SEMINARIO SEMANA N 15

TERAPIA GENICA Y CELULAS MADRE

1. Cules son las 2 caractersticas ms importantes para reconocer una clula
madre?
Explquelas.
Las clulas madre se diferencian de otras clases de clulas del cuerpo. Toda clula madre
sin importar su origen tiene tres caractersticas generales: son capaces de dividirse y
de renovarse por perodos largos; son no especializadas; y pueden dar lugar a tipos
especializados de clula.
Las clulas madre son capaces de dividirse y de renovarse por perodos
largos. Contrariamente a las clulas musculares, a las clulas sanguneas o las
neuronas las cuales normalmente no se dividen para dar clulas hijas-- las
clulas madre pueden replicarse casi en forma indefinida. Cuando las clulas se
replican muchas veces se denomina proliferacin. Una poblacin pequea de
clulas madre que prolifera por muchos meses en el laboratorio puede producir
millones de clulas. Si las clulas hijas continan siendo no especializadas como
la clula madre inicial, las clulas hijas tambin sern capaces de auto renovarse
a largo plazo al igual que las clulas madre de la cual se originaron.
Los factores y las condiciones especficas que permiten que las clulas madre
sigan siendo no especializadas son de primordial inters para los cientficos. A la
comunidad cientfica le ha tomado muchos aos de investigacin y de errores
sistemticos aprender a hacer crecer las clulas madre en el laboratorio sin que se
diferencien espontneamente a diferentes tipos especficos de clulas. Por
ejemplo, tom 20 aos aprender cmo hacer para que las clulas madre
embrionarias humanas crecieran en el laboratorio siguiendo las condiciones del
desarrollo de las clulas madre del ratn.
Las clulas madre son no especializadas. Una de las caractersticas
fundamentales de una clula madre es que no tiene ninguna estructura de tejido
especfica que le permita realizar funciones especializadas.
Una clula madre no puede trabajar con sus clulas vecinas para bombear sangre
a travs del cuerpo (como una clula del msculo del corazn); no puede llevar las
molculas de oxgeno a travs de la circulacin sangunea (como una clula de la
sangre); y no puede encender seales electroqumicas a otras clulas que
permitan que el cuerpo se mueva o hable (como una neurona). Sin embargo, las
clulas madre no especializadas pueden dar lugar a clulas especializadas,
incluyendo las clulas del msculo del corazn, las clulas de la sangre, o las
neuronas.

Las clulas madre pueden dar lugar a clulas especializadas. Cuando las
clulas madre no especializadas dan lugar a las clulas especializadas, el proceso

se llama diferenciacin". Los cientficos estn empezando a entender las

seales interiores y exteriores de las clulas que accionan la diferenciacin de la
clula madre. Las seales internas son controladas por los genes de una clula,
que se entremezclan a travs de filamentos largos de ADN y llevan instrucciones
codificadas y funciones para todas las estructuras de la clula. Las seales
externas para la diferenciacin de la clula incluyen productos qumicos
secretados por otras clulas, el contacto fsico con las clulas vecinas, y ciertas
molculas del micro ambiente en el que se encuentran.

2. Cules son los tipos de clulas madre que existen (segn clasificacin:
totipotentes, pluripotentes, multipotentes, unipotentes)?.

Las clulas madre totipotentes pueden crecer y formar un organismo completo,

tanto los componentes embrionarios (como por ejemplo, las tres capas
embrionarias, el linaje germinal y los tejidos que darn lugar al saco vitelino), como
los extraembrionarios (como la placenta). Es decir, pueden formar todos los tipos
celulares. La clula madre totipotente por excelencia es el cigoto, formado cuando
un vulo es fecundado por un espermatozoide.

Las clulas madre pluripotentes no pueden formar un organismo completo, pero

s cualquier otro tipo de clula correspondiente a los tres linajes embrionarios
(endodermo, ectodermo y mesodermo), as como el germinal y el saco vitelino.
Pueden, por tanto, formar linajes celulares. Se encuentran en distintas etapas
del desarrollo embrionario. Las clulas madre pluripotentes ms estudiadas son
las clulas madre embrionarias que se pueden aislar de la masa celular interna
del blastocisto. En la actualidad se utilizan como modelo para estudiar el desarrollo
embrionario y para entender cules son los mecanismos y las seales que
permiten a una clula pluripotente llegar a formar cualquier clula plenamente
diferenciada del organismo. Las clulas madre germinales son clulas madre
embrionarias pluripotentes que se derivan de los esbozos gonadales del embrin.
Estos esbozos gonadales se encuentran en una zona especfica del embrin
denominada cresta gonadal, que dar lugar a los vulos y espermatozoides.
Hoy se pueden manipular clulas humanas de adulto y generar clulas con
pluripotencialidad inducida (iPS), que se ha visto poseen el mismo potencial de
crecimiento y diferenciacin de las clulas madre embrionarias, e irn sustituyendo
o ampliando con creces las posibilidades biotecnolgicas soadas para las
embrionarias. El compromiso de Shinya Yamanaka, diseador de esta tecnologa y

ganador del premio nobel por su descubrimiento, en relacin con su uso hacia
otros fines, es un ejemplo de la tica y la responsabilidad del investigador y
supone asumir que la ciencia triunfa al servicio del hombre. Las ventajas tcnicas
de las iPS son muchas, las ms importantes son: no inducen rechazo
inmunolgico lo que abre la posibilidad de crear frmacos especficos para un
paciente determinado; no requiere la utilizacin de vulos humanos, la tcnica es
muy fcil de realizarse y su costo es reducido.

Las clulas madre multipotentes son aquellas que slo pueden generar clulas
de su misma capa o linaje de origen embrionario (por ejemplo: una clula madre
mesenquimal de mdula sea, al tener naturaleza mesodrmica, dar origen a
clulas de esa capa como miocitos, adipocitos u osteocitos, entre otras). Otro
ejemplo son las clulas madre hematopoyticas - clulas madre de la sangre que
puede diferenciarse en los mltiples tipos celulares de la sangre.

Las clulas madre unipotentes, tambin llamadas clulas progenitoras son

clulas madre que tiene la capacidad de diferenciarse en slo un tipo de
clulas.12 Por ejemplo las clulas madre musculares, tambin denominadas clulas
satlite slo pueden diferenciarse en clulas musculares.

3. Cules son los tipos de clulas madre que existen (segn clasificacin por
etapa
del
desarrollo:
embrionaria
y
adulta)?
La clula madre por excelencia es el cigoto, formado cuando un vulo es fecundado por
un espermatozoide. El cigoto es totipotente, es decir, puede dar lugar a todas las clulas
del
feto
y
a
la
parte
embrionaria
de
la
placenta.
Conforme el embrin se va desarrollando, sus clulas van perdiendo esta propiedad
(totipotencia) de forma progresiva, llegando a la fase de blstula o blastocisto en la que
contiene clulas pluripotentes (clulas madre embrionarias) capaces de diferenciarse en
cualquier clula del organismo salvo las de la parte embrionaria de la placenta. Conforme
avanza el desarrollo embrionario se forman diferentes poblaciones de clulas madre con
una potencialidad de regenerar tejidos cada vez ms restringida y que en la edad adulta
se
encuentran
en
"nichos"
en
algunos
tejidos
del
organismo.
Las clulas madre son clulas cuyo destino todava no se ha "decidido". Se pueden
transformar en varios tipos de clulas diferentes, a travs de un proceso denominado
"diferenciacin".
En las fases iniciales del desarrollo humano, las clulas madre, en el embrin, son
"diferentes" a todos los tipos de clulas existentes en el organismo -cerebro, huesos,

corazn,

msculos,

piel,.....

Existen diferentes tipos de clulas madres, aunque las ms empleadas en biologa son las
clulas madres embrionarias y las adultas:

Clula madre embrionaria (pluripotentes): Se encuentran en la masa celular

interna del blastocisto. El blastocisto est formado por una capa externa
denominada trofoblasto, formada por unas 70 clulas, y una masa celular interna
constituida por unas 30 clulas que son las clulas madres embrionarias que
tienen la capacidad de diferenciarse en todos los tipos celulares que aparecen en
el organismo adulto, dando lugar a los tejidos y rganos. En la actualidad se
utilizan como modelo para estudiar el desarrollo embrionario y para entender
cules son los mecanismos y las seales que permiten a una clula pluripotente
llegar a formar cualquier clula plenamente diferenciada del organismo.

Clula madre germinales: Se trata de clulas madres embrionarias

pluripotenciales que se derivan de los esbozos gonadales del embrin. Estos
esbozos gonadales se encuentran en una zona especfica del embrin
denominada cresta gonadal, que dar lugar a los vulos y espermatozoides.
Tienen una capacidad de diferenciacin similar a las de las clulas madres
embrionarias, pero su aislamiento resulta ms difcil.
Clulas madres fetales: Estas clulas madres aparecen en tejidos y rganos
fetales como sangre,hgado, pulmn y poseen caractersticas similares a sus
homlogas en tejidos adultos,

Aunque parecen mostrar mayor capacidad de expansin y diferenciacin. Su procedencia

no est del todo clara. Podran tener origen embrionario o bien tratarse de nuevas oleadas
de
progenitores
sin
relacin
con
las
clulas
madres
embrionarias.
* Clula madre adulta: Son clulas no diferenciadas que se encuentran en tejidos y
rganos adultos y que poseen la capacidad de diferenciarse para dar lugar a clulas
adultas del tejido en el que se encuentran, por lo tanto se consideran clulas
multipotenciales. En un individuo adulto se conocen hasta ahora alrededor de 20 tipos
distintos de clulas madre, que son las encargadas de regenerar tejidos en continuo
desgaste (como la piel o la sangre) o daados (como el hgado). Su capacidad es ms
limitada para generar clulas especializadas. Las clulas madre hematopoyticas de
mdula sea (encargadas de la formacin de la sangre) son las ms conocidas y
empleadas en la clnica desde hace tiempo. En la misma mdula, aunque tambin en
sangre del cordn umbilical, en sangre perifrica y en la grasa corporal se ha encontrado
otro tipo de clula madre, denominada mesenquimal que puede diferenciarse en
numerosos tipos de clulas de los tres derivados embrionarios (musculares, vasculares,
nerviosas, hematopoyticas, seas, etc). Aunque an no se ha podido determinar su
relevancia fisiolgica se estn realizando abundantes ensayos clnicos para sustituir

tejidos

daados

(corazn)

por

derivados

de

estas

clulas.

4. En la mdula sea existen una gran variedad de clulas madre. Describa las
Hematopoyticas,
Mesenquimales
y
VSEL.

Clulas

madre

hematopoyticas

(HSC)

Estas clulas son poco frecuentes, que comprende slo 1 / de 10 000 a 1/100 000 de
clulas sanguneas totales, y que parecen ser los ms verstiles en cruzar los lmites de
linaje. CMH se pueden obtener de la mdula sea, sangre perifrica, cordn umbilical, y el
hgado fetal. Durante el desarrollo hay flujo entre los sitios capaces de apoyarlos. En el
adulto, este gira en torno a la mdula sea, con la mayora de las CMH trasplantados
regresar a las cavidades de mdula sea dentro de un da. Recientemente se ha
establecido que las integrinas como receptores VLA-4 y otra de adhesin tales como
CD44 son esenciales en las clulas madre homing a la mdula sea. Los experimentos
que implican apagar el receptor CXCR4 en las clulas madre de mdula sea muestran
que es fundamental en este mecanismo. La quimiocina, factor derivado del estroma 1, es
producida por la mdula sea y se une al receptor CXCR4, activando de este modo
diversas molculas de adhesin celular a travs de sealizacin intracelular. Otro receptor
se cree que participan en el proceso de homing y el injerto es c-kit, que permite a las HSC
a adherirse al estroma a travs de la membrana factor de clulas madre enlazado.
La migracin en la direccin opuesta se puede fomentar experimentalmente usando la
colonia de granulocitos citocina factor estimulante (G-CSF). En la movilizacin de clulas
madre de esta manera, Levesque et al establece que las proteasas derivadas de
neutrfilos son capaces de escindir la molcula de adhesin predominante y las clulas
madre de liberacin de su nicho.
Uno de los pasos ms importantes en la evolucin de la investigacin con clulas madre
fue el descubrimiento de que el sialomucin CD34 es un antgeno de superficie de las
clulas hematopoyticas. Debido a que su expresin es downregulated como las clulas
se vuelven ms maduro y ms diferenciado, CD34 se ha convertido en la caracterstica
distintiva en el aislamiento, contando, y la manipulacin de clulas madre
hematopoyticas. Su funcin, sin embargo, sigue siendo desconocido. Una advertencia
reciente de esta historia ha sido la publicacin de varios estudios que sugieren que
algunos HSC no expresan CD34.

Clulas

madre

mesenquimales

(MSC)

Las clulas madre mesenquimales tambin conocidas como clulas madre estromales o
MSC (del ingls Mesenchymal Stem Cells o Mesenchymal Stromal Cells), son clulas
multipotentes primitivas, con morfologa fibroblastoide, originadas a partir de la capa

germinal mesodermal, con la capacidad de diferenciarse en diversos tipos de clulas,

incluyendo osteocitos (clulas seas), condrocitos (clulas del cartlago), adipocitos
(clulas grasas), mioblastos (precursores de clulas musculosas) cardiomiocitos (clulas
del corazn), neuronas y astrocitos (Clulas gliales) tanto in vivo como in vitro.
En estudios recientes se ha sealado que las MSC pueden ser aisladas de muchos
tejidos, adems de la mdula sea, incluyendo tejido adiposo, hgado, bazo, testculos,
sangre menstrual, fluido amnitico, pncreas, periostio, membrana sinovial, msculo
esqueltico, dermis, pericitos, hueso trabecular, cordn umbilical humano, pulmn, pulpa
dental, e incluso de sangre perifrica, sugiriendo que las MSC son ampliamente
distribuidas in vivo.27 28 En los ltimos aos, el inters ha aumentado por las clulas madre
mesenquimales aisladas de tejido adiposo (AT-MSC) dada su plasticidad de desarrollo y
su potencial teraputico31, adems de que su obtencin es mucho menos invasiva que las
realizada a partir de la mdula sea y se obtienen en mayor abundancia.
En los ltimos aos se han descrito distintos marcadores de superfcie que han permitido
identificar y aislar clulas MSC, tales como SH2, SH3, CD29, CD44, CD71, CD90 y
CD10621. Las MSC no expresan antgenos de superficie tpicos de las HSC, como CD34,
CD45
o
CD14.
A pesar de su probada multipotencialidad mesodrmica y de su habilidad para
diferenciarse a neuroectodermo, las MSC no se diferencian a tejido derivado del
endodermo y, por lo tanto, no se pueden considerar clulas madre pluripotenciales. Las
MSC constituyen un modelo muy til en aplicaciones clnicas para un nmero de
enfermedades, tanto en terapia regenerativa como en terapia gnica.

VSEL

Estas clulas, denominadas clulas madre muy pequeas similares a las embrionarias
(VSELs) en funcin de su tamao (7-8 micras), puede representar un tipo de clulas para
uso en la reparacin cardaca. Son endgenas, autloga, sin modificar, y pluripotentes,
contribuyendo as a combatir la brecha entre los adultos como de embriones fenotipos de
clulas madre. Como las clulas del BLSC y VSEL estn presentes en prcticamente
todos los tejidos adultos, incluyendo los pulmones, el cerebro, los riones, los msculos y
el pncreas, Co- purificacin de las clulas del BLSC y VSEL con otras poblaciones de
clulas madre adultas puede explicar la aparente pluripotencia de las poblaciones de
clulas madre adultas. Son clulas muy pequeas, que tienen caractersticas fsicas muy
parecidas a las encontradas normalmente en las clulas embrinicas, que son capaces de
interactuar con un rgano especfico con el fin de reparar el tejido que ha sido daado o
que
est
enfermo.

5. Qu es un marcador celular? Explicar brevemente la Protena verde

fluorescente (GFP).
La habilidad de distinguir e identificar compartimentos subcelulares es fundamental para
tener un mayor conocimiento de la estructura y funcin de los diferentes orgnulos
celulares, su biognesis y el mantenimiento de las clulas, as como para definir las
diferentes vas de transporte de proteinas, lpidos y otros compuestos en el interior celular.
El procedimiento patentado protege la sntesis y el uso de una serie de marcadores
celulares fluorescentes estables, fciles de utilizar, no txicos y con buena penetracin in
vivo.
La patente describe la preparacin y el uso del marcador fluorescente C2-BDP que
presenta unas caractersticas que proporcionan las
siguientes ventajas frente a otros marcadores
comercializados:

Alta permeabilidad y estabilidad: accede al

interior celular ofreciendo lecturas desde los 15
minutos hasta varios das despus.
Nula toxicidad celular: No altera la viabilidad ni el
crecimiento celular.
Sencillez de uso: por incubacin en el medio de
cultivo.
Amplia gama cromtica: permite la introduccin de diferentes fluorforos

Proteina verde fluorescente:

La protena verde fluorescente (o GFP, por sus siglas en ingls, greenfluorescentprotein)
es
una protena producida
por
la medusaAequorea
victoria,
que
emite bioluminiscencia en la zona verde
del espectro visible. El gen que codifica
esta protena est aislado y se utiliza
habitualmente
en biologa
molecular como marcador.
La estructura de la protena verde
fluorescente se determin en 1996.
Est constituida por 238 aminocidos,
que forman once cadenas beta, cuyo
conjunto forma un cilindro, en el centro
del cual se encuentra una hlice alfa.
La GFP original de la medusa posee dos picos de excitacin: uno menor, a 475 nm, y uno
mayor, a 395nm. Su pico de emisin est a 509 nm, en la zona verde del espectro.

Las protenas fluorescentes, entre las cuales se encuentra la GFP, son muy verstiles y se
utilizan en diversos campos como la microbiologa, ingeniera gentica y fisiologa.
Permiten ver procesos previamente invisibles, como el desarrollo de neuronas, cmo se
diseminan las clulas cancerosas, el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer, el
crecimiento de bacterias patognicas, la proliferacin del virus del SIDA, entre otros.

6. Describa

brevemente

la

tcnica

de

FISH

La tcnica de FISH permite la deteccin y localizacin de secuencias especficas de ADN

sobre
cromosomas,
clulas
o
tejidos
Citogentica
molecular
(hibridacin
"in
situ"
con
fluorescencia)
Las tcnicas de hibridacin in situ con fluorescencia (FISH) se basan en la hibridacin de
una sonda de ADN marcada con una sustancia fluorescente sobre su secuencia
complementaria del genoma, bien en la metafase cromosmica o en el ncleo en
interfase. Las tcnicas de FISH vienen utilizndose desde los aos 8028, si bien no se
han incorporado en todos los laboratorios de gentica como rutina. La alta sensibilidad y
especificidad del FISH y la rapidez de los ensayos han hecho de esta tcnica una
importante estrategia diagnstica con numerosas aplicaciones. Por otra parte, otras
tcnicas derivadas del FISH han progresado hasta tal punto que hoy es posible utilizar
simultneamente 24 sondas de pintado cromosmico, consiguiendo identificar cada
cromosoma por su color. Entre las tcnicas derivadas del FISH convencional, cabe
destacar, la hibridacin genmica comparada (CGH), de enorme utilidad en tumores
slidos y el cariotipo multicolor (SKY-FISH y M-FISH). Todas ellas, constituyen una nueva
disciplina a la que se ha denominado "citogentica molecular", que complementan, pero
nunca excluyen al anlisis citogentico convencional (cariotipo de bandas G).
FISH convencional
Los dos componentes principales de la tcnica de FISH convencional son la sonda de
ADN marcada con fluorescencia y la secuencia diana en la muestra tumoral para la cual
es especfica. Es muy importante destacar que no es una tcnica de bsqueda de nuevas
alteraciones cromosmicas, sino que detecta nicamente aquello que buscamos. El resto
del
genoma
permanece
oculto.
Podemos utilizar sondas de ADN de distintos tipos: centromricas (marcan nicamente las
zonas centrmericas), de pintado cromosmico (marcan todo un cromosoma) o de
secuencias especficas de locus ( marcan regiones cromosmicas de secuencia nica).
Esta tcnica complementa perfectamente a la citogentica convencional en todas aquellas
situaciones en las que no ha sido posible realizar un cariotipo: al disponer de metafases
de poca calidad, o no haber obtenido metafases, o bien en los casos en los que las
alteraciones cromosmicas asociadas a un diagnstico son crpticas no visibles en el
cariotipo, como el caso de la t(12;21) en leucemia aguda linfoblstica infantil.

HIBRIDIZACIN

IN

SITU

FLUORESCENTE

(FISH)

La tcnica de Hibridizacin In Situ Fluorescente (FISH) consiste en la deteccin de

secuencias de ADN con sondas marcadas con fluorescencia sobre cromosomas o
ncleos celulares fijados sobre un portaobjetos, usando para ello un microscopio de
fluorescencia y un sistema de captura y procesamiento de imgenes.
La ventaja de la prueba radica en la rapidez de la misma (resultados entre 24 y 36 horas)
al no necesitar cultivo de clulas, lo que reduce el nivel de ansiedad de los padres.
Tras la hibridacin de las sondas con ncleos en interfase o en metafase es posible
observar la presencia de ganancias, prdidas o fusiones entre genes. Esta metodologa
se usa cada vez ms en el diagnstico de las hemopatas y tambin es de extraordinaria
importancia en el estudio de las alteraciones cromosmicas en el lquido amnitico,
vellosidades coriales, material de abortos espontneos y en sangre de individuos en los
que se sospecha la existencia de una alteracin cromosmica.

7. Describa y grafiquebrevemente el estudio: Cell differentiation: Hepatocytes

from non-hepatic adult stem cells Malcolm R. Alison, Richard Poulsom,
Rosemary Jeffery, Amar P. Dhillon, Alberto Quaglia, Joe Jacob, Marco Novelli,
Grant Prentice, Jill Williamson and Nicholas A. Wright Nature 406, 257 (20 July
2000) doi:10.1038/35018642.
Las clulas madre son clulas indiferenciadas de larga vida que son capaces de muchas
rondas de divisin. Aqu mostramos que las clulas de hgado humano adulto se pueden
derivar de clulas madre de origen en la mdula sea o de circulacin fuera del hgado,
aumentando la posibilidad de que las clulas madre-sistema de la sangre podran ser
utilizadas clnicamente para generar hepatocitos para la sustitucin de tejido daado.

La presencia del cromosoma Y est indicado por un punto de color marrn clara ,
normalmente se encuentra en la periferia nuclear . una , los hepatocitos fueron
identificados por sus grandes ncleos redondos y grnulos citoplasmticos y eran
cromosoma Y - positivo en los controles masculinos . b , tambin se detect el
cromosoma Y en los conductos biliares ( D ) en los controles masculinos. c , Un conducto
biliar cromosoma Y - negativo rodeado de numerosas clulas inflamatorias Y- positivos en
un hgado femenino trasplantados en varones . D , La inmunodeteccin de dos - positiva
para el cromosoma Y las clulas (flechas) ubicados en una placa de hepatocitos
delineado por citoqueratina - 8 inmunotincin ( rojo ) a partir de un paciente que haba
recibido mdula sea masculina . e- g , la deteccin del cromosoma Y en los hgados
trasplantados en receptores femeninos masculinos ; correos , dos hepatocitos cromosoma
Y - positivos (flechas) en una placa de hepatocitos al borde de un sinusoide ( S ) , tenga
en cuenta el punto de color marrn , lo que demuestra que el cromosoma Y es fcilmente
distinguible de la nucleolo azul , f , g , secciones consecutivas de un grupo de cuatro
ncleos de hepatocitos , que muestra F , uno de los hepatocitos del cromosoma - positiva
(flecha , y la insercin con un aumento de 2 veces ) , y G , su citoqueratina - 8
inmunoreactividad . Las barras de escala , 10 mum

8. Describa y grafique brevemente el estudio Chimerism of the transplanted

heart. De Quaini F, Urbanek K, Beltrami AP, Finato N, Beltrami CA, NadalGinard B, Kajstura J, Leri A, Anversa P. N Engl J Med 2002 Jan 3;346(1):5-15.
ANTECEDENTES:
Los casos en que un paciente varn recibe un corazn de un donante femenino ofrecen
una oportunidad inusual para probar si las clulas primitivas translocan desde el receptor
al injerto y si las clulas con las caractersticas fenotpicas de los del receptor residen en
ltima instancia, en el corazn de un donante . El cromosoma Y puede ser utilizado para
detectar las clulas no diferenciadas migrados que expresan antgenos de clulas madre
y para discriminar entre clulas primitivas derivados del destinatario y los derivados de la
donante .
MTODOS:
Se examinaron muestras de las aurculas del destinatario y las aurculas y los ventrculos
del injerto por fluorescencia de hibridacin in situ para determinar si los cromosomas Y
estuvieron presentes en ocho corazones de donantes femeninos implantados en
pacientes de sexo masculino . Tambin se investigaron las clulas primitivas que llevan
cromosomas Y que expresan c-kit , MDR1 , y Sca - 1 .
RESULTADOS:
Los miocitos , arteriolas coronarias y vasos capilares que tenan un cromosoma Y hacen
un 7 a 10 por ciento de aquellos en los corazones de donantes y fueron altamente
proliferativo . En comparacin con los ventrculos de los corazones de control , los
ventrculos de los corazones transplantados haban aumentado notablemente el nmero
de clulas que fueron positivas para c- kit , MDR1 , o Sca - 1 . El nmero de clulas
primitivas fue mayor en las aurculas de los anfitriones y las aurculas de los corazones de
donantes que en los ventrculos de los corazones de donantes , y de 12 a 16 por ciento de
estas clulas contena un cromosoma Y . Las clulas no diferenciadas fueron negativas
para los marcadores de origen de la mdula sea . Se identificaron las clulas
progenitoras que expresan MEF2 , GATA - 4 , y nestina (que identifican las clulas como
miocitos ) y Flk1 (que identifica las clulas como las clulas endoteliales) .
CONCLUSIONES:
Nuestros resultados muestran un alto nivel de quimerismo cardiaco causado por la
migracin de clulas primitivas del destinatario para el corazn injertado . Se identificaron
las clulas madre putativos y las clulas progenitoras en el miocardio de control y en el
aumento de los nmeros en los corazones trasplantados .

Corazones de pacientes varones que reciben corazones femeninos fueron estudiados por
microscopa confocal al menos un ao despus del trasplante. Se us tincin de
lectinaUlexeuropaeus (rojo) para identificar endotelio, e Y cromosoma hibridacin in situ
fluorescente (verde) se utiliz para identificar clulas derivadas de fuentes extracardiacas.
Los cardiomiocitos fueron visibles debido a la autofluorescencia de las miofibrillas. Tres
clulas endoteliales dentro de un nico vnula son Y + (flechas). Un nico cardiomiocitos
Y + se muestra (punta de flecha). Como se describe en el texto, el quimerismo endotelial
era comn, mientras que el quimerismo de los cardiomiocitos era rara. Fotografa de E.
Minami.

9. Describa y grafique brevemente el estudio: Allogeneic mesenchymal stem

cells restore cardiac function in chronic ischemic cardiomyopathy via trilineage
differentiating
capacity
PNAS
2009
106
(33)
14022-14027;
doi:10.1073/pnas.0903201106, vol. 106 no. 33, p. 1402227.
El mecanismo (s) efectos reparadores cardacos subyacentes de clulas derivadas de la
mdula sea-madre mesenquimales (MSC) siguen siendo muy controvertida.Aqu hemos

probado la hiptesis de que las MSC regenerar el miocardio crnicamente infartado a

travs de mecanismos que comprenden injerto a largo plazo y la diferenciacin
trilinaje.Doce semanas despus de infarto de miocardio, cerdos hembra recibi
inyecciones transendocrdica basados en catter de placebo (n = 4) o las MSC
alognicas macho (200 millones de dlares, n = 6).Animales sometieron a imgenes por
resonancia magntica cardiaca en serie, y en el destino de clulas in vivo se determin
mediante la co-localizacin de (Y (POS)) clulas con marcadores de msculo cardiaco,
vascular y linajes endoteliales Y-cromosoma.MSC implantadas en zonas de infarto y de
frontera y diferenciarse en cardiomiocitos comprobado por co-localizacin con GATA-4,
Nkx2.5, y actina alfa sarcomrica.Adems, Y (POS) MSC exhibieron msculo liso vascular
y la diferenciacin de clulas endoteliales, lo que contribuye a la formacin de grandes y
pequeos vasos.El tamao del infarto se redujo de 19,3 + / - 1,7% a 13,9 + / - 2,0% (P
<0,001), y la fraccin de eyeccin (EF) aument de 35,0 + / - 1,7% a 41,3 + / - 2,7% (P
<0,05) en MSC pero no cerdos placebo durante 12 semanas.Esto fue acompaado por el
aumento de la contractilidad regional y el flujo sanguneo miocrdico (MBF),
particularmente en la zona fronteriza del infarto.Es importante destacar que, el MSC
injerto correlaciona con la recuperacin funcional de la contractilidad (R = 0,85, P <0,05) y
MBF (R = 0,76, P <0,01).En conjunto, estos resultados demuestran la supervivencia a
largo plazo del MSC, el injerto, y la diferenciacin trilinaje despus del trasplante en el
miocardio cicatrizado crnicamente.MSC son una clula madre adulta con la capacidad
para cardiomyogenesis y la vasculognesis que contribuyen, al menos en parte, a su
capacidad para reparar el miocardio cicatrices crnicamente.

10. Cules son las diferencias entre:

a. Terapia Regenerativa: Regeneracin rganos y tejidos
b. Ingeniera de Tejidos: Reemplazo de rganos y tejidos slidos
c. Terapia Gnica: Implante clulas manipuladas genticamente?
Explique brevemente cada una.
TERAPIA GENICA

La terapia gnica consiste en la insercin de genes en las clulas de un individuo y de

los tejidos para tratar una enfermedad, como una enfermedad hereditaria en la que se
sustituye un alelo mutante perjudicial con un funcional. Aunque la tecnologa est todava
en su infancia, se ha utilizado con cierto xito. Los avances cientficos continan
avanzando hacia la terapia gentica la medicina convencional.
Los cientficos iniciaron el paso lgico de tratar de introducir genes directamente en las
clulas humanas, centrndose en las enfermedades causadas por defectos del solo gen,
como la fibrosis qustica, la hemofilia, la distrofia muscular y anemia de clulas
falciformes. Sin embargo, esto ha resultado ms difcil de modificar que las bacterias,
sobre todo debido a los problemas planteados en la realizacin de grandes secciones de
ADN y su entrega en el sitio correcto en el genoma relativamente grande. Hoy en da, la
mayora de los estudios de terapia gentica estn dirigidos a cncer y enfermedades
hereditarias vinculadas a un defecto gentico. Antisentido la terapia no es estrictamente
una forma de terapia
gnica, pero es una
relacin, mediada por
la terapia gentica.

INGENERIA
TEJIDOS

DE

La ingeniera de tejidos
constituye
una
disciplina relativamente
nueva y un campo de
investigacin y desarrollo interdisciplinario que aplica los conocimientos de la
bioingeniera, ciencias de la vida, qumica fsica y biologa, para resolver problemas
clnicos y quirrgicos asociados a la prdida de tejidos o al fallo funcional de rganos.
Las especies normalmente implicadas en la ingeniera de tejidos son clulas vivas, as
como sus componentes extracelulares que participan en el desarrollo de dispositivos que
permitan y estimulen o favorezcan la reparacin o restauracin de un rgano o tejido
daado. La idea de utilizacin de sustitutos de componentes o tejidos biolgicos para
reparar o reemplazar elmentos daados es tan antigua como la historia misma.
La ingenera de tejidos se basa en la utilizacin de biomateriales con las caractersticas
mencionadas para los materiales de tercera generacin, es decir, bioactivos y
bioabsorbibles, y capaces de estimular la respuesta celular y molecular de forma
controlada, para que actuen como soportes temporales en la reparacin de defectos

seos. Dentro de esta rea existen dos tendencias principalmente, la primera consiste en
el desarrollo de andamios tridimensionales acelulares, que servirn para alojar las
diferentes clulas una vez implantados in vivo. La segunda tendencia consiste en el
desarrollo de andamios tridimensionales, que inicialmente son colonizados por las clulas
progenitoras bajo condiciones in vitro, y luego son implantados en el paciente para
reemplazar el tejido daado.
Caractersticas

Lo ideal sera obtener un biopolmero:

Biocompatible
No presente ningn tipo de reaccin biolgica adversa
Reabsorbible
Que se degrade de forma paulatina a medida que se forma el nuevo tejido,
transfiriendo as las cargas de forma progresiva.
Productos de degradacin fcilmente eliminables y no-txicos.

MEDICINA REGENERATIVA: DEFINICIONES

La medicina regenerativa es una rama de la medicina que se ha desarrollado
considerablemente en los ltimos aos. Los avances en este campo se han vinculado
estrechamente con los nuevos conocimientos adquiridos sobre las clulas madre y su
capacidad de convertirse en clulas de diferentes tejidos. Esto produjo inicialmente cierta
confusin que llev a considerar la medicina regenerativa como una nueva disciplina,
cuando en realidad lo nuevo eran los crecientes conocimientos adquiridos en los ltimos
aos sobre la biologa y potencialidades de las clulas madre, ya sean las embrionarias o
las adultas. Los nuevos conocimientos contribuyeron significativamente a calificar a las
clulas madre humanas como el pilar central de la medicina regenerativa y que
significara una sustancial renovacin de este tipo de medicina, que algunos han valorado
como nueva medicina regenerativa, pero que por sus antecedentes histricos, no se debe
considerar como una nueva disciplina.
Otro aspecto de inters, es que a medida que han ido aumentando los conocimientos en
este campo han ido apareciendo diferentes definiciones de la medicina regenerativa, y
aunque todas tienen en mayor o menor grado elementos comunes, recientemente se ha
sealado la necesidad de una definicin que sea corta, prctica y refleje integralmente las
funciones de esta medicina.
Entre otras definiciones que se han hecho de la medicina regenerativa estn las
siguientes:

Se utiliza con frecuencia como sinnimo de ingeniera de tejidos, aunque la

medicina regenerativa pone ms nfasis en el uso de clulas madre para producir
tejidos.
Es la rama de la bioingeniera que se sirve de la combinacin de clulas, mtodos
de ingeniera de materiales y bioqumica para mejorar o remplazar funciones
biolgicas. En la prctica, el trmino est ntimamente relacionado con las
aplicaciones para reparar o remplazar parcial o totalmente tejidos.
Es esencialmente una emergencia de la aplicacin de clulas madre y de la
biologa del desarrollo. Es un campo con un rpido avance que abre nuevas y
excitantes oportunidades con la aplicacin de metodologas y tecnologas
completamente revolucionarias.
Se refiere a la investigacin de tratamientos que restauren partes del organismo
adulto. Hay 3 estrategias para la aplicacin de futuros tratamientos: la
administracin de clulas madre o de clulas progenitoras, la induccin de
sustancias, y el trasplante de rganos y tejidos obtenidos in vitro.
Esta disciplina mdica se ha basado fundamentalmente en los nuevos
conocimientos sobre las clulas madre y en su capacidad de convertirse en

clulas de diferentes tejidos. Ella se apoya en los mismos factores que el

organismo emplea para su autorreparacin.
Puede resumirse como los tratamientos que buscan la restauracin de estructuras
y funciones daadas y por esta definicin incluye al trasplante de rganos slidos.

LINKOGRAFA

http://www.misangretusangre.com/sanguinea/celulas_madre.xhtml
http://www.cfnavarra.es/salud/anales/textos/vol26/n3/colaba.htm
http://www.hayalternativas.org/noticias/?cat=8
http://www.sobrecelulasmadre.com/celulas-madre-embrionaria.html
http://www.sobrecelulasmadre.com/celulas-madre-adultas.html
http://www.umich.edu/Es/news/08/stemcellsqa.php
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/007120.htm
http://www.ugr.es/~eianez/Biotecnologia/clonembrion.htm#_Toc3643838
http://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lula_madre#Tipos_de_c.C3.A9lulas_madre
http://www.bionetonline.org/castellano/content/sc_cont1.htm

 http://tecnologiauib.com/es/portfolio/show/marcador-celularfluorescente/27
http://www.intag.org/pages/ciencia/ciencia_022.php..(Revisar)

http://www.nature.com/nature/journal/v406/n6793/abs/406257a0.html
http://www.cladest.org.ar/publicaciones/articulos/celulas_madres.pdf
http://www.brazzini.com.pe/celmadrepreguntas.htm
http://www.mincyt.gov.ar/documentos/comision_celulas_madre/preguntas_celulas_
madre.pdf
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11777997
http://www.nature.com/nbt/journal/v23/n7/fig_tab/nbt1117_F2.html

BIBLIOGRAFIA DE LA REFERENCIA BIBLIOGARFICA PROPUESTA EN EL

CUESTIONARIO
1. Department of Histopathology, Imperial College School of Medicine, Hammersmith
Campus, London W12 0NN, UK
2. Histopathology Unit, Imperial Cancer Research Fund, London WC2A 3PX, UK
3. Department of Histopathology, Royal Free Campus, Royal Free and University
College School of Medicine, London NW3 2PF, UK
4. Department of Haematology, Royal Free Campus, Royal Free and University
College School of Medicine, London NW3 2PF, UK
5. Department of Histopathology, University College London, London WC1E 6JJ, UK
6. Human Cytogenetics Laboratory, Imperial Cancer Research Fund, London WC2A
3PX, UK