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Bioqumica
2012/2013
Polifenoloxidase
Turma 10
ndice
ndice............................................................................................................................... 2
Resumo............................................................................................................................ 3
Resultados....................................................................................................................... 4
Tabela 1 - Reao A Ao da polifenoloxidase.........................................................4
Tabela 2 - Reao B Natureza qumica da polifenoloxidase.....................................4
Tabela 3 - Reao C Especificidade para o substrato..............................................4
Tabela 4 - Reao D Efeito da concentrao do substrato.......................................4
Tabela 5 - Reao E Efeito da concentrao do enzima..........................................4
Tabela 6 - Reao F Efeito da temperatura.............................................................5
Tabela 7 - Reao G Efeito do pH............................................................................5
Discusso/Concluso........................................................................................................ 6
Reao A Ao da polifenoloxidase (Ver Tabela 1 dos Resultados).............................6
Reao B Natureza qumica da polifenoloxidase (Ver Tabela 2 dos Resultados).........6
Reao C Especificidade para o substrato (Ver Tabela 3 dos Resultados)..................7
Reao D Efeito da concentrao do substrato (Ver Tabela 4 dos Resultados)..........7
Reao E Efeito da concentrao do enzima (Ver Tabela 5 dos Resultados)..............8
Reao F Efeito da temperatura (Ver Tabela 6 dos Resultados).................................8
Reao G Efeito do pH (Ver Tabela 7 dos Resultados)................................................9
Bibliografia..................................................................................................................... 11
Resumo
As polifenoloxidases vegetais so as enzimas responsveis pelo escurecimento
de certos produtos vegetais. Neste trabalho experimental, realizaram-se vrios ensaios
com a principal finalidade de observar, entre outros fatores, a ao destas enzimas
sobre um substrato o catecol (um difenol) e verificar a influncia de alguns fatores na
atividade das mesmas, o que nos permitiu chegar a diferentes concluses a cada
ensaio realizado como, por exemplo, o facto de um enzima ter um pH e uma
temperatura ideal de funcionamento e sempre que as condies so diferentes das
condies ideais o enzima reduz a sua atividade ou desnatura.
Resultados
Aps a realizao do procedimento experimental podemos observar vrias alteraes
no aspeto e cor das solues contidas nos tubos de ensaio, alteraes essas que se
encontram registadas nas tabelas seguintes:
Cor
Composio
Inicial
Laranja escuro
Creme
Incolor
Extrato + Catecol
Extrato + gua
gua + Catecol
Depois da incubao
Vermelho tijolo escuro
Creme
Incolor
Tubo de
Ensaio
Composio
B1
Extrato + Catecol
Laranja escuro
________
B2
Extrato + TCA
Branco opaco
Branco opaco
Branco opaco
B3
Extrato + Cristais de
Feniltioureia
Branco opaco
Branco opaco
Branco mais
opaco
Inicial
Depois da
incubao
Vermelho tijolo
escuro
Cor
Composio
Extrato + Catecol
Extrato + Fenol
Extrato +
Hidroquinona
Inicial
Laranja escuro
Creme
Depois da incubao
Vermelho tijolo escuro
Laranja
Creme
Laranja
Composio
Catecol + gua
Catecol + gua
Catecol + gua
Inicial
Incolor
Incolor
Incolor
Cor
Adio de Extrato
Creme claro
Creme
Creme escuro
Depois da incubao
Vermelho tijolo claro
Vermelho tijolo
Vermelho tijolo escuro
Composio
Extrato + Catecol
Extrato + gua + Catecol
Inicial
Laranja escuro
Laranja claro
Cor
Depois da incubao
Vermelho tijolo escuro
Laranja escuro
Tubo de
Ensaio
Composio
F1
Extrato a 0C
Creme
Creme escuro
F2
Extrato a 37C
Creme
Vermelho tijolo
F3
Extrato a 70C
Creme claro
Inicial
Depois da incubao
Vermelho tijolo
escuro
Vermelho tijolo
escuro
Creme escuro turvo
Composio
HCl
Tampo acetato
Tampo de
fosfatos
Tampo Tris
Incolor
Incolor
Cor
Adio de catecol e
extrato
Esbranquiado
Creme
Incolor
Laranja escuro
Incolor
Vermelho tijolo
Castanho
Inicial
Depois da incubao
Esbranquiado
Creme escuro
Discusso/Concluso
Antes de apresentarmos as concluses acerca das reaes e dos
resultados, consideramos oportuno esclarecer o procedimento levado a cabo
para a preparao do extrato enzimtico. A adio do fluoreto de sdio ao
extrato visou ajudar a retirar o enzima do mesmo. Alm disto, o facto de o
extrato ter permanecido num banho de gelo (aproximadamente 0C) durante
toda a atividade laboratorial teve como objetivo a inibio do polifenoloxidase.
O erlenmeyer tambm permaneceu durante toda a atividade coberto com papel
de alumnio para evitar a desnaturao da protena pela luz.
Outro ponto a salientar o facto de a incubao ter sido a 37C, o que
assegurou de certa forma a viabilidade e aceitao ou no dos nossos
resultados, pois precisamente a esta temperatura que a atividade da enzima
em estudo mxima.
A atividade permitiu tirar concluses relativas ao comportamento do
polifenoloxidase em diversas situaes:
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Bibliografia
M. Dixon, E. C. Webb, Enzymes, 3rd ed.; Longman: London, 1979.
T. Aniszewskl, R. Lieberei, K. Gulewicz, Acta Biol. Crac. Ser. Bot. 2008, 50, 718.
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