TINCIN DE GRAM

ANDRES ARDILA MARTNEZ 1.065.904.499; INGRID ROJAS BADILLO

1.052.572.865; MARCO SALDAA DURAN 1.065.885.089

RESUMEN
En el siguiente informe presentamos la descripcin de un procedimiento en el cual
se llev a cabo la tincin de Gram con el fin de contrastar las bacterias presentes
en una UFC (unidad formadora de colonia). Para identificar la presencia de
bacterias segn su grupo taxonmico: Gram positivas y Gram negativas.
Palabras claves: Gram, negativas, positivas, tincin, fucsina, colonias.

ABSTRACT
In the following report we present the description of a procedure in which the Gram
staining was carried out in order to compare the bacteria on a CFU (colony forming
unit). To identify the presence of bacteria according to their taxonomic group: Gram
positive and Gram negative.
Key words: Gram, negative, positive, staining, fuchsin, colonies.

1. MARCO TERICO.
2.
3.

El principal impedimento
en la observacin de bacterias
en microscopio ptico es la
falta de contraste entre la
clula en observacin y el
medio que la rodea, la manera
ms simple de facilitar el
contraste es la utilizacin de
colorantes,
revelando
la
presencia de determinados
constituyentes celulares, tales
como
flagelos,
esporas,
cpsulas, paredes celulares,
centros
de
actividad

respiratoria,
etc.
Para
bacterias, el proceso de
fijacin por calor es lo ms
habitual,
aunque
tambin
puede fijarse con sustancias
qumicas como formaldehido,
cidos y alcoholes. Despus
de esto se aade el colorante.
La
fijacin
produce
habitualmente el encogimiento
de las clulas; la tincin, por el
contrario, hace que las clulas
parezcan mayores de lo que
son realmente. La mayora de
los colorantes son compuestos
orgnicos que tienen alguna

afinidad por
celulares.

los

materiales

4. Algunos
colorantes
teirn mejor slo despus de
que la clula haya sido tratada
con otra sustancia qumica,
que no es un colorante por s
mismo. Esta sustancia se
denomina
mordiente;
un
mordiente habitual es el cido
tnico.
El
mordiente
se
combina con un constituyente
celular y lo altera de tal modo
que ahora s podr atacar el
colorante.
5. Una tcnica de coloracin y la
ms conocida es la tincin de
Gram, denominada as por el
bacterilogo dans Christian
Gram, quien desarrollo esta
tcnica en 1844. Sobre la base
de la tincin de gran, las
bacterias se clasifican en dos
grupos: gran positivos y gran
negativos.
6. TINCIN DE GRAM
9. 2
mi
8. rystal violeta
nut
os
13. enjuagar con H2O destilada
16. 1
14.
mi
15. ugol
L
nut
o
20. enjuagar con H2O destilada
21.
22. alcohol
23. 30
A
cetona
seg
un
7.
C

do
27. enjuagar con H2O destilada
30. 1
28.
mi
29. afranina
S
nut
o
34. enjuagar con H2O destilada
35.
36. Las bacterias Gram positiva y
Gram negativas tien de forma
distinta
debido
a
las
diferencias constitutivas en la
estructura de sus paredes
celulares. La pared de la clula
bacteriana sirve para definir su
tamao y su forma al
organismo as
como para
prevenir la lisis osmtica.

37.

40.
41.
42.

38.

43. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL.
44. Identificar la morfologa (coco,
bacillus) y tipo de tincin
(Gram
positiva
y
Gram
negativa) de las colonia
observada.
45.
OBJETIVOS ESPECFICOS.
Conocer el mecanismo
bsico y ventajas de
una tincin.
aprender procesos de
preparacin de un frotis.
Conocer el manejo de
microscopio para las
observaciones
de
bacterias.
Reconocer
la
importancia del objetivo
(100x).
46.

39.

47. MATERIALES Y EQUIPOS

48.
49. Materiales.
Asa redonda
Porta objeto
Pinza
Cinta de enmascarar
Papel arroz
50. Reactivos
Cristal violeta
Lugol
Alcohol cetona

51.

Safranina
Aceite de inmersin

Equipos

Microscopia
Mechero
52.
53. MUESTRA.
02-10-2015
Proporcionada por la
profesora
(en el laboratorio de la
UPC seccional
Aguachica.)
UFC (unidad formadora
de colonia).
54.
55. METODOLOGA.
Adecuacin de rea de
trabajo.
Preparacin
de
materiales y equipos.
Nos
dispusimos
a
limpiar los objetivos del
microscopio, porta y
cubre objetos con pape
arroz para obtener una
mayor nitidez en los
micro
preparados
observados.
Organizamos
los
reactivos (colorantes)
en orden de adicin.
Agregamos una gota de
agua destilada en el
centro de un porta
objeto.
Esterilizamos un aza
redonda.

Abrimos la caja de Petri

con UFC
(unidad
formadora de colonia) y
enfriamos el aza en una
parte sin colonia.
Con
la
colonia
previamente
seleccionada,
arrastramos
una
pequea parte de ella
con el aza.
La
agregamos
al
portaobjetos con la gota
de agua destilada.
No
dispusimos
a
realizar un frotis.
Fijamos la muestra,
pasndola por la llama
del mechero, hasta
secar la gota de agua.
Al micro preparado se
le realizo la tincin de
Gram.

56. TINCIN DE GRAM

59. 2
57.
mi
58. rystal violeta
C
nut
os
63. enjuagar con H2O destilada
66. 1
64.
mi
65. ugol
L
nut
o
70. enjuagar con H2O destilada
73. 30
seg
71.
72. lcohol
un
A
cetona
do
s
77. enjuagar con H2O destilada

80. 1
78.
mi
79. afranina
S
nut
o
84. enjuagar con H2O destilada
85.
Ver anexo 1, 2,3
y4

Luego
secamos
la
muestra, colocndola
inclinada
recibiendo
brisa del ventilador.
Se observ el micro
preparado
con
3
objetivos (4x, 10x, 40x).
Finalmente llegamos al
objetivo (100x) en el
cual se le agrego una
gota de aceite de
inmersin.
Observamos
y
analizamos.
Organizacin de rea
de trabajo.

86.
87. RESULTADOS.
a. Staphylococcus ssp. en
Tincin
de
Gram.
Microscopa
ptica
en
objetivo 100 x. Bacterias de
color
violeta
(Gram
positivas).
88. Ver anexo 5.
b. Bacillu spp en tincin de
Gram. Microscopia ptica
en objetivo 100x. Bacterias
de color rosado (Gram
negativas).
89. Ver anexo 6.
90.

91. ANLISIS DE RESULTADOS.

a. logramos
apreciar
Staphylococcus ssp. Gram
positivos
que
se
encuentran en racimos,
pares y de cadenas cortas
con forma redonda (coco).
Esta bacteria se observa de
color violeta ya que en el
proceso de tincin donde
se le agrego los diferentes
colorantes como cristal
violeta y fucsina , quedaron
teidas; aun cuando se les
retir
el
exceso
de
colorante
con
agua
destilada y alcohol cetona,
tomando
este
color
caracterstico que se le
denomina a las bacterias
que lo presentan Gram
positivas. Estas bacterias
presentan este color ya que
la envoltura celular de las
bacterias
Gram-positivas
cubren
la
membrana
citoplasmtica y una pared
celular compuesta por una
gruesa
capa
de
peptidoglicano, que rodea a
la anterior. La pared celular
se une a la membrana
citoplasmtica
mediante
molculas
de
cido
lipoteicoico. La capa de
peptidoglicano
le
proporciona
una
gran
resistencia
a
estas
bacterias
y
es
la
responsable de retener el

tinte durante la tincin de

Gram al poseer una gran
proporcin
de
este
polmero
complejo
(murena) la cual no la hace
susceptibles a la accin del
solvente orgnico, sino que
este
acta deshidratando los por
os cerrndolos,
lo
que
impide
que
pueda
escaparse
el
complejo
cristal violeta/yodo.
b. observamos bacterias con
forma de bacilo (forma de
barra o vara) y de color
rojas, lo que indica que son
bateras Gram negativas.
Esta coloracin se debe a
las caractersticas que
poseen ellas, debido a que
poseen en su pared celular
una capa delgada de
peptidoglicano (murena)
unida a una membrana
externa formada por
protenas, fosfolpidos y
polisacridos, la cantidad
de colorante cristal violeta y
del lugol que retiene es
mnima, en comparacin a
las bacterias Gram
positivas, que tiene varias
capas de peptidoglicano
unido a la membrana
plasmtica, donde se
encuentra el cido
lipoteicoico, y ms en la
superficie, el cido teicoico
, por lo cual el complejo de

las molculas de cristal

violeta, lugol y cido
teicoico que se forma en la
pared celular de las Gram
positivas, es muy difcil de
remover, lo que no sucede
con las Gram negativas,
porque el cristal violeta y el
lugol no reaccionan con el
cido teicocio, debido a que
las bacterias Gram
negativas en su pared
celular no lo tienen. Por
otra parte, la membrana
externa que poseen las
bacterias Gram negativas
es soluble en compuestos
orgnicos como a la mezcla
de alcohol y acetona, por lo
tanto al momento de
agregar el decolorante
alcohol, el complejo de
cristal violeta y lugol se
perdi. De igual forma, las
bacterias Gram negativas
tomaron su color rojo,
debido a que se le agrego
el colorante de contraste
llamado Fuscina para
colocarlas en manifiesto.
92.
93. CONCLUSIONES.
94.
La tincin de Gram
permite
conocer
la
morfologa celular, el
tamao, la forma y su
clasificacin taxonmica
(Gram positivos o Gram
negativos) de acuerdo
al color que tornan las

bacterias despus de la
tincin, sin embargo no
permite
conocer
la
especie o gnero de la
bacteria
al
cual
pertenece.
Aprendimos como
realizar un frotis, a lo
cual sacaremos
provecho en
laboratorios venideros.
Tanto las bacterias
Gram positivas como
las Bacterias Gram
negativas se presentan
morfolgicamente como
cocos o bacilos, sin
embargo al ejecutar
tincin de Gram en
estas para identificar su
grupo taxonmico, las
Gram positivas se tien
de color violeta mientras
que las Gram negativas
se tien de color
rosado.
Pudimos comprender
que con el objetivo
(100x) observamos
mucho mejor las
estructuras de los micro
preparados, y que es
importante no olvidar el
aceite de inmersin,
puesto que podramos
estropear el
microscopio.
95.
96. Con lo cual
concluimos que fue una
experiencia

satisfactoria, y nos
ayud a convencernos
ms de que el
microscopio en una
pieza fundamental para
el reconocimiento de
microrganismos en un
laboratorio, y por lo cual
para el avance de la
ciencia.
97.
98.
99.
100.
101.
102.
103.
104.
REFERENCIAS
BIBLIOGRFICAS.
https://es.scribd.com/
doc/52811425/Tincione
s-en-MicrobiologiaSeminario.
http://www.ehu.eus/bio
moleculas/hc/sugar35
b.htm#lp.
http://www.ihrdiagnost
ica.com/tecnicas/pdf/A
ceiteDeInmersionv2.p
df.
105.
106.
Anexos.
107.
108.
109.
110.
111.
112.

113.

119.

114.

120.

115.

121.

116.

122.

117.

123.

118.

124.