BIODEGRADACIN DE FENOL Y REMOCIN DE MERCURIO DIVALENTE

POR LA BACTERIA ENTEROBACTER CLOACAE

Rocha Trejo Juana Esthera, Surez Herrera Martha Alicia. Laboratorio de
Biotecnologa, Facultad de Ciencias Qumicas. Universidad Autnoma de Nuevo Len.
Cd. Universitaria. Av. Pedro de Alba s/n. San Nicols de los Garza, Nuevo Len,
Mxico.

Introduccin
El problema de la contaminacin del agua por desechos que contienen fenoles
es muy grave mundialmente, El fenol es un desecho txico industrial, se utiliza
para la preparacin de resinas sintticas, colorantes, medicamentos,
plaguicidas, curtientes sintticos, sustancias aromticas, aceites lubricantes y
solventes

[1]

. La contaminacin del agua por mercurio es producido por

industrias qumicas que producen cloro, plsticos, fbricas de fungicidas y de

pinturas contra hongos, por minas de cinabrio (sulfuro de mercurio, HgS), en la
extraccin de oro y de plata por el mtodo de amalgamacin y por las refineras
del petrleo

[2]

. Se considera que la mitad del mercurio extrado es arrojado al

medio ambiente, una parte en forma de vapor a la atmsfera y otra en los

desechos industriales al suelo y al agua [3]; mientras que el mercurio divalente
afecta de manera desfavorable no solo a la vida acutica, sino que tambin
presenta el fenmeno de magnificacin, en el cul se va acumulando en la
cadena alimenticia. Las bacterias son un grupo de microorganismos que se han
empleado en procesos de degradacin de compuestos txicos. Las bacterias
Gram negativas se adaptan con mayor facilidad a medios de cultivo que
contienen

compuestos

fenlicos

entre

ellas

se

encuentra

la

familia

Enterobacteriaceae [4].

Objetivo
Utilizar microorganismos que realicen simultneamente la biodegradacin y la
remocin de metales pesados, este trabajo evalu la capacidad de la bacteria
Enterobacter cloacae para degradar fenol y mercurio simultneamente.

Materiales y Mtodos
La cepa de Enterobacter cloacae empleada fue aislada de aguas residuales por
cultivo de enriquecimiento. Un 5% de la suspensin de bacterias se adicion a
volmenes de 50 mL de medio de cultivo de caldo de sales basales segn
Castillo C.; 2006 [5], conteniendo 1g/L

de fenol y 0.3g/L de mercurio en

matraces Erlenmeyer de 250 mL. Se incubaron en condiciones aerobias, a una

temperatura de 37 C y 120 rpm durante 24 horas. Se tomaron muestras a
tiempos

regulares

para

determinar

el

crecimiento

bacteriano

por

espectrofotometra a 600 nm, el fenol residual por HPLC segn el mtodo

Alfaro L. y Surez H.; 2006 [6]; y el mercurio residual se analiz por Absorcin
Atmica utilizando una lmpara de ctodo hueco de mercurio, a una longitud de
onda de 253.7 nm. Todos los experimentos se corrieron por triplicado.

Resultados Y Discusin
Efecto de fenol y mercurio en el crecimiento
La degradacin de fenol utilizado como nica fuente de carbono por la cepa
bacteriana Enterobacter cloacae (bacilos Gram negativos no esporulados),
demostraron tener una alta resistencia y adaptacin en medios adicionados con
1 000 ppm de fenol. En los cultivos donde se adicion el fenol el
comportamiento de las curvas de crecimiento cambia con respecto a los
cultivos libres de fenol. Como puede apreciarse en la figura 1 se observa las
distintas fases de crecimiento para y Enterobacter cloacae, en la curva en
ausencia de fenol y mercurio la cepa muestra en las primeras 8 horas una fase
de adaptacin, seguida por la fase de crecimiento exponencial de las 8 a las 14
horas entra en una fase estacionaria de las 14 a las 20 horas y a partir de las
20 horas se aprecia un descenso en la D.O. que correspondera a la fase de
muerte. En los ensayos de Enterobacter cloacae con mercurio, se puede
observar que no hay una fase de adaptacin, que a partir de la primera hora de
incubacin entra a la fase de crecimiento exponencial y esta se prolonga hasta
las 8 horas. De las 9 horas en adelante hay un descenso pronunciado del
crecimiento y no se aprecia una fase estacionaria en la curva entrando directo
a la fase de muerte, obteniendo a las 24 horas un log D.O. igual al valor inicial.
Enterobacter cloacae en presencia de fenol y mercurio no presenta fase de

adaptacin entra de manera directa a la fase exponencial de las 0 a las 3

horas, de las 3 a las 8 horas presenta una fase estacionaria, de las 9 horas en
adelante entra a la fase de muerte, observndose que a partir de las 20 horas
hay un valor de log de D. O. menor al que se tena a las cero horas.

Figura 1. Cintica de crecimiento para la cepa bacteriana Enterobacter cloacae en a) Medio sin
fenol, b) medio adicionado con fenol a 1 000 ppm, c) medio adicionado con mercurio a 300 ppm
y d) medio adicionado con fenol a 1 000 ppm y 300 ppm de mercurio.

Una posible explicacin para el comportamiento en presencia de fenol es que

cuando un cultivo bacteriano que est en la fase de crecimiento exponencial en
un medio de cultivo nutritivo se pone en contacto con una sustancia txica,
puede observarse un efecto bacteriosttico, bactericida o bacterioltico. El
efecto bacteriosttico se observa por inhibicin del crecimiento sin que se
llegue a la muerte del cultivo. Algunos agentes bacteriostticos como los
antibiticos inhiben la sntesis protenica y actan unindose con los
ribosomas. Sin embargo, este enlace no es muy estrecho y cuando disminuye
la concentracin del agente txico, este se libera de los ribosomas y se
presenta nuevamente la proliferacin (crecimiento). Adicionalmente en el medio
de sales el fenol se encuentra como nica fuente de carbono y energa y esto
se ve reflejado por el incremento en crecimiento con relacin al medio donde
este est ausente

Remocin de cromo y mercurio en presencia y ausencia de fenol.

En la figura 2 se muestra el comportamiento de remocin de mercurio por la
cepa Enterobacter cloacae en medio adicionado con mercurio y en presencia y
ausencia de fenol observndose que Enterobacter cloacae tiene una cada en

la concentracin de mercurio las primeras 3 horas. Posteriormente de las 3 a

las 14 permanece en un valor casi constante y de las 15 a las 24 ocurre una
remocin lenta por parte de esta bacteria. Para medio base adicionado con
fenol y mercurio se observa como la remocin es moderadamente lenta. Las
primeras 14 horas de contacto son las que afectan en la remocin del metal, de
las 14 a las 24 horas permanece el valor de la curva de remocin casi
constante.

Figura 2. Curvas de comparacin de la capacidad de remocin de mercurio con respecto al

tiempo por la cepa Enterobacter cloacae a condiciones aerobias, 120 rpm y 37 C en a)
ausencia de fenol y b) en presencia de fenol.

Degradacion de fenol en presencia y ausencia de metales.

Se utiliz la tcnica de HPLC para determinar la variacin de la concentracin
de fenol en ausencia de metales; y en presencia de cromo y mercurio con
respecto al tiempo. En la figura 3 se muestra el comportamiento de la cepa
Enterobacter cloacae para la degradacin de fenol. Se observa que para medio
base adicionado con mercurio afecta en la degradacin en comparacin de
medio adicionado con cromo. Este a su vez presenta el mismo porcentaje de
degradacin que en medio adicionado slo con fenol.

Figura 3. Biodegradacin de fenol, a) en ausencia de metales, b) en medio adicionado con 300

ppm de cromo hexavalente; y c) en medio adicionado con 300 ppm de mercurio respecto al
tiempo por la cepa Enterobacter cloacae a condiciones aerobias, 120 rpm y 37 C

Conclusiones
El fenol contribuye de manera favorable al crecimiento de ambas bacterias,
ayudando a obtener una mejor capacidad de remocin del mercurio. Respecto
a la degradacin de fenol Enterobacter cloacae es mejor degradadora de fenol
en ausencia de mercurio, en presencia del metal se presenta una disminucin
de la degradacin del fenol, esto se debe a que el mercurio afecta de manera
desfavorable el crecimiento de la cepa. Para tener mejores resultados en
cuanto a la degradacin de fenol y la remocin de cromo sera recomendable
trabajar con el consorcio de ambas bacterias.
Agradecimientos
Agradecimientos a la Facultad de Ciencias Qumicas de la Universidad
Autnoma de Nuevo Len por las facilidades para llevar a cabo este proyecto.

Revisin bibliogrfica
1. Surez H, (2004), Aislamiento y caracterizacin de bacterias y hongos
filamentosos degradadores de elevadas concentraciones de fenol y
clorofenoles. Tesis doctoral. La Habana, Cuba pp. 22-36.
2. Esparza,E. et al. (2002).Mtodo para el tratamiento de mercurio tanto
en estado inico como metlico, contenido en soluciones, suspensiones,
en barros biolgicos o industriales y en petrleo. Comisin Nacional de
Actividades Espaciales. (CONAE)

3. eribasi, H., Yetis, . (2000). Biosorption of Ni and Pb by

Phanerochaete chrysosporium from a Binary System Kinetics. Water
SA. Vol. 27, No. 1, pp. 15-20.
4. Cerruti, M., Ortega, I., Palacios, L., (2000). Empresarios y empresas en
el norte de Mxico. Monterrey: del estado oligrquico a la globalizacin.
European Review of Latin American and Caribbean Studies. No. 69, pp.
3-27. Mxico.
5. Castillo, Z., Surez, H., (2007). Estudio de la resistencia a metales
pesados por bacterias degradadoras de fenol. Tesis de Licenciatura,
UANL.
6. Alfaro L, (2006), Oxidacin biolgica de fenol en un reactor discontinuo
usando efluentes sintticos. Tesis de Maestra, UANL. pp. 5-10.