Manual QIR

VOLUMEN IV: MANUAL DE

BIOLOGA MOLECULAR Y
TCNICAS INMUNOLGICAS
Autor: Dr. Toms E. Verdura Gonzlez
Editora: Dra. Iliana Perdomo Lpez

Manual QIR. VOLUMEN IV: MANUAL DE BIOLOGA

MOLECULAR Y TCNICAS INMUNOLGICAS
Autor: Dr. Toms E. Verdura Gonzlez

Iliana Perdomo Lpez (editora).

Depsito legal: DLC 614-2012

Reservado todos los derechos. Est prohibido, bajo las sanciones penales y el resarcimiento civil
previsto en las leyes, reproducir, registrar o transmitir esta publicacin, ntegra o parcialmente por
cualquier sistema de recuperacin y por cualquier medio, sea mecnico, electrnico, magntico, por
fotocopia o por cualquier otro, sin la autorizacin previa por escrito de la editora.

NDICE

UNIDAD I: BIOLOGA MOLECULAR

1.- COMPONENTES DE LOS CIDOS NUCLEICOS

2.- ESTRUCTURA DE LOS CIDOS NUCLEICOS

13

2.1- ESTRUCTURA PRIMARIA

14

2.2- PROPIEDADES FISICOQUMICAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS

14

3.- ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL ADN

17

3.1- REGLAS DE CHARGAFF

17

3.2.- MODELO DE WATSON Y CRICK: FORMA B DEL ADN

17

3.3.- VARIACIONES EN LA ESTRUCTURA DEL ADN

20

3.4.- PROTENAS DE UNIN AL ADN

26

4.- ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERIOR DEL ADN. ESTRUCTURAS DE LOS ARNs

31

4.1.- SUPERENROLLAMIENTO DEL ADN. ESTRUCTURA TERCIARIA

31

4.2.- ESTRUCTURA DE LOS ARNs

34

4.3.- LOS RIBOSOMAS

40

5.- CONDENSACIN DEL ADN Y CROMOSOMAS

43

5.1.- COMPOSICIN QUMICA DE LA CROMATINA

43

5.2.- NIVELES DE CONDENSACIN DEL ADN NUCLEAR EUCARITICO

45

5.3.- EL CROMOSOMA METAFSICO

48

6.- ORGANIZACIN DEL GENOMA DE EUCARIOTAS

53

6.1.- CARACTERSTICAS GENERALES DEL GENOMA. DIFERENCIAS ENTRE

PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

53

6.2.- COMPLEJIDAD DEL GENOMA EUCARITICO

54

6.3.- COMPLEJIDAD DEL GENOMA HUMANO

55

6.4.- ADN DE COPIA NICA, SIMPLE O NO REPETITIVO

55

6.5.- ADN REPETITIVO

56

7.- LA REPLICACIN DEL ADN

61

7.1.- CARACTERSTICAS

61

7.2.- ENZIMOLOGA DE LA REPLICACIN

64

7.3.- ETAPAS DE LA REPLICACIN

68

7.4.- REPLICACIN MITOCONDRIAL

75

7.5.- REPLICACIN POR CRCULOS RODANTES

77

8.- LA TRANSCRIPCIN

79

8.1.- CONCEPTO DE GEN

79

8.2.- ENZIMOLOGA DE LA TRANSCRIPCIN

81

8.3.- DIFERENCIAS EN LA TRANSCRIPCIN DE EUCARIOTAS

CON RESPECTO A LA DE PROCARIOTAS

82

8.4.- ETAPAS DE LA TRANSCRIPCIN

85

8.5.- TRANSCRPCIN DEL GENOMA MITOCONDRIAL

91

8.6.- INHIBIDORES DE LA TRANSCRIPCIN

91

9.- REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA EN EUCARIOTAS: CONTROL

PRETRANSCRIPCIONAL Y TRANSCRIPCIONAL

93

9.1.- CONTROL PRETRANSCRIPCIONAL

93

9.2.- CONTROL TRANSCRIPCIONAL

96

10.- CONTROL POSTRANSCRIPCIONAL O PROCESAMIENTO DEL ARN

105

10.1.- PROCESAMIENTO DEL ARN MENSAJERO

106

10.2.- PROCESAMIENTO DE LOS ARNs RIBOSMICOS Y TRANSFERENTES

113

10.3.- MADURACIN DEL ARN MITOCONDRIAL

113

10.4.- REGULACIN POSTRANSCRIPCIONAL Y PRETRADUCCIONAL

114

11.- EL CDIGO GENTICO

115

11.1.- CARACTERSTICAS DEL CDIGO GENTICO

115

11.2.- DESCIFRAMIENTO DEL CDIGO GENTICO

117

12.- TRADUCCIN O SNTESIS DE PROTENAS

119

12.1.- FASE PREVIA: ACTIVACIN DE LOS AMINOCIDOS

120

12.2.- INICIACIN

121

12.3.- ELONGACIN

123

12.4.- TERMINACIN

126

12.5.- ENRGETICA

127

12.6.- INHIBIDORES DE LA TRADUCCIN

127

12.7.- REGULACIN TRADUCCIONAL

127

13.- MODIFICACIONES POSTRADUCCIONALES

129

13.1.- TRFICO O DESTINO DE LAS PROTENAS

129

13.2.- MADURACIN DEL POLIPPTIDO NACIENTE

131

13.3.- DEGRADACIN DE LAS PROTENAS

137

14.- MUTACIN

141

14.1.- MUTACIONES GNICAS

141

14.2.- MECANISMOS DE ORIGEN DE LAS MUTACIONES GNICAS

142

15.- REPARACIN DEL ADN

147

15.1.- SISTEMAS PREVENTIVOS

147

15.2.- REVERSIN DIRECTA DE LA LESIN

147

15.3.- REPARACIN POR ESCISIN

148

15.4.- REPARACIN POSREPLICACIN

149

15.5.- REPARACIN GO

151

16.- MTODOS DE HIBRIDACIN

153

16.1.- HIBRIDACIN EN FASE LQUIDA

154

16.2.- HIBRIDACIN EN SOPORTE SLIDO

154

16.3.- HIBRIDACIN IN SITU

156

16.4.- MICROARRAY O MICROCHIP DE ADN

158

16.5.- TRANSFERENCIA WESTERN

159

17.- CLONACIN ACELULAR: REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

161

17.1.- OBJETIVO Y APLICACIONES DE LA PCR

161

17.2.- REQUERIMIENTOS

162

17.3.- ETAPAS DEL PROCESO

162

17.4.- CARACTERSTICAS DEL PROCESO

164

17.5.- VARIANTES DEL MTODO

164

18.- TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE

167

18.1.- NUCLEASAS

167

18.2.- ENZIMAS DE RESTRICCIN

167

18.3.- CLONACIN CELULAR DE MOLCULAS DE ADN

170

18.4.- GENOTECAS

179

19.- SECUENCIACIN
19.1.- MTODO QUMICO DE MAXAM Y GILBERT

BIBLIOGRAFA

181
181

187

UNIDAD II: TCNICAS INMUNOLGICAS

20.- TCNICAS INMUNOLGICAS

189

UNIDAD I

BIOLOGA MOLECULAR

InspiracleQIR/2012

Biologa Molecular

Fuente: Figura apartado 2.31 (pag 12) del libro Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera Gentica.,
Barcelona, 1 ed., 2008.

Las bases nitrogenadas poseen las siguientes propiedades:

a) Hidrofobicidad. La naturaleza aromtica de los anillos hace que las bases tengan un
marcado carcter apolar, sean hidrofbicas y poco solubles en agua a pH celular. A pH
cido o alcalino adquieren carga y se hacen ms solubles en agua.
b) Existencia de dipolos. Salvo la adenina, todas las bases poseen tomos de nitrgeno y
oxgeno, lo que determina que se formen entre ellas enlaces polares como los puentes de
hidrgeno.
c) Disposicin coplanar de los enlaces de cada anillo.
d) Tautomera. Consiste en el desplazamiento de un H desde un tomo de N o de O nuclear
hacia otro extranuclear y viceversa. Hay dos tipos de tautomeras:
d.1. Tautomera ceto-enol. El grupo ceto forma parte de un enlace amida cclica o lactama.
Al migrar el tomo de H desde el N nuclear al O del grupo ceto, se convierte en el tautmero
lactima (enol). Esta tautomera afecta a T, G, C y U.

Biologa Molecular

InspiracleQIR/2012

d.2. Tautomera imina-amina. Aqu el grupo exocclico es una imina, que al recibir el H
desde el N nuclear se convierte en un grupo amina primaria. Afecta a A, G y C.
En condiciones fisiolgicas normales, los equilibrios de tautomerizacin estn
desplazados hacia las formas ceto y amino, que son ms estables. Por lo tanto, en las
bases libres, estas formas son unas 10000 veces ms abundantes que las enol e imina.

Fuente: Figura (pag 15) del libro Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera Gentica., Barcelona, 1 ed.,
2008.

e) Carcter bsico. Son bases dbiles porque con valores de pka entre 9 y 10 pueden captar
protones.

Biologa Molecular

2.

InspiracleQIR/2012

ESTRUCTURA PRIMARIA DE LOS

CIDOS

NUCLEICOS.

(2011) 184; (2010) 167.

Las funciones de los dos tipos de cidos nucleicos vienen determinadas por su
localizacin subcelular y su conformacin tridimensional.
Diferencias entre el ADN y el ARN
ADN
Funcin

ARN

Depositario y transmisor de Interviene en la transmisin

la

informacin

gentica, de la informacin desde el

organizada en genes que ADN hasta los productos

Composicin

Localizacin

codifican protenas o ARNs.

gnicos.

Azcar: 2-desoxirribosa.

Azcar: Ribosa.

Bases: A, T, G, C.

Bases: A, U, G, C.

Eucariotas:

en

el

ncleo Eucariotas:

en

el

como cromosomas, matriz temporalmente,

mitocondrial y estroma de matriz
cloroplastos.
Procariotas:

ncleo
citosol,

mitocondrial

estroma.
en

la

zona Procariotas: citosol.

nucleoide del citosol, una Virus: en algunos en la

molcula de ADN circular cpside.
cromosoma

varios

plsmidos.
Virus: en algunos en la
cpside.

En los cidos nucleicos se pueden considerar varios niveles estructurales, al igual

que en las protenas:
- Estructura primaria: es la unin de los nucletidos en un polmero lineal. El orden de las
bases define la secuencia.
- Estructura secundaria: corresponde a la conformacin local, a la disposicin relativa de los
nucletidos prximos. Est definida por la asociacin de dos cadenas polinucleotdicas a
travs de las bases nitrogenadas.
- Estructuras de orden superior: para el ADN se incluyen las estructuras resultantes del
superenrollamiento y de la asociacin con protenas bsicas para formar la cromatina. No
estn determinadas por las estructuras de los niveles inferiores.

13

InspiracleQIR/2012

2.1.

Biologa Molecular

ESTRUCTURA PRIMARIA
Es comn para ADNs y ARNs. Consiste en largas cadenas de carcter

macromolecular de nucletidos unidos por enlaces covalentes 3-5-fosfodister. Son

polinucletidos con un esqueleto lineal formado por unidades alternas de pentosa y fosfato
(parte constante) de la cual sobresalen lateralmente las bases (parte variable). Por
convenio, la secuencia siempre se indica en direccin 5 3, es decir con el extremo 5-P a
la izquierda y el 3-OH a la derecha.
Puede representarse la frmula completa, esquemticamente o abreviadamente:
pApGpC pAGC AGC
2.2.

PROPIEDADES FISICOQUMICAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS

2.2.1. Propiedades en disolucin

Las cadenas de ADN y ARN son hidroflicas ya que sus grupos fosfato y OH libres
del azcar (ARN) pueden formar enlaces de hidrgeno con el agua.
A pH fisiolgico se comportan como cidos. Debido a este carcter polianinico, se
encuentran casi siempre neutralizados por cargas positivas de otras molculas. El ADN del
genoma nuclear eucaritico se une a histonas, protenas ricas en Arg y Lys cargadas
positivamente a pH fisiolgico. En los espermatozoides se une a protaminas, ricas en Arg.
En otras ocasiones se une a poliaminas (principalmente espermina y espermidina), sobre
todo en algunos virus (fago T4) y bacterias en estado de rpida proliferacin. Asimismo si la
carga negativa se compensa con la unin de iones metlicos se facilita la cristalizacin de
los cidos nucleicos.
Las soluciones de ADN son muy viscosas debido a la relativa rigidez de la doble
hlice y a su inmensa longitud en relacin con su dimetro.
2.2.2. Reactividad
Los cidos nucleicos son muy estables qumicamente, especialmente el ADN ya que
la desoxirribosa carece de grupos reactivos. El ARN es ms reactivo debido a sus grupos 2OH libres, lo que se refleja en su hidrlisis en medio alcalino.

14

Biologa Molecular

InspiracleQIR/2012

BIBLIOGRAFA
-

FERNNDEZ PIQUERAS, J. et al: Gentica. Ariel Ciencia, 1 ed., 2002.

GRIFFITHS, A., SUZUKI, D., LEWONTIN, R., MILLER, J.: Gentica. McGrawHill Interamericana. 7 ed., 2002.

KLUG, W.S., CUMMINIGS, M.R. y SPENCER, C.A.: Conceptos de Gentica.

Pearson Prentice Hall. Madrid, 8 ed. 2006.

LUQUE, J. y HERREZ, A.: Texto ilustrado de Biologa Molecular e ingeniera

gentica. Barcelona, 1 ed. 2008.

MENSUA, J. L.: Gentica: Problemas y ejercicios resueltos. Pearson Prentice

Hall. 2002.

NELSON, D.L. y COX, M.M.: Lehninger. Principios de Bioqumica. Ediciones

Omega, Barcelona, 4 ed., 2006.

PANIAGUA GMEZ LVAREZ, R.: Citologa e histologa vegetal y animal.

McGraw-Hill Interamericana.4 ed., 2007.

SOLARI, A. J.: Gentica humana: fundamentos y aplicaciones en medicina.

Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires, 3 ed., 2004.

TAMARIN, R. H.: Gentica. Editorial Revert, S. A. Espaa, 4 ed., 1996.

BROWN, T.A. Genomas Editorial mdica Panamericana. 3 edicin. 2008.

Pginas web
-

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod

http://www.drscope.com/pac/mg/b1/index.htm

http://www.es.embnet.org/-Imc/

http://genmolecular.wordpress.com/ligamiento

187

UNIDAD II

TCNICAS INMUNOLGICAS

Tcnicas Inmunolgica

InspiracleQIR/2012

20. TCNICAS INMUNOLGICAS.

2011(254),

2009(145),

2008(154,173,231),

2007(16),

2006(208,209),

2005(154,170,190),

2004(77,231), 2003(183).

Elementos de inmunologa bsica.

En cada organismo, los mecanismos de defensa son muy diversos y heterogneos, aunque
siempre existe una actuacin integrada de todos ellos. Dichos mecanismos de defensa se
suelen clasificar, didcticamente, en: Innatos (inmunidad natural o inespecfica) y
Adaptativos (inmunidad adquirida o especfica).
La respuesta inespecfica o innata es la primera barrera defensiva del organismo y no
requiere sensibilizacin previa. Por lo general a igual estimulo siempre se desarrolla con
igual intensidad (no se amplifica) y su sistema de discriminacin de las caractersticas
fisicoqumicas del agente agresor es muy primitivo (solo reconoce estructuras muy primitivas
y conservadas filogenticamente y estmulos fsicos o qumicos).
La respuesta especfica o adquirida se desarrolla solo frente a la sustancia extraa que
indujo (antgeno) su iniciacin y en ella participan prioritariamente los linfocitos y las
sustancias liberadas por los mismos (anticuerpos, citoquinas, etc.) Requiere del
reconocimiento antignico (discriminacin fina, especificidad, clonalidad) lo cual le
caracteriza, adems de otras propiedades como memoria y autorregulacin. Mejora
cuantitativa y cualitativamente con subsiguientes encuentros con el antgeno que le dio
origen.
Los linfocitos B tras interaccionar con su ligando especfico (antgeno) secretan
inmunoglobulinas (Ig) denominadas, una vez secretadas, anticuerpos (Ac). Tras salir de
la mdula sea, donde la clula B inmadura sufri durante diferentes estadios madurativos,
procesos de reordenamiento de genes y de seleccin (linfopoyesis), los linfocitos B vrgenes
requieren de la unin del antgeno (Ag) con la mIg para entrar en una serie de cambios, que
conducen a su expansin por proliferacin celular y a su diferenciacin, y que culminan, por
un lado, con la generacin de linfocitos B de memoria, y por otro, con su diferenciacin a
clula plasmtica secretora de anticuerpos.
Los linfocitos B memoria adems de haber perdido la mIgD (al menos la mayora de ellos),
en virtud del mecanismo de recombinacin de los genes de la parte constante (genes C) de
las Ig, han cambiado la regin constante de su mIg, de forma que en lugar de expresar
mIgM, expresan mIgG o mIgA o mIgE o combinaciones de mIgM/mIgG o mIgM/mIgA. De ah
que en la respuesta inmune secundaria los Ac que se producen tienen igual especificidad

189

InspiracleQIR/2012

Tcnicas Inmunolgicas

Estructura de una molcula de anticuerpo. A. Diagrama esquemtico de una molcula de IgG

secretada. Los sitios de unin al antgeno estn formados por la yuxtaposicin de los dominios V L y
VH. En la porcin constante de las cadenas pesadas se localizan los sitios de unin del complemento
(C) y los receptores de Fc. B. Diagrama esquemtico de una molcula de IgM en la membrana de
un linfocito B. La molcula de IgM tiene un dominio constante de cadena pesada (C H) ms que las
IgG. La forma unida a membrana de los anticuerpos tiene una porcin C- terminal transmembranal y
una intracitoplasmtica que anclan la inmunoglobulina a la membrana plasmtica. Rep. De. Abbas. A,
Lichtman. A, Pillai. S. Inmunologa Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic. 2008.

Si se trata con papana en condiciones controladas, la enzima corta la molcula en la regin

de bisagra y la divide en tres fragmentos. Dos de estos fragmentos son idnticos y se
componen de la cadena ligera y los dominios VH-CH1 de la cadena pesada. Se les denomina
Fab (fragmentos de unin al antgeno). El tercer fragmento est compuesto por los
dominios CH2 and CH3 de las cadenas pesadas unidos por los puentes disulfuros. Dada su
capacidad de asociarse entre ellos y cristalizar se les ha denominado fragmento
cristalizable (Fc). Si en lugar de papana se utiliza pepsina, la proteolisis ocurre un poco
ms distalmente a la regin de bisagra generando un F(ab')2, o sea se conservan intactos
los puentes disulfuro de la zona bisagra y en el fragmento se conservan los dos sitios de
unin al antgeno. La regin Fc queda fragmentada en varios trozos de los cuales el mayor
se denomina pFc.
La mayor parte de la diferencia en la secuencia de aminocidos existente entre los
diferentes anticuerpos se encuentra confinada a tres zonas cortas en las regiones
variables de las cadenas ligeras y pesadas. Estas zonas de mxima diversidad se
denominan segmentos hipervariables y coinciden con los lazos protruyentes que conectan
las hebras adyacentes de las hojas beta-plegadas que conforman los dominios variables de

192

Tcnicas Inmunolgica

InspiracleQIR/2012

las cadenas pesadas y ligeras. Estas zonas hipervariables, que se extienden

aproximadamente 10 residuos de aminocidos, estn flanquedas por secuencias mucho
ms conservadas denominadas zonas framework que le aportan la conformacin a los
dominios variables. En la molcula de Ig los tres sitios hipervariables del dominio VL y los
tres del dominio VH conforman la superficie de unin al antgeno, que es estructuralmente
complementaria a la forma del antgeno. Por esta causa a los segmentos hipervariables se
les denomina regiones determinantes de la complementariedad (CDRs) y se denotan, a
partir del extremo amino, CDR1, CDR2, y CDR3. De todos ellos el segmento CDR3 es el
ms variable de todos debido a mecanismos genticos especiales.
Las inmunoglobulinas pueden clasificarse en distintas clases y subclases en base a
las diferencias en la estructura de las regiones constantes de sus cadenas pesadas. A
estas clases se les llama tambin isotipos y se denominan IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM. En los
humanos los isotipos IgA e IgG pueden a su vez ser subdivididos en subclases o subtipos
llamados IgA1 e IgA2; e IgG1, IgG2, IgG3, e IgG4, lo que produce un total de 9 isotipos de
Ig en la especie. La secuencia de aminocidos de las regiones constantes de las cadenas
pesadas de un mismo isotipo de anticuerpo son prcticamente iguales y solo se encuentran
diferencias entre los diferentes isotipos. Las cadenas pesadas se denotan por la letra del
alfabeto griego correspondiente al isotipo del anticuerpo: IgA1, cadenas pesadas 1; IgA2,
2; IgD, ; IgE, IgG1, 1; IgG2, 2; IgG3, 3; IgG4, 4; e IgM, . En los humanos los
anticuerpos IgM e IgE presentan en su regin constante cuatro dominios, mientras que IgG,
IgA, e IgD slo tres. Dichos dominios se denominan CH y se numeran secuencialmente
desde el extremo aminoterminal hacia el carboxiterminal (e.j., CH1, CH2, etc.).
Existen dos clases o isotipos de cadenas ligeras llamados y , que se distinguen
entre s por las caractersticas de sus regiones constantes. Cada molcula de
inmunoglobulina posee dos cadenas ligeras o dos , pero nunca una de cada.
Las formas secretadas de IgG e IgE y todas las formas de membrana,
independientemente del isotipo, son monomricas (una molcula con la estructura bsica
de Ig: dos cadenas pesadas y dos ligeras). En contraste, las formas secretadas de IgM e
IgA forman complejos multimricos en los cuales dos o ms molculas bsicas de cuatro
cadenas estn unidas covalentemente. La IgM puede ser secretada como pentmeros o
hexmeros, mientras que la IgA suele ser secretada como dmero. Estos complejos se
conforman por interacciones entre regiones llamadas colas, localizadas en los extremos
carboxiterminales de las formas secretadas de las cadenas y , y un polipptido adicional
de 15-kD, llamado cadena de unin (J), mediante puentes disulfuro. Esta cadena adicional,
adems de estabilizar las formas multimricas, sirve para facilitar el transporte de estas Ig a
travs de los epitelios.
Los diferentes isotipos de inmunoglobulina presentan diferentes funciones efectoras.
Esto se debe a que las funciones efectoras de los anticuerpos son mediadas por la unin de
las regiones constantes de las cadenas pesadas a los receptores Fc de diferentes clulas

193

Tcnicas Inmunolgica

InspiracleQIR/2012

Rep. De. Roitt. I, Brostoff. J, Male. D. Inmunologa. Elsvier Espaa, Ed. 5 ed. 2000.

Radioinmunoensayos (RIAs) y Enzimoinmunoensayos (EIAs).

Se define como inmunoensayo a todos aquellos mtodos, empleados para la deteccin de
cualquier sustancia o compuesto, que estn basados en las reacciones inmunolgicas. Es
decir, que se fundamentan en el extraordinario poder discriminatorio que presentan los
anticuerpos y su gran afinidad por agentes externos extraos. Con estos mtodos pueden
ser detectadas en muestras biolgicas sustancias en el orden de picogramos. Son
inmunoensayos en los que alguno de los componentes de la reaccin (antgeno o
anticuerpo) est marcado con una enzima (EIA) o con un elemento radioactivo (RIA).
Existen muchas variantes que se han desarrollado a lo largo de muchos aos con multitud
de aplicaciones.

Radioinmunoensayos (RIA).
Es un mtodo para detectar algunas sustancias que estaban marcadas con radioistopos y
que constituan antgenos para determinados anticuerpos. Los RIAs originalmente utilizaban
a las sustancias que se queran determinar marcadas isotpicamente, o sea que lo que
presentaban marcado era el antgeno (Ag). Posteriormnete aparecieron mtodos en los que
lo que se marcaba era los anticuerpos (Ac) y a los que se les denomin ensayos
inmunoradiomtricos (IRMAs) para diferenciarlos de los RIA. Los IRMA son ms fciles de

215

InspiracleQIR/2012

Tcnicas Inmunolgicas

espectro de excitacin y emisin diferente que permite su identificacin mediante filtros

selectivos. Algunos aparatos estn equipados para separar las clulas identificadas (FACS;
separador de clulas activado por fluoresecencia).
Las clulas en suspensin se hacen pasar con gran rapidez (50000 clulas por segundo)
por un colector en forma de flujo laminar de clulas individuales (en fila india). El paso de
cada clula atravesando una fuente de rayos lser dispersa la luz y da seales que son
analizadas por un ordenador mediante detectores especficos. Hay detectores para luz
dispersada que informa del tamao de la clula (forward light scatter o luz refractada) y de
su morfologa o rugosidad ( side Light scatter o complejidad estimada por la luz reflejada a
90). Para fluorescencia hay detectores precedidos de filtros que seleccionan las longitudes
de onda de los fluorocromos correspondiente cada una a un color diferente. Estos
receptores slo son activados cuando pasa una clula recubierta por el anticuerpo
monoclonal marcado con el color correspondiente.

Re. De Regueiro. J, Lpez. L, Gonzlez. S, Martnez. E. Inmunologa Biologa y Patologa del Sistema Inmune. Editorial mdica
Panamericana, Ed. 3 edic. 2002. 6 reimp. 2006.

226

Tcnicas Inmunolgica

InspiracleQIR/2012

Bibiliografa:

1. Abbas. A, Lichtman. A, Pillai. S. Inmunologa Celular y Molecular. Elsvier, Ed. 6 edic.

2008.
2. Kindt. T, goldsby. R, Osborne. B. Inmunologa de Kuby. Mc Graw Hill, Ed. 6. 2007.
3. Regueiro. J, Lpez. L, Gonzlez. S, Martnez. E. Inmunologa Biologa y Patologa
del Sistema Inmune. Editorial mdica Panamericana, Ed. 3 edic. 2002. 6 reimp.
2006.
4. Roitt. I, Brostoff. J, Male. D. Inmunologa. Elsvier Espaa, Ed. 5 ed. 2000.
Las ilustraciones del manual han sido tomadas de bibliografas 1, 2.

235