UNIVERSIDAD DE SAN MARTIN DE PORRES

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

DIFERENCIACIN BIOQUIMICA DE BACTERIAS GRAM

POSITIVAS
II/2015

SAAVEDRA VSQUEZ DIANA ALEJANDRA

GILES SAAVEDRA, JUAN

PRCTICA N05:
METODOLOGA
Pruebas bioqumicas para Staphylococcus y Streptococcus
1. Observar el tipo de hemolsis que se forma en las placas de agar sangre
2. Realiza la prueba de catalasa con una colonia de la placa de agar sangre (AS) y con
una del manitol salado (MS).
3. Para la prueba de coagulasa, en dos tubos con un mL de plasma cada uno, depositar
en uno 0,5 mL del cultivo de Staphylococcus aureus y en otro un mL de S.epidermidis.
Incubar 30 minutos a 37 C.
4. Prepara frotis de las colonias que han desarrollado en AS y en MS.
Fermentacin del manitol

El agar manitol salado es un medio altamente selectivo para el aislamiento de

estafilococos patgenos en cultivos mixtos, ya que se aprovecha la capacidad de los
estafilococos de desarrollar en presencia de NaCl al 7,5% y la de fermentar manitol;
en este caso se observar la formacin de un halo amarillo en el agar circundante a
las colonias.

Coagulacin del plasma

Staphylococcus aureus produce una protena llamada coagulasa, capaz de aglutinar el

plasma tratado con oxalato, citrato o heparina en presencia de un factor contenido en
el suero.
Este factor srico reacciona con la coagulasa, activando el fibringeno y produciendo
un coagulo o trombo de fibrina. La coagulasa se presenta en forma unida (adherida a
la clula) y en forma libre. El estudio de la actividad coagulasa se puede llevar a cabo
en un tubo de ensayo (para coagulasa libre) y en portaobjetos (coagulasa nido),
tambin llamado factor de agregacin la prueba en tubo se hace poniendo 1 mL de
plasma al que se le agrega una asada de un cultivo nocturno de S.aureus. Se incuba
la mezcla a 37 C durante 4 horas y se considera positivo ante cualquier grado de
coagulacin.

Prueba de catalasa

La catalasa es una enzima que cataliza la descomposicin el perxido de hidrgeno

en agua y oxgeno. Se encuentra presente en la mayora de los microorganismos
aerbicos y anaerbicos facultativos, excluyendo los estreptococos.
La prueba se considera positiva cuando se produce una efervescencia rpida con
desprendimiento de burbujas: la enzima catalasa convierte el perxido de hidrgeno
en agua y oxgeno molecular. Esta prueba se emplea para diferenciar los gneros
Micrococcus y Staphylococcus (catalasa positivo) del gnero Streptococcus (catalasa
negativo).

RESULTADOS
Pruebas bioqumicas para Staphylococcus y Streptococcus:

Fermentacin de manitol
Hemlisis en agar sangre
Prueba de catalasa
Coagulacin del plasma

FERMENTACIN DE MANITOL
Imagen N01: medio de cultivo manitol salado, color rosado (manitol no fermentado)

Imagen N02: medio de cultivo manitol salado, color amarillo (manitol fermentado)

 PRUEBA HEMLISIS DE SANGRE

Imagen N03: Medio de cultivo agar sangre hemolticos

Imagen N04: Medio de cultivo agar sangre hemolticos

PRUEBA DE CATALASA

Imagen N05: Catalasa positivo

Imagen N06: catalasa negativo

 PRUEBA COAGULASA
Imagen N07: coagulasa negativa

Imagen N08: coagulasa positiva, se

aprecia la formacin de coagulo

DISCUSIONES:
AGAR MANITOL SALADO
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina, en esta
prctica nosotros lo usamos para la diferenciacin entre estafilococos y estreptococos por
el cambio de color en el indicador de PH (rojo de fenol). Las bacterias que crecen en un
medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que
se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. Los
estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los Staphylococus aureus hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias
aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante.
Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o
rosada.
PRUEBA HEMOLISIS DE SANGRE
Las colonias de S.aureus son grandes, lisas, enteras, presentan consistencia cremosa.
El gnero Streptococcus es exigente y por lo tanto debe ser cultivado en medios ricos que
le aporten los nutrientes necesarios, por ejemplo, agar sangre ovina. El efecto que tiene
los estreptococos sobre el agar sangre (hemlisis). Nos sirve para poder clasificar este
grupo de grmenes en:
hemolticos: son aquellos que producen una hemlisis total de los glbulos rojos,
observndose como un halo transparente alrededor de las colonias.
hemolticos: son aquellos que producen hemlisis parcial, la cual se observa como un
halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias.
Gamma hemolticos: son aquellos que no producen hemlisis sobre agar sangre

El Streptococcus pneumoniae a pesar de ser patgeno es hemoltico

PRUEBA DE CATALASA
La enzima catalasa, desdobla el perxido de hidrogeno en agua y oxgeno. La reaccin se
manifiesta como desprendimiento de burbujas
Catalasa positivo

Catalasa negativo

Staphylococcus

Streptococcus

Micrococcus

Enterococcus

Planococcus

Aerococcus

Stomacoccus

Planococcus

PRUEBA DE COAGULASA
Permite separar S.aureus , que posee coagulasa, de las otras especies de estafilococos
que genricamente se denominan coagulasa negativos.El Sthaphylococcus aureus
produce una protena llamada coagulasa, capaz de aglutinar el plasma. El factor srico
reacciona con la coagulasa, activando el fibringeno y produciendo el coagulo.

La prueba de la coagulasa es usada

especficamente para diferenciar las
especies del genero staphylococccus:

S. aureus

Positiva

S. epidermidis

Negativa

CONCLUSIONES:
-

En la prueba de agar manitol salado se diferencia los estafilococos de

estreptococos, ya que los estreptococos no sobreviven en este medio. Adems
tambin se puede diferenciar segn el tipo de estafilococo ya que las colonias se
vuelven amarillas cuando es un Staphylococus aureus por que el medio es cido y
se fermenta manitol, y se vuelven fucsias cuando no fermentan manitol, puede ser
un estafilococo cualquiera menos el aureus.
Se logr determinar la presencia de la catalasa en el cultivo de Staphylococcus
spp por medio de la prueba de la catalasa
Slo los S. aureus dan positiva a la prueba de coagulasa
La coagulasa es una protena producida por varios microorganismos que permite
la conversin del fibringeno en fibrina. En el laboratorio, se usa para distingir
entre diferentes tipos de Staphylococcus. Un resultado de coagulasa positivo
indica que la muestra contiene Staphylococcus aureus.
El agar sangre es una combinacin de un agar base (agar nutritivo) con el
agregado de 5 % de sangre ovina, tambin puede usarse sangre humana, para
cultivos en una placa de Agar. El agar sangre aporta muchos factores de

enriquecimiento. Se usa tambin para ver la capacidad hemoltica de los

microorganismos patgenos (que es un factor de virulencia). Observando los halos
hemolticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemlisis que posee:
alfa: halos verdosos (reduccin de la hemoglobina de los glbulos rojos a
metahemoglobina en el medio)
beta: halos incoloros (hemolisis total)
gamma: inexistencia de halos (sin hemolisis)

BIBLIOGRAFA:
-

Madigan M.T., Martinko J.M. y Parker J. (2004) Brock: Biologa de los

Microorganismos 10ma Edicin
Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003) Microbiologa 4ta Edicin
MacFaddin JF. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de
importancia clnica. Ed. Mdica Panamericana; 2003. 856 p.
Koneman EW, Allen S. Koneman. Diagnostico Microbiologico/ Microbiological
diagnosis: Texto Y Atlas En Color/ Text and Color Atlas. Ed. Mdica Panamericana;
2008. 1699 p.