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LAB.

BIOLOGIA CELULAR
PRACTICA XIII
PROTENAS
FUNDAMENTO
Las protenas son compuestas de carbono, oxigeno hidrogeno y nitrgeno. La mayora de ellas contienen
adems azufre, y algunos fsforos. Sus molculas son de proporciones coloidales, todas son muy complejas
molecularmente y tienen alto peso molecular. La molcula proteica esta compuesta de una combinacin de
aminocidos por condensacin. Las pro teosas, peptonas, pptidos y aminocidos son derivados de las
protenas formados en sntesis e hidrlisis.
Hay ciertas reacciones coloreadas que dan las protenas y dependen de los aminocidos presentes en la
molcula proteica. Todas dan la reaccin de BIURET. Esta es debida al grupo NH CO. Las que contienen
tirosina dan las reacciones Xantoproteica y de Millon, las que contienen triptofano dan la reaccin de este
nombre, y las que contienen cistina dan la reaccin de la cistina (azufre).
OBJETIVO
Ver la presencia de protenas y su importancia dentro de los organismos vivos y su mecanismo de accin a
nivel molecular.
GENERALIDADES
Las protenas Son biomolculas formadas bsicamente por carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno.
Pueden adems contener azufre y en algunos tipos de protenas, fsforo, hierro, magnesio y cobre entre otros
elementos.
Pueden considerarse polmeros de unas pequeas molculas que reciben el nombre de aminocidos y seran
por tanto la monmera unidad. Los aminocidos estn unidos mediante enlaces peptdico.
La unin de un bajo nmero de aminocidos da lugar a un pptido; si la n: de aa. Que forma la molcula no es
mayor de 10, se denomina oligopptido, si es superior a 10 se llama polipptido y si la n: es superior a 50 aa.
Se habla ya de protena.
LOS AMINOCIDOS
Los aminocidos se caracterizan por poseer un
Grupo carboxilo (COOH) y un grupo amino (NH2).

Las otras dos valencias del carbono se saturan con un tomo de H y con un grupo variable denominado
radical R.
Segn ste se distinguen 20 tipos de aminocidos.
ESTRUCTURA DE LAS PROTENAS
La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles estructurales denominados: estructura
primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y estructura cuaternaria. Cada una de estas estructuras
informa de la disposicin de la anterior en el espacio.
ESTRUCTURA PRIMARIA
La estructura primaria es la secuencia de aa. De la protena. Nos indica qu aas. Componen la cadena
polipeptdica y el orden en que dichos aas. se encuentran. La funcin de una protena depende de su secuencia
y de la forma que sta adopte.

ESTRUCTURA SECUNDARIA
La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio. Los aas., a medida
que van siendo enlazados durante la sntesis de protenas y gracias a la capacidad de giro de sus enlaces,
adquieren una disposicin espacial estable, la estructura secundaria.
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Existen dos tipos de estructura secundaria:


la a(alfa)hlice
la conformacin beta
Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la estructura primaria. Se debe a la
formacin de enlaces de hidrgeno entre el C=O de un aminocido y el NH del cuarto aminocido que le
sigue.

En esta disposicin los aas. No forman una hlice sino una cadena en forma de zigzag, denominada
disposicin en lmina plegada.
Presentan esta estructura secundaria la queratina de la seda o fibrona.
ESTRUCTURA TERCIARIA
La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un polipptido al plegarse
sobre s misma originando una conformacin globular.
En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por tanto la terciaria..

Esta conformacin globular facilita la solubilidad en agua y as realizar funciones de transporte, enzimticas,
hormonales, etc.

Esta conformacin globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces entre los radicales R de los
aminocidos.
Aparecen varios tipos de enlaces:
el puente disulfuro entre los radicales de aminocidos que tiene azufre.
los puentes de hidrgeno
los puentes elctricos
las interacciones hidrfobas.
ESTRUCTURA CUATERNARIA
Esta estructura informa de la unin, mediante enlaces dbiles (no covalentes) de varias cadenas polipeptdicas
con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas polipeptdicas recibe el
nombre de protmero.

El nmero de protmeros vara desde dos como en la hexoquinasa, cuatro como en la hemoglobina, o
muchos como la cpsida del virus de la poliomielitis, que consta de 60 unidades protecas.
PROPIEDADES DE PROTEINAS
Especificidad.

La especificidad se refiere a su funcin; cada una lleva a cabo una determinada funcin y lo realiza porque
posee una determinada estructura primaria y una conformacin espacial propia; por lo que un cambio en la
estructura de la protena puede significar una prdida de la funcin.Adems, no todas las proteinas son iguales
en todos los organismos, cada individuo posee protenas especficas suyas que se ponen de manifiesto en los
procesos de rechazo de rganos transplantados.
Desnaturalizacin.

Consiste en la prdida de la estructura terciaria, por romperse los puentes que forman dicha estructura. Todas
las protenas desnaturalizadas tienen la misma conformacin, muy abierta y con una interaccin mxima con
el disolvente, por lo que una protena soluble en agua cuando se desnaturaliza se hace insoluble en agua y
precipita.
CLASIFICACIN DE PROTENAS
Se clasifican en:
HOLOPROTENAS
Formadas solamente por aminocidos
HETEROPROTENAS
Formadas por una fraccin protenica y por un grupo no protenico, que se denomina "grupo prosttico
HOLOPROTENAS

Globulares

Prolaminas: Zena (maza),gliadina (trigo), hordena (cebada)


Gluteninas: Glutenina (trigo), orizanina (arroz).
Albminas: Seroalbmina (sangre), ovoalbmina (huevo), lactoalbmina
(leche)
Hormonas: Insulina, hormona del crecimiento, prolactina, tirotropina
Enzimas: Hidrolasas, Oxidasas, Ligasas, Liasas, Transferasas...etc.

Fibrosas

Colgenos: en tejidos conjuntivos, cartilaginosos


Queratinas: En formaciones epidrmicas: pelos, uas, plumas, cuernos.
Elastinas: En tendones y vasos sanguneos
Fibronas: En hilos de seda, (araas, insectos)

HETEROPROTENAS
Glucoproteinas

Ribonucleasa
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Mucoprotenas
Anticuerpos
Hormona luteinizante
Lipoprotenas

De alta, baja y muy baja densidad, que transportan lpidos en la


sangre.

Nucleoprotenas

Nucleosomas de la cromatina
Ribosomas

Cromoprotenas

Hemoglobina, hemocianina, mioglobina, que transportan oxgeno


Citocromos, que transportan electrones

FUNCIONES Y EJEMPLOS DE PROTENAS

Como las
glucoproteinas
que
forman
parte de
las
membranas.
Las
histonas
que
forman
parte de
los
cromosomas
Estructural
El
colgeno,
del tejido
conjuntivo
fibroso.
La
elastina,
del tejido
conjuntivo
elstico.
La
queratina
de la
epidermis.
Son las ms
numerosas y
especializadas.
Enzimatica Actan como
biocatalizadores
de las reacciones
qumicas
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Hormonal

Insulina
y
glucagn
Hormona
del
crecimiento
Calcitota
Hormonas
tropas

Defensiva

Inmunoglobulina
Trombina
y
fibringeno

Transporte

Hemoglobina
Hemocianina
Citocromos

Reserva

Ovo
albmina,
de la
clara de
huevo
Gliadina,
del grano
de trigo
Lacto
albmina,
de la
leche

METODO
En las siguientes reacciones puede usarse albmina desecada preparar una solucin de ovo albmina
agitando una pequea cantidad de polvo con agua.
REACCIN DE BIURET
Aadir 10 gotas de solucin de hidrxido de sodio y luego UNAS gotas de solucin dbil 3 gotas de
sulfato de cobre. se produce un color violeta (una reaccin similar SE obtiene con el Biuret, sustancia
obtenida calentando la urea de ah el nombre de esta reaccin, pero las protenas no contienen Biuret.
Ejecutar la prueba de Biuret con una solucin acuosa de peptona. Se obtiene un color rosado.
REACCIN XANTOPROTEICA
Aadir 2 gotas de cido ntrico a 2ml de albmina. Se obtiene un precipitado blanco. Calentar. Se
vuelve amarillo enfriar bajo el grifo y aadir exceso de 610 gotas de hidrxido de amonio de o.88 %
se vuelve naranja.
REACCIN DE MILLON
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Aadir 2 gotas de de reactivo de MILLON (es una mezcla de nitrato mercuroso y mercurio en cido
ntrico). Se obtiene un precipitado blanco. Hervir. Se vuelve rojo.
REACCIN DEL TRIPTOFANO
Aadir en exceso de cido actico glacial que ha sido expuesto a luz (y por tanto contiene cido
glioxilico, del que depende la reaccin).
Luego mediante un tubo de ensaye aadir cuidadosamente sulfrico concentrado. Se forma un anillo
morado en la superficie de separacin (el color del anillo es muy leve, observar cuidadosamente).
REACCIN DE ARGININA
Aadir 2 gotas de de hidrxido de sodio seguido de unas gotas de alfanaftol alcohlico y luego unas
3 gotas de hipoclorito de sodio. Se forma un color rojo.
REACCIN DE CISTINA
Aadir 2 gotas de solucin de acetato de plomo. Se obtiene un precipitado. Aadir suficiente solucin
de hidrxido de sodio para disolver este y luego hervir. La solucin se torna pardo obscura (debido a
la formacin de sulfuro de plomo).
REACCIN DE MOLISCH
Aadir unas gotas de alfa naftol alcohlico y agitar. Luego echar cuidadosamente con un embudo de
separacin (el color del anillo formado es muy leve, observar cuidadosamente). Esta es una reaccin
debida a la presencia de un grupo hidrocarbonato en la molcula proteica.
MATERIAL REACTIVOS
Tubos de ensayo Sol. De ovo albmina
Bao Maria Hidrxido de sodio
Sulfato de cobre 1%
Ac. Ntrico conc.
Hidrxido de amonio de 0.88%
Reactivo de Milln
Ac. Actico glacial
Beta naftol alcohlico
Hipoclorito de sodio
Acetato de plomo
Ac, sulfrico conc.

OBSERVACIONES
REACCIN DE BIURET
La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace
peptdico ( CO NH ) que se destruye al liberarse los aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja
denominada Biuret, de frmula:

Debido a dicha reaccin fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre mas ovo albmina
precipito a una coloracin violeta. Quedando en el fondo del tubo una tonalidad azul cielo reaccin positiva.
A los 2 ml de peptona se le agregaron 2 gotas del reactivo de Biuret
Precipitando a una coloracin amarilla la reaccin nos torna negativa al no haber presencia de protenas.
B) REACCIN XANTOPROTEICA
Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son
tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con
aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada
la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.
En el caso de esta reaccin nuestro tubo arrojo un precipitado blanco con grumos.
C) REACCIN DE MILLON
Los compuestos mercricos en medio fuertemente ntrico (reactivo de Millon) se condensan con el grupo
fenlico del aminocido tirosina, formando complejos de color rojizo.
El precipitado se torno blanco lechoso y se separo la parte blanca que dando bajo del tubo y arriba de el
reactivo de Millon.
D) REACCIN DEL TRIPTOFANO
El grupo indol del aminocido triptfano se condensa con el cido glioxlico del reactivo, formando
compuestos coloreados. El agregado de una pequea cantidad de cido sulfrico concentrado puro, aumenta la
sensibilidad de la reaccin.
En este caso el precipitado fue la formacin de un anillo color morado en la superficie de separacin,
reaccin positiva.
E) REACCIN DE ARGININA
El grupo guanidino del aminocido arginina se condensa con el alfanaftol del reactivo, y luego forma un
complejo coloreado con el hipoclorito de sodio. La reaccin nos precipito a un rojo ladrillo. Reaccin
positiva.

F) REACCIN DE LA CISTINA
Esta reaccin dar positiva con aquellos aminocidos que presenten azufre en su estructura, como son la
cistina, la cisteina y la metionina. La reaccin consiste en someter la muestra a una hidrlisis alcalina con
hidrxido de sodio.
RSH + 2 NaOH

ROH + SNa2 + H2O

De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre para reaccionar con el acetato de plomo
SNa2 + (CH3COO)2 Pb 2 CH3COONa + SPb (precipitado)
Al contacto con el acetato de plomo se forma una precipitacin lechosa al agregar hidrxido de sodio la
precipitacin formada desaparece. Al contacto del bao Maria la coloracin cambia a pardo.
G) REACCIN DE MOLISCH
Todos los Glcidos por accin del cido sulfrico concentrado se deshidratan formando compuestos
furfricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos compuestos furfricos
reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (solucin alcohlica de alfanaftol).
Al contacto con la albmina se obtuvo un precipitado blanco sin juntarse las sustancias al contacto con el
agua caliente empieza a tornarse una coloracin amarillo huevo en forma de una bolita amarilla dejamos
en bao Maria hasta lograr el precipitado rojizo reaccin positiva.
ESQUEMAS

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CONCLUSIONES
Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas
soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los
700C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes
indicados, que al actuar sobre la protena la desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y
cuaternaria.

BIBLIOGRAFA
Murray, R. Et al (1997): BIOQUIMICA DE HARPER; Editorial El Manual Moderno. Mxico.
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Curts Barnes (1994): BIOLOGIA. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires.


De RobertisHib (1998): FUNDAMENTOS DE BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR. El ateneo.
Buenos Aires
Castro et al (1996): Actualizaciones en Biologa. Eudeba. Buenos Aires.

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