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Bioreactores o Fermentadores

Dr. Blgo. Carlos E. Villanueva Aguilar


Microbiologa Industrial y Biotecnologa Microbiana

Qu es un biorreactor?
Dispositivo fsico donde se efecta un proceso biolgico (bioreaccin) bajo condiciones ambientales
controladas. En un proceso biolgico se tiene dos sistemas interactuando:
Sistema biolgico
Medio ambiente
Recipiente donde se lleva a cabo reacciones bioqumicas y/o bioprocesos, sea con enzimas,
microorganismos o con clulas vegetales y animales, viables y no viables. Todas estas especies se
conocen como biocatalizadores.
Fermentador: se utilizan clulas.
Reactor enzimtico: se utilizan enzimas.
Las reacciones bioqumicas se aprovechan para la transformacin y produccin de sustancias biolgicas
y qumicas
Los bioprocesos se emplean para la transformacin de materia orgnica con la ayuda de un biocatalizador,
en sntesis qumica y en la conversin de material de desecho a productos tiles (reciclaje) o a efluentes
que no son peligrosos para el ambiente (tratamiento de desechos).
La caracterstica ms importante de los bioprocesos es su elevado potencial sinttico para llevar a cabo
complicadas reacciones qumicas en un solo paso.

Funcin

La funcin principal de un biorreactor es la de proveer un medio controlado para alcanzar el


crecimiento y la formacin de productos ptimos .

El diseo y la operacin del biorreactor son responsables de suministrar, asegurar y mantener el medio
ambiente adecuado.

Su funcionamiento depende bsicamente de:


o La concentracin de biomasa.
o Mantenimiento de condiciones estriles.
o Agitacin efectiva.
o Eliminacin de calor.
o Creacin de las condiciones correctas de corte.

Componentes bsicos de un fermentador


El recipiente
debe ser esterilizable
resistente a la corrosin
construido con materiales que no sean txicos
vidrio de espesor apropiado
acero inoxidable
Entrada/salida de aire o gases
Entrada del medio de cultivo y salida del producto
obtenido
Alimentacin del inculo
Lneas de muestreo
Sistemas de agitacin mecnica

Principales modelos de fermentador


2.1. Fermentadores para cultivos lquidos
2.1.1. Depsitos con agitacin
2.1.2. Torres de fermentacin en cultivo continuo
2.1.3. Fermentadores mezclados mediante burbujeo
2.1.4. Depsitos estticos con o sin control de T
2.2. Fermentadores para procesos en fase slida
2.3. Sistemas de clulas inmovilizadas
2.3.1. Lecho esttico
2.3.2. Lecho fluido
2.3.3. Discos rotativos
La siguiente figura muestra distintas
clases de biorreactores:

Se utilizan tres grupos de biorreactores en la industria.


o
o
o

No agitados sin aireacin 86%.


No agitados con aireacin 11%.
Agitados con aireacin 13%

Biorreactor de tanque con agitacin mecnica.

Es el ms utilizado en la industria por tener bajos costos de operacin.


Son de acero inoxidable >20 l.
Poseen rodetes (agitadores).
Se utilizan solo al 70-80% de su capacidad para dar espacio a espuma.
La relacin altura y dimetro es variable aunque la ms barata es de 1.
El enfriamiento se da por medio de serpentines internos.
Se utilizan en reacciones con enzimas libres e inmovilizadas as como para cultivo de clulas en
suspensin e inmovilizadas. Imagen

Biorreactor de columna de burbujas.

La agitacin, aireacin y mezcla se logran por medio de inyeccin de gas con un difusor.
Son cilndricos con alturas dobles al dimetro.
No presentan estructuras internas.
Son baratos, no tienen partes mviles y tiene un adecuado rendimiento en la transferencia de materia y
transmisin de calor.
Se utilizan para la produccin de levadura, cerveza, vinagre y tratamiento de aguas residuales. Imagen

Biorreactor de elevacin con aire.

Su rasgo caracterstico es que las corrientes de flujo (ascendente y descendente) lquido estn separadas.
El gas se inyecta por el riser y baja a travs del down comer por diferencia de densidad.
Hay reactores de bucle interno y bucle externo (es el ms efectivo).
Se utilizan en produccin de protena unicelular a partir de metanol y gasoil, cultivo de clulas, tratamiento
de aguas.
Relacin altura-dimetro 10:1 Imagen

Biorreactor de lecho empaquetado.


Se utilizan con biocatalizadores inmovilizados o en forma de partculas.
Son tubos verticales rellenos empaquetados con partculas de catalizador.
El medio se alimenta por la parte superior o inferior y se recircula.
Tienen pantallas a la salida para evitar la salida de partculas.
La agitacin y aereamiento se hace en un recipiente separado.
Se utilizan con clulas y enzimas inmovilizadas para producir el espartato y fumarato. Imagen

Biorreactores de lechos fluidizados.

Los catalizadores empaquetados se mantienen en suspensin por el movimiento ascendente del lquido
impulsado por gas.
El medio es recirculado.
Se utiliza en el tratamiento de residuos con arena o material similar que soporta las mezclas de
poblaciones microbianas. Tambin pueden utilizarse con organismos floculantes en la fabricacin de
cerveza y vinagre.
Es una modificacin del biorreactor del lecho empaquetado. Imagen

Biorreactores con lecho de goteo.

El lquido se roca como spray sobre la parte superior del empaquetamiento y las gotas descienden a
travs del lecho en forma de pequeas corrientes.
El aire o gas se introduce por la base y sube con facilidad ya que la fase lquida no es contina a travs de
la columna.
Se utilizan para tratamiento aerobio de aguas residuales.
Es una modificacin del biorreactor de lecho empaquetado. Imagen

Bibliografa

Doran, P. (1998) Bioprocess Engineering Principles. Academic Press Limited. London.

Scragg, A. (ed). (1996). Biotecnologa para ingenieros. Sistemas biolgicos en procesos tecnolgicos. Editorial
Limusa S.A. De C.V. Mxico.

Agitacin y aireacin
Aireacin: el principal propsito es proveer oxgeno suficiente a los microorganismos, sumergidos en el
medio de cultivo, para sus requerimientos metablicos.
Agitacin: el principal propsito es asegurar la suspensin homognea de los microorganismos en el
medio que contiene los nutrientes.

Opciones de acoplamiento entre el eje del agitador y el motor


Geometra de los agitadores
Posicin de los agitadores en el recipiente
Presencia y posicin de los deflectores
Geometra del difusor de aire u oxgeno

Control de temperatura
El control de la temperatura durante la fermentacin se produce por:

Camisas de lquido refrigerante (o calefactor)


Intercambiadores de placas

Esterilizacin
5.1. Esterilizacin del fermentador
5.2. Esterilizacin del aire
5.3. Adicin del inculo en condiciones estriles
5.4. Muestreo estril

Requerimientos de los biorreactores


No existe un biorreactor universal.
Las necesidades generales ms sentidas para un biorreactor son las siguientes:

Condiciones monospticas (presencia exclusiva del microorganismo de inters)

Mezcla ptima, con un esfuerzo cortante bajo y uniforme

Adecuado transporte de masa (de oxgeno)

Condiciones de flujo claramente definidas

Alimentacin del sustrato evitando el defecto o el exceso de nutrimentos

Transferencia de calor moderada

Conveniente suspensin de slidos

Satisfaccin de las exigencias de diseo:

Volumen apropiado de reaccin

Susceptible de ser esterilizado


Construccin simple
Tcnicas adecuadas de medicin, control y regulacin
Cambio de escala
Versatilidad de uso
Operacin de estado estacionario estable segn la necesidad
Compatibilidad con las caractersticas de las corrientes de entrada y de salida
Mecanismos antiespumantes

Eleccin del reactor


La eleccin preliminar de un reactor depende de varios factores, entre los cuales, se destacan:

Tipo de microorganismos
Estado metablico de esos microorganismos

Medio de cultivo

Modo de operacin

Sustratos empleados

Esterilidad y hermeticidad

Valor de los productos deseados

Tipo y propiedades del biocatalizador


Las clulas empleadas en biorreactores pueden ser bacterias, levaduras, hongos, y clulas vegetales o
animales.
Cada una de ellas difiere en las demandas que hacen al ambiente, sus necesidades nutricionales y los
productos que forman.

Estado metablico
En procesos aerobios, se debe proporcionar al medio un adecuado y efectivo suministro de oxgeno por
dispersin y subsecuente mezcla, en todas las zonas del reactor.
Los requerimientos tpicos de oxgeno para algunos procesos aerobios se muestran en la siguiente tabla :
Tratamiento
aerbico de aguas
de desecho

Fermentacin aerbica

Cultivo de
clulas de
mamferos

0,05 0,5

20 150

1 10

Concentracin del biocatalizador,


g/l

25

5 100

10-5 1

Velocidad especfica de consumo


de oxgeno, mmol/(g h)

0,5

28

0,001 0,1

0,02 0,2

0,5 2,5 (Escala


industrial)

< 0,01

Parmetro
Concentracin del sustrato, g/l

Potencia para aireacin y


mezcla, kW/m3

0,5 - 15 (En plantas


piloto)

En los procesos anaerobios no se requiere dispersin gaseosa puesto que estos procesos son lentos y el
mezclado es menos crtico. Se debe controlar nicamente el pH y la temperatura.

Propiedades fisicoqumicas del medio


La eleccin, diseo y modo de operacin de los biorreactores estn especialmente influidos por las
propiedades fisicoqumicas descritas a continuacin.

Estado de agregacin del sustrato


Los sustratos gaseosos deben dispersarse en el medio lo ms homogneamente posible para garantizar
una adecuada velocidad de transferencia y absorcin
Los sustratos slidos deben suspenderse adecuadamente

Complejidad de los sustratos


La esterilizacin por temperatura de medios de cultivo complejos (jarabe de maz, extracto de levadura,
melazas, harina de man o hidrolizado de almidn), es posible nicamente hasta un cierto grado de
esterilidad.

El medio puede verse afectado severamente por las condiciones de temperatura y tiempo.

Reologa del medio


La viscosidad del medio determina:

la velocidad de transferencia de oxgeno,


el tiempo de mezclado,
la energa de entrada,
los patrones de flujo,
la formacin de burbujas,
el volumen de las burbujas y
la coalescencia de las mismas.

Los medios altamente viscosos estn asociados con elevadas concentraciones de sustrato, suspensiones,
productos de alto peso molecular disueltos en el medio (goma xantana, celulosa, almidones), presencia de
micelio (Penicillium chrysogenum) y con medios heterogneos que contienen componentes conformadores
de estructuras (coloides)

Formacin de espuma
La formacin de espuma puede influir decisivamente en la eleccin del reactor.
La espuma puede evitarse:

modificando la composicin del medio y controlando la lisis, el envejecimiento y la destruccin de


las clulas
con el uso de agentes antiespumantes, disminuyendo el pH, empleando rompedores mecnicos de
espuma, inyectando vapor o usando reactores de tipo especial, como por ejemplo: reactores
sumergidos de propulsin.

La formacin de espuma reduce el volumen efectivo de reaccin y produce sobreflujo dentro de los filtros
de gas de desecho; con la consecuente prdida del producto y la destruccin de las clulas dbiles.

Modos de operacin
El biorreactor puede operarse en una de las siguientes formas:

Operacin discontinua o por lotes (batch),


Operacin continua, o

Varios tipos de operaciones semicontinuas.

En la siguiente tabla, se resumen los algunas de las distintas formas de operacin de un reactor biolgico:

Modo de operacin

Comentarios

Curva: concentracin-tiempo

Balance de masa en un
reactor ideal

Por lotes

Inoculacin y
carga de todos los
nutrimentos y
sustratos al mismo
tiempo y hasta
consumo total

Por lotes con


alimentacin
intermitente

Varios esquemas
volumen tiempo
y velocidades de
alimentacin

Por lotes extendida

La concentracin
del sustrato (cS),
permanece
constante

Por lotes repetida


Despus que ha ocurrido
la reaccin en un lote,
una pequea cantidad
del fermento se saca del
reactor para que sirva
como inculo para el
siguiente lote del
proceso
Cultivo continuo
(quimiostato)

Antes de estado estacionario:


Con flujos de
entrada y de
salida del medio
de reaccin. El
reactor se
denomina
quimiostato, en
aquellos casos en
los cuales la
densidad celular y
la concentracin
permanecen
constantes

Antes de estado
estacionario:

En estado estacionario:

En estado estacionario:

Cascada de reactores continuos de tanque


agitado
Con o sin alimentaciones intermedias y
recirculacin del medio de cultivo o del
biocatalizador

Reactor continuo de tanque agitado con


recirculacin de biocatalizador

Combinacin de
reactores
(Reactor
continuo de
tanque agitado y
reactor de flujo
en pistn)

El reactor continuo de
tanque agitado sirve como
un reactor de inoculacin,
ya que la operacin en
estado estacionario de un
reactor de flujo en pistn
no es posible debido al
desplazamiento del
biocatalizador

Sustratos

1)

2)

La eleccin del biorreactor se ve influida:

por el grado de reduccin de un sustrato, esto es, por el contenido de


oxgeno,
por las velocidades de consumo de sustrato, especialmente absorcin de
oxgeno,
por la formacin de producto y el incremento de su concentracin y
por la inhibicin o activacin del biocatalizador.

Esterilidad y hermeticidad
Las siguientes son las principales exigencias para una operacin
estril:

Forma geomtrica simple


Mnimo nmero de bridas y soldaduras
Eliminacin de puntos muertos
Nmero adecuado y conveniente de entradas, salidas y vlvulas
esterilizables
Zonas del reactor que puedan ser esterilizadas por separado
Elevado coeficiente de seguridad en caso de sobrepresiones
Nmero adecuado de boquillas de medicin y muestreo
Mnima superficie rugosa
Agitador con prensaestopa esterilizable

Aspectos econmicos y de seguridad


Si se producen pequeas cantidades de un producto especial, el uso
de un reactor de tanque agitado es ventajoso; para productos
especiales de alta calidad, se puede seleccionar un reactor con diseo
especial.
El escalamiento de un proceso es ms fcil, cuando se utilizan
reactores de tanque agitado, columnas de burbujeo o reactores con
circulacin inducida.
Deben atenderse especialmente las normas de operacin y de
seguridad para plantas industriales biotecnolgicas; cada pas o grupo
econmico dispone de sus propias normas en lo referente al manejo de
microorganismos patgenos, sustancias txicas y carcinognicas, las
cuales deben observarse sin reserva.
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Fenmenos de transporte en un fermentador


Transferencia de masa del oxgeno (1)

La transferencia de oxgeno a la clula durante la aireacin del fermentador implica la transferencia de


oxgeno desde las burbujas de aire a la solucin, desde la solucin a la clula y la absorcin del oxgeno
por parte de la clula.

La transferencia de oxgeno a partir de las burbujas de aire a la solucin es la etapa limitante del proceso,
debido a la baja solubilidad del oxgeno en fase lquida.
La transferencia de masa del oxgeno NA puede ser descrita por la siguiente ecuacin:
NA

dCL/ dt

KL a ( C* - CL )

CL es la concentracin de oxgeno disuelto en el seno del lquido (mmol dm-3).


t es el tiempo (h)
dCL/ dt es el cambio de concentracin de oxgeno con el tiempo (mmol dm-3 h-1) o la velocidad
de transferencia de oxgeno
1
KL es el coeficiente de transferencia de masa (cm h- )
a es la superficie interfacial gas-lquido por volumen de lquido (cm2 cm-3)
C* es la concentracin de oxgeno disuelto a saturacin (mmol dm-3). A 1 atmsfera y 30C la
solubilidad del O2 en agua es de 1,16 mmol dm-3
KL a , coeficiente de transferencia de masa de oxgeno, es la medida de la capacidad de aireacin
del fermentador en las condiciones de la prueba

Transferencia de masa del oxgeno (2)


Factores que influyen en KL a , coeficiente de transferencia de masa de oxgeno:

Velocidad de flujo de aire


Grado de agitacin
Viscosidad del cultivo
La formacin de espuma y el uso de antiespumantes

Control del proceso de la fermentacin


El control de un parmetro en particular se lleva a cabo mediante un sensor que mide una propiedad y un
controlador que compara esta medida con un valor fijo predeterminado y que activa el equipo hasta ajustar
ambos valores.
Tipos de controladores:

controladores feed-back

tipo on/off
tipo pulso-pausa on/off
tipo modulado

controladores feed-forward
controladores adaptables

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