Alumno: Alfredo Sosa Hernndez

Prctica No. 4 Difusin de sustancias por una membrana.

Introduccin:
Membrana celular: una clula eucaritica se encuentra rodeada por una membrana
celular (membrana plasmtica) y el lmite entre ella y su entorno es esa membrana. La
membrana tiene un espesor de ms o menos 10 nm y est compuesta por una capa
doble (bicapa) de fosfolpidos y por protenas, las cuales con frecuencia poseen
cadenas de oligosacridos. En general, las membranas pueden ser: permeables,
impermeables y semipermeables. Las membranas permeables permiten el paso del
soluto y del disolvente, las impermeables impiden el paso de ambos y las
semipermeables permiten pasar el disolvente pero impiden el paso de determinados
solutos.
Transporte de sustancias a travs de la membrana plasmtica
Difusin: Es el fenmeno por el cual las partculas de un soluto se distribuyen
uniformemente en un disolvente de tal forma que en cualquier punto de la solucin se
alcanza la misma concentracin.
Transporte Pasivo: Proceso de difusin de sustancias a travs de la membrana; se
produce siempre a favor del gradiente. Este transporte puede darse por:
I) Transporte pasivo simple (difusin simple). Ciertas sustancias como las
pequeas molculas lipdicas (hormonas esteroideas, anestsicos, frmacos
liposolubles) y sustancias apolares (sin carga elctrica) como el O2 y N2 pueden
atravesar libremente la membrana por difusin a favor del gradiente de concentracin.
Este tipo de transporte no requiere un gasto de energa. Algunas molculas polares de
muy pequeo tamao, tales como H2O, CO2, etanol y glicerina tambin atraviesan la
membrana por difusin simple
II) Transporte pasivo facilitado (difusin facilitada). Las molculas hidrfilas
(agua, iones, glcidos, aminocidos...) no pueden atravesar la doble capa lipdica por
difusin a favor del gradiente de concentracin. Determinadas protenas
transportadoras de la membrana actan como "puertas" para que estas sustancias
puedan salvar el obstculo que supone la doble capa lipdica. Este tipo de transporte
tampoco requiere un consumo de energa pues se realiza a favor del gradiente de
concentracin.
Se realiza mediante dos tipos de protenas: canales inicos y carriers.
Absorbancia: En espectrofotometra, la absorbancia es definida como: es la
intensidad de la luz con una longitud de onda especfica y que es pasada por una
muestra es la intensidad de la luz antes de que entre a la muestra.
LEY DEBOUGUER-LAMBERT-BEER: La ley de Beer afirma que la totalidad de luz que
emana de una muestra puede disminuir debido a tres fenmenos de la fsica, que
seran los siguientes:
1. El nmero de materiales de absorcin en su trayectoria, lo cual se denomina
concentracin
2. Las distancias que la luz debe atravesar a travs de las muestra. Denominamos a
este fenmeno, distancia del trayecto ptico
3. Las probabilidades que hay de que el fotn de esa amplitud particular de onda
pueda absorberse por el material. Esto es la absorbencia o tambin coeficiente de
extincin.
La relacin anterior puede ser expresada de la siguiente manera:
A=- cd
Donde,
A = Absorbancia
= Coeficiente molar de extincin d = Recorrido (en cm) c =
Concentracin molar
Objetivo:

Conocer los mecanismos de paso de una sustancia a travs de una membrana

como es el fenmeno de difusin.

Desarrollo:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Con una aguja hacer un orificio pequeo en la zona apical del huevo.
Con una jeringa extraiga el contenido del huevo.
Lavar con agua destilada.
Con cuidado retirar el cascaron de la zona basal del huevo.
Colocar las diferentes soluciones de azul de metileno en los huevos.
Agregar 300 ml de agua destilado a un vaso.
Colocar el huevo en la parte de arriba del vaso de manera que la membrana del
huevo tenga contacto con el agua y quede en medio del vaso el huevo.
8. Tomar alcuotas de 2 ml de la solucin del vaso a los minutos 5, 10, 15, 20, 25,
30 y 35.
9. Colocar una cantidad en la celda y leer en el espectrofotmetro a 660 nm.
10. Anotar los resultados.
Resultados:
Tiempo (minutos)

Azul de metileno
0.01%
0.073
0.076
0.089
0.071
0.074
0.073
0.072

5
10
15
20
25
30
35

Azul de metileno
0.1%
0.582
0.603
0.608
0.617
0.701
0.725
0.730

Azul de metileno
1%
0.131
0.184
0.350
0.403
0.430
0.529
0.960

Absorbancia vs Tiempo
1.2
1
0.8

Azul de metileno
0.01%

Absorbancia 0.6
0.4

Azul de metileno
0.1%
Azul de metileno 1%

0.2
0
0

10

20

30

40

Tiempo (minutos)
Graficar la
absorbancia de azul de metileno contra el tiempo.

Discusin de resultados:
Tericamente debimos obtener en la grfica 3 lneas rectas que deberan tener una
pendiente que las dirigiera hacia el eje de la absorbancia y estas estaran ordenadas de
acuerdo a la concentracin de azul de metileno teniendo ms cerca del eje el azul de
metileno al 1% debido a que es el ms concentrado, despus el azul de metileno al
0.1% y al final el que est al 0.01%. El valor de la absorbancia va a cambiar porque
cada vez la solucin absorbe ms luz debido a que est ms concentrada, por eso los
valores debern aumentar conforme pasa el tiempo.
Nuestros resultados de absorbancia no fueron los adecuados por los cuales en la
grfica no pudimos hacer notar de manera adecuada la forma en que fueron pasando
los diversos solutos a travs de la membrana de los huevos, estos errores de
absorbancia se pudieron deber a diversos factores como lo son los tiempos en que
tomamos cada muestra, la cantidad tomada a la hora de pipetear, a que lemos
nuestra muestras despus de los 35 minutos, el dimetro de la membrana de los
huevos tuvo variacin debido a que no todas eran del mismo tamao.
Conclusin: Aprendimos una tcnica que nos permite observar el proceso de difusin
de sustancias a travs de una membrana y conocer de qu manera influyen las
concentraciones del soluto.
Cuestionario:
1. Qu es la difusin simple? Es el paso de soluto a travs de una membrana del
sitio de mayor concentracin hacia el sitio de menor concentracin. O tambin
como el paso de soluto del sitio de mayor energa cintica hacia el sitio de
menor energa cintica hasta alcanzar el equilibrio termodinmico.
2. Qu es la difusin facilitada? Es el paso de molculas o soluto a travs de la
membrana generalmente a favor de su gradiente de concentracin para lo cual
se requieren protenas acarreadoras o transportadoras. Este mecanismo no
requiere energa metablica (ATP).
3. Cules son los parmetros de la ley de Fick? La rapidez de difusin por unidad de rea
de seccin transversal en una direccin determinada es proporcional al cambio de la
concentracin del soluto en esa direccin. La ecuacin para esta ley es:
m
C
DA
t
x

m
t

Donde
es la masa del soluto que difunde a lo largo de esa direccin por unidad de tiempo,
A es el rea de la seccin transversal, C es la concentracin del soluto (que se supone
C
x

constante sobre cualquier seccin transversal del tubo), D es el coeficiente de difusin, y

se llama gradiente de concentracin. Valores tpicos de D para la difusin en agua de molculas

importantes en biologa van desde 1.10- 11 a 100 x 10 - 11 m2 /s, para un rango de pesos
moleculares de cerca de 104.
Puesto que todos los organismos vivos se componen de una o ms clulas rodeadas por
membranas, la difusin de sustancias a travs de membranas biolgicas es cuestin de suma
importancia. Por diversas razones no es posible caracterizar las membranas biolgicas por un
coeficiente de difusin D, pero es posible combinar el espesor desconocido x de la membrana
con D en un coeficiente de permeabilidad P, definido en trminos de rapidez de transferencia de
m
t
P
A( Ci C0 )

masa, utilizando la ecuacin:

Donde A es el rea, C i, es la concentracin de la sustancia que difunde en el interior de la clula
y C0 es la concentracin en el exterior. Para muchos tipos de clulas, se ha determinado el
coeficiente de permeabilidad que nos da informacin muy til en los estudios de la membrana
celular.
4. Describe las protenas canal acopladas a protenas G. Los receptores que son acoplados
a protenas G (GPCR) son el grupo ms grande de receptores que tenemos. Este tipo de
receptores, al recibir una seal estimulante mediante su agonista, se une a una protena
G. Esta activa otras protenas efectoras que generan unos segundos mensajeros (por
ejemplo AMPc, Ca++) que a su vez transmiten la seal por la clula. La transduccin de
una seal mediante los GPCRs es ms lenta que la reaccin de los receptores
ionotrpicos por ejemplo, pero el concepto del segundo mensajero permite una
intensificacin de la seal. Las protenas G son unas protenas heterotrimricas, quiere
decir que se constituyen de tres subunidades diferentes alfa, beta y gamma. Es su
estado inactivo, la subunidad alfa contiene un grupo de guanosina difosfato ( GDP ).
Estn ancladas en la membrana celular y existen varios tipos diferentes de esta
protena. Un receptor determinado interacta con una protena G determinada en la
mayora de los casos. Esta familia de receptores reconoce una gran variedad de
ligandos. Pueden ser neurotransmisores, hormonas, feromonas, odorivectores, pptidos
y protenas, adems de muchos frmacos sintticos.
5. Describe las aplicaciones de la difusin simple. El proceso de difusin simple es
de vital importancia para el transporte de molculas pequeas a travs de las
membranas celulares. Es el nico mecanismo por el cual el oxgeno ingresa a
las clulas que lo utilizan como aceptor final de electrones en la cadena
respiratoria y uno de los principales mecanismos de regulacin osmtica en las
clulas.