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2015

IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS Y
PROTEINA
1. INTRODUCCON:

En el presente tema abordaremos aspectos generales sobre estructura y funcin de los


aminocidos y las protenas en el organismo, as como de los medios de laboratorio para
identificar a los mismos.
Las protenas son principios inmediatos orgnicos constituidos por largas cadenas de
aminocidos. Los cuales se unen entre s mediante enlaces peptdicos. La existencia del
enlace peptdico, de aminocidos azufrado, puede ponerse de manifiesto en el laboratorio
mediante una serie de reacciones coloreadas especficas. Que sirven para la
identificacin de las protenas.
2. OBJETIVOS

Objetivo especfico:

Reconocer la presencia de algunos aminocidos en las protenas.

Objetivo generales:

Adquirir informacin sobre algunas propiedades fsicas y qumicas de


aminocidos.
Conocer las propiedades de las protenas.
Someter soluciones de protenas a desnaturalizacin con agentes fsicos y
qumicos.

3. Marco Terico
3.1 Protenas:
Las protenas naturales son polmeros lineales -L-aminocidos. Desempean
una gran cantidad de funciones: estructurales, como el colgeno; transportadoras,
como la hemoglobina o los citocromos; adems de aquellas funciones catalticas
que ejecutan las enzimas y que resultan necesarias en la homeostasis del
metabolismo.
En una protena podemos distinguir varios niveles de organizacin. Una estructura
primaria, que hace referencia a la secuencia de aminocidos en la cadena
polipeptdica y en la que se incluyen todos los enlaces covalentes entre los
diversos residuos: los enlaces peptdicos y los puentes disulfuro.
Una estructura secundaria, que se refiere a las disposiciones regulares en el
espacio de residuos adyacentes a la cadena polipeptdica. Ciertas secuencias de
aminocidos favorecen a las hlices o

las cadenas , as como giros que

conectan a unas estructuras regulares con otras. Algunos elementos con


estructura secundaria forman agregados regulares consecutivos que determinan
un nivel de organizacin superior, que denominamos estructura supersecundaria o
motivos. Algunos de estos se combinan, generalmente, para formar compactas
estructuras globulares que llamamos dominios. Dominios con secuencias de
aminocidos homologas en diferentes protenas tienen casi invariablemente la
misma estructura terciaria. Un dominio se define, entonces, como una parte de
una cadena polipeptdica que puede plegarse independientemente en una
estructura terciaria estable. Los dominios pueden ser tambin unidades de funcin
independientes dentro de las estructura de las protenas.
Un nivel de estructuracin superior de estos es la estructura terciaria, o disposicin
espacial de todos y cada uno de los tomos que componen la molcula. Una
protena con una determinada estructura terciaria puede estar constituida por uno
o varios dominios, que pueden llegar a tener funciones especficas y separadas.

La estructura terciaria constituye el ltimo nivel de organizacin estructural de una


protena monomrica. Sin embargo, existen macromolculas oligomricas,
formadas por la asociacin no covalente de varias cadenas polipeptdicas. Este
nivel de jerarquizacin superior se llama estructura cuaternaria. Representa, por
tanto. La disposicin espacial de las diversas subunidades de una protena
oligomrica.1

3.2 Prueba de Ninhidrina (Hidrato de tricetohidrindeno).


El tomo de nitrgenos del anin proviene del aminocido. El resto del aminocido
se convierte en un aldehdo y gas carbnico. As que, todos los -aminocidos
producen el mismo colorante violeta, y la intensidad de su color es proporcional a
la cantidad de aminocido. La prolina, que tiene un grupo amino secundario,
produce un colorante amarillo. No obstante, el color violeta no es especfico para
aminocidos debido a que el amoniaco y la mayora de los polipeptdos y
protenas desarrollan el color con la ninhidrina.
La reaccin con el nitrito de sodio (NaNO2) puede utilizarse para detectar la
presencia de los grupos amino libres como NH2, en tal caso, se podr detectar si
el aminocido se encuentra libre o est combinado formando pptidos.

1 Arboledas D. Jerarqua Estructural de las Protenas. Espaa: Editorial Club


Universitario.

3.3 Prueba de Biuret

Se basa en la reaccin colorada del reactivo de Biuret. Biuret produce un complejo


de color prpura al reaccionar con una solucin alcalina de sulfato de cobre.
Los pptidos (a partir de los tripptidos) y las protenas reaccionan con el reactivo
de Biuret. Los iones cpricos forman un complejo de coordinacin con los pares
de electrones no compartidos del N, presente en los aminocidos de las protenas.

Complejo de cobre formado en la reaccin de Biuret

El complejo muestra una absorcin mxima 330 y 545 nm. La absorbencia


generalmente se mide a 545 para propsitos cuantitativos. La absorcin es mayor
a 330 nm, pero en esa longitud de onda es probable que haya interferencias.
Sustancias similares que contienen en lugar del grupo carbamino, grupos CS(NH),
tambin responden a la prueba. Esto implica que os compuestos no proteicos que
contienen los grupos necesarios respondern a la prueba. Las protenas disuelven
el hidrxido cprico del reactivo y forman compuestos coloreados violeta o violetarosado que depende de la naturaleza de las protenas.

3.4 Prueba xantoproteica

La reaccin xantoproteica es una prueba de tipo cualitativa que indica la presencia


de protenas.

Esquema de la reaccin xantoproteica


Guarnizo A. & Martnez P. Experimentos de Qumica Orgnica con enfoques en ciencias
de la vida. Colombia: Ediciones Elizcom.

Es una reaccin que reconoce los aminocidos que poseen el grupo bencnico
(tirosina, fenilalanina, triptfano). Las protenas que tienen en su composicin
estos aminocidos tambin darn la reaccin. La positividad se reconoce por la
apararicin de un color amarillo o verde debido a la formacin de nitrocompuestos.
3.5 Prueba de los grupos SH
Es una prueba para identificar aminocidos azufrados y las protenas que los
contienen, se reconocen por la formacin de una coloracin negra o gris. La figura
siguiente muestra dicha reaccin.

Fuente: Prctica N4 de Bioqumica Ambiental

3.6 Prueba de Milln


Los compuestos que contienen el radical hidroxibenceno reaccionan con el
reactivo de Milln formando compuestos rojos. Los nicos aminocidos fenlicos
son la tirosina y sus derivados y solamente ellos dan una reaccin positiva.

Fuente: Prctica N4 de Bioqumica Ambiental


Terry C.(2015). Identificacin de Aminocidos y Protena. Prctica de Bioqumica, 4, 2-3.

Resultados y clculos
Prueba de ninhidrina
La prueba de la ninhidrina nos dio como resultado una muestra violeta poco lo cual
indica la presencia grupos aminos libres.
Prueba de Milln
En el caso del reactivo Milln y la clara de huevo se reconocio una mezcla
resultante rojisa, lo cual indica que en la estructura presenta radicales
hidroxibenceno.
Prueba xantoproteica
En esta prueba se logr comprobar la presencia de grupos bencnicos, pues
luego de agregar los reactivos a la muestra esta tomo un color amarillo.
Reactivo de Biuret
La prueaba de Biuret se realiza para el reconocimiento de uniones peptdicas, de
naturaleza amida, estas uniones se hallarn en la muestra de estudio luego del
proceso para reconocer las uniones puesto que la coloracin azulada violeta.
Prueba para los grupos SH

En esta prueba era necesario comprobar la existencia de amiocidos azufrados,


es decir que contenga el elemento azufre en su estructura lo cual fue factible pues
la muestra presento una coloracin muy oscura, luego de aadir, con posterior
exposicin a una llama, el hidrxido de sodio y el acetato de plomo.

MATERIALES:

PROCEDIMIENTO: