CULTIVOS MICROBIANOS

CULTIVO EN SISTEMA CERRADO /

CULTIVO EN SISTEMA ABIERTO

CULTIVO EN SISTEMA CERRADO

Tambin

llamado cultivo en medio no

renovado
Crecimiento en un volumen fijo de medio de
cultivo
Condiciones constantes al principio de la
fase log, pero al aumentar el # de clulas
cambian las condiciones del medio,
afectando el crecimiento poblacional

Fase
estacionaria
Fase Log o
exponencia
l

Fase
Lag

Fase de
muerte o
declinacin
logartmica

CULTIVO EN SISTEMA ABIERTO

Tambin

llamado cultivo
continuo o cultivo en medio
renovado
Cultivo en que se aade
constantemente medio fresco y
se retira constantemente medio
usado estado de equlibrio
Ej. Quimiostato y turbidostato

 Permite

controlar independientemente
la velocidad de crecimiento y la
densidad de la poblacin.
Usos
Experimentos fisiolgicos (poblacin
constante en fase log)
Ecologa microbiana (competitividad por
nutrientes a baja concentracin)

 Quimiostato:

se

alimenta un
recipiente de
cultivo con un
medio estril a la
misma velocidad
con que se gasta
el medio que
contiene los
microorganismos

MEDICIN DE CRECIMIENTO

El

crecimiento de poblaciones se
mide por:
Estimando

los cambios en el # de

clulas
Cantidad de algn compuesto
celular
Peso total seco de las clulas
Hay

mtodos directos e indirectos

MTODOS DIRECTOS
RECUENTO

DE CLULAS

TOTALES:
Recuento

directo seco (en

portaobjetos)
Recuento directo lquido (en
cmaras de recuento)

Ventajas

Rpido
Econmico
Sencillo

Desventajas

No diferencia entre clulas

vivas y muertas
Difcil contar clulas
pequeas
Si no se puede teir requiere
de microscopio de contraste
de fases
No adecuado para bajas
densidades celulares (< 106
clulas/mL)

MTODOS DIRECTOS
RECUENTO

DE CLULAS VIABLES:

Tambin llamado recuento en placa o

recuento de colonias
Consiste en cuantificar el # de clulas de la
muestra que son capaces de formar colonias en
un medio slido adecuado
Se asume que cada clula viable puede formar
una colonia
Resultado se expresa en UFC/mL

MTODO DE EXTENSIN EN
PLACA

MTODO POR VERTIDO EN

PLACA

CMARA DE QUEBEC

Equipo
compuesto
por una lupa,
iluminacin y
recuadros
de medidas
definidas
para facilitar
el recuento
de las
unidades
formadoras
de colonias
(UFC/mL)

CONTADORES MODERNOS

[ ] clulas podran generar colonias

fusionadas y alterara el recuento
[ ] clulas no permitira un clculo
estadsticamente significativo
Recuento debe oscilar de 30 a 300 UFC

dilucin de suspensiones
celulares

.filtracin por membrana:

MTODOS INDIRECTOS
MEDIDA

DE TURBIDEZ
Una suspensin bacteriana aparece
turbia porque las clulas dispersan la
luz que atraviesa la suspensin
#clulas dispersin de luz
turbidez
Medicin por fotmetro o
espectrofotmetro
Requiere de curva estndar

 DETERMINACIN

DE CONTENIDO

DE NITRGENO
Las bacterias contiene aprox. 14%
nitrgeno (peso seco)
Mtodo de anlisis qumico cuantitativo
para determinar el contenido de nitrgeno
y relacionarlo con la cantidad de clulas
microbianas
Usado en investigacin

 Desventajas:

Muy laborioso
Solo puede hacerse en muestras
libres de otra fuente de nitrgeno
Solo aplica a poblaciones
concentradas

DETERMINACIN

DE PESO

SECO
Determina

la masa celular
Ventajas: fcil y reproducible
Desventajas: aplica a
suspensiones celulares muy
densas
Usos: investigacin

MEDICIN

DE CAMBIOS
QUMICOS ESPECFICOS
Ejemplo:

la medicin de produccin
de cido al fermentar glucosa bajo
condiciones especficas, es
proporcional a la magnitud
poblacional

CULTIVO MIXTO / CULTIVO

PURO

CULTIVO MIXTO

La

poblacin
microbiana es
grande y
compleja

CULTIVO PURO
Formado de
poblaciones derivadas
de una sola clula
Para determinar las
caractersticas de
especies concretas de
microorganismos es
importante aislarlo
como cultivo axnico.

TCNICA DE ESTRIADO

.TCNICA DE DILUCIN Y
VERTIDO/ESPARCIDO

.TCNICA AISLAMIENTO DE UNA SOLA

CLULA
Micromanipulador
adaptado a
microscopio
Controla el movimiento
de una micropipeta de
tal manera de tomar
una sola clula de una
suspensin y
traspasarla a otro
medio

MANTENIMIENTO Y PRESERVACIN DE
CULTIVOS PUROS

Resiembra peridica a medios frescos

Medio

Tiempo
resistencia

T incubacin

T almacenamiento

Bacillus

Agar
nutritivo

12 meses o
mas

28

10

Pseudomonas

Agar
nutritivo

3 meses

28

10

Medio de
carne
cocida

6 meses o
mas

28

Ambiental

Agar
glicerol

4 meses

30

10

Bacteria

Clostridium

Mycobacterium

Cultivos

con capa de aceite

mineral: se cubre 1.5 cm por
encima de la superficie del medio.
Viabilidad de aos (algunos 15 a
20 aos)
Liofilizacin: secado rpido en
congelacin (20 aos)

Muy

bajas
temperaturas:
Nitrgeno

lquido

(-196 C)
Agente
crioprotector
(glicerol o dimetil
sulfxido)

DUDAS?
aislamiento
de Salmonella
sp. utilizando
agar Rambach