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Tema: Validacin de mtodo analtico de Ciprofloxacina en tabletas,

empleando la tcnica de Espectrofotometra UV-visible.


Objetivos:

A
A
A

Introduccin:
Para el desarrollo qumico-farmacutico de un nuevo medicamento es
imprescindible la utilizacin de un mtodo analtico que permita cuantificar el
producto mayoritario en forma de materia prima o como ingrediente activo de
una formulacin. Para asegurar confiabilidad, los mtodos analticos se
someten a un proceso de validacin. Mediante un proceso de validacin, ya sea
de carcter prospectivo, retrospectivo o de revalidacin, se comprueba si el
mtodo es lo suficientemente confiable y si los resultados previstos se obtienen
dentro de las condiciones prefijadas. La validacin de los mtodos analticos se
fundamenta en la determinacin de diversos parmetros, que se aplican de
acuerdo con la categora a la que pertenezcan.
Basndose en ciertas consideraciones, la eleccin de mtodos debe considerar:
a. Dar preferencia a mtodos cuya calidad y confianza se ha establecido en estudios
colaborativos, o similares en varios laboratorios (ISO / REMCO, 1993)
b. Preferir mtodos documentados o adoptados por organizaciones internacionales
reconocidas.
c. Preferir mtodos de anlisis que se aplican en forma uniforme a varios tipos de
alimentos sobre aquellos que se aplican a alimentos especficos.
Entre los atributos a considerar en la calidad de un mtodo se deben mencionar aquellas
caractersticas que son bsicas: confiabilidad, aplicabilidad, especificidad, exactitud,
precisin, detectabilidad y sensibilidad.

Fundamento Teorico:
La precisin: es el nivel de concordancia entre los resultados obtenidos cuando aplicamos
varias veces el mismo mtodo analtico a la misma muestra. Cunto menor es el grado de
concordancia, menor es la precisin, y esto es indicativo de que el mtodo presenta
errores aleatorios, que hacen que el resultado se desve del valor medio. Por el contrario,
cuanto mayor sea el grado de concordancia entre los resultados, mayor precisin
presentar el mtodo analtico, lo que indica que el mtodo no presenta errores aleatorios,
o que estos errores son aceptables.

Para determinar la precisin debemos conocer la varianza de los resultados. Con ella
podremos calcular el coeficiente de variacin. Por norma general, si ste es menor del 5%
el mtodo se puede considerar preciso.
- Repetibilidad: Da una idea del tipo de variabilidad que se puede esperar cuando el
mtodo es desarrollado por un mismo analista, en un mismo laboratorio con un mismo
instrumento analtico y en un periodo corto de tiempo. Por ejemplo, la variabilidad
esperada entre los resultados cuando la muestra es analizada por duplicado. Se miden
dos Repetibilidad: La instrumental y la del metodo.
o

Repetibilidad del sistema Instrumental: estudia la variabilidad debida nicamente al


instrumento.
Se prepara una solucin estndar a la concentracin nominal. Se analiza de
forma consecutiva de 6 a 10 veces la solucin estndar y se registran los
resultados. El anlisis de estos se realiza, mediante el calculo del RSD y del
intervalo de confianza de los resultados que se obtienen.

Criterios de aceptacin:

o RDS2%.
o Promedio del % Recuperado: 1002.0%
Repetibilidad del Metodo: Se efectua sobre una serie de alcuotas de una muestra
homognea.
El anlisis debe de ser realizado por un mismo analista, en el mismo instrumento,
en un mismo dia y laboratorio. Y se proponen dos alternativas:
1. Un minimo de 6 muestras a la concentracin nominal.
2. Minimo de 3 muestras a tres niveles de concentracin (80, 100 y
120%). Se lee la solucin 3 veces.

. El anlisis de estos se realiza, mediante el calculo del RSD y del % recuperado.


Criterios de aceptacin:
o
o

RDS3%.
Promedio del % Recuperado: 1003.0%

- Reproducibilidad: Se obtienen resultados independientes mediante el mismo mtodo


aplicado a la muestra en diferentes condiciones (diferentes laboratorios, diferentes
instrumentos analticos, diferente analista, periodos largos de tiempo).
- Precisin intermedia: ha sido definida por la ICH como la variabilidad obtenida en un
anlisis realizado en un mismo laboratorio en un periodo de tiempo prolongado y
condiciones diferentes. (Dos analistas, 3 dias consecutivos).
Preparar cada analista 3 soluciones estndar a la concentracin nominal (100%). Cada
analista realiza aplicaciones por triplicado de cada solucin durante 3 dias consecutivos.
Criterios de aceptacin:
o
o

RDS3%.
Promedio del % Recuperado: 1003.0%

La repetibilidad y la reproducibilidad dependen de la concentracin de analito y, en


consecuencia, debieran determinarse para varias concentraciones. Lo ms comn es
hacer 11 rplicas del analito en una disolucin patrn, aunque este nmero de rplicas se
puede variar en funcin de diversos factores.
Linealidad: es la capacidad del metodo para proporcionar resultados que son
directamente proporcionales a la concentracin del analito en la muestra
dentro de un rango de concentracin establecida.
Linealidad del sistema: se preparan con un estndar una curva de
calibracin en un rango de concetraciones del 80, 100 y 120%; en intervalos de
10%, para un total de 5 puntos. Realizando aplicaciones por triplicado de cada
concentracin (n=15).
Se recomienda hacer pesadas individuales para eliminar posibles errores
(Sistematico) que pueda darse si se hace una sola pesada.
Criterios de Aceptacion:
o
o
o
o
o
o

La grafica de correlacion lineal debe ser una lnea recta distinta a cero.
RDS2%.
r0.999
r20.995
ANOVA: F1c>F1tabla.
F2c<F2tabla.

*ANOVA: anlisis de varianza.


Exactitud: La exactitud de un procedimiento analtico es la proximidad entre los
resultados de la prueba obtenidos mediante este procedimiento y el valor verdadero. La
exactitud de un procedimiento analtico debe establecerse en todo su interval.
Procedimientos:

1) Realizar comparacin con un material de referencia (Puede ser un


estndar, placebo o muestra de concentracin conocida).
2) Se comparan resultados obtenidos con el mtodo analtico con otra
tcnica de referencia.
Se recomienda trabajar con un mnimo de 9 denominaciones sobre 3 niveles de
concentracin del analto que cubran el rango especificado. (80, 100 y 120%).
Estos % se utilizan para mtodos analticos de cuantificacin de principio activo
de materia prima y producto terminado.
Este mtodo se expresa como % de p.a recuperado.
Criterios de Aceptacin:
o

Si el valor de tc< al valor de t tabla, se concluye que el mtodo analtico


tiene la exactitud requerida y no hay diferencia estadstica. Caso
contrario se concluye que el mtodo analtico no es exacto y existe un
error sistemtico.
% Recuperado:
o Materia prima: 99.0-101-0%
o Producto terminado: 97.0-103.0%.

Procedimientos:
Preparacin de la solucin estndar de Ciprofloxacina.
Pesar una cantidad
del Estndar
equivalente a
27.5mg de Ciprof.

Transferir lo pesado
a un baln de
100Ml.

Agregar 25mL de
HCL a 0.01N

Mezclar y
aforar.
Solucin Madre
Transferir a un
baln de 100mL,
aforar con HCL.
(0.01N)

Tomar alcuota
de 2mL

Preparacin de la muestra:

Pesar una cantidad de polvo equivalente


a 27.5mg
de
Ciprof.
Llevar a un
mortero
y pulverizar.
fino).de 10 tabletas de Ciprof
Determinar
el peso(Polvo
promedio
Disolver con 25mL de HCL En un baln de 100mL
Aforar con la Solucin MadreTomar una
Transferir
un 2mL
baln de 100mL y aforar con HCL (0.0
alcuotaa de

Determinar la Precisin:
o

Repetibilidad del mtodo:

Emplear solucin
de HCL 0.01N
para preparar
soluciones

Preparar 3 soluciones
de la muestra a 3
niveles. (80, 100,
150%)

Anota absorbancias

Realizar clculos
correspondientes.

Un solo da, un
solo alumno y se
lee 3 veces cada
solucin

Precisin Intermedia:

Dos estudiantes
Leer 3 veces
preparan 3
soluciones de la
muestra a
concentracin
nominal.Realizar clculos.

Anotar
absorbancias

Determinacin de la linealidad:

Preparar 5 soluciones de la concentracin nominal:


Realizar
lectura por triplicado, iniciando con la solucin de menor concentracin.
Anotar
absorbancias.
80, 90, 100, 110, 120%
Graficar resultados.

Determinar si el mtodo
es lineal.