1.

Tampon cacodilato: ventaja nos permite trabajar con tejidos duros.

Tampn fosfato
Se trata de un tampn inorgnico que se encuentra en los lquidos
intracelulares y mantiene el pH en torno al 6,86 debido al equilibrio existente
entre un cido dbil; el dihidrgeno fosfato (DHP) y su base: el monohidrgeno
fosfato (MHP). Ambos compuestos mantienen un equilibrio entre s, pudiendo el
DHP liberar un protn y transformarse en MHP, (la reaccin se desplaza hacia la
derecha), y el MHP puede unirse aun protn para originar una molcula de
DHP, (la reaccin se desplaza hacia la izquierda). H2PO4- ? HPO4-2 + H+
Es decir, a pH fisiolgico, las especies del fosfato con capacidad de tamponar
son H2PO4- y HPO4-2 ya que su valor de pK es de 6,8.
As pues, para el tampn fosfato:
pH = 6,8 + log HPO4-2 / H2PO4Una solucin tampn o Buffer es una solucin capaz de amortiguar las variaciones de pH realizadas por la
adicin de una cido o una base, gracias a que contiene en equilibrio a un cido dbil y su base conjugada en
proporciones equimolares, as las adiciones de cido se neutralizaran con la base conjugada y las de base
con el cido, desplazando las posiciones de estos en el equilibrio pero manteniendo invariante el pH

2.
Glutaraldehdo. Forma puentes entre las molculas de los tejidos. Se usa a
una proporcin de entre el 0,5 y el 3 %. Tiene una alta capacidad para
preservar la estructura celular, por lo que es el fijador de referencia para
observacin de ultraestructuras celulares con el microscopio electrnico. Pero
hay que tener cuidado con su baja penetracin tisular y puede producir
retracciones. Se usa en soluciones tamponadas isotnicas.
El tetrxido de osmio, llamado tambin tetraxido de osmio) es
elcompuesto qumico con la frmula OsO4. El compuesto es notable por sus
muchos usos, a pesar de la rareza del osmio. Tambin tiene un nmero de
propiedades interesantes, siendo una de ellas que el slido es voltil.
Forma puentes entre molculas. Se emplea al 1 % en soluciones tamponadas.
Es buen fijador de la ultraestructura de la clula por lo que se emplea
habitualmente para las observaciones con el microscopio electrnico. Es un
buen fijador para grasas y membranas celulares. Por su fuerte carcter
oxidante no se usa para tinciones convencionales, excepto para las
impregnaciones argnticas como el mtodo de Golgi.

Terxido de osmio
Aunque no es un fijador comn para microscopa de campo claro, el tetrxido
de osmio tiene un entrecruzamiento extermadamente til, fijador aditivo para
estabilizar lpidos y por tanto la estructura de membranas. Uno de sus ventajas
es la posibilidad de entrecruzar carbonos insaturados que se encuentran en la
bicapa lipdica de membranas y posiblemente con grupos aromticos del
triptfano y la histidina. Ambas protenas y lpidos deben ser entrecruzados por
reaccin qumica con tetrxido de osmio. Este compuesto casi no muestra
reactividad con los cidos nucleicos o carbohidratos, aunque hay autores que
sugieren que la exposicin al cido dbil podra mostrar cidos nucleicos (y
protenas) susceptibles a la reaccin del tetrxido de osmio.
El tetrxido de osmio vuelve los tejidos negros y para ser tiles a la
microscopa de campo claro los tejidos deberan ser blanqueados. Por esta
razn y debido a su toxicidad, el tetrxido de osmio no est recomendado para
propsitos generales de microscopa de campo claro. Tratar las secciones 5
minutos a temperatura ambiente con cido peridico o "Oxone" al 1% (acuoso,
peso/volumen) para convertir el tetrxido de osmio en un dixido de osmio
menos txico.

5. Hay dos tipos de fijacin por perfusin: de gran circuito y de pequeo circuito. El primero,
se realiza inoculando el fijador a partir del corazn (ventrculo izquierdo) por lo que la
fijacin ocurre en todos los rganos del espcimen. En la perfusin de pequeo circuito, el
fijador se inyecta solo en una porcin del animal, fijando solo la parte de inters para el
investigador.

FIJACIN:
Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias qumicas que tienen varias finalidades:
1.
Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.
2.

Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparacin de finas pelculas de ste.

3.

Destruir bacterias y grmenes que pudieran encontrarse en ellos.

4.

Interrumpir los procesos celulares dinmicos que ocurren a la muerte de la clula.

Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciaran la Autolisis y llevaran a la
DEGENERACIN POST MORTEM.

La fijacin mantiene las estructuras al estimular la formacin de enlaces cruzados entre las protenas.

FIJACIN:
Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias qumicas que tienen varias finalidades:
1.
Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.
2.

Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparacin de finas pelculas de ste.

3.

Destruir bacterias y grmenes que pudieran encontrarse en ellos.

4.

Interrumpir los procesos celulares dinmicos que ocurren a la muerte de la clula.

Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciaran la Autolisis y llevaran a la
DEGENERACIN POST MORTEM.
La fijacin mantiene las estructuras al estimular la formacin de enlaces cruzados entre las protenas.

Antes de entrar en los detalles ms significativos sobre los distintos mtodos

que existen para la fijacin de tejidos vegetales, es necesario resaltar que los
mtodos ms sencillos y ms prcticos son los que no necesitan fijacin, pero
no siempre son posibles, ya que con frecuencia las muestras se encuentran
alejadas del laboratorio, la capacidad de trabajo tambin es limitada y por
tanto hay que recurrir a los mtodos de fijacin con mayor frecuencia de lo que
sera deseable.
Concepto de fijacin.- Se entiende por fijacin toda manipulacin sobre un ser
vivo, o bien sobre parte de l, que tiene por objeto mantener toda su
arquitectura tanto estructural como qumica lo ms inalterada posible, de tal
forma que sus componentes celulares mantengan las mismas caractersticas
que cuando dicho ser o tejido estaban vivos. es claro que la mayora de la
estructura celular se debe a la presencia de protenas y por tanto todo proceso
de fijacin debe tener en cuenta la naturaleza qumica de stas, de forma que
el fijador no reacciona con las mismas. Es cierto que existen componentes muy
distintos ms o menos lbiles que tambin se encuentran formando parte de la
estructura celular, pero son las protenas las que nos van a reflejar
fundamentalmente si un fijador es bueno o no bueno. Por otra parte, un fijador
prepara tambin de alguna forma el tejido o la clula para la posterior
manipulacin, bien en el proceso de inclusin, actuando como mordiente o
como fijador del colorante dependiendo de su naturaleza, por eso es
importante la eleccin del fijador.
Hay razones por las que los tejidos vegetales no deben fijarse como los
animales. Muchas veces las plantas estn cubiertas de sustancias creas en
sus cutculas que son hidrfobas e impiden la penetracin del fijador. Por otra
parte el bajo contenido proteico de las clulas vegetales, en comparacin con

ls animales, vuelve al glutaraldehido (un componente de un fijador que se

tratar ms adelante), menos efectivo en sus enlaces curzados con la protena.
As mismo la pared de las clulas vegetales supone una barrera parcial a la
penetracin del mismo.
Por otra parte hay que distinguir bien entre fijador y conservador, ya que con
frecuencia, y sobre todo en histologa vegetal, se tienen conceptos errneos al
respecto. Un conservador es aquella sustancia, o bien fenmeno fsico, que
evita la autolisis cadavrica, pero que una vez eliminada su accion, la muestra
o la clula, quedan a merced de sus propios enzimas lisgenos y son por tanto
susceptible de autodestruccin. son conservadores: fro, ciertos lquidos como
los de Petit, de Ripert, etc. As pues, una pieza que se ha mantenido durante un
tiempo en un conservador debe ser fijada rpidamente antes de cualquier
manipulacin, ya que de no hacerse corre el peligro de que sufra graves
alteraciones. un fijador por el contrario inmoviliza y estabiliza los elementos
celulares, bien sea por precipitacin de las protenas y dems sustancias
celulares activas, ya sea mediante un bloqueo qumico de su actividad, siendo
estos fenmenos permanentes.