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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE

MXICO.
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES
ZARAGOZA.

BIOQUMICA CELULAR DE LOS TEJIDOS II.


HEMOSTASIA.

GRUPO: 2551
BARCO BAZN ARELY ABIGAIL.
EQUIPO 7
FUENTES LPEZ ELISA.

HERNANDEZ GARCIA EDUARDO.


SILVA MENDOZA JORGE ENRIQUE.

Objetivos.
Analizar el fundamento de algunas pruebas hemostticas.
Realizar en el laboratorio algunas de las pruebas ms comunes para el
control de la hemostasia.
Interpretar los resultados obtenidos.
Resumen.
En la prctica se realizaron pruebas de laboratorio que son incluidas en el estudio
bsico de la coagulacin como es el tiempo de protrombina (TP), tiempo de
tromboplastina parcial activada (TTPa) y el tiempo de sangra, ademas de tiempo
de coagulacin, retraccin del coagulo, resistencia capilar y conteo de plaquetas.
Entre las ms importantes la prueba del TP determina el tiempo de coagulacin
del plasma en presencia de una concentracin ptima de extracto tisular
(tromboplastina) e indica la eficiencia global del sistema de coagulacin
extrnseco. Aunque originalmente se pensaba para medir la protrombina,
actualmente se sabe que la prueba depende tambin de reacciones con los
factores V, VII, y X y de la concentracin de fibringeno en plasma.
La prueba del TTPa mide el tiempo de coagulacin del plasma despus de la
activacin de los factores de contacto pero sin la existencia de tromboplastina
tisular aadida y, por tanto indica la eficiencia global de la va intrnseca. Y para
estandarizar la activacin de los factores de contacto, se incub el plasma por un
periodo corto (3 min) en el que se expuso a un activador de contacto en este caso

el caoln. Durante esta fase de la prueba se produce factor XIIa, que disocia el
factor XI a factor XIa, pero la coagulacin no sobrepasa este paso en ausencia de
calcio. Ya por ltimo se agreg la disolucin de CaCl 2 0.025 M lo que activa al
factor IX y se contina la cascada.
En el tiempo de sangra bsicamente se investigan los trastornos vasculares
relacionados con la hemostasia primaria y para efectuar la prueba se realiz una
pequea incisin en el lbulo de la oreja de nuestro compaero. La interrupcin
del sangrado indica la formacin de tapones hemostticos, que a su vez dependen
de un nmero adecuado de plaquetas y de la capacidad de las plaquetas para
adherirse al subendotelio y formar agregados.
Introduccin
Hemostasia
La hemostasia es un sistema de control permanente mediante el cual el organismo
mantiene la fluidez de la sangre. Uno de sus principales componentes es una
compleja cascada de coagulacin que incluye numerosas protenas o factores de
la coagulacin, las plaquetas y el factor tisular.
El factor tisular es una lipoprotena que est presente en forma constitutiva en la
membrana de ciertas clulas. Cuando se produce una lesin, se expone a la
circulacin y se une al factor VII (FVII). De esta manera se inicia el proceso de la
hemostasia que finalmente conducir a la formacin de un cogulo sanguneo
fuerte y estable capaz de detener la hemorragia.
Se han descripto numerosos trastornos de la coagulacin, congnitos o
adquiridos, que impactan negativamente sobre el sistema de hemostasia y se
caracterizan por una tendencia hemorrgica.
Entre todas las afecciones hemorrgicas congnitas, la hemofilia es la ms
frecuente. Impone una pesada carga social y econmica a los pacientes que la
padecen y a la sociedad en general.
En la hemostasia se distinguen:
Fase vascular: vasoconstriccin, que no es suficiente.
Fase plaquetaria: ante la rotura quedan libres estructuras que en condiciones
normales estn ocultas. Las clulas endoteliales liberan PGI2, que inhibe la
agregacin y las plaquetas circulan desagregadas. Ante la rotura vascular queda
visible la capa basal que contiene colgeno que induce la agregacin, las
plaquetas se adhieren al colgeno libre; esta adhesin es el principio de una serie

de reacciones fisiolgicas en el interior de plaquetas: estimula la liberacin de


calcio intracelular al citoplasma y tambin estimula la sntesis de tromboxanos a
partir del cido araquidnico en el interior de la plaqueta. En la superficie
plaquetaria aparecen receptores complejos que son glicoprotenas: complejo IbIIIa, este receptor se une al fibringeno y ste sirve para que se unen complejos
glicoprotenas de la superficie de otras plaquetas producindose agregacin
plaquetaria. Esta unin supone un cambio de forma en la plaqueta, se vuelven
ms rugosas con espculas para poder adaptarse a los acmulos.
Simultneamente se produce la liberacin del contenido de los grnulos de las
plaquetas, liberan: tromboxano, ADP, calcio, son sustancias que estimulan
agregacin plaquetaria. Esta unin es laxa en principio y despus se vuelve
irreversible.
Fase sangunea o coagulacin: es la tercera fase en la hemostasia. Consiste en la
transformacin del fibringeno en fibrina. Para que esto ocurra se necesitan unas
reacciones previas que son reacciones enzimticas. Estas protenas son factores
de coagulacin, las mayores son protenas circulares, otras estn en el interior de
la plaqueta, adheridas al tejido. Existen dos vas para la coagulacin: intrnseca:
ms lenta. Extrnseca. Estas vas varan en los pasos iniciales, luego confluyen en
un punto, la va comn.
En la va intrnseca existen reacciones antes de llegar al factor X; la va extrnseca
es ms rpida, slo hay un paso previo para activar al factor X. Este es el
responsable del paso de protrombina a trombina que transforma fibringeno en
fibrina. Existen dos tipos de fibrina: una soluble que es la primera que se forma y
que despus pasa a insoluble. Tambin ocurre una retraccin del cogulo con lo
que se aproximan los bordes de la herida y se hace ms denso impidiendo la
salida de la sangre. Al mismo tiempo el organismo tiene mecanismos de control
para evitar la coagulacin intravascular y evitar la transmisin de la coagulacin.
Existen sustancias que se oponen a la hemostasia como PGI2 o prostaciclina:
protena que inhibe la accin de protenas activadas (factor de coagulacin)
antitrombina II: protena circulante que bloquea los factores de la coagulacin.
Sistema fibrinoltico: disolucin del cogulo una vez que ha cumplido su funcin.
Es un sistema complejo que tambin consta de reacciones proteicas de activacin
de protenas, pero ms simple. Bsicamente el sistema consiste en formar
plasmina que disuelve a fibrina y da PDF que se eliminan. Tiene que existir un
equilibrio entre coagulacin y fibrinlisis para evitar trombosis, infarto, si
predomina la fibrinlisis se provocan hemorragias.
Material.

Adaptador para tubo al vaco.


Agujas para adaptador de
sistema al vaco.
Pipeta 100 L y de 2 mL.
Tubo Vacutainer rojo y lila.
Algodn.
Bolsa roja para desechos
(segn la NOM-087).
Contenedor rgido para punzocortantes (segn la NOM-087).

Gradilla.
Guantes.
Tubos de ensaye 13x100.
Ligadura.
Pipetas Pasteur.
Portaobjetos.
Recipiente para inactivacin.
Vaso de precipitados 250 mL.
Termmetro.
Soporte universal.
Pinzas dobles.

Reactivos:
Alcohol al 70%
Cloro (para inactivar).
Oxalato de amonio 1%.

Equipo:

Reactivo A (soluplastin).
Reactivo APTT (APTTest).
Cloruro de calcio.

Centrfuga.
Baumanometro.

Cronometro.
Parrilla de calentamiento.

Mtodo.
Toma de muestra.

Se utiliz un tubo Vacutainer para la toma de sangre, colocando la aguja en


el soporte.
Se aplic el torniquete y se limpi el sitio designado para la venopuncin
con una torunda de alcohol.
Se realiz la venopuncin y se coloc el tubo Vacutainer lila en soporte
rompiendo el sello, una vez la sangre comenz a fluir se quit el torniquete.
Cuando el tubo lila estuvo lleno se retir y se pas a colocar el tubo rojo,
una vez estuvo lleno a se retir.
Se coloc una torunda sobre el sitio de venopuncin y se retir
cuidadosamente la aguja con el soporte.

Tiempo de coagulacin.

Una vez que se sac la muestra de sangre en el tubo rojo se cronometro


para saber cunto tiempo tardaba en coagular.

Retraccin del coagulo.

A la muestra que se tom para tiempo de coagulacin se le midi la altura


de la columna sangunea.
Se coloc el tubo en un bao mara a 37C y 10 minutos despus se aflojo
el coagulo de las paredes con ayuda de un aza bacteriolgica.
Una hora despus se dreno toda la parte liquida del tubo, teniendo cuidado
de no romper, ni dejar ir el coagulo y se midi nuevamente la altura de la
columna sangunea.
Se hizo una diferencia y se sac el porcentaje de la cantidad de suero.

Tiempo de sangrado por el mtodo de Duke.

Se le perforo el lbulo de la oreja con una lanceta y cada 30 seg se quit el


exceso de sangre con un Kleenex; sin tocar los bordes.
Una vez que el Kleenex no se ensucio ms y dejo de salir sangre se detuvo
el cronometro.

Resistencia capilar.

Se dibuj un circulo de aproximadamente 5cm de diametro en el antebrazo


del compaero, justo debajo del pliegue del codo.

Se ajust la presin del baumanometro a la mitad de su presin normal y se


mantuvo as por 5 min.
Al final del tiempo se contaron las petequias encontradas.

Tiempo de protrombina.

Se centrifugo una muestra de sangre para separar el plasma.


El plasma se pas con ayuda de una pipeta Pasteur a un tubo de ensaye y
se coloc en bao mara a 37C durante 2 minutos.
Se tomaron 100 L de plasma en otro tubo y se le agrego al tubo 0.2 mL de
Reactivo A, tomando el tiempo al momento.
Se volvi a meter el tubo al bao mara y con ayuda de un aza
bacteriolgica se movi la solucin hasta ver la formacin del coagulo y se
detuvo el cronometro.

Tiempo tromboplastina parcial activada.

Se centrifugo una muestra de sangre para separar el plasma.


100 L de plasma se pasaron a un tubo de ensaye junto con 100 L de
reactivo APTT.
Se homogenizo la muestra y se coloc a incubar por 3 minutos a 37C,
pasado ese tiempo se le agrego CaCl precalentado a 37C tambin y se
dispar el cronometro
Con la ayuda de un aza bacteriolgica y dentro del bao mara se vio la
formacin del coagulo, en el momento que se form se detuvo el
cronometro.

Conteo de plaquetas.

Se tom una muestra de sangre del tubo Vacutainer Lila con la pipeta de
Thoma para glbulos rojos hasta la marca de 1. Con la solucin de oxalato
de amonio se llen hasta la marca de 101 y se homogenizo.
Se desecharon las primeras 4 gotas y se procedi a llenar la cmara de
Neubauer.
Se dej sedimentar durante 10 minutos en una caja Petri con un papel filtro
hmedo en el fondo.
Se contaron 10 cuadros terciarios al microscopio en 40X.

Resultados.

PACIENTE: Arely Abigail Barco Bazn


femenino

Tiempo de
coagulacin
Tiempo de
sangrado
Tiempo de
protrombina
Tiempo de
tromboplastina
parcial

SEXO:

Valores
obtenidos

Valores de
Referencia

6 min 25 seg.

5-8 minutos

2 min 40 seg.

2-7 minutos

11 segundos

10-14 segundos

34 segundos

33-48 segundos

Pruebas

EDAD:22 aos

Resistencia
capilar

Retraccin de
coagulo
Altura de la
columna de
suero

Altura de la
columna de
sangre

Sin petequias

Normal: 10
petequias
Dudosa: 10 a 20
petequias
Anormal: >20
petequias

2
1
m
m
5
4

61%

>40%

m
m

Conteo de

plaquetas
Anlisis de resultados.

180,000
mm

140,000450,000
mm

RETRACCIN DEL COGULO

La retraccin del cogulo depende del nmero de plaquetas, de su


actividad funcional y de la concentracin del fibringeno. El grado de

retraccin se correlaciona muy bien con el nmero de plaquetas. Se


encontr dentro de los valores de referencia

RECUENTO DE PLAQUETAS

Las plaquetas desempean una funcin importante en el mecanismo de la


hemostasia, as como en la respuesta a la lesin vascular. La detencin de
la hemorragia depende de la formacin de un trombo plaquetario que se
consolida con la formacin de fibrina por activacin del mecanismo de la
coagulacin; nos dio 180,000mm y se encuentra dentro de los valores de
referencia.

TIEMPO DE COAGULACIN

En este mtodo se observ el mecanismo intrnseco de la coagulacin. Es


sensible solo a deficiencias graves de factores de la coagulacin; por lo
tanto, su uso en el laboratorio est limitado. El valor fue de 6 min. 25 seg.
Se encontr dentro de los valores de referencia.

TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA ACTIVADO (TPTA)

El TPTA es una prueba global que explora los factores o componentes


plasmticos relacionados con las vas intrnseca y comn de la coagulacin
(factores XII, XI, IX, VIII, X, V, II y I), por lo que est particularmente
indicado para el diagnstico de las anomalas de estas vas. No se encontr
ningn tipo de anomala, ya que se encuentra dentro de los valores de
referencia

TIEMPO DE PROTROMBINA

Es un mtodo que explora la coagulacin extrnseca. Es ms sensible a los


defectos de los factores VII, X y V que a la deficiencia de protrombina. No
detecta disminuciones moderadas de fibringeno se obtuvo un TP normal.

TIEMPO DE TROMBINA

Esta prueba permite explorar de forma rpida y simple el tiempo para la


formacin de fibrina. Este indicador se mantiene normal en deficiencias del
factor XIII.

RESISTENCIA CAPILAR

Normalmente, la pared vascular no permite extravasacin de sangre. Sin


embargo, en algunas situaciones anormales, tales como desnutricin
intoxicaciones, trombocitopenias, desarreglos hormonales, se puede
presentar una fragilidad del endotelio capilar o pared vascular, que permite
una salida anormal de la sangre hacia los tejidos circulantes, lo que se
traduce en la aparicin de petequias. Por lo tanto. No existe alguna
anormalidad en esta prueba ya que no se encontraron pequitas.

Los resultados obtenidos de las pruebas de hemostasia concluyen que la


paciente Abigail Barco no presenta ninguna deficiencia las diferentes
pruebas realizadas.

Conclusiones.

Se lograron cumplir los principales objetivos de la prctica, es decir, se


realizaron adecuadamente todas las pruebas bsicas de un perfil
hemosttico, as como interpretar cada resultado de dichas pruebas.

De acuerdo a los resultados obtenidos se concluye que la paciente no


presenta problemas o alguna enfermedad o trastorno relacionado con
problemas de coagulacin, ya que todos los resultados obtenidos estn
dentro de los valores de referencia.

Cuestionario.

1. Cules son los principales complejos que forma el calcio durante la fase
fluida de la hemostasia?

El factor tisular (Tromboplastina) forma un complejo con el F VII y el calcio,


convirtiendo al F VII en una proteasa activa que acta sobre el F X
activndolo.
El F XIIa activa al XI y el XIa al IX, que forma complejo con el F VIII, el FP3,
y el calcio (complejo protrombina) activando finalmente el F X.
El F Xa forma un complejo con el F V y el calcio que convierte la
protrombina en trombina.

2. Cmo se da la activacin de la va extrnseca de la fase fluida de la


coagulacin in vivo e in vitro?

La activacin in vivo es mediada por un complejo formado por factor VII,


Ca2+ y factor tisular (factor III) unido a fosfolpidos provenientes de las
membranas celulares rotas y de las plaquetas.

3. Cmo se da la activacin de la va intrnseca de la fase fluida de la


coagulacin in vivo e in vitro?

La va intrnseca se activa por el contacto de las protenas de la


coagulacin con superficies cargadas de negativamente, es decir, el
contacto de la pared del vaso con las partculas de lipoprotena, VLDLs y
quilomicrones. La va intrnseca tambin puede ser activada por el contacto
de la pared del vaso con bacterias.

In vitro, se inicia al contacto de la sangre con clulas diferentes a las


hemticas o con superficies extraas a la vasculatura.
Bibliografia.

1. Montiel-Manzano G. Temas selectos de laboratorio e investigacin en


hematologa. VIII. Hemostasia primaria. Gac Med Mex.
2003;139(Supl 2):95-6.

2. Kordich L, Snchez Avalos JC, de Campos Guerra C, editores. Manual


de hemostasia y trombosis (Grupo CLAHT). 2da. ed. Buenos Aires:
Federacin Bioqumica; 1990.

3. Chord C, Pramp JA. The vascular endothelium: physiopathology and


participation in thrombogenesis. Sangre. 1995 Dec;40(6):491-8.

4. Verstraeten L, Francois P, Dinant JP. The physiology of


primary hemostasis. J Pharm Belq. 1989 Jul-Aug;44(4):302-7.