno total y fsforo disponible en
biofertilizante. Se utiliz el procedimiento ANOVA del programa Statistical Analysis
System (SAS 1999).

RESULTADOS
Propiedades fsicas y qumicas del perfil y clasificacin del suelo
La presencia de un epipedn mbrico, las propiedades de diagnstico utricas, el
porcentaje de saturacin de bases del 50 % hasta 100 cm de profundidad, adems la
disminucin del contenido del carbono orgnico al aumentar la profundidad del perfil,
indican que el suelo estudiado es un Fluvisol utrico (ISSSISRICFAO 2002). Los
resultados de los anlisis qumicos evidenciaron que es un suelo que favorece el
crecimiento de colonias de bacterias, ya que nutrimentalmente posee los elementos
qumicos necesarios para el crecimiento bacteriano (Tabla 2). El pH en los primeros
tres horizontes superficiales flucta de medianamente alcalino (7.4 a 8.5) a
moderadamente cido (5.1 a 6.5), pero a partir del cuarto horizonte la alcalinidad del
suelo aumenta con el incremento de la profundidad. Se determinaron contenidos altos
de carbono orgnico de 7.42 y 2.20% en los dos primeros horizontes (A1p y A2p), el
cual disminuye conforme aumenta la profundidad en el suelo, observndose la misma
tendencia en los contenidos de nitrgeno total y el potasio intercambiable. No obstante
lo anterior, el fsforo disponible en el primer y segundo horizontes tienen contenidos
muy altos, 144 y 21.7 mg kg1, respectivamente, que disminuye en los horizontes
subyacentes (Tabla 2). La capacidad de intercambio catinico, segn la clasificacin de
Cottenie (1980), corresponde a la clase alta en los horizontes A1p y A2p, y a la clase
media en los horizontes A3s, C1sq, C2s y C3s (Tabla 2). El porcentaje de saturacin de

bases en los cuatro horizontes intermedios es de 50 %, en el primer horizonte y en el

sexto es menor a 50 %. El contenido de carbonato de calcio es mayor al aumentar la
profundidad del suelo, es 1.88% en el horizonte superficial A1p (02 cm) y 4.9 % en el
horizonte subyacente C2s (5970 cm). Las propiedades fsicas en los primeros cuatro
horizontes son apropiadas para la multiplicacin de las bacterias, destacando
contenidos de humedad normales en todo el perfil, lo cual favorece los contenidos de
oxgeno en el espacio poroso.
Densidad de bacterias en suelo cultivad o con banano
La comparacin de las medias de la densidad de bacterias fijadoras de N de vida libre
muestran diferencias significativas (p < 0.05) (Tabla 2). La poblacin ms grande
(33.4x103 UFC g1 suelo seco) correspondi a las BFN del horizonte superficial A1p (0
2 cm), fue 55 veces mayor que la poblacin del horizonte C1sq (3959 cm) ms
profundo en donde se localiz la poblacin de BFN (Figura 1). En los horizontes ms
profundos (> 59 cm de profundidad) no se localizaron colonias de bacterias,
posiblemente por las condiciones anaerbicas. Azospirillumse encontr en los primeros
cuatro horizontes. La mayor poblacin (4.3x103 UFC g1 suelo seco) se localiz en el
horizonte superfcial A1p (02 cm), a partir de I horizonte A2p (2 15 /19) hasta C 1s
q (3959 cm) las medias de la densidad de bacterias no mostraron diferencias
significativas (Figura 1). La mayor densidad poblacional de Azotobacter (18.93
x103 UFC g1 suelo seco) se localiz en el horizonte A2p (215/19 cm) y fue 17 veces
mayor que la poblacin encontrada en muestras del horizonte mas profundo C3s (70
110 cm), con una poblacin de 11x102 UFC g_1 suelo seco y correspondi a un slo tipo
de aislado (Figura 1). La mayor (cuatro) diversidad de aislados de Azospirillum
y Azotobacter se localizaron en los dos primeros horizontes superficiales.

Azospirillum y Azotobacter se localizaron en los 30 puntos del muestreo, tanto en suelo

como en rizsfera de banano (Tabla 3). Se observan diferencias significativas entre las
medias del tamao de poblacin de ambos tipos de bacterias en los puntos de
evaluacin (suelo rizosfrico y suelo seco), distribuidos en los 10 000 m2evaluados. La
ms alta poblacin de Azospirillum (94x104 UFC g suelo seco) se encontr en el suelo
rizosfrico de la planta 175 y de Azotobacter con 110x105 UFC g1 suelo seco en la
planta 634. Las menores poblaciones deAzospirillum (9x102 UFC g1 suelo seco) y
de Azotobacter (16x102 UFC g1 suelo seco) se contaron en muestras de suelo a
distancia de las plantas 360 y 1151, respectivamente. En los 30 puntos se observa
efecto rizsfera, este presenta valores desiguales entre los puntos evaluados desde 1.7
a 270 en la poblacin de Azospirillum y de 13.9 a 192.5 con Azotobacter (Tabla 3).
Aislados de bacterias
En base a los resultados previamente citados se aislaron seis cepas de bacterias, tres
son FBazp1, FBazp2 y FBazp3 que corresponden al gnero Azospirillum y tres
de Azotobacter, identificadas como FBazt1, FBazt2 y FBazt3, las caractersticas
macroscpicas y microscpicas se observan en la Tabla 4. Los aislados
deAzospirillum se caracterizaron por su forma de bacilos cortos y Gram negativos,
mientras que los tres aislados de Azotobacter presentaron forma de coco y Gram
negativos.

Azospirillum en biofertilizante
En los tres tiempos (das 1, 30 y 60) despus de la inoculacin de Azospirillum se
observaron diferencias significativas entre medias de los tratamientos (p < 0.05)
(Tabla 5), por efecto del sustrato y consorcio de bacterias utilizados en la formulacin
del biofertilizante. Los resultados indican que en los das 1 y 60 la formulacin
integrada por el Bio4 (pinzote + C/ Azospirillum) promueve el aumento de la
poblacin deAzospirillum ya que se alcanzaron tamaos mximos, con 55x102 UFC g
1
suelo seco el da 1 y 150x104 UFC g1 suelo seco el da 60 (Tabla 5).
Azotobacter en biofertilizante
Al evaluar el tamao de poblacin del consorcio Azotobacter los das 1, 30 y 60
despus de la inoculacin, se observan diferencias significativas entre medias de
tratamientos (Tukey, p< 0.05) por efecto del sustrato y consorcio integrante del
biofertilizante (Tabla 6). El da uno la mayor poblacin (90x102 UFC g1 suelo seco) se
observ en Bio15 integrado con pinzote + suelo + C/Azotobacter, pero el da 30 la
mayor poblacin (90x104UFC g1 suelo seco) se encontr en Bio7 (pollinaza +
C/Azospirillum + C/Azotobacter). El da 60 la poblacin de Azotobacter est presente
en los 10 tratamientos inoculados, pero la mayor poblacin (63x104 UFC g1 suelo
seco) se observa en el tratamiento Bio10 (pinzote + suelo + C/Azospirillum +
C/Azotobacter) y la menor (84x102 UFC g1 suelo seco) en el Bio6, integrado con
suelo + C/Azospirillum + C/Azotobacter.
Nitrgeno total y su relacin con Azospirillum y Azotobacter en biofertilizante
Al cuantificar los contenidos de nitrgeno total el da 60 despus de la inoculacin de
los biofertilizantes con los consorcios de bacterias, se encontraron diferencias
significativas entre las medias de los tratamientos (Tukey, p< 0.05). El mayor
contenido de N (5.25%) se localiz en el Bio7 (pollinaza +
C/Azospirillum y Azotobacter) con una densidad de Azospirillum de 68x104 UFC g
1
suelo seco (Tabla 5) y Azotobacter de 20x104 UFC g1 suelo seco (Tabla 6). Los
menores contenidos de N total (0.39%), de Azospirillum (22x102 UFC g1 suelo seco)
yAzotobacter 17x104 UFC g1 suelo seco se muestran en el Bio6 (suelo +
C/ Azospirillum y Azotobacter) (Tabla 5).
En la Figura 2 se observa que las densidades de Azospirillum y de Azotobacter y los
contenidos de N total en los sustratos son superiores respecto a los localizados en
suelo. El sustrato de pollinaza present la mayor poblacin (37x103 UFC g1 suelo seco)
y los altos contenidos de N total (4.45 %), presentando una correlacin positiva
(0.723) entre las dos variables. Sin embargo, la mayor densidad
de Azotobacter (11x104 UFC g1 suelo seco) se localiza en el sustrato pinzote + suelo
(Bio15) mostrando bajos contenidos de N total (1.76%). El coeficiente de correlacin
indica que no existe relacin (0.132) entre las dos variables.

DISCUSIN
Las caractersticas fsicoqumicas y propiedades de diagnstico indican que el cultivo
de banano presente en la finca se localiza en vega de ro, en un Fluvisol utrico,
condiciones que acorde con Annimo (2001) menciona que estos suelos sustentan
cultivos de frutales como pltano y han sido formados a partir de aluviones recientes,
que en la regin han sido depositados por el ro Samaria. No obstante lo anterior, es
importante indicar que bajo condiciones de un sustrato Calcisol vrtico, existen
plantaciones de banano en otras regiones de Mxico (OrozcoRomero & PrezZamora
2006), igualmente en otras regiones como en la provincia de Sullana en Per, donde
existen plantaciones bananeras en Fluvisoles (Soldevilla 2005).
Asimismo se identific que en los diferentes horizontes del Fluvisol cultivado con
banano, se identific que las poblaciones de bacterias disminuyen al aumentar la
profundidad, principalmente aquellas que son fijadoras de N de vida libre como
son Azotobacter y Azospirillum. Al respecto, RiveraCruz et al. (2002) encontraron en
Gleysol histiorthiutrico similares resultados en bacterias fijadoras de N de vida libre,
las cuales fueron localizadas hasta una profundidad de 70 cm, por su parte Coyne
(2000) encontr bacterias aerbicas hasta una profundidad de 145 cm. En el presente
estudio se localizaron bacterias fijadoras de N y Azospirillum hasta 59 cm de
profundidad, pero Azotobacter fue localizado hasta los 110 cm. La densidad de estas
bacterias a travs de la profundidad fueron del orden de 101 a 103 UFC g1 de suelo
seco (Figura 1), lo que indica poblaciones aceptables al compararlas con lo que
menciona Alexander (1994) respecto a Azotobacter que no es comn encontrar cifras
mayores de 103 UFC g1 suelo seco en regiones tropicales, pero se pueden hallar
poblaciones que excedan 104 por gramo de suelo seco en regiones templadas. Esta
densidad de bacterias posiblemente se debe a las condiciones qumicas que son

favorables para el crecimiento de las bacterias ya que el suelo es rico en nutrimentos

(Tabla 2). Los contenidos de materia orgnica, nitrgeno, fsforo y potasio son
abundantes en los dos primeros horizontes y disminuyen en los ms profundos. El pH y
los contenidos de carbonatos aumentaron en el cuarto, quinto y sexto horizontes. Las
condiciones fsicas son propicias para las bacterias en la mayora de los horizontes,
destacando las condiciones de humedad favorables (20 a 39 %), lo que permite un
mejor desplazamiento de oxgeno en el espacio poroso.
Azospirillum y Azotobacter se localizaron tanto en rizsfera de la planta de banano
como en suelo alejado de la sta, pero las mayores densidades de ambas bacterias se
localizaron en la rizsfera (Tabla 3). Esta respuesta se ha reportado en varios trabajos
y lo atribuyen a que la rizsfera es el espacio razsuelo en donde las poblaciones
microbianas son mayores porque existen mejores condiciones nutritivas. Las
condiciones son mejores porque se incrementa la acumulacin de carbono y energa
por el continuo flujo de substratos orgnicos solubles en agua (azcares, aminocidos,
cidos orgnicos, hormonas y vitaminas), e insolubles en agua como la pared celular,
material descompuesto y otros residuos de races y muclagos (Brimecombe et
al. 2001; Manoharachary & Mukerji 2006).
Se localiz en la rizsfera de banano la mayor densidad de Azospirillum con
94x104 UFC g1 r.s (planta 175) (Tabla 5), en tomate se reportan densidades de
104 UFC g1 raz seca (Meunchang et al. 2006), as mismo la presencia
de Azospirillum se ha localizado en rizsferas de plantas de arroz, maz y sorgo (Dos
Santos et al.2005). Azotobacter ha sido reportada en pastos (Dbereiner et al. 1972),
en trigo con 11x104 UFC g1 de suelo rizosfrico (Kumar et al. 2001) y en tomate con
103 UFC g1 r.s (Meunchang et al. 2006). En el presente estudio la mayor densidad
(11x105 UFC g1 r.s) se localizo en la rizsfera de la planta 634 de banano (Tabla 3). El
efecto rizsfera tomando como indicador a la densidad
de Azospirillum y Azotobacter en rizsfera y en suelo, se observ en esta investigacin
debido a la naturaleza fsica y qumica que existe en la raz.
De los sustratos utilizados como acarreadores de Azospirillum para la formulacin de
biofertilizantes, pinzote nicamente con consorcio de Azospirillum (Bio4) favoreci la
densidad de Azospirillum el da 60 despus de la inoculacin (Tabla 5), pero al
relacionar tipo de sustrato con densidad de Azospirillum se localiz que pollinaza
favorece la densidad (Figura 2). Respecto al consorcio de Azotobacter, el mejor
acarreador que favoreci su mayor densidad fue pinzote + suelo (Bio10) (Tabla
6, Figura 2). Se ha reportado el uso de sustratos orgnicos y minerales como
acarreadores de Azospirillum y Azotobacter. Okon & LabanderaGonzlez (1994)
encontraron que el carbn de lea, arcilla, vemiculita y alginatos tienen el potencial de
sostener una alta densidad deAzospirillum, con la ventaja de sobrevivencia despus de
la inoculacin en semillas.
El uso de pollinaza y pinzote como acarreadores de bacterias reguladoras del
crecimiento de plantas, presenta la ventaja de contener reserva de carbn orgnico y
contenidos de nitrgeno, fsforo y potasio en el biofertilizante, lo que le da un valor
agregado al producto. Al respecto, en esta investigacin se encontraron contenidos de
N total en los 15 tratamientos, pero fueron mayores cuando se utiliz sustrato orgnico

(Tablas 5y 6), aunque pollinaza con 5.25% fue 10.5 y 2.03 veces mayor que el
localizado en suelo y en pinzote, respectivamente.
En conclusin, los resultados de esta investigacin sugieren que el uso de pollinaza
como sustrato deAzospirillum es favorable porque mantuvo una poblacin de 104 UFC
g1 suelo seco, con contenido de N total de 4.18%. Sin embargo, para Azotobacter el
mejor sustrato es pinzote con 50 % de suelo debido al incremento de su densidad
(63x104 g1 suelo seco), aunque se localizaron 3.38 veces menores contenidos de N
total respecto al determinado en el sustrato de pollinaza. La formulacin integrada por
pollinaza + consorcio Azospirillum +Azotobacter se sugiere como biofertilizante por los
contenidos altos (5.25 %) de N total y por la capacidad de sostener densidades de
15x104 y 20x104 UFC g1 suelo seco de Azospirillum y Azotobacter, respectivamente.
Los futuros trabajos en esta lnea de investigacin deben conducirse evaluando mayor
cantidad de parmetros qumicos que permitan fortalecer los contenidos qumicos de
reserva de los biofertilizantes.

AGRADECIMIENTOS
Se agradece las facilidades proporcionadas por el propietario y personal tcnico de la
empresa bananera 'El Castao' AGRISNA S. P. R. de R. L., localizada en el municipio de
Crdenas, Tabasco, para realizar el estudio del suelo y de la microbiologa del suelo
dentro de la plantacin de 40 hectreas. El primer autor agradece al Consejo Nacional
de Ciencia y Tecnologa por la beca otorgada para realizar estudios de Maestra en
Ciencias en el Colegio de Postgraduados Campus Tabasco.

LITERATURA CITADA
Abdul BM, Zulkifli HS, Zakaria W, Mahmood M (2005) Highyielding and quality banana
production through plant growthpromoting rhizobacterial inoculation. Fruits 60: 179
185.
[ Links ]
Alexander M (1994) Introduccin a la microbiologa del suelo. Pea CJJ (trad). 2a.
reimp. AGT editor, S.A. Mxico, DF 491 p.
[ Links ]
Annimo (2001) Sntesis de Informacin Geogrfica del Estado de Tabasco. INEGI.
Aguascalientes, Mxico. 89 p.
[ Links ]
Brimecombe JM, de Leij FA, Lynch J (2001) The effect of Root Exudates on Rhizosphere
Microbial Populations. En: Pinton R, Varanini Z, Nannipieri P(eds.) The Rhizosphere
Biochemistry and Organic Substances at the SoilPlant Interface. Marcel Dekker. New
York. pp. 95140.
[ Links ]
Colque O, Iquize E, Ferrufino A (2005) Efecto de la fertilizacin nitrogenada y potsica
en la produccin del banano Musa AAA en fincas comerciales de tres localidades del

Trpico de Cochabamba. La Jota, Chimor, Bolivia. Informaciones Agronmicas 26: 1

7.
[ Links ]
Cottenie A (1980) Los anlisis de suelos y plantas como base para formular
recomendaciones sobre fertilizantes. Boletn de suelos de la FAO. Roma, Italia 70 p.
[ Links ]
Coyne M (2000) Microbiologa del suelo: un enfoque exploratorio. Editorial Paraninfo.
Madrid, Esp. 416 p.
[ Links ]