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BIOTECNOLOGIA

ALUMNO:
Eduardo Rodrguez Alvarado

FACILITADOR:
Mariana Samaniego Garca
MATERIA:
Bioquimica
GRUPO:
BI-BBIQ-1501S-B1-002

Actividad 3.
Analisis de lipidos

OBJETIVOS
-Conocer y analizar los mtodos para el anlisis de lpidos en el laboratorio.
-Aprender y conocer sus aplicaciones en el mtodo de HPLC.
INSTRUCCIONES
1.- Investiga el mtodo necesario y procedimiento (practica) para analizar lpidos y
agregar en tu documento la informacin mas relevante.
2.- Investiga acerca del HPLC y sus aplicaciones.
3.- Una vez realizadas las investigaciones anteriores agrega tus conclusiones respecto
a la importancia que tiene el HPLC y los lpidos en la ingeniera en biotecnologa.

INTRODUCCION.
Los lpidos son molculas responsables de la reserva de energa y la formacin de
membranas. Los lpidos pueden ser clasificados en saponificables, es decir capaces de
generar jabn mediante hidrolisis alcalina y los insaponificables.
Mtodos de extraccin y cuantificacin
Mtodo de Soxhlet
Es una extraccin semicontinua con disolvente donde una cantidad de disolvente rodea
la muestra y se calienta a ebullicin, una vez que dentro del Soxhlet (ver Fig. 3) el
liquido condensado llega a cierto nivel es sifoneado de regreso al matraz de ebullicin,
la grasa se mide por prdida de peso de la muestra o por cantidad de muestra
removida. (Nielsen, 1998).

Mtodo de Goldfish
Es una extraccin continua por disolvente donde a la muestra se le hace pasar vapor
de disolvente y la grasa se cuantifica por prdida de peso en la muestra o por grasa
removida. (Nielsen, 1998) Fig. 4. Esquema de extraccin Goldfisch

Mtodo por lotes (en batch)


Se basa en una separacin de fases entre dos disolventes no miscibles. Se sabe que la
sustancia de inters es soluble en uno de ellos. Posteriormente se separa la fase que se
sabe contiene la sustancia y se desecha la otra, se concentra y se obtiene la sustancia.
Este mtodo hace uso de la solubilidad intrnseca de la sustancia a separar; es claro
que un compuesto polar es soluble en un disolvente polar, por tanto el otro disolvente
debe ser no polar. (Hoffman, 1989)
Mtodo de Bligh-Dyer
El mtodo de Bligh-Dyer as como su modificacin por Hanson y Olley proporciona un
mtodo rpido para la extraccin de lpidos de tejidos y productos alimenticios que
contienen una cantidad significativa de agua. El mtodo se basa en la homogenizacin
de la muestra con cloroformo, metanol y agua en proporciones tales que se forme una
sola fase miscible con el agua de la muestra. Al aadir alcuotas de cloroformo y agua
se logra la separacin de fases. El material lpidico se encuentra en la fase no acuosa,
mientras que el material no lpidico se encuentra en la fase acuosa. Los lpidos se
pueden extraer de dos gramos de muestra seca hasta veinte gramos de muestra
hmeda. El contenido de agua de la muestra se ajusta a diecisis mililitros conservar la
proporcin de cloroformo, metanol y agua es esencial si se pretende una separacin de
fases y una extraccin cuantitativa d elididos. La ventaja de este procedimiento es que
las etapas de filtrado y lavado son eliminadas. Sin embargo no es un mtodo muy
cuantitativo y tiene un elevado margen de error para muestras secas de cereales.
(Rossell y Pritchard, 1991)
Mtodo de Rse-Gottlieb.
De acuerdo a este mtodo, la separacin de la grasa es lograda por amoniaco y etanol
con un posterior efecto de deshidratacin sobre los fosfolpidos. La grasa es disuelta en
ter recin destilado y se aade algo de petrleo de tal suerte que se separen algunos
compuestos no lipdicos que se puedan encontrar en la fase etrea. Esta mezcla es
completamente inmiscible en agua de manera que mediante una extraccin adecuada
es simple dejar la grasa en la fase etrea y el residuo graso es pesado. Este mtodo es
particular para leche fresca que no contiene cidos grasos libres, los cuales en
disolucin alcalina forman sales de amonio y esto es insoluble en ter. Esta es la razn

por la cual esto no se aplica a quesos, los cuales si tienen cidos grasos libres.
(Boekenoogen, 1964)

Mtodo de Gerber.
ste, as como los dems mtodos volumtricos presentan un carcter un tanto cuanto
emprico ya que varios factores afectan la gravedad especfica de la grasa separada,
variaciones propias de la grasa, cidos grasos presentes, solubilidad de la grasa en los
disolventes, etc. Con estos mtodos volumtricos la muestra se sita en un butirmetro
y se descompone utilizando cidos o lcalis de manera que la grasa es liberada, esta
se separa por mtodos mecnicos (centrifuga) y se colecta en el cuello calibrado.
(Boekenoogen, 1964)
Mtodo de Mojonnier
La grasa es extrada con una mezcla de ter etlico y ter de petrleo en un matraz de
Mojonnier, la grasa extrada se pone a peso constante y es expresada en porcentaje de
grasa por peso. La prueba de Mojonnier es un ejemplo de extraccin discontinua con
disolvente. Esta extraccin no requiere remover previamente la humedad de la
muestra. (Nielsen, 1998) Fig. 5. Tubos Mojonnier

HPLC y sus aplicaciones


Principios de la tcnica
En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una
columna que contiene a la fase fija. La separacin cromatogrfica en HPLC es el
resultado de las interacciones especficas entre las molculas de la muestra en ambas
fases, mvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto
rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no est limitada por la
volatilidad o la estabilidad trmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas, productos naturales
lbiles, materiales polimricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de
alto peso molecular. Con una fase mvil lquida interactiva, otro parmetro se
encuentra disponible para la selectividad, en adicin a una fase estacionaria activa.

La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor
gama de estas interacciones selectivas y ms posibilidades para la separacin.
HPLC preparativa
Es la tcnica escogida para aislamiento y purificacin de productos de valor en las
industrias qumicas y farmacuticas as como en la biotecnologa y la bioqumica. La
cromatografa preparativa comprende un amplio rango de aplicaciones, desde el
aislamiento de 1g de muestra para identificacin espectroscpica hasta el aislamiento
de un compuesto puro de una mezcla de 100 g.
Aplicaciones
Campos de Aplicacin de HPLC

Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos


Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos
Productos de alimentacin: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas,
aditivos
Productos de la industria qumica: Aromticos condensados, tensoactivos,
propulsores, colorantes
Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos
Medicina clnica: cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina,
estrgenos.

Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa

Separacin y purificacin de metabolitos


Separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas procedentes de
muestras de orina
Purificacin y separacin de enantimeros
Purificacin de compuestos naturales
Purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas

COMENTARIOS
Para los lpidos es importante conocer su estructura, por ejemplo los aceites vegetales
tienen una composicin lipdica variada dependiendo de la fuente de origen y de su
composicin en cidos grasos, lo que se traduce en diferencias nutricionales. Con el
propsito de obtener plantas que produzcan aceites con caractersticas especficas, los
agricultores han impulsado durante aos proyectos de mejoramiento a travs de
tcnicas tradicionales, como la hibridacin o la induccin de mutaciones y han
desarrollado con xito nuevas variedades vegetales. Actualmente, la modificacin por
ingeniera gentica permite cambiar la composicin de cidos grasos y mejorar la
calidad de los aceites vegetales de manera ms rpida y precisa que las tcnicas
tradicionales para as mejorar la dieta de las personas.
El anlisis por medio de la cromatografa se ha convertido en una herramienta
indispensable en la investigacin biotecnolgica. Esta tcnica de separacin debe su
crecimiento a su rapidez, simplicidad, relativo bajo costo y versatilidad. Justamente la

adaptabilidad de la cromatografa de fase reversa permiti el surgimiento de la


cromatografa por supresin inica y la secuencial.

BIBLIOGRAFIA.
1. (Nielsen, 1998) Fundamentos y Tcnicas de Anlisis de Alimentos 12 LABORATORIO
DE ALIMENTOS I FACULTAD DE QUIMICA, UNAM

2. Karger B.L., Snyder L.R. and Horvath C., An introduction to separation


science. John Wiley and Sons, Canada, 1973.
3. Gooding K. and Regnier F., HPLC of Biological Macromolecules, Vol 51,
Chromatographic Science Series, Marcel Dekker Inc., USA, 1990.
4. Hearn M., HPLC of proteins, peptides and polynucleotydes, VCH
Publishers Inc., USA, 1991.