Síntese de monoestearato de glicerila

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO
PRISCILLA HENRIQUES GROETAERS DE SOUZA COSTA
SNTESE DE MONOESTEARATO DE GLICERILA

PARA USO COSMTICO:
Comparao entre as vias qumica e enzimtica
RIO DE JANEIRO
2010
Priscilla Henriques Groetaers de Souza Costa
SNTESE DE MONOESTEARATO DE GLICERILA PARA

USO COSMTICO:
Dissertao de Mestrado apresentada ao

Programa
de
Ps-Graduao
em
Tecnologia de Processos Qumicos e
Bioqumicos, Escola de Qumica,
Universidade Federal do Rio de Janeiro,
como requisito parcial obteno do
ttulo de Mestre em Cincias.
Orientadores: Donato Alexandre Gomes Aranda, D. Sc.

Denise Maria Guimares Freire, D. Sc.
RIO DE JANEIRO
Costa, Priscilla Henriques Groetaers de Souza.

Sntese de monoestearato de glicerila para uso cosmtico: Comparao
entre as vias qumica e enzimtica / Priscilla Henriques Groetaers de
Souza Costa 2010.
f.: 232
Dissertao (Mestrado em Tecnologia de Processos Qumicos e
Bioqumicos) Universidade Federal do Rio de Janeiro, Escola de
Qumica, Rio de Janeiro, 2010.
Orientadores: Donato Alexandre Gomes Aranda, D. Sc.
Denise Maria Guimares Freire, D. Sc.
1. Monoestearato de glicerila. 2. Lipase. 3. Estearato de zinco. 4.
Esterificao - Teses. I. Aranda, Donato Alexandre Gomes. Freire,
Denise Maria Guimares (Orientadores). II. Universidade Federal do
Rio de Janeiro. Escola de Qumica. III. Sntese de monoestearato de
glicerila para uso cosmtico: Comparao entre as vias qumica e
enzimtica.
Priscilla Henriques Groetaers de Souza Costa
SNTESE DE MONOESTEARATO DE GLICERILA PARA

USO COSMTICO:
Dissertao de Mestrado apresentada ao

Programa
de
Ps-Graduao
em
Tecnologia de Processos Qumicos e
Bioqumicos, Escola de Qumica,
Universidade Federal do Rio de Janeiro,
como requisito parcial obteno do
ttulo de Mestre em Cincias.
Aprovada em 03 de agosto de 2010.
_______________________________________________
Donato Alexandre Gomes Aranda, D. Sc., Escola de Qumica, UFRJ
________________________________________________
Denise Maria Guimares Freire, D. Sc., Instituto de Qumica, UFRJ
________________________________________________
Marta Antunes Pereira Langone, D. Sc., Instituto de Qumica, UERJ
________________________________________________
Melissa Limoeiro Gutarra, D. Sc., Instituto de Qumica, UFRJ
________________________________________________
Nei Pereira Jr., D. Sc., Escola de Qumica, UFRJ
Agradecimentos
Agradeo primeiramente a Deus por ter me dado a oportunidade e a capacidade de
ingressar no programa de ps-graduao, ter me ajudado e orientado durante o curso e ter
possibilitado que este fosse concludo com xito.
Agradeo tambm a minha famlia que sempre esteve disposta a me ajudar em todas as
etapas da minha vida, especialmente a minha me e o meu marido que por meio de palavras e
aes me sustentaram durante esta longa caminhada.
Agradeo ainda a todos do Laboratrio GreenTec (especialmente Carla, Cristiane,
Michelle, Paulinha, Jussara, Alex, Leonard, Reinaldo, Luciana, Mariana, Marcela, Larissa e
Thiago) e do Laboratrio de Biotecnologia Microbiana (especialmente Elisa, Joab e
Melissa) que me ajudaram durante a execuo das reaes, anlises titulomtricas e
cromatogrficas e na execuo e anlise do planejamento experimental. Muito obrigada, no
s pela ajuda prtica, mas por terem me acolhido de maneira to amistosa e agradvel. Um
bom ambiente de trabalho essencial para que tudo possa evoluir da melhor maneira possvel.
Agradeo aos meus colegas de trabalho e alunos que me incentivaram a ingressar e
concluir o curso de mestrado. Trabalhar, estudar e ainda executar a parte experimental
realmente no fcil, mas a compreenso de todos torna tudo muito mais fcil.
Finalmente, agradeo aos meus orientadores, Donato Alexandre Gomes Aranda e
Denise Maria Guimares Freire, que me deram toda a infra-estrutura laboratorial e intelectual
imprescindvel para o sucesso deste trabalho. Muito obrigada pela amizade e confiana de
vocs!
Resumo
O objetivo principal deste trabalho foi realizar uma comparao entre a esterificao por via
qumica (estearato de zinco) e a enzimtica (lipase comercial Novozym 435) para a sntese de
monoestearato de glicerila para uso cosmtico (no mnimo 40% em -monoglicerdeos). As
reaes foram conduzidas em meio isento de solvente, com livre evaporao da gua formada
durante a esterificao. No caso da sntese enzimtica, foram feitos estudos prvios para
avaliar o efeito do tipo de lipase e do meio reacional. Foram feitos planejamentos
experimentais com os catalisadores qumicos e enzimticos a fim de investigar a influncia de
certas variveis (temperatura, razo molar glicerol/cido esterico e relao mssica
catalisador/cido esterico) na converso e na seletividade da reao. Alm disso, foram
realizados estudos cinticos das reaes qumicas e enzimticas. Aps todos os estudos
realizados foi possvel chegar a uma condio tima para a sntese de monoestearato de
glicerila por via qumica (140C, razo molar glicerol/cido esterico de 4 e 15 % m/m de
catalisador em relao ao cido esterico) e
por via enzimtica (70C, razo molar
glicerol/cido esterico de 4 e 2,5 % m/m de catalisador em relao ao cido esterico) em

apenas 2 horas de reao. Atravs de ambas as vias foi possvel alcanar converses de
aproximadamente 85% com uma seletividade aproximada de 55% em monoglicerdeos.
Assim, possvel sintetizar monoestearato de glicerila de uso cosmtico a partir de
esterificao catalisada tanto por via qumica (estearato de zinco) quanto por via enzimtica
(Novozym 435), com excelentes converses e seletividade apropriada, no mesmo tempo de
reao. Os produtos sintetizados por ambas as vias podem ser purificados ou utilizados
diretamente como blends, j que todos os componentes do produto final so insumos
cosmticos (glicerol, monoesterato de glicerila e estearato de zinco), com exceo da enzima
que poder ser reutilizada. A produo do blend apresenta duas vantagens principais:
Aumento do valor agregado do produto final e diminuio dos gastos com purificao durante
o processo industrial.
Abstract
The aim of this study was to make a comparison between the chemical (zinc stearate) and the
enzymatic (commercial lipase Novozym 435) esterification for the synthesis of glyceryl
stearate for cosmetic use (mn. 40% of -monoglycerides). The reactions were carried out in
a solvent-free system with free evaporation of the water produced during the esterification.
For the enzymatic synthesis, previous studies were made to evaluate the effect of the type of
lipase and the reaction medium. Experimental designs were used to investigate the effect of
some parameters (temperature, glycerol/stearic acid molar ratio and catalyst concentration) on
the degree of esterification and the selectivity of the reaction. Besides, kinetics studies were
made for the chemical and the enzymatic reactions. After all the experiments, it was possible
to reach a optimum condition for the chemical (140C, glycerol/stearic acid molar ratio of 4
and 15 % w/w of catalyst based on the stearic acid) and the enzymatic (70C, glycerol/stearic
acid molar ratio of 4 and 2,5 % w/w of catalyst based on the stearic acid) synthesis of glyceryl
stearate in only two hours of reaction. The results showed that it's possible to obtain high
degrees of esterification (approximately 85%) and suitable selectivities of monoglycerides
(approximately 55%) using either zinc stearate or novozym 435. The synthetized products can
be purificated or directly used as a blend because all the components of the final product are
cosmetic ingredients (glycerol, glyceryl stearate and zinc stearate), except for the enzyme that
can be reused. The blend production is economically advantageous.
Sumrio
1
INTRODUO ........................................................................... 21
OBJETIVOS................................................................................ 24
REVISO BIBLIOGRFICA .................................................. 25
3.1
3.1.1
3.1.2
Surfactantes.............................................................................................. 25
Generalidades .....................................................................................................25
Classificao e aplicaes cosmticas................................................................27
3.2
Emulses................................................................................................... 30
3.3
Monoglicerdeos ....................................................................................... 33
3.3.1
3.3.2
3.4
Generalidades .....................................................................................................33
Monoestearato de glicerila e suas aplicaes cosmticas ................................35
Mtodos de obteno de monoglicerdeos............................................... 39
3.4.1
Via qumica .........................................................................................................39
3.4.1.1 Hidrlise ou alcolise de triglicerdeos ...........................................................39
3.4.1.2 Glicerlise de triglicerdeos .............................................................................41
3.4.1.3 Esterificao do glicerol com cidos graxos ou transesterificao do glicerol
com steres de cidos graxos ...........................................................................................43
3.4.2
Via enzimtica.....................................................................................................49
3.4.2.1 Hidrlise ou alcolise de triglicerdeos ...........................................................50
3.4.2.2 Glicerlise de triglicerdeos .............................................................................52
3.4.2.3 Esterificao do glicerol com cidos graxos ou transesterificao do glicerol
com steres de cidos graxos ...........................................................................................56
3.5
3.5.1
3.5.2
3.6
Reagentes utilizados na sntese de monoglicerdeos via esterificao .. 65

Glicerol ................................................................................................................65
cidos graxos ......................................................................................................68
Estearato de zinco .................................................................................... 72
3.6.1
Generalidades .....................................................................................................72
3.6.2
Aplicaes ............................................................................................................74
3.6.2.1 Catalisador .......................................................................................................74
3.6.2.2 Ingrediente cosmtico.......................................................................................76
3.7
Lipases ...................................................................................................... 77
3.7.1
Generalidades .....................................................................................................77
3.7.2
Estrutura e mecanismo de ao.........................................................................79
3.7.3
Especificidade .....................................................................................................82
3.7.4
Aplicaes em biocatlise...................................................................................84
3.7.4.1 Sntese de ingredientes cosmticos...................................................................89
3.7.5
Imobilizao ........................................................................................................93
3.7.6
Lipases comerciais ..............................................................................................95
MATERIAIS E MTODOS ...................................................... 99
4.1
Materiais................................................................................................... 99
4.1.1
4.1.2
4.1.3
4.1.4
4.1.5
4.2
Equipamentos .....................................................................................................99
Reagentes...........................................................................................................100
Padres cromatogrficos..................................................................................100
Catalisadores.....................................................................................................101
Produtos comerciais .........................................................................................101
Metodologia experimental ..................................................................... 101
4.2.1
Sntese de monoestearato de glicerila por via qumica .................................101
4.2.1.1 Procedimento geral das reaes de esterificao..........................................101
4.2.1.2 Planejamento experimental ............................................................................102
4.2.1.3 Estudo cintico da reao ..............................................................................103
4.2.1.4 Efeito da razo molar entre os reagentes.......................................................103
4.2.2
Sntese de monoestearato de glicerila por via enzimtica............................104
4.2.2.1 Procedimento geral das reaes de esterificao..........................................104
4.2.2.2 Efeito do tipo de lipase ...................................................................................104
4.2.2.3 Efeito do meio reacional ................................................................................105
4.2.2.4 Planejamento experimental ............................................................................105
4.2.2.5 Estudo cintico da reao ..............................................................................106
4.2.2.6 Efeito da razo molar entre os reagentes.......................................................107
4.3
Mtodos analticos.................................................................................. 107
4.3.1
4.3.2
4.3.3
Anlise do cido esterico utilizado como reagente ......................................107

Anlise da converso das reaes....................................................................108
Anlise dos produtos comerciais e da seletividade das reaes....................109
RESULTADOS E DISCUSSO.............................................. 112
5.1
Anlise do cido esterico utilizado como reagente............................. 112
5.2
Anlise dos produtos comerciais ........................................................... 113
5.3
Sntese de monoestearato de glicerila por via qumica ........................ 117
5.3.1
5.3.2
5.3.3
5.4
5.4.1
5.4.2
5.4.3
5.4.4
5.4.5
5.5
5.5.1
5.5.2
Planejamento experimental .............................................................................117

Estudo cintico da reao ................................................................................143
Efeito da razo molar entre os reagentes .......................................................147
Sntese de monoestearato de glicerila por via enzimtica.................... 151

Efeito do tipo de lipase .....................................................................................151
Efeito do meio reacional...................................................................................153
Estudo cintico da reao ................................................................................194
Comparao entre a via qumica e a enzimtica.................................. 207

Estudo cintico ..................................................................................................208
5.5.3
5.5.4
5.5.5
5.5.6

Condio tima experimental..........................................................................211
Aspecto do produto final da reao ................................................................214
Consideraes finais .........................................................................................216
CONCLUSES ......................................................................... 217
SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS .................. 219
REFERNCIAS ........................................................................ 220
Lista de Figuras
Figura 1: Representao esquemtica de um surfactante .........................................................25
Figura 2: Orientao dos surfactantes nas interfaces................................................................26
Figura 3: Classes de Tensoativos .............................................................................................28
Figura 4: Escala de Griffin X Aplicaes cosmticas dos tensoativos.....................................30
Figura 5: Fotomicrografia de uma emulso de lcool cetoestearlico em gua explicitando a
fase externa e a interna .............................................................................................................31
Figura 6: Esquema de uma micela de uma emulso O/A estabilizada por um emulsionante e
um co-emulsionante..................................................................................................................33
Figura 7: Formas isomricas dos monoglicerdeos * ...............................................................34
Figura 8: Monoestearato de glicerila: Estrutura caracterstica de um surfactante no-inico..34
Figura 9: Obteno de monoglicerdeos por hidrlise ou alcolise enzimtica * ....................51
Figura 10: Obteno de monoglicerdeos por glicerlise enzimtica *....................................53
Figura 11: Possveis produtos formados na esterificao enzimtica * ...................................57
Figura 12: Estrutura do glicerol................................................................................................66
Figura 13: Estrutura de um triglicerdeo ..................................................................................69
Figura 14: Estruturas qumicas de trs cidos graxos de 18 carbonos .....................................71
Figura 15: Modelo estrutural da lipase de Pseudomonas cepacia ligada a 1-fenoxi 2-acetoxi
butano .......................................................................................................................................79
Figura 16: Conformao aberta (amarela) e fechada (azul) da tampa da lipase de R. miehei
..................................................................................................................................................80
Figura 17: Mecanismo cataltico das lipases ............................................................................82
Figura 18: Reaes catalisadas por lipases do tipo no-especfica e 1,3-especfica * .............84
Figura 19: Reaes catalisadas por lipases *............................................................................86
Figura 20: Fluxogramas dos processos de esterificao convencional (qumico) e enzimtico
..................................................................................................................................................93
Figura 21: Mtodos de imobilizao de enzimas .....................................................................94
Figura 22: Banho ultratermosttico, placa de aquecimento e reator ........................................99
Figura 23: Detalhe da placa de aquecimento e reator de vidro encamisado...........................100
Figura 24: Cromatogramas do cido esterico (rosa) e do cido palmtico (preto) sobrepostos
................................................................................................................................................112
Figura 25: Cromatograma do cido esterico derivatizado ....................................................113
Figura 26: Composio em glicerdeos dos produtos comerciais ..........................................115
Figura 27: Cromatograma dos padres...................................................................................115

Figura 28: Cromatograma do monoestearato de glicerila VETEC.........................................116
Figura 29: Cromatograma do monoestearato de glicerila PROQUIMIOS.............................116
Figura 30: Cromatograma do monoestearato de glicerila ISOFAR .......................................116
Figura 31: Superfcie de resposta para a converso em funo das variveis razo molar e
temperatura com concentrao de catalisador = 1,68.............................................................121
Figura 32: Superfcie de resposta para a converso em funo das variveis concentrao de
catalisador e temperatura com razo molar = 1,68.................................................................122
catalisador e temperatura com razo molar = - 1,68 ..............................................................123
catalisador e razo molar com temperatura = 1,68.................................................................124
Figura 35: Superfcie de resposta para a seletividade em MAG em funo das variveis
temperatura e razo molar com concentrao de catalisador = - 1.........................................127
temperatura e concentrao de catalisador com razo molar = - 1.........................................128
Figura 37: Superfcie de resposta para a seletividade em MAG em funo das variveis razo
molar e concentrao de catalisador com temperatura = - 1 ..................................................129
Figura 38: Superfcie de resposta para a seletividade em DAG em funo das variveis razo
molar e temperatura com concentrao de catalisador = 0.....................................................133
Figura 39: Superfcie de resposta para a seletividade em TAG em funo das variveis razo
molar e temperatura com concentrao de catalisador = - 1,68 .............................................137
molar e concentrao de catalisador com temperatura = 1,68................................................138
Figura 41: Superfcie de resposta para a seletividade em TAG em funo das variveis
concentrao de catalisador e temperatura com razo molar = - 1,68....................................139
Figura 42: Perfil do progresso da reao do experimento18 (via qumica) *.........................144
Figura 43: Cromatograma do produto sintetizado no experimento 18 aps 240 min de reao
(via qumica) *........................................................................................................................146
Figura 44: Efeito da razo molar entre os reagentes (via qumica) * .....................................147
Figura 45: Comparao entre o desempenho das lipases Novozym 435 e Lipozyme RM IM *
................................................................................................................................................152
Figura
46:
Comparao
entre
desempenho
da
Novozym
435
em ausncia e presena de solvente *.....................................................................................156
Figura
47:
Comparao
entre
desempenho
da
Lipozyme
RM
IM
em ausncia e presena de solvente *.....................................................................................156

Figura 48: Superfcie de resposta para a converso em funo das variveis temperatura e
relao mssica lipase/cido esterico com razo molar = 0 .................................................164
temperatura e relao mssica lipase/cido esterico com razo molar = 0...........................167
relao mssica lipase/cido esterico com razo molar = 1 .................................................176
relao mssica lipase/cido esterico com temperatura = 1 .................................................177
relao mssica lipase/cido esterico com temperatura = - 1 ...............................................178
temperatura com relao mssica lipase/cido esterico = - 1 ...............................................179
temperatura e razo molar com relao mssica lipase/cido esterico = 0...........................184
relao mssica lipase/cido esterico e razo molar com temperatura = 1...........................185
Figura 58: Perfil do progresso da reao do experimento 43 (via enzimtica) * ...................196
Figura 59: Perfil do progresso da reao do experimento 44 (via enzimtica) * ...................196
Figura 60: Cromatograma do produto sintetizado no experimento 43 aps 2 h de reao
(via enzimtica) * ...................................................................................................................199
(via enzimtica) * ...................................................................................................................200
(via enzimtica) * ...................................................................................................................200
(via enzimtica) * ...................................................................................................................200
(via enzimtica) * ...................................................................................................................201

(via enzimtica) * ...................................................................................................................201
(via enzimtica) * ...................................................................................................................201
Figura 67: Efeito da razo molar entre os reagentes aps 4 horas de reao (via enzimtica) *
................................................................................................................................................203
................................................................................................................................................203
Figura 69: Comparao entre os perfis cinticos das reaes de sntese de monoestearato de
glicerila por via qumica - A (140C, razo molar: 4 e 15% de estearato de zinco)
enzimtica - B (70C, razo molar: 4 e 2,5% de Novozyme 435)..........................................209

Figura 70: Comparao entre o efeito da razo molar nas reaes de sntese de monoestearato
de glicerila por via qumica - A (140C e 15% de estearato de zinco) e enzimtica - B (70C e
2,5% de Novozym 435) ..........................................................................................................210
Figura 71: Comparao entre a composio de produtos obtidos por via qumica, enzimtica e
comercial * .............................................................................................................................213
Figura 72: Comparao entre os cromatogramas dos produtos sintetizados por via qumica
(A), por via enzimtica (B) e do produto comercial da marca PROQUIMIOS (C) * ............214
Figura 73: Produtos obtidos nas reaes de sntese de monoestearato de glicerila por via
qumica e enzimtica * ...........................................................................................................216
15
Lista de Tabelas
Tabela 1: Substncias anfiflicas apolares e surfactantes comumente usados..........................32
Tabela 2: Ceras auto-emulsionveis comerciais e farmacopicas............................................33
Tabela 3: Exemplos de monoglicerdeos e suas principais aplicaes.....................................35
Tabela 4: Composio em cidos graxos do monoestearato de glicerila .................................37
Tabela 5: Converso e seletividade na reao de transesterificao de glicerol com estearato
de metila na presena de xidos metlicos aps 6 h de reao 220C, com quantidades
equimolares de reagentes, 0,5 g de catalisador, presso atmosfrica, sob atmosfera de
nitrognio..................................................................................................................................49
Tabela 6: Mtodos para formao seletiva de MAG em reaes de esterificao ou
transesterificao ......................................................................................................................58
Tabela 7: Propriedades fsico-qumicas do glicerol .................................................................67
Tabela 8: Nomenclatura sistemtica, ponto de fuso e solubilidade em gua de alguns cidos
graxos .......................................................................................................................................70
Tabela 9: Especificaes tcnicas do estearato de zinco fabricado pela Sim Estearina Indstria
e Comrcio................................................................................................................................73
Tabela 10: Especificaes tcnicas do estearato de zinco fabricado pela FOCOR Produtos
Qumicos S. A. .........................................................................................................................73
Tabela 11: Resultados de cinco parmetros ambientais fundamentais baseados na produo 92
Tabela 12: Equipamentos utilizados durante o trabalho...........................................................99
Tabela 13: Reagentes utilizados durante o trabalho ...............................................................100
Tabela 14: Padres cromatogrficos utilizados durante o trabalho ........................................101
Tabela 15: Catalisadores utilizados durante o trabalho ..........................................................101
Tabela 16: Valores reais e codificados das variveis independentes do Delineamento
Composto Central Rotacional (via qumica) .........................................................................102
Tabela 17: Valores reais e codificados das variveis independentes do Planejamento Fatorial
23 (via qumica) .....................................................................................................................103
Tabela 18: Condies experimentais das reaes realizadas para avaliar o efeito da razo
molar entre os reagentes (via qumica)...................................................................................104
Tabela 19: Condies experimentais das reaes realizadas para avaliar o efeito do tipo de
lipase.......................................................................................................................................105
Tabela 20: Condies experimentais das reaes realizadas para avaliar o efeito do meio
reacional..................................................................................................................................105
16
Tabela 21: Valores reais e codificados das variveis independentes dos Planejamentos
experimentais (via enzimtica)..............................................................................................106
Tabela 22: Condies experimentais das reaes estudadas cineticamente (via enzimtica) 107
molar entre os reagentes (via enzimtica) ..............................................................................107
Tabela 24: Condies cromatogrficas da anlise do cido esterico....................................108
Tabela 25: Condies cromatogrficas da anlise da seletividade.........................................110
Tabela 26: Dados de rotulagem dos monoestearatos de glicerila comerciais ........................114
Tabela 27: Composio dos monoestearatos de glicerila comerciais.....................................115
Tabela 28: Matriz do Delineamento Composto Central Rotacional e resultados obtidos
(via qumica)...........................................................................................................................118
Tabela 29: Valores experimentais e preditos de converso para as diferentes condies
experimentais do Delineamento Composto Central Rotacional (via qumica) ......................119
Tabela 30: Efeito das variveis estatisticamente e marginalmente significativas sobre a
converso baseado no Delineamento Composto Central Rotacional * ..................................120
Tabela 31: Anlise de varincia (ANOVA) do Delineamento Composto Central Rotacional
................................................................................................................................................121
Tabela 32: Valores experimentais e preditos de seletividade em MAG para as diferentes
condies experimentais do Planejamento Fatorial 23 (via qumica).....................................125
Tabela 33: Efeito das variveis estatisticamente significativas sobre a seletividade em MAG
baseado no Planejamento Fatorial 23 ......................................................................................126
Tabela 34: Anlise de varincia (ANOVA) do Planejamento Fatorial 23 ..............................126
Tabela 35: Valores experimentais e preditos de seletividade em DAG para as diferentes
condies experimentais do Delineamento Composto Central Rotacional (via qumica) .....131
Tabela 36: Efeito das variveis estatisticamente significativas sobre a seletividade em DAG
baseado no Delineamento Composto Central Rotacional * ...................................................132
................................................................................................................................................132
Tabela 38: Valores experimentais e preditos de seletividade em TAG para as diferentes
condies experimentais do Delineamento Composto Central Rotacional (via qumica) .....135
Tabela 39: Efeito das variveis estatisticamente significativas sobre a seletividade em TAG
baseado no Delineamento Composto Central Rotacional * ...................................................136
................................................................................................................................................136
17
Tabela 41: Comparao entre as condies timas para as 4 variveis de resposta da sntese de
monoestearato de glicerila por via qumica............................................................................140
Tabela 42: Resultados obtidos do estudo cintico da reao (via qumica) ...........................143
Tabela 43: Resultados obtidos do estudo do efeito da razo molar entre os reagentes
(via qumica)...........................................................................................................................147
Tabela 44: Resultados obtidos por Macierzanka e Szelag * ..................................................149
Tabela 45: Resultados obtidos do estudo do efeito do tipo de lipase .....................................151
Tabela 46: Resultados obtidos do estudo do efeito do meio reacional...................................155
Tabela 47: Matriz do Delineamento Composto Central com Face Centrada e resultados
obtidos (via enzimtica)..........................................................................................................159
experimentais do Delineamento Composto Central com Face Centrada (via enzimtica) ....162
Tabela 49: Efeito das variveis estatisticamente significativas sobre a converso baseado no
Delineamento Composto Central com Face Centrada *.........................................................163
Tabela 50: Anlise de varincia (ANOVA) do Delineamento Composto Central com Face
Centrada..................................................................................................................................163
condies experimentais do Planejamento Fatorial 23 (via enzimtica) ................................165
Tabela 54: Valores experimentais de seletividade em DAG para as diferentes condies
experimentais do Planejamento Fatorial 23 (via enzimtica) .................................................168
Tabela 55: Efeito das variveis testadas sobre a seletividade em DAG baseado no
Planejamento Fatorial 23.........................................................................................................169
condies experimentais do Planejamento Fatorial 23 (via enzimtica) ................................170
Tabela 57: Efeito da varivel estatisticamente significativa sobre a seletividade em TAG
monoestearato de glicerila por via enzimtica (t = 4 horas)...................................................173
experimentais do Delineamento Composto Central com Face Centrada (via enzimtica) ....174
18

converso baseado no Delineamento Composto Central com Face Centrada *.....................175
Centrada..................................................................................................................................175
condies experimentais do Delineamento Composto Central com Face Centrada (via
enzimtica)..............................................................................................................................181
Tabela 64: Efeito das variveis estatisticamente e marginalmente sobre a seletividade em
MAG baseado no Delineamento Composto Central com Face Centrada * ...........................182
Centrada..................................................................................................................................183
Tabela 68: Valores experimentais de seletividade em TAG para as diferentes condies
Tabela 69: Efeito das variveis testadas sobre a seletividade em TAG baseado no
monoestearato de glicerila por via enzimtica (t = 6 horas)...................................................189
Tabela 71: Comparao entre as condies timas para a sntese de monoestearato de glicerila
por via enzimtica nos dois tempos de reao........................................................................191
Tabela 72: Comparao entre os resultados experimentais (Exp.) e preditos (Pred.) para a
sntese de monoestearato de glicerila por via enzimtica nos dois tempos de reao............192
Tabela 73: Resultados obtidos do estudo cintico da reao (via enzimtica).......................195
Tabela 74: Comparao entre os teores de glicerdeos dos produtos obtidos atravs dos
melhores experimentos realizados por via enzimtica e de um produto comercial ...............199
(via enzimtica) ......................................................................................................................202
Tabela 76: Comparao entre os resultados obtidos atravs dos planejamentos experimentais
com catalisadores qumico e enzimtico para a sntese de monoestearato de glicerila..........207
Tabela 77: Comparao entre os experimentos que forneceram os melhores resultados por via
qumica e enzimtica ..............................................................................................................212
19
Lista de Siglas, Abreviaturas e Smbolos

A/O gua em leo
O /A leo em gua
RDC Resoluo de Diretoria Colegiada
ANVISA Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
EHL Equilbrio Hidrfilo-Lipfilo
HLB Hydrophile-Lipophile Balance
MAG Monoglicerdeo(s) ou Monoacilglicerol(is)
1(3) - MAG 1(3)-monoglicerdeo ou 1(3)-monoacilglicerol
2-MAG 2-monoglicerdeo ou 2-monoacilglicerol
GRAS Generally Recognized as Safe
FDA Food and Drugs Administration
PEG Polietilenoglicol
USP-NF Farmacopia Americana - Formulrio Nacional
AOT bis (2-etil-1-hexil)sulfosuccinato de sdio
DAG Diglicerdeo(s) ou Diacilglicerol(is)
TAG Triglicerdeo(s) ou Triacilglicerol(is)
1,3-DAG 1,3-diglicerdeo ou 1,3-diacilgicerol
1,2-DAG 1,2-diglicerdeo ou 1,2-diacilglicerol
min minutos
h horas
IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry
B2 Mistura de 2% de biodiesel ao diesel
B5 Mistura de 5% de biodiesel ao diesel
LCA Avaliao do Ciclo de Vida
PA Para Anlise
MSTFA N-Metil-N-trimetilsililtrifluoroacetamida
MHDEC Metil-heptadecanoato
C Concentrao de estearato de zinco (% m/m em relao ao cido esterico)
T Temperatura (C)
R Razo molar glicerol/cido esterico
E Relao mssica lipase/cido esterico (% m/m)
20
CEN Comit Europeu de Normalizao (Comit Europen de Normalisation)

FID Detector de Ionizao de Chamas (Flame Ionization Detector)
ASTM Sociedade Americana para Testes e Materiais (American Society of Testing and
Materials)
21
1 INTRODUO
Os surfactantes constituem uma classe importante de compostos qumicos amplamente
utilizados em diversos setores industriais (NITSCHKE; PASTORE, 2002). Segundo Nitschke
e Pastore (2002), a produo mundial de surfactantes excede 3 milhes de toneladas por ano.
Monoglicerdeos so surfatantes no-inicos, que possuem o status GRAS (Generally
Recognized as Safe) pela FDA (Food and Drugs Administration), sendo amplamente
utilizados nas indstrias farmacuticas, de alimentos e de cosmticos (SILVA et al., 2003),
por no apresentarem efeitos colaterais quando ingeridos ou irritaes na pele, ao contrrio
dos tensoativos inicos (MACHADO et al., 2000).
A produo mundial de monoglicerdeos estimada em cerca de 180 mil toneladas por
ano (BELLOT et al., 2001). Nas indstrias alimentcia, farmacutica e de cosmticos,
representam cerca de 70% de todos os emulsificantes sintticos utilizados (FREGOLENTE,
2006).
Tanto fatores tcnicos como regulatrios da FDA e da Unio Europia, dentre outras,
tm incentivado o desenvolvimento de melhores processos para a sntese de emulsificantes,
especialmente daqueles usados em aplicaes farmacuticas, cosmticas ou relacionadas
rea de alimentos (OTERO et al., 2001).
Monosteres de glicerila (monoglicerdeos) so usados como agentes emulsificantes
gua em leo (A/O), co-emulsionantes leo em gua (O/A), estabilizantes, espessantes,
aglutinantes e emolientes em uma grande variedade de produtos cosmticos. O monoestearato
de glicerila (ou monoestearina) o derivado mais usado em formulaes cosmticas e por isso
mencionado em vrias farmacopias (ECCLESTON, 1997).
A sntese do monoestearato de glicerila pode ser realizada atravs de reaes de
hidrlise (ou alcolise), glicerlise, esterificao ou transesterificao. Dentre estes mtodos
de obteno, a esterificao do glicerol com cidos graxos tem se destacado como promissora
e vm sendo bastante estudada tanto por catlise qumica quanto por catlise enzimtica
(lipases).
A sntese de monosteres de lcoois poliidroxilados como o glicerol um desafio, pois
a tendncia que ocorra a esterificao das demais hidroxilas resultando numa mistura de
steres. A preparao seletiva de monosteres dependente do catalisador empregado e das
condies reacionais (temperatura, razo molar entre os reagentes, meio reacional, dentre
22
outras) como tem sido demonstrado pelos vrios trabalhos publicados e pelas patentes
registradas (PEREIRA-SOARES; SILVA, 2007).
O estearato de zinco aparece como um eficiente catalisador qumico para reaes de
esterificao com o objetivo de sintetizar monoestearato de glicerila para uso cosmtico. Isto
ocorre porque a etapa final de remoo do catalisador pode ser dispensada j que o estearato
de zinco tambm um ingrediente muito usado em cosmticos como emulsionante A/O, coemulsionante O/A, corante e p lubrificante. Tais propriedades justificam sua aplicao em
emulses e produtos para maquiagem compacta (ps e sombras), coincidentemente as
mesmas formulaes nas quais o monoestearato de glicerila utilizado (DRAELOS, 1999).
Dessa forma, a venda de um blend (monoestearato de glicerila + estearato de zinco) aparece
como uma alternativa vantajosa em relao venda do monoestearato de glicerila isolado pois
agrega valor ao produto final, alm de diminuir os gastos com processos de purificao
durante o processo industrial.
No entanto, so encontrados poucos trabalhos na literatura sobre o uso de estearato de
zinco na sntese de monoglicerdeos (MACIERZANKA; SZELAG, 2001, 2004).
Recentemente a sntese de MAG catalisada por lipases tem sido estudada intensamente
como alternativa ao mtodo convencional, devido, principalmente, utilizao de condies
reacionais brandas de pH e temperatura, que implicam em baixo consumo energtico e menor
incidncia de reaes indesejveis, e seletividade das lipases que, de forma integrada,
resultam em produtos de melhor qualidade. Alm disso, a especificidade dessas enzimas
possibilita a sntese de produtos que no poderiam ser obtidos pela rota qumica convencional.
Pode-se explorar a seletividade das lipases por determinados cidos graxos e tambm sua
regioseletividade pela posio alfa das molculas de glicerol em detrimento da posio beta.
Cabe ressaltar que do ponto de vista ambiental, o processo enzimtico tecnicamente limpo e
seguro. Este fato bastante significativo tendo em vista a crescente demanda por tecnologias
verdes e produtos seguros para o consumidor (consumer-friendly) (BORNSCHEUER, 1995).
O elevado custo das lipases e sua baixa estabilidade operacional apresentam o maior
obstculo na competio com a sntese qumica atualmente empregada. No entanto, o
progresso na rea da gentica e na tecnologia de processos permite que a indstria oferea
biocatalisadores com melhores propriedades e com um custo reduzido (FREITAS et al.,
2008). Alm disso, a possibilidade de recuperao e reuso das enzimas se torna cada vez mais
vivel.
Alm disso, a sntese de um produto de alto valor agregado, na maioria das vezes,
compensa os gastos com as enzimas. Este o caso da sntese de insumos cosmticos. Os
23
steres de uso cosmtico sintetizados enzimaticamente, por exemplo, tm sido designados

como "Biosteres" a fim de ressaltar a qualidade do produto e seu apelo "natural". Esta
estratgia de marketing certamente aumenta o preo do produto final e aumenta as vendas, j
que a indstria de cosmticos possui uma alta demanda por ingredientes inovadores e
"naturais" (KOSKINEN; KLIBANOV, 1996).
Na literatura so encontrados inmeros trabalhos que utilizam lipases como
catalisadores da esterificao do glicerol com cidos graxos para a obteno de
monoglicerdeos. Todavia, h pouqussimos trabalhos que estudam a sntese do
monoestearato de glicerila em particular (YANG et al, 2003). Uma das possveis razes para
isso que a maioria dos pesquisadores tem dado maior enfoque aos monoglicerdeos
comumente usados em alimentos (monocaprina, monolaurina, monopalmitina e monoolena).
24
2 OBJETIVOS
O objetivo principal deste trabalho foi realizar uma comparao entre a esterificao
por via qumica (estearato de zinco) e a enzimtica (lipase comercial Novozym 435) para a
sntese de monoestearato de glicerila para uso cosmtico, que, diferentemente do usado em
alimentos, no necessita de alta pureza (no mnimo 40% em -monoglicerdeos).
Dentre os objetivos especficos do presente trabalho esto:
Estudar a influncia do tipo de lipase (Lipozime TL IM, Lipozyme RM IM, Lipase de

pinho manso e Novozym 435) e do meio reacional (com ou sem acetona) na
esterificao por via enzimtica;
Investigar a influncia de algumas variveis (temperatura, relao mssica

catalisador/cido esterico e razo molar entre os reagentes) na converso e
seletividade da reao de esterificao por via qumica e enzimtica atravs de
planejamentos experimentais;
Propor modelos empricos resultantes da tcnica de planejamento experimental que

representem uma relao entre a converso/seletividade e as variveis independentes
investigadas e us-los como base para uma otimizao do processo;
Realizar um estudo cintico das melhores condies experimentais obtidas com o

catalisador qumico e o enzimtico a fim de avaliar a converso e a seletividade em
funo do tempo de reao;
Estudar unilateralmente o efeito da razo molar entre os reagentes na converso e

seletividade das reaes de sntese de monoestearato de glicerila por via qumica e
enzimtica.
25
3 REVISO BIBLIOGRFICA
3.1 Surfactantes
3.1.1 Generalidades
Os surfactantes constituem uma classe importante de compostos qumicos amplamente
utilizados em diversos setores industriais (NITSCHKE; PASTORE, 2002). O termo
surfactante vem do ingls surfactant (surface active agent) e sinnimo do termo
tensoativo, ambos os nomes remetem ao seu mecanismo de ao.
Os surfactantes so molculas anfipticas constitudas de uma poro hidrofbica e
uma poro hidroflica. O grupo lipoflico dos surfactantes, responsvel pela solubilidade em
leo, geralmente formado por cadeias hidrocarbnicas lineares ou ramificadas, contendo ou
no, grupos aromticos. O grupo hidroflico, determinante da solubilidade do surfactante em
gua, altamente polar, podendo ser inico ou no-inico (Figura 1). A grande afinidade
desta parte da molcula pela gua permite solubilizar o grupo lipoflico, normalmente
insolvel em gua.
Fonte: ROSSI et al., 2006
Figura 1: Representao esquemtica de um surfactante

Em funo da presena de grupos hidroflicos e hidrofbicos na mesma molcula, os
surfactantes tendem a se distribuir nas interfaces entre fases fluidas com diferentes graus de
polaridade. Eles se orientam de maneira que o grupo polar fique voltado para a fase aquosa e
o grupo apolar para a fase oleosa (ROSSI et al., 2006) (Figura 2).
26
Fonte: ROSSI et al., 2006
Figura 2: Orientao dos surfactantes nas interfaces

A formao de um filme molecular, ordenado nas interfaces, reduz a tenso interfacial
e superficial, sendo responsvel pelas propriedades nicas dos surfactantes. Estas
propriedades fazem os surfactantes serem adequados para uma ampla gama de aplicaes
industriais envolvendo: detergncia, emulsificao, lubrificao, capacidade espumante,
capacidade molhante, solubilizao e disperso de fases. A maior utilizao dos surfactantes
se concentra na indstria de produtos de limpeza (sabes e detergentes), na indstria de
petrleo e na indstria de cosmticos e produtos de higiene (FREITAS, 2006).
Segundo Nitschke e Pastore (2002), a produo mundial de surfactantes excede 3
milhes de toneladas por ano, sendo a maioria utilizada como matria-prima para fabricao
de detergentes de uso domstico.
A maioria dos surfactantes disponveis comercialmente so sintetizados por via
qumica. Entretanto, muitos surfactantes contm ligaes ster ou amida e so passveis de
sntese enzimtica, atravs do uso de lipases ou proteases. Estas enzimas agem na natureza
como hidrolases biodegradativas, mas podem ser usadas em reaes de sntese orgnica
atravs da implementao de biocatlise em meios aquo-restritos, o que direciona o equilbrio
da reao para o sentido da sntese em detrimento da hidrlise (SINGH et al., 2007).
Nos ltimos anos tem crescido o interesse na sntese de emulsificantes catalisada por
lipases, tais como monoglicerdeos, steres de carbohidratos e steres de aminocidos. Estes
steres apresentam vrias vantagens em relao aos produzidos quimicamente, dentre elas
27
destacam-se a menor toxicidade, biodegradabilidade e possibilidade de serem produzidos a

partir de reagentes renovveis e de baixo custo (LANGONE, 1998).
3.1.2 Classificao e aplicaes cosmticas

Os surfactantes podem ser classificados, de acordo com seu grupo polar, em: inicos
(aninicos ou catinicos), no-inicos e anfteros (Figura 3).
a) Surfactantes inicos: Apresentam cargas eltricas na parte hidroflica, ao se dissociarem em
gua, formando ons carregados negativamente (tensoativos aninicos) ou positivamente
(tensoativos catinicos). Os surfactantes aninicos mais conhecidos so os sais de cidos
graxos (ou sabes) e os alquil sulfatos. Na classe dos surfactantes catinicos, destacam-se os
sais de amnio quaternrio e as aminas de cadeia longa;
b) Surfactantes no-inicos: Esta classe de surfactantes no fornece ons em soluo aquosa e
a sua solubilidade em gua se deve presena, em suas molculas, de grupamentos funcionais
que possuem forte afinidade pela gua. Como exemplos podemos destacar os steres graxos
de glicerila e os lcoois graxos etoxilados;
c) Surfactantes anfteros: Um surfactante anftero aquele que, dependendo do pH, pode ser
aninico, catinico ou zwiterinico. Portanto, pode-se dizer que so compostos cujas
molculas contm ambos os tipos de grupos: o cido e o bsico. No ponto isoeltrico,
apresentam-se como espcies zwiterinicas, mostrando um mnimo de solubilidade,
detergncia e poder molhante. Como exemplo, podemos citar as betanas como os principais
tensoativos representantes desta classe (ROSSI et al., 2006).
28
Figura 3: Classes de Tensoativos

A Resoluo de Diretoria Colegiada (RDC) n 211, de 14 de julho de 2005 da Agncia
Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), estabelece a definio de produtos de higiene
pessoal, cosmticos e perfumes. Segundo esta Resoluo, tais produtos so preparaes
constitudas por substncias naturais ou sintticas, de uso externo nas diversas partes do corpo
humano, pele, sistema capilar, unhas, lbios, rgos genitais externos, dentes e membranas
mucosas da cavidade oral, com o objetivo exclusivo ou principal de limp-los, perfum-los,
alterar sua aparncia e/ou corrigir odores corporais e/ou proteg-los ou mant-los em bom
estado (BRASIL, 2005).
Os surfactantes so muito utilizados como matrias-primas cosmticas, sendo que sua
aplicao especfica ditada por suas propriedades que, por sua vez, so determinadas pela
sua estrutura qumica.
29
O grupo polar do tensoativo determina suas propriedades marcantes. Os tensoativos

aninicos so conhecidos pela sua detergncia e poder espumante, sendo aplicados em
produtos de higiene pessoal. Os tensoativos anfteros so menos irritantes que os demais,
assim so usados como detergentes primrios em formulaes suaves, como os shampoos
infantis. Os tensoativos catinicos so detergentes efetivos, com algum poder espumante,
entretanto, podem ser irritantes para a pele e olhos em concentraes muito baixas quando
comparados a outros tensoativos. Assim, se destacam pela sua ao condicionante, sendo
utilizados em condicionadores. Os tensoativos no-inicos podem ser muito suaves, mas
apresentam capacidade espumante muito baixa. Para eles, destaca-se o poder solubilizante e
emulsificante. Como solubilizantes, atuam na disperso de componentes lipossolveis (como,
por exemplo, as fragrncias) em formulaes aquosas. Como emulsificantes, estabilizam
grande parte das emulses cosmticas. Por no possurem carga eltrica so compatveis com
uma grande variedade de ingredientes cosmticos. Ademais, no so afetados pelo pH e pela
concentrao de sal das formulaes cosmticas (SCHUELLER; ROMANOWSKI, 2002).
Um outro critrio de classificao dos tensoativos leva em conta seu EHL (equilbrio
hidrfilo-lipfilo) ou HLB (hydrophile-lipophile balance). O EHL definido como o balano
entre as duas pores moleculares com caractersticas opostas dos tensoativos. Este representa
um sistema de classificao dos tensoativos, tendo como base os parmetros de solubilidade
desses compostos em solventes polares e/ou apolares. Neste sistema, introduzido por Griffin
em 1949, uma escala numrica adimensional de valores entre 1 e 20 usada para descrever a
natureza do agente tensoativo, sendo que os valores de EHL aumentam de acordo com a
hidrofilia da molcula. O conhecimento dos valores de EHL permite predizer o tipo de
comportamento esperado do composto, fornecendo desta forma orientao para suas
aplicaes prticas (Figura 4) (ZANIN et al., 2002).
30
Fonte: adaptado de ZANIN et al., 2002
Figura 4: Escala de Griffin X Aplicaes cosmticas dos tensoativos

Os mtodos de determinao do EHL so classificados em trs categorias, sendo elas
(1) o mtodo terico, relacionando o EHL de um tensoativo com sua estrutura molecular; (2)
o mtodo direto, comparando visualmente o comportamento de tensoativos com padres de
EHL conhecidos e (3) mtodos indiretos, relacionando componentes fsico-qumicos
mensurveis com o EHL dos compostos (ZANIN et al., 2002).
O EHL resultante da mistura de dois ou mais tensoativos no a simples mdia
aritmtica entre os valores de EHL individuais, mas sim a mdia ponderada que leva em conta
no s os valores de EHL individuais, mas tambm a frao mssica de cada um na mistura.
3.2 Emulses
Emulso uma disperso cuja fase dispersa composta por gotculas de um lquido,
distribudas num veculo lquido no qual imiscvel. Na terminologia das emulses, a fase
dispersa conhecida como fase interna e o meio dispersante como fase externa ou contnua
(Figura 5). As emulses que tem fase interna oleosa e fase externa aquosa so conhecidas
como emulses leo em gua e podem ser designadas como O/A. Ao contrrio, emulses
que tem fase interna aquosa e externa oleosa so emulses gua em leo e podem ser
designadas como A/O (ANSEL et al., 2000).
31
Fonte: adaptado de ECCLESTON, 1997
Figura 5: Fotomicrografia de uma emulso de lcool cetoestearlico em gua explicitando a

fase externa e a interna
As emulses podem se classificar, de acordo com o tamanho das gotculas da fase
interna em (ANSEL et al., 2000):
Macroemulses: So emulses opacas, termodinamicamente instveis, com gotculas

de tamanho maior que 400 nm, o que as torna visveis ao microscpio ptico;
Microemulses: So sistemas termodinamicamente estveis, disperses isotrpicas,

transparentes, de baixa viscosidade, com gotculas de tamanho inferior a 100 nm;
Miniemulses: Possuem aaspecto branco-azulado semi-opaco, baixa viscosidade e

tamanho de gotculas entre 100 e 400 nm.
As macroemulses, tambm chamadas de emulses, so as mais largamente
empregadas em cosmticos e por isso sero abordadas a partir de agora.

Para se preparar uma emulso estvel imprescindvel a presena de um tensoativo
que age como emulsificante permitindo que as duas fases imiscveis se misturem. A
natureza do emulsionante determina se a emulso O/A ou A/O. Como regra geral tem-se
que a fase na qual o emulsionante preferencialmente solvel a fase externa da emulso.
Assim, emulsionantes de alto EHL geram emulses O/A e os de baixo EHL geram emulses
A/O.
Emulses fluidas e semi-slidas so muito usadas na indstria cosmtica como
veculos para ativos cosmticos e/ou pelas suas propriedades hidratantes, emolientes e
lubrificantes da pele. Formulaes fluidas so conhecidas como loes cremosas, enquanto
que as semi-slidas, como cremes.
Emulses so termodinamicamente instveis. Elas possuem uma energia livre
interfacial positiva e tentam continuamente atingir o equilbrio termodinmico atravs da
32
separao de fases. Na prtica, isto resulta em floculao e agregao das gotculas da fase
interna levando, s vezes, a uma separao completa das fases. Para fabricar um produto com
uma vida til razovel, o formulador deve estar atento a estes possveis fenmenos de
instabilidade. Isto pode ser feito atravs da adio de um emulsionante ou de uma mistura
composta por um surfactante inico ou no-inico (emulsionante) combinado com uma
substncia anfiflica apolar (co-emulsionante ou emulsionante auxiliar) como alcois graxos,
cidos graxos e monoglicerdeos (Tabela 1). O uso deste tipo de mistura demonstrou ser mais
eficiente do que o uso de um nico emulsionante no sentido de conferir estabilidade s
emulses O/A (Figura 6). Os ingredientes da mistura podem ser adicionados separadamente
durante a fabricao de uma emulso cosmtica ou juntos sob a forma de uma cera ou base
auto-emulsionvel, que j contm os dois ingredientes (surfactante e substncia anfiflica
apolar) misturados previamente. Existem vrias ceras auto-emulsionveis disponveis no
mercado (Tabela 2). Apesar destas ceras serem descritas como emulsificantes, elas exibem
outras funes na formulao. Elas estabilizam as gotculas atravs da formao de um filme
interfacial, conferem estabilidade longo prazo ao produto final devido sua habilidade de
prevenir a aproximao das gotculas atravs da estruturao da fase contnua (ao
espessante) e tambm controlam as propriedades reolgicas da formulao (ECCLESTON,
1997).
Tabela 1: Substncias anfiflicas apolares e surfactantes comumente usados

Substncias anfiflicas apolares
Surfactantes
lcool cetoestearlico
Lauril sulfato de sdio
lcool cetlico
Cetrimida
lcool estearlico
Cetomacrogol 1000
Monoestearato de glicerila
PEG 1000 monoestearato
cido esterico
Estearato de trietanolamina
Fosfatidilcolina
Estearato de sdio
33
Fonte: adaptado de Oliveira et al., 2004
Figura 6: Esquema de uma micela de uma emulso O/A estabilizada por um emulsionante e
um co-emulsionante
Tabela 2: Ceras auto-emulsionveis comerciais e farmacopicas

Cera auto-emulsionvel
Componentes
Cera auto-emulsionvel BP
lcool cetoestearlico, Lauril sulfato de sdio
Cera auto-emulsionvel USNF
lcool cetlico, Polisorbato
Cera auto-emulsionvel catinica BPC
lcool cetoestearlico, Cetrimida
Monoestearato de glicerila S.E.

Cera auto-emulsionvel Cetomacrogol BPC
Monoestearato de glicerila, Estearato de

sdio
lcool cetoestearlico, Cetomacrogol 1000
Polawax
lcool cetlico, Surfactante no-inico
Lecitina
Fosfatidilcolina,
Fosfatidiletanolamina,
Fosfatidilinositol, cido fosfatdico
3.3 Monoglicerdeos
3.3.1 Generalidades
Monoglicerdeos ou monoacilgliceris (MAG) so basicamente monosteres formados
por cidos graxos e glicerol. Dependendo da orientao das molculas, duas formas
isomricas podem existir (Figura 7) (FREITAS et al., 2008). A forma -monoglicerdeo
tambm pode ser chamada de 1(3) - monoglicerdeo (1(3)-MAG) e a forma -monoglicerdeo
tambm designada por 2- monoglicerdeo (2-MAG).
34
* R = Cadeia carbnica saturada ou insaturada
Figura 7: Formas isomricas dos monoglicerdeos *

Monoglicerdeos so surfatantes no-inicos (Figura 8), que possuem o status GRAS
(Generally Recognized as Safe) pela FDA (Food and Drugs Administration), sendo
amplamente utilizados nas indstrias farmacuticas, de alimentos e de cosmticos (SILVA et
al., 2003), por no apresentarem efeitos colaterais quando ingeridos ou irritaes na pele, ao
contrrio dos tensoativos inicos (MACHADO et al., 2000).
Figura 8: Monoestearato de glicerila: Estrutura caracterstica de um surfactante no-inico

Na indstria farmacutica, os monoglicerdeos so utilizados como emolientes para
emplastos, liberando lentamente a medicao. Na indstria alimentcia so mais comumente
utilizados como emulsificantes em produtos de padaria, como margarinas, derivados do leite,
doces e molhos. Na indstria cosmtica, eles so usados como agentes texturizantes e para
melhorar a consistncia de cremes e loes (KAEWTHONG et al., 2005). Na Tabela 3 so
sumarizados diferentes tipos de monoglicerdeos e algumas de suas principais aplicaes.
35
Tabela 3: Exemplos de monoglicerdeos e suas principais aplicaes

Monoglicerdeos
Aplicaes
Monoglicerdeos dos
Previnem efeitos danosos em pessoas que possuem desordens
cidos EPA e DHA
vasculares
Monopentanoglicerol
Tratamento de cabelos
Monocaprina
Possui propriedades antimicrobianas sendo utilizada em emulses
para mucosa bucal, reduzindo os prejuzos causados por bactrias
como Candida albicans, que se aloja entre a gengiva e os dentes
(principalmente nas dentaduras)
Monolaurina
Possui propriedades antimicrobianas e usada como um dos
principais agentes penetrantes para aplicaes em membranas
mucosas, onde reduz o tempo necessrio para o incio da ao da
droga, aumenta a quantidade da droga penetrante e causa menor
ou nenhum efeito deletrio membrana mucosa
Monoolena
Utilizada como sistema de liberao de drogas, carreador
farmacutico e emulsificante
Monoestearina
Amplamente usada como emulsificante em alimentos,
medicamentos e cosmticos
Fonte: adaptado de FREITAS et al., 2008
A produo mundial de monoglicerdeos estimada em cerca de 180 mil toneladas por

ano (BELLOT et al., 2001). Eles so consumidos na faixa de 85 mil toneladas por ano nos
EUA, correspondendo a, aproximadamente, 70% do total de emulsificantes usados em
produtos alimentcios (ARCOS; OTERO, 1996). Nas indstrias alimentcia, farmacutica e de
cosmticos, representam cerca de 70% de todos os emulsificantes sintticos utilizados
(FREGOLENTE, 2006).
Tanto fatores tcnicos como regulatrios da FDA e da Unio Europia, dentre outras,
tm incentivado o desenvolvimento de melhores processos para a sntese de emulsificantes,
especialmente daqueles usados em aplicaes farmacuticas, cosmticas ou relacionados
rea de alimentos (OTERO et al., 2001).
3.3.2 Monoestearato de glicerila e suas aplicaes cosmticas

Um exame minucioso das formulaes cosmticas revela uma srie de ingredientes
que podem ser classificados, de acordo com suas propriedades, em: agentes emulsificantes,
espessantes, solventes, umectantes, emolientes, dentre outros. Esta classificao nem sempre
satisfatria para certos ingredientes, particularmente para os emulsificantes que so capazes
de executar vrias funes, isoladamente ou combinados com outros componentes da
formulao. Por exemplo, um monoster de glicerila pode ser descrito como um
36
emulsificante, co-emulsionante, estabilizante, espessante ou emoliente dependendo do seu

papel na formulao (ECCLESTON, 1997).
Monosteres de glicerila, preparados atravs da esterificao do glicerol com cidos
graxos, so usados como agentes emulsificantes A/O, co-emulsionantes O/A, estabilizantes e
espessantes em uma grande variedade de emulses cosmticas. O monoestearato de glicerila
(ou monoestearina) o derivado mais usado em formulaes cosmticas e por isso
mencionado em vrias farmacopias (ECCLESTON, 1997).
O monoestearato de glicerila descrito como sendo o mais simples dos compostos
no-inicos utilizados como co-emulsionantes O/A, sendo o mais largamente empregado em
emulses cosmticas. Isoladamente, possui ao como emulsionante A/O e propriedades
emolientes. No entanto, quando associado a um tensoativo aninico tem o efeito de produzir
auto-emulses (monoestearato de glicerina auto-emulsionvel), sendo usado com bons
resultados em sistemas do tipo O/A como co-emulsionante (GRAMALUX, 2009).
De acordo com Eccleston (1997), os cidos graxos usados na esterificao no so
substncias puras, mas geralmente so uma srie homloga de cidos graxos. Assim, os
monoestearatos de glicerila comerciais tambm so uma mistura homloga de
monoglicerdeos saturados com tamanho de cadeia variando de C14 a C18, diglicerdeos,
triglicerdeos, cidos graxos livres e seus sais e traos de alcois livres, como o glicerol. O
nome do ster representa apenas o cido predominante na mistura. Por exemplo, a
especificao do monoestearato de glicerila na Farmacopia Americana Formulrio
Nacional (USP NF) edio XVII diz que ele deve conter no mnimo 90% de
monoglicerdeos, principalmente monoestearato de glicerila e monopalmitato de glicerila. Em
contraste, a Farmacopia Europia descreve o monoestearato de glicerila 40-50 como uma
mistura de monoglicerdeos, diglicerdeos e triglicerdeos dos cidos esterico e palmtico
contendo entre 40 e 50% de monoglicerdeos calculados como monoestearato (ECCLESTON,
1997).
A Farmacopia Portuguesa edio VII diz que o cido esterico uma mistura
constituda principalmente por cido esterico e cido palmtico. Alm disso, ela diz que este
produto contm quantidades nominais diferentes de cido esterico: o cido esterico 50
contm entre 40,0 e 60,0 %, o cido esterico 70 contm entre 60,0 e 80,0 % e o cido
esterico 95 contm, no mnimo, 90,0 %. A soma dos teores em cido esterico e palmtico
no inferior a 90,0 % para o cido esterico 50 e o cido esterico 70 e no inferior a 96,0
% para o cido esterico 95. A mesma Farmacopia diz que o monostearato de glicerila 40-55
uma mistura de monoacilgliceris, principalmente de monoestearilglicerol, contendo
37
quantidades variveis de di e triacilgliceris. Contm entre 40,0 e 55,0 % de

monoacilgliceris, 30,0 a 45,0 % de dialcilgliceris e 5,0 a 15,0 % de triacilgliceris, obtidos
por glicerlise parcial de leos vegetais contendo principalmente triacilgliceris dos cidos
palmtico e esterico ou por esterificao da glicerina pelo cido esterico 50 (tipo I), pelo
cido esterico 70 (tipo II) ou pelo cido esterico 95 (tipo III). Assim, a composio em
cidos graxos do monoestearato de glicerila depender do cido esterico utilizado na sua
sntese, no caso de sntese via esterificao do glicerol com cido esterico (Tabela 4). A
Farmacopia portuguesa ainda acrescenta que o teor de glicerol livre no pode ultrapassar 6,0
% (FARMACOPIA PORTUGUESA VII, 2002).
Tabela 4: Composio em cidos graxos do monoestearato de glicerila

Monoestearato de glicerila cido graxo utilizado Composio em cidos graxos
40 - 55
na sua sntese
cido esterico: 40,0 a 60,0 %.
Tipo I
cido esterico 50
Soma dos teores em cidos
palmtico e esterico: no mnimo,
90,0 %.
Tipo II
cido esterico 70
90,0 %.
Tipo III
cido esterico 95
96,0 %.
Fonte: Farmacopia portuguesa VII, 2002
A quarta edio da Farmacopia Brasileira diz que o cido esterico uma mistura de
cidos esterico e palmtico. Ela acrescenta ainda que o contedo de cada um dos dois cidos
graxos de, no mnimo, 40 % e a soma dos dois componentes no deve ser inferior a 90 %
(FARMACOPIA BRASILEIRA IV, 1996). Nenhuma das edies da Farmacopia Brasileira
aborda as especificaes do monoestearato de glicerila.
A empresa brasileira fornecedora de ingredientes cosmticos Pharma Special declara
que o monoestearato de glicerila uma mistura de mono e diglicerdeos dos cidos palmtico
e esterico (PHARMA SPECIAL, 2009).
Para uma maior compreenso das aplicaes e funes do monoestearato de glicerila
em formulaes cosmticas importante o conhecimento de seu EHL.
Os valores de EHL publicados por Griffin (1954) para o monoestearato de glicerila
obtido de diferentes fontes so similares entre si (EHL = 3,8). A coincidncia entre os valores
38
dados por Griffin (1954) sugere que eles foram obtidos atravs da equao 1 (equao
utilizada para o para clculo do EHL de tensoativos no-inicos do tipo ster), possivelmente
usando uma mdia para os valores de ndice de saponificao do ster e do ndice de acidez
do cido graxo correspondente (PASQUALI et al., 2008).
EHL = 20 (1 S/A)
Equao 1
onde S o ndice de saponificao do ster e A o ndice de acidez do cido graxo utilizado

na esterificao.
Griffin (1954) usava o clculo do EHL do monoestearato de glicerila como um
exemplo do uso da equao 1. Ele usava 161 mg de KOH/g como o valor do ndice de
saponificao do monoestearato de glicerila e 198 mg de KOH/g como o valor do ndice de
acidez do cido esterico. A massa molecular relativa do cido graxo 283 (este valor
corresponde a uma mistura de 95,2% de cido esterico e 4,8% de cido palmtico), a massa
molecular do monoster 357 e do dister 622. Se as equaes 2 e 3 forem aplicadas, a
concluso que os valores de EHL do monoestearato de glicerila e do diestearato de glicerila
so, respectivamente, 4,15 e 1,80. Considerando que o valor de EHL publicado por Griffin
(1954) para o monoestearato de glicerila 3,8, pode ser estimado atravs da aplicao da
equao 4 que este produto formado por uma mistura de 85% de monoestearato e 15% de
diestearato (PASQUALI et al., 2008).
EHLmonoster = [Mr(monoster) - 2Mr(cido)] x 20
Equao 2
Mr(monoster)
onde Mr(monoster) a massa relativa do monoster e Mr(cido) a massa relativa do cido
graxo.
EHLdister = [Mr(dister) - 2Mr(cido)] x 20
Equao 3
Mr(dister)
onde Mr(dister) a massa relativa do dister.
EHL = EHLi x fi
Equao 4
onde fi a frao mssica do surfactante i.

O baixo valor de EHL atribudo ao monoestearato de glicerila (3,8) ajuda a entender
suas propriedades e aplicaes cosmticas. Quanto menor o EHL, maior a lipofilicidade da
molcula. Como visto na Escala de Griffin (Figura 4), tensoativos com valor de EHL de 3 a 8
so usados como emulsionantes A/O.
O monoestearato de glicerila uma substncia anfiflica pouco polar que sozinho
considerado como um fraco emulsionante O/A, assim descrito como no-auto-emulsionvel
39
em vrias farmacopias. Ele passa a ser auto-emulsionvel quando misturado com 5% de

surfactante inico ou no-inico de alto EHL (polar), resultando em um produto conhecido
como cera ou base auto-emulsionvel ou auto-emulsionante (monoestearato de glicerila autoemulsionvel) (ECCLESTON, 1997).
O valor de EHL do monoestearato de glicerila auto-emulsionvel depender, conforme
mostra a equao 4, das quantidades relativas de monoestearato de glicerila, diestearato de
glicerila e do tensoativo de alto EHL adicionado mistura, bem como dos valores de EHL
individuais.
3.4 Mtodos de obteno de monoglicerdeos

Os monoglicerdeos podem ser obtidos atravs de 3 metodologias: (1) hidrlise ou
alcolise de triglicerdeos, (2) glicerlise de triglicerdeos, (3) esterificao do glicerol com
cidos graxos ou transesterificao do glicerol com steres de cidos graxos (mais comumente
steres metlicos, etlicos ou vinlicos de cidos graxos). Os 3 processos podem ser
conduzidos tanto por via qumica quanto por via enzimtica empregando lipases.
Todos os mtodos de obteno de MAG levam a um produto final que uma mistura
de mono, di e triglicerdeos e substratos que no reagiram. A proporo depende da presena
e do tipo de catalisador e das condies da reao, como temperatura e razo molar entre os
reagentes. Dentre os acilgliceris sintetizados, o monoster possui a maior atividade como
tensoativo e, por isso, a quantidade de MAG no produto final muito importante para
direcionar o uso do produto final da reao como emulsificante. Geralmente, a concentrao
de MAG no produto final no ultrapassa 50%. Ele pode ser separado dos demais glicerdeos
atravs de destilao molecular e assim alcanar a concentrao de 90% ou mais. A
concentrao
final
desejada
depende
muito
da
aplicao
do
produto
final
(ZWIERZYKOWSKI; SZELAG, 2004).
3.4.1 Via qumica

3.4.1.1 Hidrlise ou alcolise de triglicerdeos
A hidrlise contnua de leos e gorduras para a produo de cidos graxos e glicerol
um processo padro utilizado em escala industrial. As gorduras so hidrolisadas em
tratamento contracorrente com vapor em elevadas temperaturas e presses (LI e WARD,
1993). No entanto, necessrio um rgido controle operacional para evitar a hidrlise
40
completa dos triglicerdeos, o que resultaria em cidos graxos e glicerol em vez de

monoglicerdeos. O principal problema na reao de hidrlise o baixo rendimento em MAG,
pois so produzidos dois mols de cido graxo livre por mol de MAG (HOLMBERG;
STERBERG, 1988).
A desvantagem da reao de alcolise o desperdcio de dois cidos graxos do
triglicerdeo, sendo, portanto, mais eficiente o mtodo no qual o glicerol usado como lcool
(glicerlise), permitindo a converso total dos trs cidos graxos (YAMANE et al., 1986).
A reao de hidrlise procede em estgios que ocorrem simultaneamente em
velocidades diferentes. Nas reaes de hidrlise, os triglicerdeos so convertidos para
diglicerdeos, os diglicerdeos so convertidos em monoglicerdeos e os monoglicerdeos so
convertidos em glicerol e cidos graxos (SILVA, 2002).
Geralmente feito um pr-tratamento de purificao de leos e gorduras para eliminar
a cor, os fosfolipdeos, os sabes metlicos, os resduos e as mucilagens que podem interferir
posteriormente no processo de hidrlise. Por exemplo, em altas presses os sabes produzem
emulses que interferem na reao de hidrlise. Este processo de pr-tratamento chamado
de degomagem e geralmente realizado pelo tratamento com cidos, tais como cido
clordrico, cido fosfrico e cido ctrico (DIEZ, 1996).
Na hidrlise qumica, conhecida como ciso ou desdobramento, so citados na
literatura os processos Twichell e Sob-presso que utilizam altas temperaturas, tempos de
residncia variveis e altas presses. Os produtos resultantes variam tanto em relao sua
natureza quanto sua pureza (SILVA, 2002).
Segundo Silva (2002), o processo Twichell o primeiro processo vivel de hidrlise
de leos e gorduras. Ele foi proposto por E. Twichell em 1890 e utiliza o cido naftalnico
sulfonado como catalisador. Este processo consiste na hidrlise em meio cido (cido
sulfrico, geralmente) com a utilizao de um tensoativo capaz de promover a emulsificao e
melhorar a interao entre os componentes do meio reacional. As principais objees a este
processo so a produo de cidos graxos de cor escura e o alto consumo de energia,
principalmente para a produo de vapor de gua necessrio para agitao e aquecimento da
reao. Alm disso, os glicerdeos a serem processados requerem um tratamento prvio com
cido sulfrico (0,5 - 2,5%) 50 - 60C sob agitao com vapor durante 30 - 60 minutos
(min). Este tratamento objetiva eliminar as mucilagens que so separadas por decantao em
8 - 12 horas (h).
O processo sob-presso um processo descontnuo que utiliza altas temperaturas (140
- 220). Neste processo so utilizadas autoclaves de ao inoxidvel a fim de evitar a corroso
41
das mesmas. Os catalisadores normalmente utilizados neste processo so os xidos de zinco,

magnsio ou clcio (SILVA, 2002).
3.4.1.2 Glicerlise de triglicerdeos
Os 2 processos industriais mais importantes para a obteno de MAG e diglicerdeos
ou diacilgliceris (DAG) so a glicerlise de leos ou gorduras animais ou vegetais e a
esterificao direta do glicerol com cidos graxos. A glicerlise representa um caso especial
da reao de transesterificao e tem sido bastante estudada. Existem vrias patentes para
processos comerciais (CORMA et al. 1998).
A glicerlise envolve a reao entre triglicerdeos ou triacilgliceris (TAG) e glicerol e
requer 2 mols de glicerol por mol de TAG a fim de gerar 3 mols de MAG. No entanto, este
esquema apenas uma simplificao do que ocorre durante a glicerlise. Na verdade, o
processo ocorre em 2 etapas representadas por 2 equaes sucessivas com diferentes taxas de
reao. Na primeira etapa h a formao dos DAG que posteriormente reagem com o glicerol
gerando os MAG (CORMA et al., 1998). Os monoglicerdeos produzidos via glicerlise so
predominantemente 1(3)-MAG (82 - 95%). A proporo entre 1(3)-MAG e 2-MAG depende
da temperatura da reao. Em altas temperaturas um aumento de 2 a 18% na produo de 2MAG pode ser alcanado (BOYLE, 1997).
Como a reao de glicerlise reversvel, necessrio um excesso de glicerol para
que o equilbrio seja deslocado para a formao dos MAG. No entanto, essencial que ocorra
uma certa homogeneidade entre o glicerol hidroflico e o TAG hidrofbico para que a reao
ocorra. Mesmo em excesso de glicerol, isso s possvel em altas temperaturas (~230C) pois
estas aumentam a solubilidade do glicerol na fase oleosa da reao (CORMA et al., 1998).
Normalmente, os MAG so sintetizados quimicamente via glicerlise de triglicerdeos
empregando catalisadores inorgnicos bsicos (Ca(OH)2, NaOH) 220 - 250C sob atmosfera
de N2 (BERGER; SCHNEIDER, 1993; LANGONE, 1998). A utilizao de temperaturas
elevadas, alm de acarretar um alto consumo energtico, responsvel por um baixo
rendimento, formao de muitos subprodutos e produtos de colorao escura e com sabor de
queimado (SONNTAG, 1982; LANGONE, 1998). Desta forma, quando esta rota usada, se
obtm um produto constitudo por uma mistura que contm cerca de 35 - 60% de
monoglicerdeos, 35 - 50% de diglicerdeos, 1 - 20% de triglicerdeos, 1 - 10% de cidos
graxos livres e produtos secundrios (acrolena, politeres de glicerol, epxidos), sendo assim
necessria uma etapa de purificao para obteno de MAG a ser utilizado na indstria
(FREITAS et al., 2008; SILVA, 2002).
42
O catalisador mais usado para a obteno de MAG para a indstria alimentcia o

Ca(OH)2 pois leva a um escurecimento menor do produto final quando comparado a outros
catalisadores bsicos. Aps o trmino da reao, o catalisador precisa ser neutralizado para
prevenir a reao inversa, que pode ocorrer em uma proporo de at 30%, e tambm para
evitar caractersticas indesejveis no produto final como um sabor de sabo, cor instvel e
espuma devido presena do catalisador. Assim, no final da reao costuma-se adicionar
cido fosfrico para a neutralizao do catalisador bsico. Em seguida, os produtos so
filtrados em argila, e mesmo quando uma grande quantidade de solvente usado, uma grande
quantidade de MAG fica adsorvida na argila. Alm disso, pode haver formao de
subprodutos durante a etapa de neutralizao que levam a problemas durante a filtrao
(CORMA et al., 1998).
Triglicerdeos saturados e hidrogenados tm sido os mais usados para a reao de
glicerlise, sendo que os contendo cidos graxos de 16 e 18 carbonos so os
predominantemente usados. Isso ocorre porque as altas temperaturas inerentes deste processo
(180 - 250C) provocam a decomposio trmica dos TAG usados, sendo que os TAG
insaturados so mais susceptveis a esta decomposio (SILVA, 2002).
Segundo Silva (2002), alm das desvantagens citadas, os processos de glicerlise
apresentam, em geral, baixos rendimentos em MAG.
Numa tentativa de minimizar as reaes colaterais indesejveis inerentes ao processo
de glicerlise, reaes tm sido feitas sob atmosfera de nitrognio para evitar as reaes de
oxidao. No entanto, mesmo nestas condies a formao de produtos com cor escura, sabor
queimado e rendimentos reduzidos ainda so obtidos na maioria das vezes (SILVA, 2002).
Apesar dos inconvenientes e desvantagens relatados, a literatura traz alguns resultados
de estudos bem sucedidos da via de glicerlise para sntese de monoglicerdeos (CHICUTA et
al., 2005; CORMA et al., 1998).
Chicuta et al. (2005) estudaram a sntese de monoglicerdeos atravs da reao de
glicerlise de leo de soja comercial, utilizando-se NaOH como catalisador, atmosfera inerte
de N2 e agitao constante. Para a otimizao das condies reacionais, foi utilizado um
planejamento fatorial 23 com trs pontos centrais, em que as variveis independentes
estudadas foram: razo glicerol/triglicerdeos, quantidade de catalisador (NaOH) e
temperatura. Atravs deste estudo, foi possvel verificar que o efeito das variveis razo molar
e temperatura so estatisticamente significativos no nvel de confiana estudado, porm, o
efeito da razo molar apresentou-se maior nas condies experimentais estudadas. A partir
das estratgias desenvolvidas neste trabalho, foi possvel alcanar a condio de equilbrio da
43
glicerlise aps 1 hora de reao para todos os ensaios e foram obtidos monoglicerdeos em
teor igual a 55,8%.
Corma et al. (1998) estudaram a glicerlise da triolina na presena de vrios
catalisadores bsicos (MCM-41-Cs, Cs sepiolita, Al-Mg hidrotalcita e MgO). Os resultados
demonstraram que o MgO e a hidrotalcita com baixo contedo de alumnio so catalisadores
ativos e seletivos para a obteno de MAG atravs de glicerlise. As converses e
seletividades obtidas foram, respectivamente, 92 - 97% e 75 - 78%.
3.4.1.3 Esterificao do glicerol com cidos graxos ou transesterificao do glicerol com
steres de cidos graxos
A esterificao e a transesterificao tambm produzem monoglicerdeos sem
desperdiar o cido graxo (FREITAS, 2006). A esterificao do cido graxo com glicerol ,
na verdade, o inverso da reao de hidrlise. O equilbrio entre a reao direta e a inversa
usualmente feito pelo controle do contedo de gua do meio reacional (SILVA, 2002). Por
outro lado, a sntese de monosteres de lcoois poliidroxilados como o glicerol um desafio,
pois a tendncia que ocorra a esterificao das demais hidroxilas resultando numa mistura
de steres (MAG, DAG e TAG). A preparao seletiva de monosteres dependente do
catalisador empregado como tem sido demonstrado pelos vrios trabalhos publicados e pelas
patentes registradas envolvendo tanto a esterificao de glicerol quanto a transesterificao de
glicerdeos (PEREIRA-SOARES; SILVA, 2007).
Um exame a respeito dos dados disponveis na literatura sobre a esterificao de
cidos graxos com glicerol revela que altos rendimentos de MAG dependem mais das
propriedades do catalisador do que das condies da reao (PREZ-PARIENTE et al.,
2003).
A sntese de MAG a partir de cidos graxos ou steres de cidos graxos e glicerol pode
ser conduzida na presena de catalisadores cidos ou bsicos (BANCQUART et al., 2001).
A reao de esterificao para sntese de MAG geralmente catalisada por cidos
(cido sulfrico, cido p-toluenosulfnico), mas a seletividade em MAG extremamente
baixa. Estes catalisadores favorecem a degradao do MAG a partir de reaes com o cido
graxo (oxidao ou dimerizao) ou com o glicerol (polimerizao, desidratao em acrolena
e oxidao). Alm do mais, o uso de catalisadores cidos gera problemas ambientais como
despejos cidos, corroso, dificuldade da reciclagem do catalisador e reaes secundrias
(SILVA, 2002).
44
O uso de catlise homognea (cida ou bsica) para a sntese de MAG leva formao
de uma grande quantidade de sais como subprodutos da reao de esterificao ou
transesterificao. O uso de catalisadores heterogneos poderia superar estes problemas
(BANCQUART et al., 2001).
Atualmente os esforos tm se voltado para a utilizao de catalisadores slidos para a
sntese de MAG. A literatura descreve diferentes tipos de catalisadores qumicos utilizados na
sntese de MAG. Dentre estes destacam-se as peneiras moleculares zeolticas (MACHADO et
al., 2000), resinas trocadoras de ons (POUILLOUX et al., 1999) e materiais mesoporosos
funcionalizados (LIN et al., 1999; PREZ-PARIENTE et al., 2003). Apesar de sua eficincia
na formao de MAG e DAG, a preparao destes catalisadores tediosa e longa. Como
alternativa a estes catalisadores, o uso de sais metlicos multivalentes tem sido estudado
(NAKAMURA et al., 2008).
As resinas trocadoras de ons requerem uma razo molar glicerol/cido graxo na
ordem de 6 a fim de aumentar de forma significativa a seletividade por MAG, mas este
processo tem os inconvenientes associados com esta estequiometria. Ademais, a regenerao
do catalisador dificultada (PREZ-PARIENTE et al., 2003).
Pouilloux et al. (1999) estudaram a sntese de MAG a partir de esterificao do
glicerol com cidos graxos na presena de resinas trocadoras de ons. Um inchamento
preliminar da resina em presena de glicerol inibiu a reao, ao passo que um inchamento em
cido olico aumentou a atividade e seletividade. Estes resultados demonstram que a adsoro
competitiva de glicerol e cido graxo influencia a taxa de reao. Atravs do uso de peneiras
moleculares para a remoo de gua, eles obtiveram um aumento da converso para 90% sem
nenhuma alterao na seletividade em MAG (85%). Alm do mais, devido estrutura porosa
do catalisador, o tamanho da cadeia hidrocarbonada do cido graxo afetou a atividade e
seletividade. Finalmente, eles observaram que embora um excesso de glicerol tenha
aumentado a seletividade em MAG, diminuiu a atividade e pode ser considerado como um
inibidor seletivo.
As zelitas tm sido estudadas como catalisadores em potencial para a esterificao do
glicerol com cidos graxos devido a seus suficientemente fortes stios cidos e limitao de
tamanho imposta aos produtos da reao pelo dimetro do poro. J foi constatado que zelitas
cidas so catalisadores eficientes para a sntese de MAG a partir de cidos graxos de baixo
peso molecular. Alm disso, o rendimento em MAG depende no s do tamanho do poro, mas
tambm da dimenso do sistema de canais e do contedo de alumnio (PREZ-PARIENTE et
al., 2003).
45
Machado et al. (2000) estudaram a sntese seletiva de monolaurina a partir da

esterificao do glicerol com cido lurico utilizando as zelitas comerciais Beta, Y e
Mordenita com diferentes razes Si/Al como catalisadores. No caso da zelita Y, foi
verificado um aumento no rendimento e na seletividade de MAG com uma alta razo Si/Al.
Este comportamento parece estar relacionado com a presena de stios cidos mais fortes nos
catalisadores com baixo contedo de alumnio e provavelmente tambm devido maior
hidrofibicidade das zelitas com maior razo Si/Al. A zelita Mordenita, ao contrrio,
apresentou baixa atividade e seletividade para MAG, o que pode ser atribudo limitao
difusional imposta pelo sistema de canais monodimensionais que impediu que o substrato
orgnico tivesse acesso aos stios presentes no interior do catalisador, restringindo reao
regio superficial do mesmo. A zelita Beta apresentou os melhores resultados no sentido de
obter MAG, com seletividades maiores que 60% e um rendimento de 20%.
A disponibilidade de materiais mesoporosos ordenados a partir de 1991 tem permitido
uma ampla investigao de sua aplicao na esterificao do glicerol com cidos graxos. O
tamanho de poro dos materiais pertencentes famlia M41S de peneiras moleculares (2 - 10
nm) grande o suficiente para permitir que ocorram reaes dentro do poro. O MCM-41 o
membro mais notrio da famlia M41S de peneiras moleculares mesoporosas. Ela apresenta
uma alta seletividade para MAG, mas uma baixa atividade cataltica nas reaes de
esterificao. O tamanho do poro um parmetro crtico na determinao da seletividade em
MAG. Uma estratgia para aumentar sua atividade cataltica a insero de novos grupos
cidos na superfcie do catalisador. Bons resultados foram conseguidos utilizando grupos
funcionais contendo cido sulfnico, o cido lurico como cido graxo, quantidades
equimolares de reagentes e temperatura de 100C (PREZ-PARIENTE et al., 2003).
Nakamura et al. (2008) estudaram a esterificao da glicerina com cido lurico
catalisada por sais metlicos multivalentes com o objetivo de produzir MAG e DAG. Os
resultados demonstraram que estes sais (hidratos de zircnio, ferro e alumnio) apresentam
uma alta atividade cataltica para a esterificao estudada, sem solvente. Dentre os sais
testados, ZrOCl2.8H2O e AlCl3.6H2O resultaram em uma alta seletividade em monolaurina. J
os sais Fe2(SO4)3.nH2O e Zr(SO4)2.4H2O apresentaram uma maior seletividade em dilaurina,
mesmo em excesso de glicerina. A reao ocorreu atravs da dissoluo ou disperso dos sais,
que apresentam propriedades fracamente cidas. No entanto, so necessrios estudos
detalhados para o melhor entendimento do mecanismo desta catlise.
Alguns estudos tm sido realizados com o objetivo de utilizar sabes (sais de cidos
graxos) para acelerar a reao de esterificao de cidos graxos e glicerol com o objetivo de
46
produzir uma mistura emulsionante composta predominantemente de MAG para uso

cosmtico ou farmacutico denominada emulsionante do tipo acilglicerol modificado. A
composio do produto da reao seria: cido graxo e glicerol que no reagiram, MAG, DAG
e o sabo utilizado como catalisador (MACIERZANKA; SZELAG, 2006). O sabo que foi
utilizado para acelerar a reao no precisa ser removido do meio pois tambm possui ao
emulsionante, podendo complementar a ao do MAG. Sabes de metais alcalinos (sdio e
potssio) possuem um alto valor de EHL, sendo utilizados como emulsionantes O/A. J
sabes de ctions multivalentes (zinco) so utilizados como emulsionantes A/O por possurem
uma maior hidrofobicidade (menor EHL). O EHL final do produto depender das quantidades
relativas dos emulsionantes presentes na mistura alm dos valores de EHL individuais.
Szelag e Zwierzykowski (1998) estudaram a cintica da esterificao do glicerol com
cidos graxos na presena de sabes de sdio e potssio sintetizados in situ. Eles investigaram
o efeito da temperatura, da concentrao de sabo e do cido graxo na concentrao final de
MAG. Os estudos cinticos provaram que a reao de esterificao realizada uma reao de
primeira ordem que tem o MAG como um produto intermedirio estvel. Conhecendo as
constantes das taxas de reao possvel calcular a concentrao final de MAG. Este mtodo
abre caminho para um ajuste especfico da composio do produto final, bem como de seu
EHL e de suas caractersticas como emulsionante.
Szelag e Macierzanka (2001) estudaram a sntese de MAG via esterificao catalisada
por sabes de sdio, potssio e zinco. Eles examinaram o efeito do cido graxo e do ction do
sabo utilizado no progresso da reao e na concentrao final de MAG. Sob as condies dos
experimentos realizados, o catalisador mais eficiente foi o sabo de zinco, seguido pelo sabo
de sdio e, por ltimo, o de potssio. Os resultados demonstraram que as propriedades
hidroflicas do emulsionante produzido podem ser modificadas programando-se o
comprimento da cadeia hidrocarbonada do MAG e do sabo. Os MAG modificados pela
presena de sabes de sdio e potssio podem estabilizar emulses O/A enquanto que as
preparaes modificadas pela presena de sabes de zinco podem estabilizar emulses A/O.
Os mesmos autores estudaram a cintica da esterificao do glicerol com cidos
graxos (C12:0, C14:0, C16:0 e C18:0) na presena de sabes de zinco dos cidos graxos
utilizados. Eles estudaram o efeito da temperatura (130 - 160C) e da razo molar
glicerol:cido graxo:sabo de zinco (1:1:0,00625 - 1:1:0,05) na concentrao final de MAG
durante 6 horas de reao. A presso do sistema foi mantida reduzida a fim de eliminar a gua
gerada durante a esterificao. Os estudos cinticos provaram que a reao de esterificao
realizada uma reao de primeira ordem que tem o MAG como um produto intermedirio
47
estvel. A mxima concentrao de MAG na mistura final foi 50%. As condies reacionais,
bem como o tipo de cido graxo e sabo utilizado influenciaram a converso e a concentrao
final de MAG. Os sabes de zinco demonstraram ser eficientes em aumentar o contato entre
os reagentes, aumentando assim o progresso da reao. A formao de microemulses foi
observada em todos os processos de esterificao estudados. Atravs dos estudos cinticos foi
possvel controlar a composio final do produto em relao ao contedo de MAG e sabo de
zinco. A influncia da composio dos emulsionantes sintetizados no seu valor de EHL
tambm foi investigada. O comprimento da cadeia hidrocarbonada do MAG bem como a
concentrao do sabo influenciaram o valor de EHL das preparaes sintetizadas
(MACIERZANKA; SZELAG, 2004).
Pereira-Soares e Silva (2007) objetivando a preparao seletiva de monoster de
glicerol realizaram reaes com o cido dodecanico e glicerol na presena de xido de
nibio como catalisador variando-se as propores entre os reagentes. Foi alcanado o teor de
80% de monoster aps 8 h de reao com a proporo em mols de 5 de glicerol para o cido
graxo, massa de catalisador equivalente a 1% de stios cidos temperatura de 160 5C
(mais baixa do que as atualmente praticadas na maioria das patentes registradas). Nestas
condies, a converso do cido determinada por titulao foi da ordem de 90%. O produto
foi caracterizado por espectrometria no infravermelho, por ressonncia magntica nuclear de
hidrognio e de carbono. Os autores concluram que o aumento do excesso de glicerol foi um
dos fatores determinantes para o aumento do teor de monoster em relao ao dister.
Embora menos usados, alguns catalisadores bsicos (hidrxidos, carbonatos) tm
demonstrado alguma atividade na reao de esterificao. O uso de catalisadores bsicos
poderia limitar a formao de reaes secundrias que acarretam a degradao dos produtos.
Uma comparao entre catalisadores bsicos slidos (MgO, ZnO e Na2CO3) mostrou que o
ZnO um dos melhores catalisadores na esterificao do glicerol com o cido esterico j que
as bases usuais favorecem a formao de sabo. Alm do mais, o uso de um solvente
apropriado aumenta a atividade e a seletividade em MAG do ZnO devido homogeneizao
do meio reacional e limitao da reao trmica. Os resultados mostraram que a reao de
esterificao fortemente dependente do catalisador e da solubilidade solvatao dos
reagentes e produtos (POUILLOUX et al., 2000).
Pouilloux et al. (2000) estudaram a sntese de monoestearina por esterificao do
glicerol com cido esterico sob atmosfera de nitrognio em reator termostatizado e com
agitao mecnica. As melhores condies experimentais obtidas foram: temperatura de
110C, tempo de reao de 16 h, razo molar glicerol/cido esterico igual a 1 e 0,5% (m/m)
48
de catalisador (carbonato de sdio ou cido p-toluenosulfnico). Utilizando carbonato de

sdio eles conseguiram 43,9% de converso e 68,5% de converso em MAG, j com o uso do
cido p-toluenosulfnico eles atingiram 89,4% de converso e 32,3% de MAG.
A produo convencional de MAG atravs de esterificao geralmente envolve o uso
de catalisadores. No entanto, estes podem ser inativados em altas temperaturas ou por
impurezas presentes nos reagentes, alm de poderem levar formao de subprodutos e cores
indesejveis. Adicionalmente, a remoo do catalisador no final da reao leva perda no
rendimento da reao. Devido a estes problemas, reaes sem catalisadores so, muitas vezes,
preferidas. Com os atuais avanos na tecnologia de fluidos supercrticos, uma alternativa seria
conduzir reaes no-catalisadas na presena de dixido de carbono supercrtico. Este um
meio excelente no s devido s suas propriedades solventes mas tambm porque permite que
a reao de esterificao ocorra em ausncia de oxignio, resultando em produtos sem
resduos de solventes e em um processo ambientalmente seguro. Alm disso, a separao dos
cidos graxos livres no final da reao feita de maneira simples no final do processo
(MOQUIN; TEMELLI, 2008).
Moquin e Temelli (2008) estudaram a esterificao do glicerol com cido olico em
dixido de carbono supercrtico, sem catalisador, com o objetivo de produzir MAG e elucidar
a cintica e o mecanismo da reao. As reaes foram conduzidas 10 - 30 MPa de carbono
supercrtico, 170 - 250C e razes molares (glicerol/cido olico) de 10:1, 1 e 1:2. Os
resultados demonstraram que a taxa de formao de MAG 50% da concentrao de
equilbrio (taxa-50%) aumentou significativamente com a temperatura, mas no foi afetada
pela presso do meio supercrtico. Os valores da taxa-50% para as razes molares 10:1 e 1
foram similares e maiores que para a razo 1:2. A concentrao de MAG no equilbrio
diminuiu significativamente com a diminuio da concentrao inicial de glicerol.
Bancquart et al. (2001) estudaram a transesterificao do glicerol com estearato de
metila, na ausncia de solventes, utilizando catalisadores slidos bsicos. A comparao entre
vrios catalisadores slidos bsicos (MgO, CeO2, La2O3 e ZnO) demonstrou que quanto maior
for a basicidade intrnseca do catalisador, mais ativo ele ser (Tabela 5). Apesar do La2O3 ter
sido o catalisador mais ativo, foi observada a presena de acrolena resultante da desidratao
do glicerol nos centros cidos do catalisador. Os autores reconheceram que a seletividade em
MAG poderia ser aumentada se a reao ocorresse em excesso de glicerol, porm devido
dificuldade da posterior remoo deste do meio (devido s propriedades tensoativas do MAG
impossvel lavar a mistura com gua), foi usado um excesso de apenas 1,2. Com o intuito de
aumentar a performance de 2 dos catalisadores testados, os autores utlilizaram vrios mtodos
49
para preparar o MgO e CeO2. O MgO preparado por hidratao seguida de calcinao de um
material comercial mostrou ser o catalisador mais ativo (90% de converso e 30% de MAG)
provavelmente devido presena de stios bsicos mais fortes.
Tabela 5: Converso e seletividade na reao de transesterificao de glicerol com estearato

de metila na presena de xidos metlicos aps 6 h de reao 220C, com quantidades
equimolares de reagentes, 0,5 g de catalisador, presso atmosfrica, sob atmosfera de
nitrognio
Catalisador
Converso (%)
MAG (%)
DAG (%)
TAG (%)
ZnO
18
80
20
MgO
83
42
52
La2O3
97
28
61
11
CeO2
100
Fonte: adaptado de BANCQUART et al., 2001
Corma et al. (2005) estudaram os stios ativos bsicos de Lewis e Brnsted em

catalisadores slidos e o seu papel na sntese de MAG. Catalisadores slidos do tipo base de
Brnsted apresentaram uma atividade maior e uma taxa especfica muito maior do que as
reportadas para as hidrotalcitas (bases de Lewis) para a transesterificao do ster metlico do
cido olico com o glicerol. A seletividade das bases de Brnsted para MAG maior por
causa da menor desativao do catalisador, o que permite que a transesterificao de DAG
ocorra em tempos de reao mais longos. Hidrotalcitas Li-Al calcinadas apresentaram maior
atividade do que o MgO e as hidrotalcitas Al-Mg devido a sua maior basicidade de Lewis.
Todos os catalisadores slidos do tipo base de Lewis apresentaram a mesma seletividade em
MAG independentemente da fora da base e uma seletividade menor do que os catalisadores
bsicos de Brnsted.
3.4.2 Via enzimtica

Recentemente a sntese de MAG catalisada por lipases tem sido estudada intensamente
como alternativa ao mtodo convencional, devido, principalmente, utilizao de condies
reacionais brandas de pH e temperatura, que implicam em baixo consumo energtico e menor
incidncia de reaes indesejveis, e seletividade das lipases que, de forma integrada,
resultam em produtos de melhor qualidade. Alm disso, a especificidade dessas enzimas
possibilita a sntese de produtos que no poderiam ser obtidos pela rota qumica convencional.
50
Pode-se explorar a seletividade das lipases por determinados cidos graxos e tambm sua
regioseletividade pela posio alfa das molculas de glicerol em detrimento da posio beta.
Cabe ressaltar que do ponto de vista ambiental, o processo enzimtico tecnicamente limpo e
seguro. Este fato bastante significativo tendo em vista a crescente demanda por tecnologias
verdes e produtos seguros para o consumidor (consumer-friendly) (BORNSCHEUER, 1995).
O elevado custo das lipases e sua baixa estabilidade operacional apresentam o maior
obstculo na competio com a sntese qumica atualmente empregada. No entanto, o
progresso na rea da gentica e na tecnologia de processos permite que a indstria oferea
biocatalisadores com melhores propriedades e com um custo reduzido (FREITAS et al.,
2008).
Alm disso, a sntese de um produto de alto valor agregado, na maioria das vezes,
compensa os gastos com as enzimas. Este o caso da sntese de insumos cosmticos. Os
steres de uso cosmtico sintetizados enzimaticamente, por exemplo, tm sido designados
como "Biosteres" a fim de ressaltar a qualidade do produto e seu apelo "natural". Esta
estratgia de marketing certamente aumenta o preo do produto final e aumenta as vendas, j
que a indstria de cosmticos possui uma alta demanda por ingredientes inovadores e
"naturais" (KOSKINEN; KLIBANOV, 1996).
Neste contexto, diferentes alternativas tm sido propostas com relao sntese
enzimtica de monoglicerdeos. Algumas destas incluem a hidrlise seletiva usando lipases
1,3-especficas, a esterificao de cidos graxos ou a transesterificao de steres com glicerol
e a glicerlise de leos e gorduras. Diferentes sistemas reacionais para a produo de MAG
operando em regime batelada ou contnuo, bem como variadas fontes de lipase, graus de
pureza e mtodos de imobilizao, vm sendo investigados detalhadamente. No caso da
utilizao de lipases como catalisadores, a hidrlise ou alcolise de triglicerdeos fornece 2MAG, enquanto as demais metodologias usualmente fornecem uma mistura de
monoglicerdeos, na qual o 1(3)-MAG o composto predominante, geralmente obtido com
um rendimento elevado (FREITAS et al., 2008).
3.4.2.1 Hidrlise ou alcolise de triglicerdeos
Hidrlises enzimticas usando lipases no-especificas oferecem um processo
alternativo para a produo de cidos graxos em condies moderadas. Vrios mtodos esto
descritos na literatura, incluindo reaes na presena (VIRTO et al., 1991) ou na ausncia
(BAILLARGEON; SONNET, 1991) de solventes orgnicos. Para obteno de MAG por
hidrlise enzimtica, necessrio o controle da reao para evitar uma hidrlise completa. A
51
maneira mais fcil de alcanar esse propsito a aplicao de lipases 1,3-especficas que
resulta em 2-MAG como um dos produtos (FREITAS et al., 2008) (Figura 9).
* R e R' = Cadeia carbnica saturada ou insaturada
Figura 9: Obteno de monoglicerdeos por hidrlise ou alcolise enzimtica *

No caso de hidrlise enzimtica, a migrao do grupo acila (da posio 2 para a
posio 1(3) do glicerol) deve ser suprimida a fim de evitar a hidrlise total do TAG, que
resultaria em glicerol e cidos graxos (HOLMBERG; STERBERG, 1988). Por outro lado, a
reao de alcolise pode ser realizada na presena de solventes apolares, reduzindo a
velocidade de migrao do grupo acila. Por esta razo, a alcolise de triacilgliceris fornece
rendimentos mais elevados (75 - 97%) que a hidrlise. Adicionalmente as reaes de alcolise
so mais rpidas por no ocorrer mudana do pH durante a reao e tambm porque a lipase
no sofre inibio dos cidos graxos livres. A adio do lcool em excesso desloca o
equilbrio para a formao de monoglicerdeos (FREITAS, 2006).
Hidrlises parciais de leos de diversas sementes so descritas na literatura, como por
exemplo, a hidrlise do leo de mamona usando a lipase 1,3-especfica de Rhizophus
arrhizus.
Nesse
procedimento,
rendimentos
de
23%
de
MAG
(principalmente
monorricinolena) e 66% de cido ricinoleico foram alcanados em 3 h de reao. A

precipitao do cido pela adio de cloreto de sdio aumentou a quantidade de MAG para
65% (BORNSCHEUER, 1995).
Um procedimento mais especfico de obteno de 2-MAG em um sistema bifsico foi
relatado por Mazur et al. (1991). O sistema consistia em hexano, lcool aliftico (lcoois
primrios como o 2-butanol) e uma soluo aquosa tamponada contendo lipase 1,3-especfica.
Numa segunda etapa uma maior seletividade de reao pde ser induzida pela esterificao
dos cidos graxos livres liberados com o lcool aliftico. O rendimento foi de 70% e o mtodo
foi considerado apropriado para TAG saturados de tamanho de cadeia na faixa de C8 a C14.
52
Uma outra possibilidade para aumentar a seletividade em MAG pode ser alcanada
pela hidrlise do leo na presena de surfactantes aninicos. Em condies otimizadas,
Holmenberg e sterberg (1988) obtiveram um rendimento de 80% em 2- MAG.
Tambm relatada na literatura a hidrlise de leos de origem animal. Hur et al.
(1999) estudaram a hidrlise de leo de peixe utilizando a lipase comercial de Aspergillus
orysae, Lipolase-100T. A quantidade de cidos graxos na posio 2 e o grau de migrao dos
cidos graxos no 1,2(2,3)-DAG e 2-MAG foram cuidadosamente avaliados.
A taxa de
converso de 1,2(2,3)-DAG a 1,3-DAG e de 2-MAG a 1(3)-MAG tambm foram obtidas. Os

resultados indicaram que a taxa de migrao de 1,2(2,3)-DAG a 1,3-DAG foi maior do que a
taxa de hidrlise de 1,2(2,3)-DAG a 2-MAG e que a taxa de converso de 2-MAG a 1(3)MAG foi extremamente baixa.
Muo et al. (2008) estudaram a etanlise do leo de peixe catalisada por lipases 1,3especfica com o objetivo de produzir 2-MAG rico em cidos graxos poliinsaturados. Altos
rendimentos em 2-MAG (90,3%) foram obtidos utilizando etanol 96% e a lipase comercial
Novozym 435, que se comporta como uma lipase 1,3-especfica em grande excesso de etanol.
No entanto, a gua presente no etanol levou formao de cidos graxos livres que
dificultaram a purificao do 2-MAG. Um rendimento de 75% foi alcanado utilizando-se a
lipase D de Rhizopus orysae e a lipase de Rhizopus delemar imobilizada em Accurel MP1000 utilizando etanol absoluto. Nestas condies no foram obervadas a formao de cidos
graxos e a migrao de acilas. Estes rendimentos foram obtidos utilizando-se as seguintes
condies: razo molar etanol/leo de 11 e 6 mL de acetona por grama de leo. A alcolise
atingiu um valor mnimo na ausncia de solvente; no entanto, o rendimento em 2-MAG no
equilbrio parece no ter sido influenciado pela razo acetona/leo.
3.4.2.2 Glicerlise de triglicerdeos
A desvantagem da reao de alcolise o desperdcio de dois cidos graxos do
triglicerdeo, sendo, portanto, mais eficiente o mtodo no qual o glicerol usado como lcool
(glicerlise), permitindo a converso total dos trs cidos graxos, empregando lipases tanto
especficas como no especficas (FREITAS et al., 2008). Na prtica, usualmente as reaes
promovem a migrao do grupo acila de tal forma que se estabelece um equilbrio da
concentrao
dos produtos formados na razo de 9:1 (1(3)-MAG e 2-MAG)
(KAZLAUSKAS; BORNSCHEUER, 1998 apud FREITAS, 2006) (Figura 10).
53
Figura 10: Obteno de monoglicerdeos por glicerlise enzimtica *

Como a glicerlise de triglicerdeos apresenta baixo rendimento (30 - 50%) em
monoglicerdeos, devido ao equilbrio desfavorvel da reao, diversas estratgias so
adotadas para deslocar o equilbrio no sentido desejvel da reao.
O trabalho pioneiro foi desenvolvido por Yamane et al. (1986) que estudaram a reao
de glicerlise do leo de milho pela lipase de Pseudomonas fluorescens em sistema batelada,
sem adio de surfactantes ou emulsificantes, e conseguiram produzir 20,4% de MAG a 40C.
Desde ento a reao de glicerlise catalisada por lipases vem sendo intensamente pesquisada,
sendo inmeros os trabalhos realizados visando a obteno de MAG a partir de uma variedade
de leos e gorduras naturais.
Reaes de glicerlise j foram realizadas em micelas reversas (sistemas compostos
por molculas anfiflicas que se auto-organizam de forma que seus grupamentos polares se
orientam para a face interna e a parte apolar se orienta para a face externa) (CHANG et al,
1991; HOLMBERG et al., 1989), na presena ou ausncia de solventes orgnicos ou em
sistemas em estado slido livre de solvente (MCNEILL et al., 1990). Problemas envolvendo a
hidrofilicidade do substrato glicerol em solventes orgnicos e problemas analticos para a
determinao quantitativa dos glicerdeos parciais foram descritos por Ferreira-Dias e
Fonseca (1993).
Ohta et al. (1989) relataram que a lipase pode sofrer inibio e desativao pelo leo
oxidado durante a glicerlise (batelada ou contnua) do leo de girassol.
Tan e Yin (2005) estudaram o mecanismo da glicerlise de 1,3-palmitina-2-olena pela
lipase de Rhizopus arrhizus. Os resultados mostraram que a glicerlise um processo
complexo incluindo hidrlise, esterificao e isomerizao de MAG e DAG. Nas primeiras 5
h de glicerlise, a hidrlise predomina e, a seguir, acontecem a esterificao e isomerizao.
54
Mcneill et al. (1990) desenvolveram um mtodo, no qual a glicerlise foi realizada

numa emulso lquido-lquido de glicerol e triglicerdeos, seguida da cristalizao dos
monoglicerdeos formados. Usando este mtodo, foram obtidas altas formaes de MAG (7099%) utilizando diferentes meios reacionais (BORNSCHEUER; YAMANE, 1994;
FERREIRA-DIAS; FONSECA, 1993; MYRNES et al., 1995). A temperatura de reao
tambm crtica e precisa ser mantida abaixo da temperatura do ponto de fuso do
monoglicerdeo. Para sebo de boi, por exemplo, a temperatura tima foi de 42C fornecendo
72% de 1(3)-MAG usando lipase pancretica ou microbiana (MCNEILL et al., 1990).
Adicionalmente, um melhor desempenho do processo pode ser obtido por meio do controle do
teor de gua do meio reacional, da razo entre triglicerdeos e glicerol, da quantidade e do tipo
de lipase (MCNEILL; YAMANE, 1991).
Bornscheuer e Yamane (1994) estudaram a atividade e estabilidade de lipases de
diferentes fontes durante a glicerlise da triolena. Eles observaram que lipases bacterianas
foram muito estveis, enquanto que as lipases fngicas foram rapidamente inativadas. Uma
melhoria na estabilidade operacional foi descrita por meio da imobilizao da lipase em
Celite. Utilizando-se a lipase de Chromobacterium viscosum, foi possvel obter 99% de MAG
em 120 h de reao 8C (sendo as primeiras 8 h 25C).
O rendimento em MAG em funo do tamanho da cadeia e perfil de saturao dos
cidos graxos do TAG foi estudado durante a glicerlise do leo de palma. A anlise
detalhada da composio dos produtos de reao indicou uma cristalizao preferencial de
MAG especialmente pelo acmulo de cidos graxos saturados, tais como C16:0, na frao de
MAG (MCNEILL; BERGER, 1993; MCNEILL et al., 1992).
Em processos contnuos, podem ser usados reatores com membrana para remover os
monoglicerdeos ao invs da estratgia da cristalizao (STEVENSON et al., 1993; CHANG
et al., 1991).
Em biorreatores com membrana de microporos hidroflicos, leo comestvel foi
glicerolisado por lipase de P. fluorescens, resultando na formao de 5 - 25% de MAG. O
tempo de meia-vida da enzima foi de 3 semanas a 40C (FREITAS, 2006).
Chang et al. (1991) empregaram biorreatores contnuos com membrana de
polissulfona para a glicerlise do leo de oliva em bis (2-etil-1-hexil) sulfosuccinato de sdio
(AOT)/isooctano usando lipase de C. viscosum imobilizada em lipossomas (pequenas
vesculas lamelares). A fase estacionria foi atingida aps 24 h de operao, resultando numa
converso de 80% do leo de oliva durante 6 dias de operao do reator. Uma produtividade
mais elevada da monoolena (90 moL (h.mL)-1) foi obtida numa concentrao de 2% do
55
substrato inicial. O fluxo otimizado do leo de oliva foi de 2,5 mL/h, e o teor de gua foi
menor que 8%. A estabilidade operacional da lipase imobilizada em lipossoma foi calculada
em 45 dias, por outro lado, o tempo de meia-vida da enzima livre em micelas reversas foi
somente cerca de 4 dias. A atividade da enzima imobilizada foi ligeiramente inferior ao
biocatalisador na forma livre.
Esmelindro et al. (2008) utilizaram o AOT como surfactante na glicerlise de leo de
oliva catalisada pela lipase comercial Novozym 435 em presena de propano pressurizado
como solvente. Os experimentos foram conduzidos em batelada mantendo constante a razo
glicerol/leo de 2, razo mssica propano/substratos de 4, concentrao de enzima de 10%
(em relao ao peso dos substratos) e agitao de 600 rpm, variando a temperatura, presso e
concentrao de AOT. Os resultados demonstraram que a glicerlise enzimtica em propano
pressurizado pode ser uma rota alternativa aos mtodos convencionais j que foram obtidos
altos rendimentos de MAG e DAG em condies brandas de temperatura e presso (30C e 30
bar) com uma baixa razo mssica entre solventes e substratos e em pouco temo de reao (1
h).
Em um outro exemplo, um elevado rendimento de formao de MAG foi obtido para
reaes conduzidas na presena de um lcool secundrio ou tercirio agindo na mistura
reacional como solvente para todos os componentes incluindo o glicerol.
Uma grande
variedade de leos e gorduras naturais foram glicerolisados na presena de n-butanol. Aps 3

h de reao a 70C, 82 - 90% de MAG foram sintetizados pela lipase imobilizada de Candida
antarctica. Esse sistema tambm foi aplicado em reaes de esterificao e transesterificao
usando cidos graxos e seus derivados (BORNSCHEUER, 1995).
Ferreira-Dias et al. (2001) testaram duas lipases comerciais (Lipozyme IM e Novozym
435) como catalisadores da glicerlise do azeite de oliva em n-hexano com o objetivo de
produzir MAG e DAG. O maior teor de MAG obtido variou de 43 - 45% com razo molar
igual a 1 para ambos os catalisadores. No caso da Novozym 435, a menor concentrao de
enzima testada (12% p/p) levou a melhores resultados, enquanto que para a Lipozyme IM
foram necessrios 26% p/p para obter os melhores rendimentos. Os autores concluram que o
melhor catalisador para sntese de MAG nestas condies foi a Novozym 435.
Posteriormente, Ferreira-Dias et al. (2003) testaram a eficincia da lipase de Candida
rugosa imobilizada em poliuretano para efetuar a glicerlise de leo de oliva residual refinado
em n-hexano com o objetivo de produzir MAG e DAG. Aps 24 horas de reao 30C,
razo molar glicerol/leo igual a 1 e atividade de gua na enzima de 0,83 foram obtidos 32%
(p/p) de MAG e 18% (p/p) de DAG.
56
Cheirsilp et al. (2007) realizaram um estudo cintico da produo de MAG por

glicerlise do leo de palma utilizando uma lipase comercial de Pseudomonas sp. imobilizada
em Accurel EP-100. Um modelo matemtico foi desenvolvido e os parmetros cinticos
foram estimados. Houve uma boa correlao entre os resultados experimentais e os preditos
pelo modelo sob vrias condies reacionais. A partir do modelo, simulou-se o efeito
sinrgico das concentraes dos substratos. Os resultados da simulao demonstraram que
altas concentraes de substratos levaram a uma taxa inicial de reao alta e a baixos
rendimentos em MAG. No entanto, foi possvel obter rendimentos aceitveis (82%) e altas
taxas reacionais utilizando concentraes de substratos adequadas. O rendimento mximo em
MAG (100%) foi obtido em concentraes baixas de leo de palma e excesso de glicerol.
Kaewthong e H-Kittikun (2004) estudaram a glicerlise de olena de palma pela lipase
PS (Pseudomonas sp.) imobilizada em Accurel EP100 em solventes orgnicos. As condies
timas de reao (56% de MAG produzidos aps 24 h) foram: 10% (p/p) de olena de palma
em uma mistura de acetona e isooctano, razo molar TAG/glicerol de 8:1, 50% (p/p) de
enzima em relao olena de palma e temperatura de 45C.
Kaewthong et al. (2005) testaram 9 lipases comerciais para a reao de glicerlise da
olena de palma com o objetivo de produzir MAG. A lipase mais adequada foi a lipase PS
(Pseudomonas sp.) que produziu 28,05% de MAG 45C. Vrios suportes para imobilizao
desta lipase foram testados e o melhor foi o Accurel EP100. A lipase imobilizada produziu
20,74% de MAG aps 24 h de reao 45C. A produo contnua de MAG foi realizada
utilizando-se a lipase PS imobilizada em dois tipos de reatores: leito fixo e tanque de mistura
contnuo.
3.4.2.3 Esterificao do glicerol com cidos graxos ou transesterificao do glicerol com
steres de cidos graxos
A boa estabilidade das lipases em meio orgnico possibilitou o desenvolvimento de
vrias metodologias envolvendo esterificao ou transesterificao para a sntese de
monoglicerdeos utilizando lipases como catalisadores (SILVA, 2002).
A esterificao produz monoglicerdeos sem desperdiar o cido graxo, podendo
formar 1(3) e 2-MAG, 1,3 e 1,2-diglicerdeos (1,3 e 1,2-DAG) e triglicerdeos (TAG),
conforme a especificidade da lipase (Figura 11). Na esterificao do glicerol com cidos
graxos utilizando lipases 1,3-especficas, o glicerol pode ser esterificado na posio 1 ou 3,
podendo formar 1(3)-MAG e 1,3-DAG. Quando lipases no-especficas so empregadas, o
glicerol pode ser esterificado em qualquer posio, podendo formar 1(3) e 2-MAG, 1,3 e 1,2-
57
DAG e TAG. Deve-se levar em considerao que ainda pode ocorrer a migrao do grupo
acila, ocasionando mudanas de posies desse grupo na molcula do glicerol (FREITAS,
2006).
Figura 11: Possveis produtos formados na esterificao enzimtica *
58
A condio mais importante para as lipases catalisarem este tipo de reao o baixo
contedo de gua ou lcool no meio reacional (BORNSCHEUER, 1995). Para deslocar a
reao de esterificao ou transesterificao para a formao de monoglicerdeos, diversas
estratgias so usadas para remover gua ou o lcool, como por exemplo, reduo de presso
ou uso de agentes dessecantes (YAMAGUCHI; MASE, 1991; MILLQVIST - FUREBY et al.,
1996). A Tabela 6 lista outras estratgias descritas na literatura para atingir um elevado
rendimento de formao de MAG e evitar a inverso da reao no sentido da hidrlise.
Tabela 6: Mtodos para formao seletiva de MAG em reaes de esterificao ou
transesterificao
Mtodo
Princpio
Referncias
Adio de peneira molecular
Remoo de gua
YAMAGUCHI; MASE,
1991; GANCET, 1990;
DUCRET et al., 1995
Reduo de presso
Remoo de gua
MILLER et al., 1988
Adsoro do glicerol em um
material suporte
Deslocamento do
equilbrio,
aumento da seletividade
BERGER ; SCHNEIDER,
1992, 1993
Adsoro de MAG em uma

coluna em srie
Deslocamento do
equilbrio,
aumento da seletividade
VAN DER PADT et al., 1992
Adio do cido fenil bornico
Aumento da solubilidade
do glicerol, agente protetor
STEFFEN et al., 1992
Fonte: FREITAS, 2006
Watanabe et al. (2004) estudaram a sntese de monoglicerdeos a partir de cido

linolico conjugado atravs de esterificao utilizando lipase de Penicillium camembertii. Os
resultados revelaram que a sntese de DAG a partir de MAG foi reprimida em baixas
temperaturas. Quando o cido graxo foi esterificado 5C, com razo molar glicerol/cido
graxo de 5, 200 U/g de enzima e 2% de gua, a converso atingiu 89,6% aps 45 h de reao,
com 87% de MAG, 4,5% de DAG e 0% de TAG. Em um outro experimento, aps 20 h de
reao, eles iniciaram a desidratao do sistema atravs de evaporao com uma presso de 5
mmHg utilizando uma bomba de vcuo. A converso aumentou juntamente com a
desidratao at atingir 94,5% aps 16 h (total de 36 h de reao). O contedo de MAG e
DAG foram 92,75 e 2,9%, respectivamente. Estes resultados demonstraram que a
desidratao foi eficiente para produzir MAG em altas concentraes.
59
Ducret et al. (1995) realizaram com sucesso a esterificao do glicerol com cido
olico (em quantidades equimolares) utilizando como catalisador a lipase comercial
Novozym 435 e como solvente o 2-metil-2-butanol. Para a remoo de gua os autores
conectaram ao reator um extrator do tipo Soxhlet contendo um cartucho de peneira molecular,
um condensador e uma bomba de vcuo. A temperatura da reao foi mantida em 60C, mas a
presso foi sendo reduzida continuamente para que o solvente contendo gua liberada da
reao de esterificao pudesse sofrer refluxo e passar por dentro do Soxhlet e fosse seco
antes de voltar ao meio reacional. Depois de 24 horas de reao a converso foi de 99% e o
teor de MAG dentre os steres formados foi de 67,5%.
Como estratgia para superar o problema da acilao subseqente, que pode ocorrer
nas reaes de esterificaes e transesterificaes com glicerol puro, a proteo do glicerol
tem sido testada por vrios grupos de pesquisa. Nesse caso, duas das 3 hidroxilas do glicerol
so bloqueadas e posteriormente feita a remoo do grupo protetor aps a formao do
monoglicerdeo. Isso tambm oferece uma vantagem para a sntese de MAG
enantiomericamente puro (WANG et al., 1988; BORNSCHEUER ; YAMANE, 1995). A
etapa de retirada dos grupos protetores pode ser realizada com cido brico em 2metoxietanol, cido clordrico concentrado ou cido trifluoroactico. No entanto, condies
fortemente cidas resultaram em interesterificao entre duas molculas de MAG, levando a
formao de DAG e glicerol como subprodutos e migrao de acilas (BORNSCHEUER,
1995).
Hess et al. (1995) utilizaram o 1,2-O-isopropilideno glicerol como composto de
glicerol protegido para produo de monoestearina a partir de reaes de esterificao e
transesterificao catalisadas por uma lipase comercial de Pseudomonas cepacia.
Experimentos envolvendo a transesterificao do glicerol protegido com estearato de etila
foram realizados em vrios solventes, sendo que o n-heptano e o n-decano se mostraram mais
adequados. A esterificao direta com cido esterico resultou na maior converso (84%).
Variaes no resduo alqulico dos steres de cido esterico utilizados como reagente nas
reaes de transesterificao levaram a uma diminuio na taxa inicial de reao na seguinte
ordem: etil metil propil butil estearato.
O cido fenil bornico foi descrito como um solubilizante e agente protetor da
esterificao do glicerol com diferentes cidos graxos na presena de solventes orgnicos
(STEFFEN et al., 1992). O rendimento mais elevado de MAG (84%) foi obtido usando o
cido hidroxiesterico como substrato e Lipozyme como biocatalisador em meio de n-hexano.
60
A baixa solubilidade do glicerol em solventes apolares orgnicos reduz a velocidade

de reao e favorece a reao paralela, ou seja, acilao dos monoacilgliceris e
diacilgliceris mais solveis. Para minimizar este problema, algumas tcnicas tm sido
propostas como o uso de diferentes tipos de solventes (KWON et al., 1995; YANG et al.,
2003), micelas reversas (BORNSCHEUER et al., 1994), uso de suportes slidos inertes para
adsoro do glicerol (KWON et al., 1995; BERGER; SCHNEIDER, 1992; BELLOT, 2001),
conduo do processo em reatores com membranas (VAN DER PADT et al., 1992; HOQ et
al., 1985) ou meios reacionais isentos de solvente (YAMAGUCHI; MASE, 1991; FREITAS,
2006; SILVA, 2002), que ainda trazem o atrativo de ser um processo mais limpo, mais barato
e que elimina a etapa de remoo do solvente.
Otero et al. (2001) estudaram o efeito do solvente, da temperatura e do cido graxo na
seletividade para sntese de MAG a partir de esterificao direta do glicerol utilizando a lipase
comercial Novozym 435. Dentre os solventes testados (acetona, dioxano e acetonitrila), a
acetonitrila mostrou-se mais adequada sntese de monolauroilglicerol. Dentre as
temperaturas testadas (5, 20 e 40C), a de 5C foi a mais eficiente para a sntese de
monolaurina. Utilizando o solvente e a temperatura mais adequados, foram feitos
experimentos utilizando vrios cidos graxos (C8:0, C12:0, C16:0 e C18:1), sendo que a
maior converso em MAG foi vista utilizando-se C16:0 e C12:0 e a maior taxa de reao foi
observada utilizando-se C18:1. Os autores tambm estudaram a esterificao do cido olico
com glicerol, em excesso de glicerol, 3C, utilizando uma lipase de Pseudomonas sp.
imobilizada em Celite. Foi observada uma converso completa do cido graxo nestas
condies. Segundo eles, a alta seletividade para a formao de MAG na presena ou
ausncia de solventes pode ser atribuda a um conjunto de fatores como a precipitao do
MAG, uso do glicerol em excesso (cinco vezes mais que a quantidade de cido graxo) e baixa
solubilidade relativa do cido graxo no sistema. Ao contrrio da reao na presena de
solvente, a reao em um meio sem solvente produziu o dister primeiro. O monoster s se
acumulou no meio em conseqncia de reaes de glicerlise do dister formado
inicialmente. Alm disso, em meios isentos de solvente, as altas temperaturas diminuram a
seletividade para MAG devido ao relativamente alto ponto de fuso do MAG.
Yang et al. (2003) desenvolveram um processo envolvendo duas etapas para a sntese
de monoestearina de alta-pureza (> 99%). A primeira etapa envolveu a esterificao do
glicerol com cido esterico, utilizando uma lipase imobilizada comercial (Novozym 435), em
acetona. A reao foi conduzida 50C com uma razo molar de cido graxo/glicerol de 1:4 e
com 5% de lipase em relao ao peso de cido graxo usado. Em 8 h o equilbrio foi atingido
61
com 85,5% de converso e 82,4% de monoglicerdeos. A adio de mais solvente deslocou o

equilbrio para a formao dos produtos e resultou em aumento da converso (89,7%) e do
teor de monoestearina (92,7%) aps 16 h de reao (total de 24 h). As maiores impurezas no
produto consistiam em cido esterico livre, DAG e TAG. A segunda etapa foi a remoo do
cido esterico livre atravs de um tratamento bsico, gerando MAG com pureza maior que
99% e um rendimento global de 66,8%.
Kwon et al. (1995) estudaram a produo de mono e dipalmitoilglicerol em n-hexano.
Alm do uso do solvente, foram adicionados vrios suportes slidos inertes ao meio reacional,
resultando em um aumento da converso de equilbrio e da rea interfacial entre o glicerol e o
cido palmtico em n-hexano. Dentre os suportes slidos testados, a slica-gel demonstrou ser
o mais adequado. Entretanto, foi difcil atingir altas converses de mono ou
dipalmitoilglicerol em sistemas em batelada pois tripalmitoilglicerol tambm foi produzido.
Para superar este problema, foi realizado um acmulo in situ do acilglicerol desejado atravs
da diferena de solubilidade dos produtos em n-hexano. Alm disso, foi possvel direcionar a
sntese do acilglicerol desejado atravs do uso de lipases com diferentes especificidades. O
rendimento de mono ou dipalmitoilglicerol foi bastante influenciado pela temperatura e pela
razo molar entre o cido palmtico e glicerol. Eles obtiveram 60% de converso em mono ou
diglicerdeo (dependendo da lipase utilizada) 25C com razo molar 5:10 (cido
palmtico/glicerol). As lipases de Mucor miehei e Pseudomonas fluorescens se mostraram
adequadas para a sntese do diglicerdeo, enquanto a lipase de Rhizopus delemar demonstrou
maior especificidade para a sntese de monoglicerdeos nestas condies reacionais.
O alto rendimento de sntese de 1(3)-MAG regioisomericamente puro em solventes
orgnicos em escala laboratorial foi relatado por Berger e Schneider (1992). O problema da
baixa solubilidade do hidroflico glicerol em solventes orgnicos apolar foi superado
facilmente pela adsoro do glicerol em um suporte slido em p (por exemplo, slica gel).
Estas preparaes de glicerol foram colocadas em um solvente orgnico e um doador do
grupo acila foi adicionado juntamente com a lipase 1,3-seletiva, simulando assim, uma
interface lquido-lquido artificial. Depois do trmino da reao, enzima e suporte foram
removidos simultaneamente por filtrao simples, enquanto os produtos da esterificao
permaneceram em soluo. Em condies otimizadas, foi obtida concentrao mxima de
70% de MAG, rendimentos mais elevados no foram alcanados devido alta concentrao
de 1(3)-MAG que serviu como melhor substrato que o prprio glicerol. Desta forma, para
obter rendimentos mais elevados, os autores desenvolveram um sistema de separao
contnua constituda de 2 etapas: sntese e isolamento. Substratos no reagidos e subprodutos
62
indesejados (por exemplo, 2-MAG, DAG e TAG) foram completamente reciclados e 1(3)MAG foi congelado a baixas temperaturas. Lipases no-especficas tambm foram utilizadas
com sucesso neste procedimento.
A aplicabilidade do mtodo desenvolvido por Berger e Schneider (1992) foi
demonstrada para diferentes sistemas de esterificao usando vrios doadores do grupo acila,
tais como, cidos graxos livres (C5 a C18 saturados ou insaturados), metil steres de cidos
graxos, steres vinlicos, triacilgliceris sintticos e leos e gorduras naturais. Vrios
monoacilgliceris foram produzidos com alto rendimento e pureza isomrica sem a
necessidade de etapas posteriores de purificao.
Bellot et al. (2001) tambm se utilizaram da mesma tcnica de adsorver o glicerol em
um suporte inerte. Eles investigaram a sntese de monoglicerdeos atravs de esterificao do
glicerol adsorvido em slica gel com cido olico em solventes orgnicos utilizando a lipase
de Rhyzomucor miehei. Atravs deste estudo, foi demonstrado que o aumento da polaridade
do solvente, utilizando misturas de n-hexano e 2-metil-2-butanol, aumentou drasticamente a
seletividade na formao de monoglicerdeos. Em n-hexano, o teor de monoglicerdeos
representou apenas 6% dos glicerdeos formados no ponto de equilbrio termodinmico. Por
outro lado, usando uma mistura equimolar de n-hexano e 2-metil-2-butanol, o teor de
monoglicerdeos subiu para 94%. No entanto, nestas condies de maior polaridade do
sistema solvente, houve uma diminuio da velocidade inicial e da converso no equilbrio
termodinmico.
Van der Padt et al. (1992) desenvolveram um processo alternativo baseado em um
reator com membrana equipado com coluna de adsoro em srie. Neste reator, um circuito
interno (contendo cidos graxos e glicerdeos produzidos) e um circuito externo glicerol/gua
foram separados usando uma membrana de fibra oca. A lipase de Candida rugosa foi
adsorvida na superfcie interna da fibra. Eles observaram que monoacilgliceris (por exemplo,
monocaprina) foram adsorvidos preferencialmente na coluna em srie que foi colocada na
fase oleosa do circuito do reator. Desta forma, o MAG foi removido da mistura reacional,
deslocando o equilbrio da reao para o sentido de esterificao. Os autores concluram que o
reator de membrana pode ser usado em processos contnuos usando uma seqncia de
colunas. Eles estimaram uma produo de 60 mols (15 Kg) de monoster/g de enzima com o
tempo de meia-vida de 50 dias.
Yamane et al. (1984) e Hoq et al. (1985) estudaram a produo contnua de glicerdeos
em reator com membrana a partir de cidos graxos e glicerol pela lipase de Mucor miehei
imobilizada em microporos hidrofbicos. Eles obtiveram 80% de converso e 32% de MAG
63
(principalmente 1-MAG), sendo que o tempo de meia-vida do biocatalisador imobilizado foi

de 54 dias. A aplicao de biorreatores de membrana para esterificao de cidos graxos com
glicerol e a hidrlise de leos foi revisada por Kloostermam et al. (1987) apud Freitas, 2006.
Freitas (2006) estudou a seleo da melhor rota enzimtica para produo de
monoglicerdeos, em meio isento de solvente, empregando lipases de diferentes fontes, tanto
comerciais quanto no-comerciais. Para alcanar o objetivo proposto foram analisadas duas
metodologias: (1) esterificao do glicerol com cidos graxos e (2) glicerlise do leo de
babau. Verificou-se que meios reacionais contendo excesso de glicerol favoreceram a sntese
de steres glicricos, entretanto, tanto a velocidade reacional como a converso molar foram
dependentes do tamanho da cadeia carbnica e grau de insaturao dos cidos graxos
testados. Os experimentos realizados permitiram tambm selecionar a lipase Candida
antarctica B como fonte de lipase mais adequada para rota de esterificao, sendo alcanada
uma elevada concentrao de monolaurina em 12 h de reao (24,15%). Para obteno de
monoglicerdeo pela rota de glicerlise do leo de babau, o melhor desempenho foi
alcanado pela lipase Burkholderia cepacia, revelando uma formao de 10% (m/m) de
monoglicerdeos em apenas 3 h de reao. A anlise comparativa do desempenho das duas
rotas de obteno de monoglicerdeos indicou que a esterificao foi mais eficiente que a
glicerlise, sendo ento selecionada para estudos complementares de otimizao. Um
planejamento experimental completo 22 foi proposto para verificar a influncia simultnea das
variveis x1 (temperatura entre 45 - 65C) e x2 (razo molar glicerol/ cido lurico na faixa 3 a
5) na formao de monolaurina, empregando a lipase Candida antarctica B imobilizada em
polissiloxano lcool polivinlico. De acordo com a anlise estatstica, a formao de
monolaurina foi fortemente influenciada pela varivel razo molar entre glicerol e cido
lurico (x2), enquanto que a influncia da temperatura (x1) foi pouco significativa. O modelo
matemtico proposto permitiu prever as condies necessrias que favoreceram o alcance de
elevados rendimentos de formao de monolaurina, sendo a reao maximizada (31,35%)
para meios reacionais constitudos de glicerol e cido lurico numa razo molar de 5 e
temperatura de incubao de 45C. Essas condies foram tambm adequadas para sntese de
monolaurina empregando outras fontes de lipase, como a lipase de Penicillium camembertii
cujo desempenho foi altamente eficiente para obteno de monoglicerdeos, alcanando
valores mais competitivos de formao de monolaurina (51%).
Silva et al. (2003) estudaram a sntese de monocaprina em meio livre de solvente
utilizando a lipase comercial imobilizada Lipozyme IM 20 a partir da esterificao direta do
cido cprico com glicerol. As reaes foram conduzidas por 6 horas, em reator aberto, com
64
agitao constante. Um planejamento fatorial 23 com ponto central foi feito para investigar o
efeito da temperatura, da razo molar cido cprico/glicerol e da concentrao da enzima na
seletividade em monocaprina. Os resultados demonstraram que todos os parmetros so
estatisticamente significativos. As melhores condies estabelecidas para a sntese de
monocaprina foram obtidas utilizando uma temperatura de 55C, 3% (m/m) de enzima e razo
estequiomtrica dos reagentes. Foi testada a adio de peneira molecular e uso de solventes
(mistura 1 de n-hexano/t-butanol) nas condies otimizadas, mas estas alternativas no se
mostraram vantajosas. A composio do produto final, em condies otimizadas, aps 6 horas
de reao foi: 61,3% de monocaprina, 19,9% de dicaprina e 18,8% de cido cprico.
Xia et al. (2003) estudaram a esterificao do glicerol com o cido cprico, em meio
microaquoso isento de solvente, pela lipase de Candida Antarctica. Em reator fechado, a
converso de equilbrio atingiu 65,6% em 9 h de reao em condies timas (temperatura de
60C, 12% de gua, 100U de lipase/g de cido cprico, quantidades equimolares dos
reagentes).
Um outro processo sem solvente foi desenvolvido para a produo de monoolena a
partir de glicerol e cido olico, com o uso de lipase de Staphylococcus simulans imobilizada
em carbonato de clcio como catalisador. A metodologia de superfcie de resposta baseada em
um planejamento 33 composto central rotacional foi utilizada para otimizar 3 variveis da
reao: quantidade de enzima, quantidade inicial de gua adicionada e razo molar entre cido
olico e glicerol. As condies timas que levaram a um rendimento de 70,6% de MAG
foram: 100 UI de lipase, 5% de gua e razo molar de 0,2 (GHAMGUI et al., 2006).
Sakiyama et al. (2001) estudaram a cintica da sntese de monoglicerdeos catalisada
por uma monoacilglicerol lipase isolada de Pseudomonas sp. LP7315 em um sistema bifsico,
sem solvente, 65C, onde as gotculas de cido graxo foram dispersas em uma fase de
glicerol contendo uma pequena quantidade de gua. A taxa inicial da reao foi influenciada
pelas quantidades de cido graxo e glicerol e pela concentrao da enzima na fase glicrica.
Para analisar os efeitos destes fatores foi desenvolvido um modelo cintico baseado na
premissa de que o equilbrio de adsoro das molculas de lipase na interface das duas fases
o fator crucial para a reao de sntese. O modelo proposto teve boas aproximaes com as
taxas iniciais de reao em vrias condies reacionais. A anlise sugeriu que o
comportamento de adsoro das molculas de lipase na interface teve um grande efeito na
taxa inicial da reao de sntese de monoglicerdeos.
65
A influncia do tamanho da cadeia dos cidos graxos na reao de esterificao com

glicerol tem sido estudada por diversos grupos (TSUJISAKA et al., 1977 apud FREITAS,
2006; JANSSEN et al., 1993).
Tsujisaka et al. (1977) apud Freitas (2006) demonstraram a versatilidade das lipases
para a reao de esterificao do glicerol com diversos cidos graxos. Com lipases de
Aspergillus niger e Rhizopus delemar, a esterificao do cido oleico ocorreu exclusivamente
nas posies 1 e 3 do glicerol. Por outro lado, lipases de Geotrichum candidum e Penicillium
cyclopium esterificaram somente cidos graxos de cadeia longa e a esterificao ocorreu
randomicamente.
Janssen et al. (1993) observaram que a maior formao de monoster foi possvel para
cadeias curtas de cidos graxos em solventes polares, ao passo que a maior sntese de di e
tristeres foi encontrada nas cadeias maiores de cidos graxos em solventes orgnicos
apolares.
3.5 Reagentes utilizados na sntese de monoglicerdeos via esterificao

3.5.1 Glicerol
O glicerol (1,2,3-propanotriol ou glicerina) foi descoberto por Scheele em 1779
durante o processo de saponificao de azeite de oliva. Pasteur (1858) tambm observou sua
formao como um subproduto da fermentao alcolica, em concentraes de 2,5 - 3,6% do
contedo de etanol, podendo ser o glicerol o segundo maior produto formado durante a
fermentao alcolica (ARRUDA et al., 2007).
O glicerol um polilcool de frmula estrutural apresentada na Figura 12, que est
presente em diferentes espcies. No entanto, difcil encontrarmos o glicerol na sua forma
livre nesses organismos, pois geralmente se encontra como um triglicerdeo combinado com
cidos graxos. Grandes quantidades de glicerol podem ser encontradas tambm em leos ou
azeites como o de cco, dend, soja, algodo e oliva, bem como em gorduras de animais
como a banha de porco e sebo.
66
Fonte: ARRUDA et al., 2007
Figura 12: Estrutura do glicerol

O termo glicerol aplica-se somente ao composto puro, 1,2,3-propanotriol, enquanto o
termo glicerina aplica-se purificao de compostos comerciais que contm normalmente
quantidades maiores ou iguais a 95% de glicerol. No caso da utilizao do glicerol em
humanos, para fins teraputicos, como em medicamentos, por exemplo, a terminologia
encontrada em sua especificao deve ser glicerol USP (ARRUDA et al., 2007).
O glicerol, desde 1959, reconhecido como substncia atxica, permitido como
aditivo em alimentos, e tambm considerado como substncia GRAS pelo FDA. Estudos
mostraram que a administrao de 5% de glicerol em animais e humanos no causou
toxicidade ou efeitos indesejveis nestes organismos, relata-se apenas que uma leve irritao
da pele pode ocorrer com o contato de glicerol no diludo, devido retirada de gua da pele
em funo de seu forte poder higroscpico (MORRISON, 1994; JACKOBSON et al., 1989
apud ARRUDA et al., 2007).
Dentre as caractersticas fsico-qumicas do glicerol (Tabela 7) destacam-se as
propriedades de ser um lquido oleoso, incolor, viscoso e de sabor doce, solvel em gua e
lcool em todas as propores, pouco solvel em ter, acetato de etila e dioxano e insolvel
em hidrocarbonetos (LPES et al., 1999 apud ARRUDA et al., 2007).
67
Tabela 7: Propriedades fsico-qumicas do glicerol

Propriedade fsico-qumica
Valor
Peso molecular
92,09
Densidade (glicerol 100%) 25C
1,262 kg/m3
Viscosidade 20C
939 cps
Ponto de ebulio (101,3 KPa)
290C
Ponto de fuso
18C
Ponto de inflamao
177C
Tenso superficial 20C
63,4 mN/m
Calor especfico (glicerol 99,94%) 26C
2,435 J/g
Calor de evaporao 55C
88,12 J/mol
Calor de dissoluo
5,8 KJ/mol
Calor de formao
667,8 KJ/mol
Condutividade trmica
0,28 W/(m.K)
Fonte: ARRUDA et al., 2007
Devido combinao de suas propriedades de no toxicidade e ausncia de cor e odor,

o glicerol uma substncia com grande variedade de aplicaes. Dentre elas destaca-se sua
aplicao em cosmticos devido sua ao umectante, impedindo o ressecamento dos
produtos cosmticos e conferindo hidratao pele. Suas hidroxilas so as responsveis pela
sua higroscopicidade e reteno de gua no produto e/ou na pele.
Recentemente novas aplicaes do glicerol vem sendo descobertas, como seu emprego
como substrato para fermentaes bacterianas com a finalidade de se obter produtos de alto
valor agregado como polmeros biodegradveis e biosurfactantes (KRONENBERGER et al.,
2008).
Tradicionalmente o glicerol produzido por saponificao dos leos, gorduras ou
sebos utilizando lixvias alcalinas, sendo obtido como subproduto na fabricao de sabo, no
entanto, esse processo tem sido menos utilizado a nvel industrial devido substituio do
sabo por detergentes. A sua obteno pode ser a partir de derivados do petrleo por clorao
a altas temperaturas, mas devido formao de subprodutos prejudiciais ao meio ambiente
essa rota entrou em declnio. Uma outra via de obteno a hidrogenao da sacarose na
presena de um catalisador alta presso e temperatura. Devido s diferentes possibilidades
de aplicaes do glicerol na indstria e sua ocorrncia em vrios processos fisiolgicos
vitais tanto em procariticos quanto em eucariticos, vem aumentando o nmero de pesquisas
68
para a sua produo por via fermentativa a partir de fontes renovveis de energia, cujos
resultados tm sido patenteados. No processo fermentativo a matria-prima empregada incide
apreciavelmente nos custos de fabricao do glicerol (HESTER, 2000; WANG et al., 2001).
A produo de biodiesel a partir da transesterificao de leos vegetais gera uma
grande quantidade de glicerol como subproduto. Esta quantidade de glicerol corresponde em
volume a aproximadamente 10% do biodiesel produzido. Hoje essa faixa de 30 mil
toneladas por ano. O acrscimo da disponibilidade de glicerina no mercado brasileiro, com a
implantao do B2 (mistura de 2% de biodiesel ao diesel), dever ser da ordem de 60 a 80 mil
toneladas por ano e com a introduo do B5 (mistura constituda de 5% de biodiesel ao diesel)
em 2013, a previso que esta produo aumente para 150 mil toneladas por ano
(BORSCHIVER; NOGUEIRA, 2007). Assim, urgente no s que se encontre novas opes
de aplicao para o glicerol e seus derivados, mas tambm que se desenvolva tecnologia
nacional para a produo de alguns destes derivados que so atualmente importados. Este o
caso dos mono e disteres graxos de glicerol, que encontram aplicao como emulsificantes
na indstria de alimentos (24%) e cosmticos (40%) (PEREIRA-SOARES; SILVA, 2007).
Pereira-Soares e Silva (2007) sugeriram o aproveitamento do glicerol, sub-produto da
sntese de biodiesel, para a preparao de monosteres de glicerol e cido dodecanico na
presena de derivados de nibio.
3.5.2 cidos graxos

cidos graxos so compostos formados por uma cadeia de carbonos, de onde se deriva
a propriedade lipossolvel, e um grupo carboxila terminal, proporcionando caractersticas
cidas. So conhecidos cidos graxos com comprimento de cadeia de carbonos variando entre
2 e 30, porm os mais comuns so aqueles que variam entre 12 e 22 tomos de carbono.
Na natureza, os cidos graxos so mais comumente encontrados no na forma livre,
mas na forma de triglicerdeos (triacilgliceris), que so molculas constitudas por uma
molcula de glicerol ligada a trs molculas de cidos graxos (Figura 13) (FREGOLENTE,
2006).
69
Fonte: adaptado de WIKIPEDIA, 2009
Figura 13: Estrutura de um triglicerdeo

Com relao ao nome da classe cidos graxos, embora a IUPAC recomende a
substituio do termo cido graxo livre por apenas cido graxo, na literatura o termo mais
utilizado ainda cido graxo livre (FREGOLENTE, 2006).
As cadeias dos cidos graxos so geralmente alifticas e com diferentes nmeros
(normalmente pares) de carbonos. Os cidos graxos com 2 a 4 tomos de carbonos so
considerados de cadeia curta; de 6 a 12 tomos de carbono, de cadeia mdia, e de 14 a 24
tomos de carbono de cadeia longa. Estes cidos graxos podem no possuir duplas ligaes
(cidos graxos saturados) ou podem possuir uma ou mais duplas ligaes, geralmente na
forma de ismeros cis. cidos graxos com uma dupla ligao so chamados de cidos graxos
monoinsaturados e cidos graxos com mais de uma dupla ligao so chamados de cidos
graxos poliinsaturados.
Alguns smbolos so utilizados para identificar os diferentes tipos de cidos graxos,
como o caso do smbolo C18:2 (9,12), representando o cido linolico, e C18:3 (6,9,12),
representando o cido -linolnico. O nmero justaposto ao smbolo C indica o nmero de
tomos de carbono e o segundo nmero a quantidade de duplas ligaes. As posies das
duplas ligaes na cadeia do cido graxo so indicadas entre parnteses, pela indicao do
tomo que contm a dupla ligao, contando-se a partir da hidroxila terminal da molcula. No
entanto, a IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry) recomenda a
utilizao de nomes sistemticos, os quais indicam, alm das posies das duplas ligaes, as
configuraes das ligaes, ou seja, ligaes na configurao cis so representadas pelo
smbolo c-, enquanto que ligaes na configurao trans so representadas pelo smbolo t-. A
Tabela 8 traz o nome sistemtico e a estrutura dos principais cidos graxos (FREGOLENTE,
2006).
70
Tabela 8: Nomenclatura sistemtica, ponto de fuso e solubilidade em gua de alguns cidos

graxos
cido graxo Nome sistemtico
Estrutura Ponto de Fuso Solubilidade
(C)
30C em gua
(mg/g de gua)
Lurico
Dodecanico
12:0
44,2
0,063
Mirstico
Tetradecanico
14:0
53,9
0,024
Palmtico
Hexadecanico
16:0
63,1
0,0083
Esterico
Octadecanico
18:0
69,6
0,0034
Araqudico
Eicosanico
20:0
76,5
___
Palmitolico
c-9-Hexadecenico
16
1 - 0,5
___
Olico
c-9-Octadecenico
18:1
13,4
___
Linolico
c-9,c-12-Octadecenico 18:2
-5
___
18:3
- 11,0
___
20:4
- 49,5
___
c-9,c-12,c-15Octadecenico
Araquidnico c-5,c-8,c-11,c-14Icosatetraenico
Linolnico
Fonte: LEHNINGER et al., 2006
A Figura 14 traz as estruturas de trs cidos graxos de 18 carbonos com diferentes

graus e posies de insaturao.
71
Figura 14: Estruturas qumicas de trs cidos graxos de 18 carbonos

As propriedades fsicas dos cidos graxos e dos compostos que os contm so
largamente determinadas pelo comprimento e pelo grau de insaturao da cadeia
hidrocarbnica dos mesmos. A cadeia hidrocarbnica apolar a responsvel pela
insolubilidade dos cidos graxos na gua. Logo, quanto maior a cadeia do cido graxo e
menor o nmero de duplas ligaes, menor a solubilidade em gua. De outro modo, o ponto
de fuso aumenta com o nmero de tomos de carbono e diminui com o nmero de
insaturaes de cidos graxos. A Tabela 8 traz o ponto de fuso e a solubilidade em gua de
alguns cidos graxos.
cidos orgnicos so considerados cidos fracos. A fora de um cido medida pela
facilidade com que ele libera o prton, conseqentemente, quanto mais fcil o cido liberar o
H+, mais facilmente ocorrer a esterificao. Um cido graxo pode ser considerado muito
reativo quanto maior for o seu grau de ionizao (Ka) e menor seu pKa, pois a reao de
72
esterificao ocorre na regio da hidroxila do grupamento cido. Por conseguinte, o cido

graxo mais forte ser o mais reativo (GONALVES, 2007).
Rahman et al. (1979) mediram o valor do pka dos cidos lurico, mirstico, palmtico e
esterico em dois meios diferentes: etanol/gua e metanol/gua. Eles observaram que os
valores de pKa dos cidos graxos aumentaram com o aumento do contedo de lcool no meio.
Alm disso, os valores de pKa no solvente etanlico foram maiores do que no solvente
metanlico. Comparando-se os valores de pKa dos cidos graxos em um mesmo solvente, foi
possvel observar que o valor de pka diminui na seguinte ordem: cido esterico > cido
palmtico > cido mirstico > cido lurico. Atravs destes resultados possvel concluir que
quanto maior a cadeia hidrocarbnica do cido graxo, maior o seu pKa, menor o seu Ka e
menor sua reatividade. Consequentemente, pode-se concluir que o cido esterico o menos
reativo dentre os cidos graxos estudados.
Kanicky e Shah (2002) estudaram o efeito da posio, do tipo e do grau da insaturao
no pKa de cidos graxos contendo 18 carbonos atravs da titulao dos cidos graxos
dissolvidos em uma soluo bsica (pH > 10) com HCl. Os resultados dos valores de pKa dos
cidos esterico, eladico (ismero trans do cido olico), olico, linolico e linolnico foram
respectivamente: 10,15; 9,95; 9,85; 9,24 e 8,28. Os resultados mostraram que o valor de pKa
diminui com o aumento do nmero de insaturaes na molcula. Assim, pode-se concluir que,
dentre os cidos graxos estudados, o cido esterico, por apresentar o maior valor de pKa, o
menos reativo.
Os estudos de Rahman et al. (1979) e Kanicky e Shah (2002) mostraram que o cido
esterico apresenta uma desvantagem frente a outros cidos graxos em termos de reatividade
devido sua grande cadeia hidrocarbonada e ausncia de insaturaes na molcula.
3.6 Estearato de zinco

3.6.1 Generalidades
O estearato de zinco um ster entre um cido graxo e o zinco. Dependendo do
fabricante e/ou dos reagentes utilizados para sua sntese, o estearato de zinco pode ser
composto somente por steres do cido esterico ou por uma mistura de steres de cido
palmtico e esterico. Desta forma, o ponto de fuso do composto tambm pode variar. Esta
informao importante pois, no caso de seu uso como catalisador, dependendo da
73
temperatura da reao, ele pode estar fundido ou em estado slido e isso pode influenciar sua
atividade cataltica.
O estearato de zinco preparado por Macierzanka e Szelag (2004), composto
praticamente somente por steres de cido esterico (j que partiu de um cido esterico com
92,2% de pureza), possui uma faixa de fuso de 123,5 - 128C.
O estearato de zinco fabricado pela empresa Sim Estearina Indstria e Comrcio
obtido atravs da reao do xido de zinco com cido esterico, podendo tambm formar
palmitato de zinco em menor teor. Segundo a ficha tcnica do produto, ele apresenta as
seguintes especificaes (Tabela 9) (FRAGON, 2009):
Tabela 9: Especificaes tcnicas do estearato de zinco fabricado pela Sim Estearina Indstria
e Comrcio
Propriedades
Estearato de zinco
Aspecto
P fino e branco
Teor de cido graxo livre
Mximo 1,0%
Teor de cinzas
13 15
Teor de umidade
1,00%
Reteno de mesh 325
Mximo 10%
Fonte: FRAGON, 2009
O estearato de zinco fabricado pela empresa FOCOR Produtos Qumicos S. A.

apresenta as seguintes especificaes (Tabela 10):
Tabela 10: Especificaes tcnicas do estearato de zinco fabricado pela FOCOR Produtos
Qumicos S. A.
Propriedades
Estearato de zinco
Aspecto
P branco
Ponto de fuso
120 124C
Teor de zinco
10,5 12%
ndice de acidez
Mximo 3 mg KOH/g
Teor de umidade
Mximo 1,5%
Espessura (200 mesh)
Mximo 0,5%
Fonte: FOCOR, 2009
O estearato de zinco pode ser obtido a partir de fornecedores ou sintetizado facilmente

para uso. Vrios mtodos de sntese tm sido descritos na literatura.
74
Macierzanka e Szelag (2004) prepararam o estearato de zinco atravs do processo de

precipitao em um reator de vidro com 3 sadas conectado um agitador mecnico, um
termmetro e um condensador. O cido esterico foi aquecido at fundir e, a seguir, foi
adicionada uma soluo aquosa de NaOH 5%. A reao levou obteno de estearato de
sdio e foi conduzida 90C. Na prxima etapa, foi adicionada uma soluo aquosa de ZnSO4
10% para precipitar o estearato de zinco. O produto foi lavado, filtrado e seco at peso
constante. Os resultados obtidos so comparveis aos relatados por outros autores.
Di Serio et al. (2005) executaram a sntese de estearato de zinco em reator de vidro
com agitao magntica. Foi utilizado um reator encamisado com contnua recirculao de
leo a fim de manter a temperatura em 180C. Os reagentes utilizados foram acetato de zinco
e cido esterico em quantidades estequiomtricas. O cido actico formado durante a reao
foi continuamente removido atravs de um fluxo de nitrognio gasoso (2 L/h) e coletado em
um condensador. A converso foi calculada atravs da medio da quantidade de cido
actico recuperada. Foi possvel chegar a 64% de converso aps 3 horas de reao.
Wanjun e Donghua (2008) desenvolveram um processo simples e limpo para a sntese
de estearato de zinco. O mtodo utilizado foi a execuo de uma reao em fase slida baixa
temperatura. Os reagentes utilizados foram xido de zinco e cido esterico em uma razo
molar de 1:2. Inicialmente os reagentes foram misturados e triturados em um gral com auxlio
de um pistilo para garantir uma perfeita homogeneizao. A seguir foi adicionado etanol
mistura a fim de eliminar a eletricidade esttica. A mistura continuou sendo triturada por mais
30 minutos. A seguir, a mistura foi colocada em um reator hermtico e mantida 60C por 4
horas e depois foi deixada secar sob a mesma temperatura por 2 horas com o reator aberto. O
rendimento do produto final foi de 98%. O produto em p pode ser obtido sem a necessidade
de processos adicionais de separao ou pulverizao. Comparado com os processos de
precipitao e saponificao, o mtodo utilizado mais rpido, de menor custo, mais simples,
menos poluente e resulta em maiores rendimentos.
3.6.2 Aplicaes
3.6.2.1 Catalisador
Compostos de zinco (xido, cloreto e fluoreto de zinco) so catalisadores bastante
ativos de reaes de esterificao. No caso do cloreto de zinco, foi sugerido que sua reao
inicial com cidos graxos e glicerol levaria a formao de sabes metlicos e cloridrinas e que
a esterificao continuaria atravs da interao destes dois produtos da reao inicial. No
75
entanto, h informao limitada sobre o uso de sabes metlicos, como os sabes de zinco,
como catalisadores de reaes de esterificao (MACIERZANKA; SZELAG, 2004).
Di Serio et al. (2005) estudaram a sntese de biodiesel utilizando catalisadores
homogneos cidos de Lewis (acetatos e estearatos de Cd, Mn, Pb, Zn, Co, Mg, Ni, Ca e Ba).
A partir dos resultados, eles concluram que sais de metais bivalentes so catalisadores tanto
em processos de esterificao quanto em reaes de transesterificao. Sua atividade cataltica
est relacionada fora dos metais como cidos de Lewis (aceptores de eltrons) e estrutura
molecular do nion. Estearatos so mais eficientes que os acetatos em reaes que ocorrem
em fase oleosa devido sua maior solubilidade neste meio.
Jacobson et al. (2008) testaram diferentes tipos de catalisadores slidos cidos para a
sntese de biodiesel (steres metlicos) a partir de leo de baixa qualidade contendo alto
contedo de cidos graxos livres. O estearato de zinco imobilizado em slica gel foi o
catalisador mais ativo e estvel dentre todos os catalisadores heterogneos testados,
catalisando simultaneamente a transesterificao dos triglicerdeos e a esterificao dos cidos
graxos livres presentes no leo.
Fitremann et al. (2007) estudaram a co-fuso de sacarose slida e estearatos de
magnsio ou zinco, sob condies bsicas, a fim de sintetizar palmitato de sacarose atravs de
transesterificao em meio isento de solvente. Esta estratgia permitiu a formao de um meio
reacional homogneo onde a sacarose slida foi totalmente dissolvida. Este processo pode ser
descrito como um fenmeno de transferncia de fase ou uma solubilizao em um sal fundido
(os sabes metlicos encontravam-se fundidos na temperatura usada para a reao). Alm
disso, tambm foram cogitadas a ao dos estearatos como emulsificantes para melhorar a
disperso da sacarose slida e hidroflica em um meio lipoflico (palmitato de metila) e a
hiptese da formao de um complexo entre o sabo metlico e a sacarose levando
formao transitria do complexo sucrato-ction-carboxilato, potencialmente miscvel com o
palmitato de metila graas cadeia graxa do carboxilato complexado. Segundo os autores, j
foi relatada a habilidade de complexao entre poliis e sabes metlicos multivalentes. Alm
disso, sabes de ctions multivalentes j foram propostos para uso como catalisadores ou para
facilitar o reciclo da sacarose em snteses de steres de sacarose em meio isento de solvente.
O estearato de zinco aparece como um eficiente catalisador para reaes de
esterificao com o objetivo de sintetizar MAG para uso cosmtico. Isto ocorre porque a etapa
final de remoo do catalisador pode ser dispensada j que o estearato de zinco, alm de agir
como catalisador, tambm um ingrediente cosmtico. No entanto, so encontrados poucos
trabalhos na literatura sobre o uso de estearato de zinco na sntese de monoglicerdeos.
76
Szelag e Macierzanka (2001) estudaram a sntese de monoacilgliceris via

esterificao catalisada por sabes de sdio, potssio e zinco. Eles examinaram o efeito do
cido graxo e do ction do sabo utilizado no progresso da reao e na concentrao final de
monoglicerdeos e chegaram a concluso que os sabes de zinco foram os catalisadores mais
eficientes dentre os sabes testados.
Os mesmos autores estudaram a cintica da esterificao do glicerol com cidos
graxos na presena de sabes de zinco. As cinticas da esterificao do glicerol com 4 cidos
graxos diferentes (C12:0, C14:0, C16:0 e C18:0) na presena de sabes de zinco destes cidos
graxos foram investigadas. Eles estudaram o efeito da temperatura e da concentrao de sabo
na converso e na concentrao final de monoglicerdeos. Algumas concluses relevantes
deste trabalho esto aalistadas a seguir (MACIERZANKA; SZELAG, 2004):
Independentemente do cido graxo testado, a maior temperatura (160C) e a maior

concentrao de sabo de zinco levou a maiores converses;
A temperatura e a concentrao de sabo de zinco influenciaram a produo de MAG;
Sobre o mecanismo de ao do estearato de zinco, os autores afirmam que os sabes

de zinco agem como agentes emulsificantes que causam um aumento da interface de
contato entre o glicerol e o cido graxo no incio do processo. Desta forma, o contato
entre os reagentes facilitado e a sntese de MAG pode ocorrer mais rapidamente. O
aumento da concentrao de sabo de zinco resulta numa disperso mais eficiente do
glicerol no cido graxo. Um filme de sabo de zinco e MAG recm-sintetizado
diminui a tenso interfacial (glicerol/cido graxo) e permite que a esterificao ocorra
sob a forma de microemulso. Este filme estabiliza a microemulso formada e pode
ser penetrado por molculas de cidos graxos que iro reagir com o glicerol. Assim,
conduzir a reao em forma de microemulso elimina o problema da baixa
solubilidade do glicerol em cidos graxos. Alm disso, a interface provavelmente a
rea onde ocorre a esterificao do MAG gerando outros steres maiores;
Os cidos graxos de cadeia maior so menos reativos e/ou o tipo de cido graxo
influencia a estrutura da microemulso formada, o que pode determinar a velocidade
da reao.
3.6.2.2 Ingrediente cosmtico

O estearato de zinco um ingrediente muito usado em cosmticos devido a vrias
propriedades que justificam sua aplicao nos mesmos. Suas caractersticas anfiflicas levam
77
sua ao emulsionante que justifica sua aplicao em emulses (cremes, loes cremosas,
condicionadores e produtos emulsionados em geral) como emulsionante A/O (cremes
demaquilantes ou cremes de uso noturno) ou co-emulsionante O/A (MACIERZANKA;
SZELAG, 2004).
Alm disso, o estearato de zinco um p branco insolvel apresentando ao corante
como pigmento (corante insolvel). Ele permitido para uso em todos os tipos de produtos
cosmticos segundo o anexo III da Resoluo n 79, de 28 de agosto de 2000 da ANVISA
(BRASIL, 2000).
Devido a esta propriedade, ele pode ser usado para colorir produtos
diversos tendo uma vasta aplicao em produtos para maquiagem onde pode acrescentar
poder de cobertura ao produto (capacidade do produto de encobrir a pele subjacente) e diluir
corantes coloridos. Ainda em relao sua aplicao em produtos para maquiagem, devido s
suas propriedades lubrificantes, ele confere homogeneidade formulao, aderncia e
facilidade de aplicao (deslizamento) do produto na pele.
Dessa forma, o MAG adicionado de estearato de zinco pode ser utilizado tanto em
emulses quanto em produtos de maquiagem. Um exemplo de formulao de maquiagem que
contm tanto monoestearato de glicerila quanto estearato de zinco o p compacto. O
estearato de zinco est presente para auxiliar o deslizamento do p na pele durante a aplicao
e o monoestearato de glicerila funciona como aglutinante lipoflico que permite a compresso
do p a fim de gerar o p compacto (DRAELOS, 1999).
3.7 Lipases
3.7.1 Generalidades
As lipases (EC 3.1.1.3) so enzimas que atuam, por definio, na interface orgnicaaquosa, catalisando a hidrlise de ligaes ster-carboxlicas e liberando cidos e lcoois
orgnicos. Entretanto, como mostrou Pottevin pela primeira vez em 1906, pode ocorrer, em
ambientes com restrio de gua, a reao inversa (esterificao) ou, tambm, diversas
reaes de transesterificao (POTTEVIN, 1906 apud FREIRE; CASTILHO, 2008).
As lipases so encontradas em tecidos de vrios animais e plantas, e podem ser
produzidas por fermentao usando vrias espcies de microrganismos, tais como os fungos
Aspergillus mucor, Rhizopus penicillium, Geotrichum sp., as leveduras Tulopis sp. e Candida
sp. e bactrias como Pseudomonas sp., Achromobacter sp. e Staphylococcus sp. (DALLAVECHIA et al., 2004). Do ponto de vista econmico e industrial, as lipases microbianas so
78
mais usadas devido sua maior estabilidade, manipulao gentica facilitada, abastecimento
regular sem flutuaes sazonais e rpido crescimento de microorganismos em meios de
cultura de baixo custo com altos rendimentos em produo de enzima (HASAN et al, 2006).
Os fungos so especialmente valorizados porque as enzimas produzidas por eles normalmente
so extracelulares, o que facilita a sua recuperao do meio de fermentao e tambm porque
a maioria dos fungos no nociva sade humana, sendo reconhecidos como GRAS. Fungos
de diversos gneros demonstraram ser bons produtores de lipases e as suas enzimas tm sido
estudadas sob o ponto de vista acadmico e industrial (FERNANDES, 2007).
Com o objetivo de intensificar a utilizao de lipases em escala piloto e industrial,
estudos de fontes vegetais, como sementes, ltex, folhas e caule, tm crescido nos ltimos
anos. Dentre as lipases vegetais, as mais estudadas so as extradas de cereais e leos de
sementes, localizadas em diferentes tecidos e normalmente ativadas durante a germinao
(PAQUES; MACEDO, 2006).
Cavalcanti et al. (2007) desenvolveram um processo indito de produo de lipases
vegetais a partir de sementes oleaginosas. A lipase vegetal obtida a partir da semente
germinada de mamona apresentou uma alta especificidade para hidrlise de substratos de
cadeia curta. Souza et al. (2009) utilizaram o mesmo processo para produzir lipases vegetais
de pinho manso. A lipase obtida a partir da semente germinada de pinho manso apresentou
uma alta capacidade de hidrlise de leos vegetais e rejeitos orgnicos oleosos, atingindo
elevadas porcentagens de converso e produtividade.
Dependendo da fonte, as lipases podem ter massa molecular variando entre 20 a 75
kDa, atividade em pH na faixa de 4 a 9 e em temperaturas variando desde a ambiente at
70C. Lipases so usualmente estveis em solues aquosas neutras temperatura ambiente
apresentando, em sua maioria, uma atividade tima na faixa de temperatura entre 30 e 40C.
Contudo, sua termoestabilidade varia consideravelmente em funo da origem, sendo as
lipases microbianas as que possuem maior estabilidade trmica (VULFSON, 1994;
KASLAUSKAS; BORNSCHEUER, 1998 apud CASTRO et al., 2004).
Na sua grande maioria, as lipases microbianas so glicoprotenas com pontos
isoeltricos variando entre 3,4 e 9,9, sendo que as lipases obtidas a partir de leveduras so
glicoprotenas cidas com pontos isoeltricos variando entre 4,1 e 5,5 (RUA; BALLESTERO,
1994 apud SILVA, 2002).
79
3.7.2 Estrutura e mecanismo de ao

As lipases possuem baixa homologia na sequncia de aminocidos (estrutura
primria), no entanto, estas enzimas possuem alta similaridade em sua arquitetura
tridimensional (estruturas secundria e terciria) (JAEGER et al., 1999 apud SILVA, 2002).
A estrutura tridimensional da lipase fngica de Rhizomucor miehei e da lipase
pancretica foram determinadas em 1990. Desde ento, mais de onze estruturas de lipases j
foram determinadas, das quais, com exceo da lipase pancretica, todas so de origem
microbiana. Estas enzimas mostram uma caracterstica padro conhecida como o entrelaado
de / hidrolase (Figura 15) (JAEGER; REETZ, 1998; KASLAUSKAS; BORNSCHEUER,
1998; PETERSEN, 1996 apud CASTRO et al., 2004) .
Fonte: PROTEIN DATA BANK apud BARON, 2008
Figura 15: Modelo estrutural da lipase de Pseudomonas cepacia ligada a 1-fenoxi 2-acetoxi
butano
O stio ativo da lipase formado por uma trade cataltica constituda pelos
aminocidos: serina, cido asprtico (ou glutmico) e histidina; o resduo nucleoflico serina
localizado no C-terminal da fita 5 de um pentapeptdeo altamente conservado (G-X1-S-X2-G,
onde G = glicina, S = serina, X1 = histidina e X2 = cido glutmico ou asprtico) formando
uma caracterstica principal em torno de , designada como cavidade nucleoflica. O stio
80
composto de uma folha central consistindo de 8 diferentes fitas (1-8) conectadas com
seis hlices (A-F) (JAEGER; REETZ, 1998; PETERSEN, 1996 apud CASTRO et al.,
2004).
O stio cataltico, que se repete em todas as estruturas, freqentemente protegido na
molcula por loops das cadeias de superfcie de carter hidrofbico (conhecidos como
tampa das lipases) que ao interagir com a interface lipdeo/gua sofre uma mudana
conformacional, expondo o stio ativo e, ao mesmo tempo, uma larga superfcie hidrofbica
que facilita a ligao da lipase interface (JAEGER; REETZ, 1998; PETERSEN, 1996 apud
CASTRO et al., 2004; FREIRE; CASTILHO, 2008). Aps esta reorganizao conformacional
da lipase, ocorre a criao de uma regio chamada cavidade do oxinion ou buraco do
oxinion em torno do resduo de serina. Esta regio responsvel pela estabilizao das
cargas negativas geradas durante o ataque nucleoflico na ligao carbonila do substrato,
portanto, estabiliza o estado de transio durante a catlise (PAIVA et al., 2000). A Figura 16
ilustra as diferentes conformaes da tampa da lipase de Rhizomucor miehei. A descoberta
desta tampa tem causado certas controvrsias a respeito da identidade e propriedades das
lipases ao longo dos anos.
Fonte: adaptado de ALOULOU et al., 2006
Figura 16: Conformao aberta (amarela) e fechada (azul) da tampa da lipase de R. miehei
Em 1958, Sarda e Desnuelle propuseram definir as lipases a partir de sua caracterstica
cintica: A propriedade de ativao na presena de substratos insolveis em gua e
emulsionados, ou seja, na presena de uma interface lipdeo/gua. Segundo estes autores, as
81
lipases seriam ativadas na presena de steres emulsionados, enquanto as esterases no

apresentariam esta ativao, exercendo sua funo hidroltica sobre substratos solveis em
gua (SARDA; DESNUELLE, 1958 apud FERNANDES, 2007). A determinao da estrutura
tridimensional das lipases de Rhizomucor miehei, Geotrichum candidum e da lipase
pancretica humana, propiciou uma explicao para o fenmeno da ativao interfacial: O
stio ativo destas enzimas era recoberto por uma tampa hidrofbica, que ao interagir com a
interface lipdeo/gua sofreria uma mudana conformacional, expondo o stio ativo (BRADY
et al., 1990; SCHRAG et al., 1991; WINKLER et al., 1990 apud FERNANDES, 2007). A
presena da tampa na estrutura da enzima e a propriedade de ativao interfacial passaram a
ser fatores determinantes para a caracterizao de lipases (FREITAS, 2006).
Mais recentemente, entretanto, observou-se que a presena da tampa no est
necessariamente correlacionada com a ativao interfacial, sendo que as lipases de
Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia glumae e Candida antarctica B, que apresentam a
tampa em suas estruturas, no sofrem ativao interfacial. Por outro lado, as cutinases,
enzimas consideradas lipases verdadeiras, no apresentam a tampa e no precisam da
interface para exercer a atividade hidroltica (JAEGER; REETZ, 1998; CYGLER; SCHRAG,
1997 apud DALLA-VECHIA et al., 2004). Estas observaes sugerem que a presena de uma
tampa dominante e a ativao interfacial no so critrios adequados para classificar uma
enzima como lipase. A partir da, as lipases passaram a ser definidas como carboxilesterases
capazes de catalisar a hidrlise de acilgliceris de cadeia longa (FREIRE; CASTILHO, 2008).
Secundo et al. (2006) estudaram o papel da tampa na modulao da atividade
lipsica utilizando 3 lipases recombinantes modificadas na sequncia referente esta regio:
Isoforma 1 da lipase de Candida rugosa, lipase de Pseudomonas fragi e lipase A de Bacillus
subtilis. A primeira enzima, obtida pela substituio de sua tampa pela tampa de outra
isoforma de C. rugosa, foi influenciada em sua atividade e enantioseletividade em solvente
orgnico. A segunda enzima, na qual 3 resduos polares da tampa foram substitudos por
aminocidos conservados em lipases homlogas, apresentou mudanas na especificidade e
aumento de termoestabilidade. No terceiro caso, a insero de uma tampa de uma enzima
estruturalmente homloga em uma lipase que naturalmente no apresenta tal regio causou
uma reduo de sua atividade e mudana de especificidade. Estes resultados demonstram
fortemente que a tampa possui um papel importantssimo em modular a atividade,
especificidade, enantioseletividade e estabilidade das lipases.
O mecanismo de ao da hidrlise de triglicerdeos pelas lipases tem sido amplamente
descrito na literatura. A hidrlise do substrato inicia-se com o ataque nucleoflico pelo
82
oxignio da serina no tomo de carbono carbonlico na ligao ster, levando formao de

um intermedirio tetradrico estabilizado pelas ligaes do hidrognio a tomos de nitrognio
de resduos da cadeia principal pertencente cavidade de oxinion. Um lcool liberado aps
a formao do complexo acil-lipase, o qual finalmente hidrolisado com a liberao dos
cidos graxos e regenerao da enzima (Figura 17) (JAEGER; REETZ, 1998; BALCO et
al., 1996 apud CASTRO et al., 2004).
Fonte: JAEGER et al., 1999 apud BARON, 2008
Figura 17: Mecanismo cataltico das lipases
3.7.3 Especificidade
Para aplicao industrial, a especificidade da lipase um fator crucial. A enzima pode
ser especfica com relao molcula cida ou alcolica do substrato. De acordo com sua
83
especificidade, as lipases podem ser divididas em 3 grupos (Figura 18) (KASLAUSKAS;

BORNSCHEUER, 1998; JENSEN et al., 1990 apud CASTRO et al., 2004) :
Lipases no-especficas (produzidas por Candida rugosa, Staphylococcus aureus,

Chromobacterium viscosum e Pseudomonas sp.) quebram as molculas de
acilglicerol na posio randmica, produzindo cidos graxos livres, glicerol,
monoacilgliceris e diacilgliceris como intermedirios. Neste caso, os produtos so
similares queles produzidos por catlise qumica, porm com menor grau de
termodegradao, devido temperatura na biocatlise ser bem inferior;
Lipases 1,3-especficas (produzidas por Aspergillus niger, Mucor javanicus,

Humicola lanuginosa, Rhizopus delemar, Rhizopus oryzae, Candida lipolytica,
Rhizopus niveus e Penicillium roquefortii) liberam cidos graxos das posies 1 e 3 e
formam, por esta razo, produtos com composies diferentes daquelas obtidas pelas
lipases no-regiosseletivas, ou mesmo pelo catalisador qumico;
Lipases cido graxo especficas so lipases com ao especfica na hidrlise de

steres com determinados cidos graxos. Como exemplo temos a lipase de
Geotrichum candidum que especfica na hidrlise de steres contendo cidos graxos
de cadeia longa insaturada com duplas ligaes em cis no carbono 9. steres com
cidos graxos saturados ou sem insaturao no carbono 9, so lentamente
hidrolisados. Este tipo de especificidade no comum entre as lipases e o exemplo
mais estudado at hoje a lipase de Geotrichum candidum.
84
* R1, R2 e R3 = Cadeia carbnica saturada ou insaturada
Figura 18: Reaes catalisadas por lipases do tipo no-especfica e 1,3-especfica *

Tambm merece referncia a estereoespecificidade, ou seja, a capacidade que algumas
lipases possuem de discriminar os enantiomros de uma mistura racmica. A especificidade
estrutural ou regiosseletividade decorrente da orientao imposta pelas dimenses e pela
estrutura do centro ativo ligao do substrato. Estas restries levam distino e
transformao seletiva de funes quimicamente similares na mesma molcula. A seletividade
e a estereoqumica advm da prpria quiralidade da enzima, que limita a sua ao em
substratos que no satisfaam determinadas relaes espaciais. Desse modo, a catlise
enzimtica permite transferir ou criar centros quirais nas molculas, assim como distinguir
formas enantimeras (CASTRO et al., 2004).
3.7.4 Aplicaes em biocatlise

Os principais benefcios de se usar enzimas como catalisadores so a especificidade,
condies reacionais brandas e diminuio da produo de rejeitos. Uma planta industrial que
utiliza reaes enzimticas pode ser construda e operada com um custo muito menor de
energia e capital quando comparada a plantas que utilizam reaes qumicas convencionais.
Alm disso, a planta apresenta um menor custo com tratamento de efluentes pois as enzimas
so biodegradveis e, como so usualmente utilizadas na concentrao de 0,1 - 1,0 % (m/m)
85
em relao ao substrato, a contribuio da enzima para a Demanda Bioqumica de Oxignio

(DBO) do efluente nfima (HASAN et al., 2006).
As lipases vm se destacando cada vez mais no cenrio da Biotecnologia Enzimtica.
Impulsionadas por sua versatilidade, que permite a catlise de reaes de hidrlise e sntese,
muitas vezes de forma quimio, rgio ou enantiosseletiva, as lipases so aplicadas em muitos
setores como, por exemplo, a indstria alimentcia, farmacutica, cosmtica, de qumica fina,
de fragrncias, de detergentes, de biodiesel, de polpa de papel, de couro, de biosensores e no
tratamento de efluentes (FREITAS; CASTILHO, 2008).
Em funo de suas muitas aplicaes, a participao das lipases no mercado mundial
de enzimas industriais tem crescido significativamente. Estima-se que, no futuro, elas tero
uma importncia industrial comparvel a das peptidases, que atualmente representam 25 40% das vendas de enzimas industriais (FREIRE; CASTILHO, 2008; HASAN et al., 2006).
As lipases catalisam uma srie de diferentes reaes. Alm de quebrar as ligaes de
ster de triacilgliceris com o consumo de molculas de gua (hidrlise), as lipases so
tambm capazes de catalisar a reao reversa sob condies microaquosas, como por
exemplo, a formao de ligaes ster, a partir de um lcool e um cido carboxlico (sntese
de ster). Estes dois processos bsicos podem ser combinados numa seqncia lgica para
resultar em reaes de interesterificao (acidlise, alcolise e transesterificao),
dependendo dos reagentes de partida empregados (Figura 19). A atividade hidroltica da
lipase pode ser diretamente relacionada com sua atividade de sntese, mas independente de
sua atividade de interesterificao. Outros compostos, alm de gua e lcool, podem ser
utilizados como nuclefilos em reaes catalisadas por estas enzimas. Desta forma, as lipases
podem participar de reaes como aminlises, tiotransesterificaes, oximlises e
lactonizao, em solventes orgnicos, com elevada seletividade. Lipases de diferentes fontes
so capazes de catalisar a mesma reao, embora possam diferir no desempenho sob as
mesmas condies reacionais (CASTRO et al., 2004).
86
* R1, R2 e R3 = Cadeia carbnica saturada ou insaturada
Figura 19: Reaes catalisadas por lipases *

Apesar da atividade lipsica inicialmente ser considerada como restrita a meios
aquosos, nos ltimos anos as lipases tambm tm sido empregadas em meios no-aquosos.
Alguns meios no-convencionais que esto sendo utilizados incluem solventes orgnicos, sais
e lquidos inicos, fluidos supercrticos e sistemas sem solvente (OLIVEIRA et al., 2006;
87
FORESTI et al., 2007). Em meios no-aquosos, as lipases catalisam a transferncia de grupos

acila de compostos doadores para uma ampla faixa de compostos aceptores diferentes da
gua. Entre os possveis processos catalisados pelas lipases em meio no-aquoso, a sntese de
steres apresenta-se como uma vertente bastante promissora, conforme atestam os processos
em fase de implantao industrial.
A utilizao de enzimas como catalisadores em reaes sintticas em meio orgnico
no recente; as primeiras so do incio do sculo XX. Entretanto, o interesse por estes
sistemas ressurgiu com a publicao dos trabalhos de Zaks e Klibanov no incio dos anos 80
(ZAKS; KLIBANOV, 1984, 1985, 1988a, 1988b apud DALLA-VECCHIA et al., 2004). As
enzimas apresentavam pouca utilidade em sntese orgnica devido, principalmente, idia
pr-concebida de que somente o meio aquoso era propcio para manter a conformao
estrutural cataliticamente ativa. Entretanto, sabe-se atualmente que muitas enzimas (ou
complexos enzimticos) so cataliticamente ativas em ambientes hidrofbicos, com eficincia
similar quela encontrada em solues aquosas, ou em certos casos at superior. Acredita-se
que as enzimas sejam cataliticamente ativas em meio orgnico porque permanecem na sua
forma original e no se desdobram em meio no-aquoso. Elas mantm sua conformao
original, mas perdem um pouco de sua flexibilidade, tornando-se mais rgidas. Esta
caracterstica deve-se, em parte, ao aumento das interaes eletrostticas entre os grupos
polares da enzima, baixa constante dieltrica da maioria dos solventes orgnicos e, tambm,
ao aumento do nmero de ligaes de hidrognio intramoleculares. A rigidez estrutural das
enzimas em meio orgnico pode alterar sua especificidade. As lipases, por exemplo, perdem a
mobilidade necessria para acomodar molculas grandes de substratos no stio ativo em meio
no-aquoso. Alm disso, a rigidez estrutural aliada necessidade de gua por parte dos
processos covalentes envolvidos na inativao irreversvel (deamidao, hidrlise de
peptdeos e decomposio da cistina) faz com que as enzimas sejam mais termoestveis em
solvente orgnico do que em meio aquoso. Por outro lado, estudos mostram que o mecanismo
cataltico das enzimas no alterado pela mudana do meio reacional, de aquoso para
orgnico (ZAKS; KLIBANOV, 1984, 1988b apud KOSKENEN; KLIBANOV, 1996; LIMA;
ANGNES, 1999).
A gua , talvez, o componente mais importante quando o biocatalisador utilizado
em meio orgnico. Est bem documentado na literatura que uma quantidade mnima de gua,
que dependente do tipo de solvente, de enzima e do suporte utilizado, absolutamente
necessria para a atividade da enzima. A atividade enzimtica depende mais da gua
associada diretamente enzima, do que da gua do meio, sendo a atividade de gua o
88
parmetro mais apropriado para quantificar a gua ligada enzima. As enzimas necessitam de
uma pequena quantidade de gua para reter a sua conformao cataliticamente ativa, mesmo
quando esto ligadas covalentemente a um suporte. A gua age como um plastificante,
aumentando a flexibilidade e a polaridade do stio ativo. A hidratao dos grupos polares
(carregados ou no) das enzimas um pr-requisito para sua atividade cataltica. O papel da
gua parece ser formar pontes de hidrognio com os grupos funcionais das enzimas,
neutralizando as interaes eletrostticas e dipolo-dipolo intramoleculares, e, assim,
diminuindo a rigidez estrutural provocada pelas interaes intramoleculares. Entretanto, o
excesso de gua pode favorecer a reao de hidrlise e no a de sntese, alm de estar
envolvido em vrios processos de inativao, como a agregao enzimtica (ZAKS;
KLIBANOV, 1988b apud KOSKENEN; KLIBANOV, 1996).
Matsumoto et al. (1997) estudaram o efeito de poliis (etilenoglicol, glicerol, eritritol,
xilitol e sorbitol) e solventes orgnicos (isoctano, ciclohexano, clorofrmio e acetato de etila)
na termoestabilidade de lipase de C. cylindracea. A lipase em estudo foi incubada na presena
de glicol ou solvente orgnico antes da medio de sua atividade. No caso da incubao em
solvente orgnico, o mesmo foi removido antes de se medir a atividade enzimtica. Todos os
poliis utilizados contriburam para a estabilizao da lipase e a extenso do efeito aumentou
com a concentrao e o nmero de carbonos do poliol. A mxima meia-vida da lipase
estabilizada com glicol excedeu a lipase sem aditivos 2000 vezes. O comportamento da
termodesativao dependeu do solvente utilizado, sendo que o pr-tratamento com solventes
orgnicos foi eficiente em aumentar a estabilidade enzimtica em todos os casos.
A natureza do solvente orgnico outro fator bastante importante na enzimologia noaquosa. O solvente afeta no s a atividade e estabilidade da enzima, mas tambm sua
especificidade. Geralmente o solvente afeta a atividade da enzima atravs de interao com a
gua, com a enzima, com substratos e produtos. O solvente pode alterar a conformao da
enzima e a proporo de stios ativos disponveis para catlise. Alm disso, o solvente pode
competir com o substrato pela ligao ao stio ativo e at penetrar no stio ativo, diminuindo a
polaridade local, o que levaria a um aumento da repulso eletrosttica entre a enzima e o
substrato e, consequentemente, a uma diminuio da ligao enzima-substrato (KOSKENEN;
KLIBANOV, 1996).
Os efeitos do solvente sobre a velocidade de reao da catlise enzimtica em sistemas
monofsicos ou bifsicos podem ser diretos ou indiretos. Os efeitos indiretos compreendem a
partio de reagentes e de produtos (entre a camada de gua em torno da enzima e o meio), a
alterao do equilbrio qumico e a transferncia de massa em sistemas de duas fases. Os
89
efeitos diretos so responsveis pela reduo da atividade e pela inativao (desestabilizao)

da enzima atravs de dois mecanismos: primeiramente, pela interao solvente-enzima que
altera a conformao nativa da enzima devido penetrao do solvente no mago hidrfobo
da protena provocando a quebra das ligaes de hidrognio e das interaes hidrofbicas.
Uma exceo, seria a estabilizao conformacional adquirida pela enzima em meios noaquosos, atravs do "efeito gaiola". Neste caso, as molculas das enzimas estariam
firmemente espremidas pelas molculas ao seu redor semelhana das enzimas imobilizadas
(KOSKENEN; KLIBANOV, 1996; LIMA; ANGNES, 1999).
Outra maneira na qual os solventes afetam a atividade por interao direta com a
gua essencial em torno da molcula enzimtica. Solventes altamente polares so capazes de
absorver gua avidamente e retirar a camada de hidratao da enzima, provocando a perda das
propriedades catalticas por inativao ou desnaturao. Reciprocamente, os solventes
hidrofbicos, por serem menos capazes de deformar a camada de hidratao, podem afetar
apenas parcialmente a atividade cataltica (KOSKENEN; KLIBANOV, 1996). importante
frisar que h excees notveis. A xantina oxidase, a lipase pancretica suna e a subtilisina
mantm suas propriedades catalticas tanto em solventes orgnicos como em meio aquoso.
Uma possvel explicao para este fato que essas enzimas so capazes de reter sua camada
de hidratao to fortemente que mesmo solventes hidroflicos no conseguem retirar a gua
(LIMA; ANGNES, 1999).
Embora o uso de solventes orgnicos na sntese de steres catalisada por lipases esteja
bem difundida na literatura, a eliminao de solventes tecnicamente possvel e oferece
inmeras vantagens, tais como: Obteno de produes volumtricas mais elevadas,
eliminao do custo adicional com solventes, separao facilitada dos produtos formados e
pronto reciclo dos substratos no convertidos. Alm disso, a ausncia de solventes geralmente
promove processos produtivos ambientalmente limpos, j que a maioria dos solventes so
txicos e agentes poluentes. Nestes sistemas a ausncia de um solvente que solubilize
reagentes e produtos, e que diminua a viscosidade do sistema, dificulta o controle e determina
a influncia dos vrios parmetros que afetam o processo (FREITAS, 2006; FORESTI et al.,
2007).
3.7.4.1 Sntese de ingredientes cosmticos
Os processos mais utilizados industrialmente para a obteno de insumos cosmticos
envolvem reaes de hidrlise e de esterificao. As limitaes destes processos esto
associadas aos tipos de catalisadores qumicos empregados, que so pouco versteis e
90
requerem altas temperaturas e presses para atingir razovel velocidade de reao. Alm
disso, apresentando baixa especificidade, geralmente formam produtos de composio
qumica mista ou contaminada, exigindo uma etapa posterior de purificao (SANTOS et al.,
2008).
Neste contexto, a tecnologia enzimtica vem se apresentando como uma alternativa
atrativa para a explorao na indstria de insumos cosmticos, principalmente quando so
consideradas algumas das vantagens desta via, tais como a elevada eficincia cataltica,
seletividade, maior rendimento, obteno de produtos biodegradveis, menor consumo de
energia, reduo da quantidade de resduos e atuao em condies de temperatura branda (30
- 70C) e em presso atmosfrica (SANTOS et al, 2008).
A literatura descreve uma srie de aplicaes de lipases para a produo de insumos
cosmticos. Algumas aplicaes esto sendo pesquisadas enquanto outras j foram
patenteadas e tm sido utilizadas em escala industrial.
Maugard et al. (2002) sintetizaram derivados hidrosolveis de retinides para
aplicao em cosmticos utilizando lipases imobilizadas. A sntese foi baseada em uma
acilao enzimtica de duas etapas. Dentre os diferentes compostos sintetizados, os mais
hidrosolveis foram os derivados de dissacardeos e os sais sdicos de dicidos de retinila.
Castro et al. (2004) citam vrios trabalhos de pesquisa que esto sendo realizados
visando a otimizao e o desenvolvimento de processos em escala industrial para a sntese de
steres de interesse cosmtico utilizando a lipase como biocatalisador:
Produo de steres de cidos graxos e acares para a utilizao como emulsificantes

e cosmticos. O processo baseado na esterificao de carbohidratos ou derivados
(glicose, frutose, sacarose ou sorbitol) com cidos graxos (esterico, olico e linolico)
utilizando lipases de diferentes fontes. A limitao deste processo referente alta
polaridade do solvente requerido para dissoluo dos acares, o que pode ocasionar
inativao da preparao enzimtica (CAO et al, 1999; COULON et al., 1998; GAO et
al., 1999 apud CASTRO et al., 2004);
Fabricao de steres aromatizantes, steres de baixo peso molecular, principalmente

para o uso como fragrncias em cosmticos. O mercado mundial para esses compostos
est avaliado em US$ 3 bilhes. Alm disso, quando preparados por processos
enzimticos podem ser caracterizados como naturais ou idnticos ao natural sendo,
portanto, preferidos pelo mercado consumidor. Aproximadamente 50 steres,
formadores de aromas, foram sintetizados por reaes catalisadas por lipases. Em
princpio, o processo pode ser realizado em meios reacionais contendo mistura de
91
lcool e cido carboxlico em presena ou ausncia de solventes, resultando em altas

produtividades e rendimentos praticamente quantitativos. Apesar das inmeras
vantagens apresentadas por esta tcnica, a sntese de steres de baixo peso molecular
apresenta dificuldades tcnicas em funo do complexo mecanismo de ao
enzimtica em meios altamente polares. Diversos parmetros, como por exemplo,
hidratao da enzima, temperatura, concentrao do substrato, tamanho da cadeia e
estrutura qumica, podem afetar o desempenho da sntese (GATFIELD, 1995 apud
CASTRO et al., 2004);
Sntese de oleato de cetila (um anlogo do leo de cachalote, tambm chamado de

espermacete, que possui importantes aplicaes em indstrias de cosmticos como
emoliente), usando como catalisador a lipase comercial Novozym 435 (Novozymes)
(GARCIA et al., 2000 apud CASTRO et al., 2004);
Sntese de oleato de etila utilizando a lipase de Rhizomucor miehei imobilizada,

empregando um bioreator de disco rotativo perfurado. Os resultados experimentais
deste trabalho mostraram um decaimento na atividade enzimtica, independente do
tempo de residncia utilizado. A constante de desativao obtida foi da ordem de
0,003 h-1, revelando um tempo de meia-vida de 10 dias (OLIVEIRA et al., 2000 apud
CASTRO et al., 2004).
Keng et al. (2009) sintetizaram steres de palma para uso como emolientes cosmticos
atravs de transesterificao enzimtica de vrias fraes do leo de palma com lcool

olelico utilizando a enzima comercial Lipozyme RM IM como catalisador. Em condies
timas de reao foi possvel obter rendimentos maiores que 80% aps 5 horas de reao.
A empresa Unichem International (Espanha) utiliza a lipase imobilizada de
Rhizomucor meihei para a produo de steres (miristato de isopropila, palmitato de
isopropila, 2-etilhexilpamitato) utilizados como emolientes em cosmticos com rendimento de
99%. O processo em questo conduzido em reatores agitados numa temperatura entre 50 e
70C em solvente orgnico (isopropanol). A gua gerada durante a esterificao removida
por destilao vapor. O processo permite a recuperao da preparao enzimtica e sua
reutilizao em bateladas subseqentes (CASTRO et al., 2004; FERNANDES, 2007);
A indstria Croda Universal Ltda. utiliza a lipase de C. cylindracea em processos em
batelada para a produo de steres graxos (steres produzidos a partir de cidos graxos e
alcois graxos) com aplicaes similares aos steres citados acima. De acordo com a empresa,
o custo total de produo levemente superior ao mtodo convencional, mas seu custo
justificado pelo aumento da qualidade do produto final (HASAN et al., 2006).
92
Em 2005, a Degussa, empresa qumica internacional de produtos especializados,

realizou juntamente com a Novozymes, empresa que comercializa enzimas, uma Avaliao do
Ciclo de Vida (LCA) para comparar o impacto ambiental dos processos de sntese qumico e
enzimtico para a produo de steres cosmticos utilizados como emolientes (HOLM, 2007).
A produo de miristato mirstico foi escolhida para a Avaliao LCA como um
processo modelo para estes tipos de steres cosmticos. Centenas de toneladas so produzidas
todos os anos pela Degussa, sendo que este um dos steres emolientes mais populares. Alm
do miristato mirstico, trs outros steres - ricinoleato cetlico, cocoato declico e palmitato
isocetlico - so produzidos por biocatlise na fbrica da Degussa em Duisburg, Alemanha.
Todos eles so produzidos com a lipase Novozym 435, que a Degussa vem usando na
produo comercial h mais de dez anos. Os demais steres cosmticos so produzidos por
rotas qumicas. Portanto, a Degussa tem experincia tanto com o processo de sntese qumico
como com o processo biocataltico (HOLM, 2007).
Ao comparar o impacto ambiental dos dois processos, a biocatlise demonstrou
oferecer vantagens claras (Tabela 11). As principais causas das redues so a economia da
energia usada no aquecimento e a substituio do catalisador de estanho (HOLM, 2007).
Alm de ter um menor impacto ambiental, o processo biocataltico para a sntese de steres
cosmticos possui outras vantagens. Conforme ilustrado pela Figura 20, o processo
enzimtico precisa de menos etapas e resulta em um produto de melhor qualidade (maior
concentrao do ingrediente ativo, menos subprodutos indesejveis, melhor cor e odor)
devido a menor temperatura empregada e maior especificidade do catalisador.
Tabela 11: Resultados de cinco parmetros ambientais fundamentais baseados na produo

de 5 toneladas de miristato mirstico, um ster emoliente popular
Parmetros ambientais
Processo Processo
Ganho (%)
qumico
enzimtico
Energia
GJ
22,5
8,63
62
Aquecimento
global
Acidificao
Kg de equivalentes de CO2
1518
582
62
Kg de equivalentes de SO2
10,58
1,31
88
0,86
0,24
74
0,49
0,12
76
Enriquecimento Kg de equivalentes de PO4

de nutrientes
Formao
Kg de equivalentes de etileno
de fumaas
Fonte: HOLM, 2007
93
Fonte: HOLM, 2007
Figura 20: Fluxogramas dos processos de esterificao convencional (qumico) e enzimtico

A enzima imobilizada Novozym 435 funciona a 60C e disposta em um leito fixo,
sendo facilmente removida do produto final sem uma etapa adicional de filtrao. Depois de
algumas semanas de funcionamento contnuo, a atividade da enzima chega ao fim e o leito
desta precisa ser substitudo (HOLM, 2007).
Os resultados da Avaliao LCA esto sendo usados como parte da estratgia da
Degussa para promover seus steres emolientes obtidos por biocatlise. Os argumentos
ambientais esto se tornando gradualmente mais importantes e estes produtos podem ser de
interesse para fabricantes de cosmticos naturais ou para aqueles que do nfase
sustentabilidade de seu trabalho e seus produtos (HOLM, 2007).
3.7.5 Imobilizao
Enzimas imobilizadas so aquelas que esto confinadas em um espao, separadas por
barreiras que permitem o contato entre a enzima e o substrato no meio de reao, mas que as
tornam pouco solveis em qualquer meio. As pesquisas sobre este assunto se intensificaram a
partir dos anos 60 no sentido de estabelecer mtodos eficientes de imobilizao (PAIVA et
al., 2000; VITOLO, 2001). A Figura 21 traz um resumo dos principais mtodos utilizados
para a imobilizao de enzimas.
94
Fonte: DALLA-VECCHIA et al., 2004
Figura 21: Mtodos de imobilizao de enzimas

As enzimas esto sujeitas inativao por fatores qumicos, fsicos ou biolgicos,
podendo ocorrer quando estocadas ou durante o uso. Frente a este problema, novas tcnicas
de imobilizao tm sido desenvolvidas para aumentar a estabilidade das enzimas e facilitar
sua recuperao e reutilizao. A utilizao destas tcnicas tem sido crescente nos ltimos
vinte anos e, com isso, novas informaes tericas e aplicaes prticas esto surgindo. O uso
de biocatalisadores imobilizados tambm crescente em escala industrial, especialmente na
indstria farmacutica, de detergentes, couros e panificao, dentre outras (DALLAVECCHIA et al., 2004).
A imobilizao do biocatalisador em um suporte, sem prejuzo de sua atividade por
um perodo razovel de tempo, pode assegurar sua reutilizao ou mesmo seu uso em reatores
contnuos, resultando em economia nos processos industriais. Assim, de modo geral, o uso de
enzimas imobilizadas pode diminuir o custo do processo, aumentar sua rapidez e
repetibilidade (SEBRO et al., 2007).
O principal interesse em imobilizar uma enzima obter um biocatalisador com
atividade e estabilidade que no sejam afetadas durante o processo, em comparao sua
forma livre. Idealmente, a enzima imobilizada dever exibir uma atividade cataltica superior.
Alm disso, no devero ocorrer alteraes estruturais, bem como modificaes no stio ativo
(DALLA-VECCHIA et al., 2004).
95
No entanto, j foram relatadas na literatura algumas desvantagens com relao aos

procedimentos de imobilizao como perda de atividade ou inibio enzimtica, limitaes
difusionais, mtodos de imobilizao trabalhosos, demorados e onerosos (LIMA; ANGNES,
1999).
Diversas preparaes de lipase imobilizada esto disponveis comercialmente e podem
ser adquiridas de diversos fornecedores, como: Sigma-Aldrich, Fluka, Novozymes, Amano,
dentre outros.
Estudos comparativos mostram diferenas acentuadas no desempenho de lipases
imobilizadas nos vrios suportes e evidenciam que apesar das vrias experincias reportadas
na literatura, a imobilizao de lipases ainda um desafio complexo, uma vez que a extenso
da imobilizao depende da estrutura da enzima, do mtodo de imobilizao e do tipo de
suporte. Em muitos casos, suportes que proporcionam uma elevada atividade e estabilidade da
enzima apresentam srias limitaes de resistncia mecnica e de queda de presso, o que os
tornam inviveis para a utilizao em alguns tipos de reatores (FREITAS, 2006).
3.7.6 Lipases comerciais

As lipases so comumente encontradas na natureza, podendo ser obtidas a partir de
fontes animais, vegetais e microbianas. Inicialmente, eram obtidas a partir de pncreas de
animais e usadas como auxiliar digestivo para consumo humano. Em funo do baixo
rendimento do processo fermentativo, as lipases microbianas tinham tambm um custo bem
mais elevado quando comparado com outras hidrolases, como proteases e carboxilases.
Entretanto, os recentes avanos registrados na tecnologia do DNA tm permitido aos
fabricantes de enzimas colocar no mercado lipases microbianas com atividade bem elevada, a
um custo bem mais acessvel. Atualmente, lipases microbianas so produzidas por diversas
indstrias, como Novozymes, Amano, Gist Brocades, dentre outras. Uma publicao recente
sobre a disponibilidade comercial de lipases listou enzimas de 34 diferentes fontes, incluindo
18 a partir de fungos e 7 de bactrias. Nesta mesma publicao destacada a existncia de
uma confuso considervel sobre a origem de algumas lipases e de mudanas nos nomes
sistemticos de linhagens fngicas e bacterianas que produzem estas enzimas: Candida
rugosa era anteriormente denominada de Candida cylindracea; Thermomyces lanuginosus de
Humicola lanuginosa; Pseudomonas glumae e Pseudomonas cepacia foram renomeadas
como Burkholderia glumae e Burkholderia cepacia, respectivamente. Alm disso, a lipase
Burkholderia glumae idntica Chromobacterium viscosum (CASTRO et al., 2004).
96
A seguir so descritas as caractersticas e especificaes de algumas lipases comerciais

comumente usadas em diversas aplicaes.
Lipozyme RM IM
Lipozyme RM IM uma lipase imobilizada comercial produzida pela Novozymes.
Trata-se da lipase de Rhizomucor miehei produzida por um fungo do gnero Aspergillus e
adsorvida em uma resina macroporosa aninica com 4% de gua (FREITAS, 2006;
NOVOZYMES, 2009a).
A Lipozyme RM IM descrita como uma lipase particularmente adequada para uso
como catalisador em processos de esterificao e interesterificao com o objetivo de
produzir compostos oticamente ativos (NOVOZYMES, 2009a).
A Lipozyme RM IM tambm ativa para a sntese de steres a partir de uma
variedade de alcois e cidos. um catalisador muito robusto e estvel que pode ser aplicado
em processos em batelada e contnuos envolvendo diferentes solventes orgnicos
(NOVOZYMES, 2009a).
Lipases de Rhizomucor miehei tem massa molecular de 33 kDa. Com relao
necessidade estrica do substrato, elas se parecem com as lipases de Pseudomonas sp. e so
similares Candida e Pseudomonas quanto a sua especificidade hidroltica. Estudos com
lipases de Rhizomucor miehei mostraram que ela muito seletiva na produo de monosteres
oticamente puros (FABER, 1997 apud FREITAS, 2006).
Lipozyme TL IM
Lipozyme TL IM uma lipase imobilizada comercial fabricada pela Novozymes.
Trata-se da lipase de Thermomyces lanuginosus produzida pelo microorganismo
geneticamente modificado Aspergillus oryzae e imobilizada em granulados de slica porosa,
sendo o conjunto insolvel em leo (FREITAS, 2006; NOVOZYMES, 2009b).
A Lipozyme TL IM um produto de grau alimentcio. uma lipase 1,3-especfica.
Isto significa que a enzima rearranja os cidos graxos somente nas posies 1 e 3 (a posio 2
preservada). Seu uso resulta em gorduras mais naturais do que nos processos qumicos de
interesterificao e hidrogenao, sendo assim sua aplicao mais relevante na
interesterificao na indstria de alimentos para a produo de margarina, por exemplo
(NOVOZYMES, 2009b).
97
Alm disso, a Lipozyme TL IM descrita como uma lipase particularmente adequada

para uso como catalisador em processos de esterificao e interesterificao com o objetivo de
produzir compostos oticamente ativos (NOVOZYMES, 2009c).
A Lipozyme TL IM tambm ativa para a sntese de steres a partir de uma variedade
de alcois e cidos. Sua verso imobilizada foi desenvolvida especialmente para operao em
reatores de leito fixo (NOVOZYMES, 2009c).
Novozym 435
Novozym 435 uma lipase imobilizada comercial produzida pela Novozymes. Tratase da lipase B de Candida Antarctica (CAL B) produzida por fermentao submersa de um
microorganismo geneticamente modificado (Aspergillus oryzae) e adsorvida em resina
acrlica macroporosa numa concentrao de 3% m/m. Consiste de partculas com dimetro na
escala de 0,3-0,9 mm, densidade aproximada de 430 Kg/m3 contendo 1-2% de gua m/m
(NOVOZYMES, 2009d; ALVES et al., 2006).
A CAL B tem massa molecular de 33 kDa. Esta enzima apresenta pouca ou nenhuma
ativao interfacial e catalisa muito lentamente a hidrlise de triglicerdeos de cadeia longa.
Por esta razo, classificada por alguns autores como uma esterase. Demonstra elevada
atividade e alta enantiosseletividade para uma extensa variedade de lcoois. Esta
enantiosseletividade baixa para cidos carboxlicos (KASLAUSKAS; BORNSCHEUER,
1998 apud FREITAS, 2006).
A Novozym 435 provavelmente a lipase mais usada em biocatlise. um catalisador
altamente verstil sendo ativa frente a uma grande variedade de substratos. A enzima
imobilizada um catalisador muito robusto e termoestvel, apresentando atividade em vrios
solventes orgnicos. Pode ser utilizada tanto em processos contnuos quanto em batelada, mas
particularmente adequada para uso em reatores de leito fixo (NOVOZYMES, 2009d).
Apesar de seu uso em processos industriais como um catalisador na sntese de steres
simples (incluindo polisteres) e amidas e na sntese regioseletiva de monosteres de
carbohidratos, a Novozym 435 foi primariamente usada como um catalisador altamente
enantioseletivo para a sntese de alcois, aminas e cidos carboxlicos oticamente ativos
(NOVOZYMES, 2009d).
A Novozym 435 descrita como preparada com o objetivo primrio de aplicao na
sntese de steres e materiais graxos de cadeia curta. Na sntese de steres, o ideal que a
quantidade de subprodutos seja a menor possvel pois estes reduzem o rendimento e
complicam a purificao do ster desejado (NOVOZYMES, 2009e).
98
Assim, uma das aplicaes mais relevantes da Novozym 435 seu uso como esterase
para produzir steres especficos, tais como os usados na indstria cosmtica, em processos
baixas temperaturas. Tambm utilizada na re-sntese de glicerdeos a partir de glicerol e
cidos graxos quando necessria a adio de cidos graxos especficos. Atravs da operao
em relativamente baixas temperaturas (60-70C), a formao de subprodutos mantida em
um patamar mnimo, reduzindo os custos com os procedimentos de purificao. Est sendo
desenvolvida uma verso grau alimentcio desta enzima (NOVOZYMES, 2009e).
99
4 MATERIAIS E MTODOS
4.1 Materiais
4.1.1 Equipamentos
Os equipamentos utilizados durante o presente trabalho esto listados na Tabela 12.
Tabela 12: Equipamentos utilizados durante o trabalho

Equipamento
Fabricante
Modelo
Pipeta automtica
LAB
MPDE+
Balana analtica
GEHAKA
AG200
Banho ultratermosttico
Quimis
Q214M2
Placa de aquecimento e
IKA
C-MAG HS4
agitao
Cromatgrafos gasosos
Shimadzu
CG2010 e GCMS2010
As Figuras 22 e 23 mostram em detalhe o banho ultratermosttico, a placa de

aquecimento/agitao e o reator de vidro encamisado utilizados durante as reaes de
esterificao por via enzimtica. A placa de aquecimento e agitao tambm foi utilizada
durante as reaes de esterificao por via qumica.
Figura 22: Banho ultratermosttico, placa de aquecimento e reator
100
Figura 23: Detalhe da placa de aquecimento e reator de vidro encamisado
4.1.2 Reagentes
Os reagentes utilizados durante o presente trabalho foram obtidos a partir dos
fornecedores listados na Tabela 13.
Tabela 13: Reagentes utilizados durante o trabalho

Reagente
Fornecedor
Glicerol PA
VETEC
cido esterico puro
VETEC
cido palmtico 95%
MP Biomedicals
Acetona 99,5% ACS
Tdia
Hidrxido de sdio em lentilhas
Merck
Fenolftalena PA ACS
Merck
lcool etlico absoluto
Tdia
n-Heptano
Tdia
Piridina
Tdia
N-Metil-N-trimetilsililtrifluoroacetamida
Regis-technologies
(MSTFA)
4.1.3 Padres cromatogrficos

Os padres cromatogrficos utilizados durante o presente trabalho foram obtidos a
partir dos fornecedores listados na Tabela 14.
101
Tabela 14: Padres cromatogrficos utilizados durante o trabalho

Padro
Fornecedor
Glicerol
Tdia
1,2,4-Butanotriol
Chemservice
Tricaprina
MP biomedicals
Monoolena
MP biomedicals
Diolena
MP biomedicals
Triolena
MP biomedicals
Metil-heptadecanoato (MHDEC)
Spectrum chemical
4.1.4 Catalisadores
Os catalisadores utilizados durante o presente trabalho foram obtidos a partir dos
fornecedores listados na Tabela 15.
Tabela 15: Catalisadores utilizados durante o trabalho
Catalisador
Fornecedor
Estearato de zinco
Sim Estearina indstria e comrcio
Novozym 435
Sigma-Aldrich
Lipozyme RM IM
Sigma-Aldrich
Lipozyme TL IM
Sigma-Aldrich
Lipase de pinho manso
Laboratrio de Biotecnologia Microbiana - IQ - UFRJ
4.1.5 Produtos comerciais

Os monoestearatos de glicerila comerciais utilizados como padres de qualidade
durante o presente trabalho foram doados pelo Instituto Federal de Educao, Cincia e
Tecnologia do Rio de Janeiro. So 3 produtos comerciais das seguintes marcas: VETEC,
PROQUIMIOS e ISOFAR.
4.2 Metodologia experimental

4.2.1 Sntese de monoestearato de glicerila por via qumica
4.2.1.1 Procedimento geral das reaes de esterificao
As reaes de esterificao foram realizadas em reator de vidro cilndrico com volume
de 50 mL. O aquecimento e a agitao foram feitos por uma placa de aquecimento e agitao
e um agitador magntico. A agitao foi mantida constante (500 rpm) ao longo de toda a
102
reao. Aps a adio dos reagentes (glicerol e cido esterico), do catalisador (estearato de
zinco) e do agitador magntico, o aquecimento foi iniciado. Com o passar do tempo ocorreu a
fuso do cido esterico, o que facilitou a homogeneizao do meio reacional. A temperatura
do meio reacional foi monitorada com o auxlio de um termmetro at que a temperatura
desejada fosse atingida. A partir da iniciou-se a contagem do tempo de reao. Durante a
esterificao a gua gerada foi evaporada livremente e a temperatura do meio reacional foi
monitorada e ajustada continuamente a fim de manter a temperatura desejada. Foram retiradas
alquotas no tempo zero (assim que a temperatura desejada foi atingida) e no final da reao
(2 horas). As alquotas foram retiradas com o meio fundido e sob agitao a fim de garantir a
homogeneidade da amostragem.
4.2.1.2 Planejamento experimental
A fim de verificar a influncia das condies experimentais na converso e na
seletividade da reao de esterificao, investigou-se o efeito de algumas variveis no
processo, tais como a concentrao de catalisador (estearato de zinco) (C), a temperatura (T) e
a razo molar glicerol/cido esterico (R), atravs da utilizao da ferramenta estatstica de
planejamento experimental. O tipo de planejamento experimental realizado variou conforme a
varivel dependente estudada (converso, seletividade em MAG, seletividade em DAG e
seletividade em TAG). Para as variveis dependentes converso, seletividade em DAG e
seletividade em TAG foi empregado um Delineamento Composto Central Rotacional. Para a
varivel dependente seletividade em MAG foi empregado um Planejamento Fatorial 23. Ao
todo foram realizados 17 experimentos nesta etapa (Experimento 1 - 17). Os valores reais e
codificados das variveis independentes testadas nestes dois tipos de planejamento
experimental esto apresentados nas Tabelas 16 e 17, respectivamente.
Tabela 16: Valores reais e codificados das variveis independentes do Delineamento

Composto Central Rotacional (via qumica)
Variveis
Valores codificados
-1,68
-1
1,68
T(C) *
99,8
110
125
140
150,2
R **
3,3
6,7
C (% m/m) ***
1,6
10
15
18,4
* T: Temperatura
** R: Razo molar glicerol/cido esterico
*** C: Concentrao de catalisador (estearato de zinco) em relao ao cido esterico
103
Tabela 17: Valores reais e codificados das variveis independentes do Planejamento Fatorial
23 (via qumica)
Variveis
Valores codificados
-1
110
125
140
R **
C (% m/m) ***
10
15
T(C) *
* T: Temperatura
*** C: Concentrao de catalisador (estearato de zinco) em relao ao cido esterico
A anlise dos dados foi realizada utilizando o software Statistica 7.0. A anlise
estatstica permitiu estimar os efeitos das variveis testadas, bem como da interao entre elas.
Os valores de t e p, que representam os efeitos padronizados das variveis e a probabilidade
de significncia do teste, respectivamente, tambm foram estimados e utilizados para avaliar a
significncia dos efeitos das variveis.
4.2.1.3 Estudo cintico da reao
O melhor resultado do planejamento experimental foi repetido para que pudesse ser
avaliado cineticamente atravs da remoo de alquotas em diferentes tempos de reao (0, 15
minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 3 horas e 4 horas). As condies deste
experimento (experimento 18) foram as seguintes: Temperatura de 140C, razo molar
glicerol/cido esterico de 4 e 15% (%m/m em relao ao cido esterico) de catalisador.
Apesar de utilizar a mesma razo molar e concentrao de catalisador, esta reao foi
realizada em maior escala (o triplo da quantidade de reagentes e catalisador) devido grande
quantidade de alquotas a serem retiradas ao longo da reao.
4.2.1.4 Efeito da razo molar entre os reagentes
Com o objetivo de avaliar unilateralmente o efeito da razo molar entre os reagentes
na converso e seletividade da reao de sntese de monoestearato de glicerila, foram
realizadas reaes nas condies descritas na Tabela 18 para posterior comparao com
experimentos realizados nas mesmas condies mas com razes molares diferentes (4 e 6).
104
molar entre os reagentes (via qumica)
Experimento Temperatura (C) Razo Molar * Concentrao de catalisador **
19
140
1
15
20
140
15
* glicerol/cido esterico
** (%m/m em relao ao cido esterico)
4.2.2 Sntese de monoestearato de glicerila por via enzimtica

4.2.2.1 Procedimento geral das reaes de esterificao
As reaes de esterificao foram realizadas em reator de vidro encamisado conectado
atravs de mangueiras a um banho ultratermosttico (Figuras 22 e 23), o que garantiu uma
temperatura constante ao longo da reao, o que essencial para uma reao enzimtica. A
agitao foi feita com o auxlio de um agitador magntico e uma placa de agitao e foi
mantida constante (500 rpm) ao longo de toda a reao. Aps a adio dos reagentes (glicerol
e cido esterico), do catalisador (lipase) e do agitador magntico (e de 5 ml de solvente, nos
casos de reaes que ocorreram em meio de acetona), o aquecimento foi iniciado. Com o
passar do tempo ocorreu a fuso do cido esterico, o que facilitou a homogeneizao do
meio reacional. A partir do momento em que a temperatura desejada foi atingida iniciou-se a
contagem do tempo de reao. Durante a esterificao a gua (e o solvente, nos casos de
reaes que ocorreram em meio de acetona) gerada foi evaporada livremente. As reaes
tiveram durao de 6 horas. Foram retiradas alquotas no tempo zero (assim que a temperatura
desejada foi atingida), aps 4 horas de reao e no final da reao com o auxlio de uma
esptula de metal de extremidade abaulada. As alquotas foram retiradas com o meio fundido
e sob agitao a fim de garantir a homogeneidade da amostragem.
4.2.2.2 Efeito do tipo de lipase
Para avaliar o efeito do tipo de lipase na converso e na seletividade da sntese de
monoestearato de glicerila foram realizadas 4 reaes, nas mesmas condies, mudando-se
somente a lipase utilizada (Tabela 19). As lipases utilizadas foram: Novozym 435, Lipozyme
RM IM, Lipozyme TL IM e Lipase de pinho manso. As 3 primeiras so lipases comerciais
imobilizadas, enquanto a ltima uma preparao de origem vegetal desenvolvida pelo
105
Laboratrio de Biotecnologia Microbiana - IQ - UFRJ (CAVALCANTI et al., 2007; SOUZA

et al., 2009).
Tabela 19: Condies experimentais das reaes realizadas para avaliar o efeito do tipo de
lipase
Experimento Lipase
Temperatura Razo
Meio
Relao mssica
(C)
Molar * reacional lipase/cido esterico
(% m/m)
Novozym 60
Isento de
20
4
5
435
solvente
Lipozyme
21
RM IM
Lipozyme
22
TL IM
Pinho
23
manso
4.2.2.3 Efeito do meio reacional

Para avaliar o efeito do meio reacional na converso e na seletividade da sntese de
monoestearato de glicerila foram realizadas 2 reaes utilizando um meio de acetona sob as
mesmas condies das reaes descritas na Tabela 19 para que fosse possvel comparar o
meio isento de solvente com o meio de acetona (Tabela 20). As lipases utilizadas foram:
Novozym 435 e Lipozyme RM IM.
Tabela 20: Condies experimentais das reaes realizadas para avaliar o efeito do meio
reacional
Experimento Lipase
Temperatura Razo
Meio
Relao mssica
(C)
Molar * reacional lipase/cido esterico
(% m/m)
Novozym 60
Acetona
24
4
5
435
Lipozyme
25
RM IM
4.2.2.4 Planejamento experimental

A fim de verificar a influncia das condies experimentais na converso e na
seletividade da reao de esterificao, investigou-se o efeito de algumas variveis no
processo, tais como a relao mssica lipase/cido esterico (E), a temperatura (T) e a razo
106
molar glicerol/cido esterico (R), atravs da utilizao da ferramenta estatstica de

planejamento experimental.
As reaes do planejamento experimental utilizaram como catalisador enzimtico a
lipase Novozym 435 em meio isento de solvente, com os tempos de reao de 4 e 6 horas.
O tipo de planejamento experimental realizado variou conforme a varivel dependente
estudada (converso, seletividade em MAG, seletividade em DAG e seletividade em TAG) e
o tempo de reao. Para as variveis dependentes converso (4 h), converso (6 h) e
seletividade em MAG (6 h) foi empregado um Delineamento Composto Central com Face
Centrada. Para as variveis dependentes seletividade em MAG (4 h), seletividade em DAG (4
h), seletividade em TAG (4 h), seletividade em DAG (6 h) e seletividade em TAG (6 h) foi
empregado um Planejamento Fatorial 23. Ao todo foram realizados 17 experimentos nesta
etapa (Experimento 26 - 42) Os valores reais e codificados das variveis independentes
testadas nestes dois tipos de planejamento experimental esto apresentados na Tabela 21.
Tabela 21: Valores reais e codificados das variveis independentes dos Planejamentos
experimentais (via enzimtica)
Variveis
Valores codificados
-1
T(C) *
60
65
70
R **
2,5
6,25
10
E (% m/m) ***
* T: Temperatura
*** E: Relao mssica lipase/cido esterico
A anlise dos dados foi realizada utilizando o software Statistica 7.0. A anlise
estatstica permitiu estimar os efeitos das variveis testadas, bem como da interao entre elas.
Os valores de t e p, que representam os efeitos padronizados das variveis e a probabilidade
de significncia do teste, respectivamente, tambm foram estimados e utilizados para avaliar a
significncia dos efeitos das variveis.
4.2.2.5 Estudo cintico da reao
Os melhores resultados do planejamento experimental foram repetidos para que
pudessem ser avaliados cineticamente atravs da remoo de alquotas em diferentes tempos
de reao (0, 1, 2, 4, 6 e 8 horas). No experimento 44 retirou-se uma alquota adicional em 30
107
minutos. As condies das duas reaes estudadas esto descritas na Tabela 22. Apesar de
utilizar a mesma razo molar e concentrao de enzima, estas reaes foram realizadas em
maior escala (o dobro da quantidade de reagentes e catalisadores) devido grande quantidade
de alquotas a serem retiradas ao longo da reao.
Tabela 22: Condies experimentais das reaes estudadas cineticamente (via enzimtica)
Razo Molar *
Relao mssica lipase/cido
Experimento Temperatura (C)
esterico (% m/m)
43
70
4
2,5
44
60
2,5
4.2.2.6 Efeito da razo molar entre os reagentes

Com o objetivo de avaliar unilateralmente o efeito da razo molar dos reagentes na
converso e seletividade da reao de sntese de monoestearato de glicerila, foram realizadas
reaes nas condies descritas na Tabela 23 para posterior comparao com experimentos
realizados nas mesmas condies mas com razes molares diferentes (4 e 6).
molar entre os reagentes (via enzimtica)
Razo Molar *
Experimento Temperatura (C)
esterico (% m/m)
45
70
1
2,5
46
70
2,5
4.3 Mtodos analticos

4.3.1 Anlise do cido esterico utilizado como reagente
A fim de determinar o grau de pureza do cido esterico utilizado como reagente,
foram realizadas anlises cromatogrficas do cido esterico e do cido palmtico para fins de
comparao entre os tempos de reteno das eventuais impurezas presentes no cido esterico
e do cido palmtico. O padro interno MHDEC, de tempo de reteno conhecido, foi
108
adicionado juntamente com a amostra apenas para comparao entre os tempos de reteno de
um ster de cido graxo (MHDEC) e dos cidos graxos analisados (palmtico e esterico).
Esta anlise foi uma adaptao da norma europia elaborada pelo Comit Europeu de
Normalizao (CEN) designada por EN 14103 de 2003 utilizada originalmente para
quantificar steres metlicos de cidos graxos (biodiesel). Assim, o padro MHDEC foi
preparado segundo esta norma (CEN, 2003).
A amostra foi preparada da seguinte maneira: Em frascos de vidro de 10 mL foi
pesado aproximadamente 50 mg de amostra e adicionado 1 mL da soluo de MHDEC. Aps
agitao, a mistura foi injetada (1 L).
A Tabela 24 traz as condies cromatogrficas desta anlise.
Tabela 24: Condies cromatogrficas da anlise do cido esterico
Supelcowax
Coluna
30 m de comprimento
0,32 mm de dimetro interno
0,25 m de espessura da fase estacionria
(Cromatgrafo CG2010)
200C (isotrmico)
Temperatura do forno
Hidrognio (make-up: Nitrognio)
Gs de arraste
1 mL/min
Fluxo do gs de arraste
Split 1:20
Injetor
250C
Temperatura do injetor
Detector de Ionizao de Chamas (FID)
Detector
250C
Temperatura do detector
1 L
Volume de injeo
60 minutos
Tempo total de anlise
O cido esterico utilzado como reagente das reaes de sntese do monoestearato de
glicerila tambm foi analisado utilizando as condies cromatogrficas descritas na Tabela 25
(cromatgrafo CG2010) aps derivatizao com o reagente MSTFA. Isto foi feito a fim de
localizar seu tempo de reteno nos cromatogramas dos produtos das reaes que foram
analisados utilizando as mesmas condies cromatogrficas (Tabela 25). Os detalhes desta
anlise esto descritos no tem 4.3.3.
4.3.2 Anlise da converso das reaes

Uma anlise titulomtrica foi realizada com o objetivo de avaliar a converso em
termos de consumo de cido graxo (FREITAS, 2006). Trata-se de uma titulao cido-base
convencional.
109
Os reagentes utilizados durante a anlise foram: Soluo de fenolftalena em etanol

absoluto 0,1% (p/p) e Soluo de NaOH 0,1 M.
Inicialmente realizou-se a pesagem de aproximadamente 0,1 g de amostra em um
erlenmeyer em balana analtica (o valor exato do peso foi registrado). A seguir adicionou-se
ao erlenmeyer 20 mL de soluo de fenolftalena em etanol e manteve-se este sistema sob
agitao magntica em placa de agitao durante aproximadamente 15 minutos at completa
dissoluo da amostra. Esta etapa de agitao foi necessria j que a amostra era slida
temperatura ambiente. Aps isso, o contedo do erlenmeyer foi titulado com a soluo de
NaOH at aparecimento de uma colorao rsea. O volume gasto de soluo de NaOH foi
registrado.
Tanto as alquotas retiradas no tempo zero de reao quanto as retiradas durante e aps
o trmino da reao foram tituladas.
O clculo da concentrao de cido graxo em cada alquota foi realizado atravs da
equao 5.
AG = (V x M x MM) / m
Equao 5
onde AG a concentrao de cido graxo (g/L), V o volume de soluo de NaOH

gasto na titulao (mL), MM a massa molecular do cido graxo titulado (g/mol), M a
molaridade da soluo de NaOH (mol/L) e m a massa da amostra titulada (g).
A converso foi expressa em termos de cido graxo consumido empregando-se a
equao 6.
% Molar = [ (C0 C) / C0 ] x 100
Equao 6
onde C0 a concentrao inicial de cido graxo (nas alquotas retiradas no tempo

zero) e C a concentrao de cido graxo em um determinado tempo.
4.3.3 Anlise dos produtos comerciais e da seletividade das reaes

Uma anlise cromatogrfica foi feita com o intuito de se medir a seletividade das
reaes, ou seja, o favorecimento da produo de um dos glicerdeos (RUPPEL; HALL,
2007). A anlise realizada foi uma adaptao da norma americana elaborada pela Sociedade
Americana para Testes e Materiais (ASTM) designada por ASTM D 6584-00 de 2000
originalmente utilizada para determinao de glicerina total e livre em biodiesel de steres
metlicos B100 (ASTM, 2000).
As condies cromatogrficas esto descritas na Tabela 25. Foram utilizadas duas
colunas com dimenses ligeiramente diferentes pois foram utilizados 2 cromatgrafos
110
distintos, cada um com uma coluna acoplada, de acordo com a disponibilidade dos
equipamentos. Como conseqncia disto os cromatogramas resultantes das anlises de
seletividade realizadas utilizando-se estas duas colunas podem apresentar tempos de reteno
ligeiramente diferentes entre si.
Coluna
Tabela 25: Condies cromatogrficas da anlise da seletividade

Capilar com 5% de fenilpolidimetilsiloxano
12 m de comprimento
(Cromatgrafo CG2010)
Temperatura do forno
Gs de arraste
Fluxo do gs de arraste
Injetor
Temperatura do injetor
Detector
Temperatura do detector
Volume de injeo
Tempo total de anlise
Capilar com 5% de fenilpolidimetilsiloxano

15 m de comprimento
(Cromatgrafo CGMS2010)
50C (1 minuto), 15C/min at 180C,
7C/min at 230C, 30C/min at 380C (10
minutos)
Hidrognio
3mL/min
On-column
60C (1 minuto), 20C/min at 380C (10
minutos)
FID
380C
1 L
50 minutos
Os padres glicerol, monoolena, diolena e triolina foram injetados previamente

amostra com o objetivo de se ter uma idia do tempo de reteno do glicerol, mono, di e
triglicerdeos, respectivamente.
Os padres internos butanotriol e tricaprina foram injetados juntamente com a amostra
para fins de comparao e confirmao do tempo de reteno do glicerol e dos glicerdeos,
respectivamente. No caso deste trabalho, a padronizao interna no foi feita para quantificar
os componentes da amostra, mas sim para nortear a identificao dos picos correspondentes
ao glicerol, MAG, DAG e TAG nos cromatogramas.
Os padres foram preparados segundo a norma ASTM D 6584-00 (ASTM, 2000).
As amostras foram preparadas da seguinte maneira: Em frascos de vidro de 10 mL foi
pesado aproximadamente 100 mg de amostra. Aps isso, foi adicionado 100 L de cada
111
soluo de padro interno e 100 L da soluo de MSTFA. Esta mistura foi agitada
vigorosamente e deixada em repouso por 20 minutos em temperatura ambiente para que a
reao de derivatizao pudesse ocorrer. Ao final, foram adicionados 8 mL de n-heptano, o
frasco foi vedado e agitado. A mistura final foi ento injetada (1 L).
As amostras injetadas foram somente as alquotas retiradas aps determinado tempo
de reao. As alquotas retiradas no tempo zero no foram injetadas pois no incio da reao
ainda no havia formao de glicerdeos.
O clculo da seletividade foi feito segundo a equao 7.
S % = [ Ai / (AMAG + ADAG + ATAG) ] x 100
Equao 7
onde S a seletividade, Ai a rea dos picos do glicerdeo que se quer avaliar o

favorecimento de produo frente aos demais e AMAG, ADAG e ATAG so as reas dos picos de
mono, di e triglicerdeos, respectivamente.
Utilizando as mesmas condies apresentadas acima, foram analisados 3
monoestearatos de glicerila comerciais indicados para uso cosmtico ou farmacutico
(VETEC, ISOFAR, PROQUIMIOS) a fim de verificar a proporo entre os glicerdeos em
produtos comerciais, bem como a variabilidade que existe entre estes produtos. Tambm foi
analisada a composio dos produtos comerciais considerando a presena de glicerol alm dos
glicerdeos. Nesse caso, o clculo da composio centesimal foi feita de acordo com a
equao 8.
F % = [ Ai / (AGLI + AMAG + ADAG + ATAG) ] x 100
Equao 8
onde F a frao mssica, Ai a rea do pico do componente individual do produto

comercial e AGLI, AMAG, ADAG e ATAG so as reas dos picos de glicerol, mono, di e
triglicerdeos, respectivamente.
O clculo da composio centesimal dos produtos das reaes realizadas no foi feito
pois devido ao excesso de glicerol utilizado na maioria das reaes algumas alquotas ficaram
divididas em duas fases (glicerol e glicerdeos), o que dificultou a realizao de uma
amostragem homognea e conseqentemente influenciou a quantificao do glicerol.
112
5 RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 Anlise do cido esterico utilizado como reagente
O cido esterico utilizado como reagente foi analisado atravs de duas condies
cromatogrficas distintas, com objetivos diferentes.
A anlise cromatogrfica segundo as condies cromatogrficas da Tabela 24 mostrou
que o cido esterico utilizado apresenta majoritariamente a seguinte composio em cidos
graxos: 54,8% de cido palmtico e 36,8% de cido esterico. A Figura 24 mostra a
comparao entre o cromatograma do cido esterico (rosa) e o do cido palmtico (preto). O
resultado obtido a partir da anlise do cido esterico est de acordo com Eccleston (1997)
que disse que os cidos graxos usados na esterificao no so substncias puras mas
geralmente so uma srie homloga de cidos graxos. Assim, os monoestearatos de glicerila
comerciais tambm so uma mistura homloga de monoglicerdeos variando de C14 a C18,
diglicerdeos, triglicerdeos, cidos graxos livres e seus sais e traos de alcois livres, como o
glicerol. Por outro lado, o mesmo autor diz que o nome do ster representa o cido
predominante na mistura, o que neste caso no verdade, j que o cido graxo predominante
na mistura o palmtico.
Figura 24: Cromatogramas do cido esterico (rosa) e do cido palmtico (preto) sobrepostos
Vrias farmacopias citam a presena de cido palmtico no cido esterico grau
farmacopico. Dentre elas esto a brasileira e a portuguesa.
A quarta edio da Farmacopia Brasileira diz que o cido esterico uma mistura de
cidos esterico e palmtico. Ela acrescenta ainda que o contedo de cada um dos dois cidos
graxos de, no mnimo, 40% e a soma dos dois componentes no deve ser inferior a 90%
113
(FARMACOPIA BRASILEIRA IV, 1996). O cido esterico analisado contm menos de

40% de cido esterico e por isso no se ajusta s especificaes da farmacopia brasileira.
A Farmacopia Portuguesa edio VII diz que o cido esterico uma mistura
constituda principalmente por cido esterico e cido palmtico. Ela acrescenta que este
produto contm quantidades nominais diferentes de cido esterico, resultando em 3 tipos de
cido esterico. O cido esterico 50 contm entre 40,0 e 60,0% de cido esterico. O cido
esterico analisado se aproxima mais da especificao deste tipo de cido esterico, mais
ainda assim est abaixo da especificao.
A Figura 25 mostra o tempo de reteno do cido esterico derivatizado analisado nas
condies cromatogrficas descritas na Tabela 25. De acordo com o cromatograma podemos
verificar que o tempo de reteno do cido esterico nos cromatogramas dos produtos das
reaes ser aproximadamente de 8 a 12,5 minutos. Esta informao ser muito til a fim de
verificar o desaparecimento do cido esterico aps ou ao longo da reao de sntese de
monoestearato de glicerila.
Figura 25: Cromatograma do cido esterico derivatizado
5.2 Anlise dos produtos comerciais

A Tabela 26 traz alguns dados que constam na rotulagem dos produtos comerciais
analisados. Como visto na tabela, com relao ao teor de MAG, o produto da ISOFAR no
menciona o teor e o da VETEC diz que deve haver no mnimo 40% mas no especifica o tipo
de ismero de MAG. J a PROQUIMIOS especifica que deve haver no mnimo 40% do
ismero alfa. Isso mostra que h uma certa variabilidade em termos de informaes
fornecidas na rotulagem a respeito do teor de MAG.
114
Tabela 26: Dados de rotulagem dos monoestearatos de glicerila comerciais

Monoestearato Teor de Ponto de Teor de ndice
ndice
de ndice
saponificao de iodo
de glicerila
MAG
fuso
glicerol de acidez
(mg KOH/g)
(mg KOH/g)
(%)
(C)
(%)
ISOFAR
___
59 - 61
___
4,5
___
___
VETEC
Mn. 40
59 -61
Mx. 7
Mx. 6
155 - 170
PROQUIMIOS
Mn. 40 55 - 62
-MAG
Mx. 7
Mx. 5
160 - 170
Mx.
3g/ 100g
Mx.
3cg I2/g
A Tabela 27 traz o resultado da anlise cromatogrfica da composio dos

monoestearatos de glicerila comerciais. Esta tabela traz a composio do produto
considerando a presena de glicerol e desconsiderando-o. Os resultados demonstram que
todos os produtos comerciais realmente apresentam um teor mnimo de 40% de MAG,
considerando a presena do glicerol. No possvel verificar o teor em termos das formas
isomricas, isto somente seria possvel se houvesse um padro de 1-MAG ou 2-MAG. A
Figura 26 ilustra este resultado em termos da composio em glicerdeos. Os resultados
mostram que h uma variabilidade nos produtos comerciais em termos da composio em
gicerdeos, sendo que o produto da ISOFAR apresentou o maior teor em MAG. Isto mostra
que h uma faixa aceitvel de valores dos glicerdeos em um monoestearato de glicerila
comercial: 54,5 - 68,4 de MAG, 16,5 - 34,8 DAG e 9,7 - 15,1 em TAG. Outra concluso
importante tirada a partir da observao da Tabela 28 que os teores de DAG e TAG podem
ser praticamente iguais em torno de 16% (no caso de valores mais altos de MAG) ou
diferentes sendo o de DAG ao redor de 30% e o de TAG cerca de 10% (no caso de valores
mais baixos de MAG). Estes valores so importantes para nortear a sntese do monoestearato
de glicerila e escolher as melhores condies de sntese, ou seja, aquelas que no s levem a
uma alta converso, mas que tambm resultem em um produto com uma composio
semelhante a um dos produtos comerciais: Altos valores de MAG (50 - 60%), valores
medianos de DAG (15 - 32%) e valores baixos de TAG (8 - 13%).
115
Tabela 27: Composio dos monoestearatos de glicerila comerciais

Monoestearato Glicerol (%)
MAG (%)
DAG (%)
TAG (%)
de glicerila
ISOFAR
11
60,9
14,7
13,4
VETEC
PROQUIMIOS
___
68,4
16,5
15,1
19,2
51,2
21,8
7,8
___
63,3
27,0
9,7
7,4
50,5
32,2
9,9
___
54,5
34,8
10,7
100%
90%
80%
Porcentagem (%)
70%
60%
TAG
50%
DAG
MAG
40%
30%
20%
10%
0%
ISOFAR
VETEC
PROQUIMIOS
Figura 26: Composio em glicerdeos dos produtos comerciais

As Figuras 27 a 30 trazem os cromatogramas dos padres cromatogrficos e dos
produtos analisados.
Figura 27: Cromatograma dos padres
116
Figura 28: Cromatograma do monoestearato de glicerila VETEC
Figura 29: Cromatograma do monoestearato de glicerila PROQUIMIOS
Figura 30: Cromatograma do monoestearato de glicerila ISOFAR

Pelo cromatograma dos padres observa-se os seguintes tempos de reteno
aproximados: 4,5 min para o glicerol, 5 min para o butanotriol, 17,5 min para a monoolena,
23 min para a tricaprina, 27 min para a diolena e 35 min para a triolena. Nos cromatogramas
dos produtos notam-se 2 picos majoritrios de MAG em 15 a 20 min (sendo que cada um se
subdivide em dois picos, cada um referente a uma forma isomrica: 1-MAG e 2-MAG), 4 a 6
picos de DAG em 25 a 28 min e 3 a 4 picos de TAG em 31 a 36 min (no cromatograma
referente ao produto da PROQUIMIOS observa-se um adiantamento dos tempos de reteno
resultante da execuo da anlise em outro cromatgrafo com uma coluna de dimenses
ligeiramente distintas). Esta multiplicidade de picos ocorre provavelmente devido
composio do cido esterico utilizado na sntese que possui cido palmtico alm do cido
esterico propriamente dito. Isto resulta em dois MAGs (monopalmitato e monoestearato de
117
glicerila), vrios DAGs e vrios TAGs devido possibilidade de vrias combinaes de

estruturas de di e triglicerdeos a partir de dois cidos graxos diferentes. Esta observao
comprova que os monoestearatos de glicerila comerciais so uma mistura homloga de
monoglicerdeos (ECCLESTON, 1997).
5.3 Sntese de monoestearato de glicerila por via qumica

5.3.1 Planejamento experimental
A Tabela 28 mostra a matriz de experimentos gerada de acordo com um Delineamento
Composto Central Rotacional e os resultados obtidos em termos de converso e seletividade
aps 2 horas de reao utilizando como catalisador o estearato de zinco. A anlise deste
conjunto de resultados importante pois permite identificar a melhor condio experimental,
isto , aquela que fornece ao mesmo tempo uma alta converso e alta seletividade em MAG.
Neste caso, a melhor condio foi a do experimento 6 (140C, razo molar glicerol/cido
esterico de 4 e 15% m/m de estearato de zinco em relao ao cido esterico): 83,9 % de
converso, 52,3 % de MAG, 37,2 % de DAG e 10,5 % de TAG.
Aps esta anlise global dos resultados, foi feita uma anlise mais detalhada atravs de
planejamentos experimentais individuais a fim de verificar a influncia das variveis
independentes (temperatura, razo molar e concentrao de catalisador) sobre cada varivel
de resposta ou varivel dependente estudada: Converso (X %), seletividade em MAG (MAG
%), seletividade em DAG (DAG %) e seletividade em TAG (TAG %). Para cada varivel de
resposta foi avaliada a adequao do modelo quadrtico obtido a partir de um Delineamento
Composto Central Rotacional. Nos casos em que o modelo quadrtico no se ajustou
adequadamente, um modelo linear foi proposto a partir de um Planejamento fatorial 23.
118
Tabela 28: Matriz do Delineamento Composto Central Rotacional e resultados obtidos

(via qumica)
Razo Molar *
Concentrao de X ***
(%)
catalisador **
MAG
(%)
DAG
(%)
TAG
(%)
110
12,9
71,3
18
10,7
110
15
53,9
52
13
35
110
34,8
53,5
13,9
32,6
110
15
51,5
45,9
16,7
37,4
140
52,6
51,2
34,9
13,9
140
15
83,9
52,3
37,2
10,5
140
48,2
43,2
20,8
36
140
15
91,8
21,7
12,9
65,4
99,8
10
57,3
14,5
28,2
10 150,2
10
69,8
48,9
39,8
11,3
11 125
1,6
24,5
65
27
12 125
18,4
15,2
36,4
15,7
47,9
13 125
3,3
10
60,1
47,3
11,6
41,1
14 125
6,7
10
65,3
53,5
10,6
35,9
15 125
10
45,2
45,2
19
35,8
16 125
10
45,4
49,6
8,1
42,3
17 125
10
45,1
54,9
9,7
35,4
Experimento
Temperatura
(C)
*** Converso em termos de consumo de cido graxo
A seguir encontram-se alistados os resultados obtidos para cada varivel de resposta.

Varivel de resposta: Converso
A partir de um Delineamento Composto Central Rotacional foi possvel construir um
modelo emprico para a converso em funo das variveis codificadas, incluindo apenas os
termos estatisticamente significativos (valor de p < 0,1) e marginalmente significativos
(Equao 9):
119
X (%) = 44,8 + 17,0T + 9,2R2 + 8,6C - 6,0C2
Equao 9
onde X (%) a converso, T a temperatura (C), R a razo molar glicerol/cido

esterico e C a concentrao de estearato de zinco (% m/m em relao ao cido esterico).
A Tabela 29 mostra as condies experimentais do Delineamento Composto Central
Rotacional realizado, os valores de converso experimentais e preditos pelo modelo gerado e
o desvio relativo entre eles.
experimentais do Delineamento Composto Central Rotacional (via qumica)
Razo
Molar
*
Concentrao
de catalisador **
X (%)
experimental
***
X (%)
predita
Desvio
relativo
-1
-1
-1
12,9
22,4
- 73,6
-1
-1
53,9
39,6
26,5
-1
-1
34,8
22,4
35,6
-1
51,5
39,6
23,1
-1
-1
52,6
56,4
- 7,2
-1
83,9
73,6
12,3
-1
48,2
56,4
- 17,0
91,8
73,6
19,8
- 1,68
16,2
- 224,0
10 1,68
69,8
73,4
- 5,2
11 0
- 1,68
24,5
20,3
17,1
12 0
1,68
15,2
42,3
- 178,3
13 0
- 1,68
60,1
70,8
- 17,8
14 0
1,68
65,3
70,8
- 8,4
15 0
45,2
44,8
0,9
16 0
45,4
44,8
1,3
17 0
45,1
44,8
0,7
Experimento
Temperatura
(C)
120
A Tabela 30 mostra o efeito das variveis estatisticamente e marginalmente

significativas sobre a converso baseado nos dados do Delineamento Composto Central
Rotacional.
De acordo com a Tabela 30, a varivel que mais afeta a converso a
temperatura, sendo que quanto maior a temperatura maior ser a converso. O termo
quadrtico da razo molar e a concentrao de catalisador tambm afetam de maneira
diretamente proporcional a converso. J o termo quadrtico da concentrao de catalisador
afeta a converso de maneira inversamente proporcional.

converso baseado no Delineamento Composto Central Rotacional *
Variveis
Coeficiente
Erro padro
Teste t
Valor de p
Temperatura (C) (L)
17,0
7,4
4,6
0,0006
Razo molar glicerol/cido

esterico (Q)
Concentrao de catalisador
(% m/m) ** (L)
Concentrao de catalisador
(% m/m) ** (Q)
9,2
7,8
2,4
0,0360
8,6
7,4
2,3
0,0393
- 6,0
7,8
- 1,5
0,1524
* (L): Efeitos lineares / (Q): Efeitos quadrticos

** em relao ao cido esterico
A anlise de varincia (ANOVA) foi realizada para avaliar a adequao do modelo

(Tabela 31). O modelo considerado preditivo se o coeficiente de determinao (R2)
prximo de 1 e se o valor de F calculado for superior ao valor crtico de F. O modelo
apresentado na Equao 9 apresentou um F calculado 3,7 vezes maior que o valor crtico de F
e o R2 foi 0,75. O valor de F calculado superior ao F crtico valida o modelo gerado. O erro
puro foi consideravelmente baixo, indicando uma boa reprodutibilidade dos experimentos.
121

Fonte de
variao
Soma
quadrtica
Graus de
liberdade
Mdia
quadrtica
Valor de F*
Regresso
6845,6
1711,4
9,1
Resduo
2250,35
12
187,5
Falta de ajuste
2250,3
10
225,03
Erro puro
0,05
0,025
Total
9095,9
16
* Coeficiente de determinao: R2 = 0,7526; F0,1;4.12 = 2,48

Valor de F = mdia quadrtica da regresso/mdia quadrtica do resduo
O modelo obtido foi utilizado para a construo de superfcies de resposta, mostrando

os valores de converso preditos para cada par de variveis dentro da faixa estudada (Figuras
31 a 34).
temperatura com concentrao de catalisador = 1,68
122
A Figura 31 mostra que, considerando a concentrao de catalisador mais alta

utilizada (j que esta varivel influencia a converso de maneira diretamente proporcional),
em altos valores de temperatura (150,2C) so obtidos altos valores de converso (70 - 90%),
independentemente da razo molar utilizada, sendo que os mais altos de valores de converso
(90%) so obtidos com o valor mximo de temperatura (150,2C) e razes molares mnimas
(3,3) ou mximas (6,7). Em razes molares baixas ou altas (3,3 ou 6,7), possvel obter
valores altos de converso (70 - 80%) em temperaturas medianas (125 - 140C).
catalisador e temperatura com razo molar = 1,68
123
catalisador e temperatura com razo molar = - 1,68
A Figuras 32 e 33 mostram que, independentemente da razo molar utilizada (mxima

ou mnima), a converso mxima obtida utilizando-se a temperatura mxima (150,2C) e
valores de concentrao de catalisador superiores a 10 % m/m. Alm disso, possvel obter
altos valores de converso (80%) utilizando a temperatura mxima (150,2C) e concentraes
mais baixas de catalisador (1,6 - 10 % m/m).
124
catalisador e razo molar com temperatura = 1,68
A Figura 34 mostra que, considerando a temperatura mais alta utilizada (j que esta
varivel influencia a converso de maneira diretamente proporcional), a mxima converso
atingida utilizando-se altos valores de concentrao de catalisador (maior que 10 % m/m) e
razes molares mximas ou mnimas (6,7 ou 3,3). Esta observao confirma a informao
dada pelas Figuras 31 a 33 de que possvel obter valores mximos de converso utilizandose valores mximos ou mnimos de razo molar e concentraes de catalisador superiores a 10
% m/m. Assim, pode-se concluir que a condio tima para a varivel de resposta converso
: 150,2C, 10 % m/m de estearato de zinco e razo molar glicerol/cido esterico de 3,3. Isto
porque a utilizao de menores concentraes de catalisador e menores razes molares
resultam em economia de gastos com catalisador e reagentes.
125
Varivel de resposta: Seletividade em MAG

A partir de um Planejamento Fatorial 23 foi possvel construir um modelo emprico
para a seletividade em MAG em funo das variveis codificadas, incluindo apenas os termos
estatisticamente significativos (valor de p < 0,1) e marginalmente significativos (Equao 10):
MAG (%) = 49,2 - 6,8T - 7,8R - 5,9C
Equao 10
onde MAG (%) a seletividade em MAG, T a temperatura (C), R a razo molar

glicerol/cido esterico e C a concentrao de estearato de zinco (% m/m em relao ao
cido esterico).
A Tabela 32 mostra as condies experimentais do Planejamento Fatorial 23 realizado,
os valores de seletividade em MAG experimentais e preditos pelo modelo gerado e o desvio
relativo entre eles.
condies experimentais do Planejamento Fatorial 23 (via qumica)
Razo
Molar
*
Concentrao
de catalisador **
MAG (%)
experimental
MAG
(%)
predita
Desvio
relativo
-1
-1
-1
71,3
69,7
2,2
-1
-1
52,0
57,9
- 11,3
-1
-1
53,5
54,1
- 1,1
-1
45,9
42,3
7,8
-1
-1
51,2
56,1
- 9,6
-1
52,3
44,3
15,3
-1
43,2
40,5
6,3
21,7
28,7
- 32,3
15 0
45,2
49,2
- 8,8
16 0
49,6
49,2
0,8
17 0
54,9
49,2
10,4
Experimento
Temperatura
(C)
126
A Tabela 33 mostra o efeito das variveis estatisticamente significativas sobre a

seletividade em MAG baseado nos dados do Planejamento Fatorial 23. De acordo com a
Tabela 33, as variveis temperatura, razo molar e concentrao de catalisador influenciam a
seletividade em MAG de maneira inversamente proporcional, ou seja, valores menores destas
variveis favorecem a seletividade em MAG. Alm disso, dentre estas variaveis, a razo
molar a que mais influencia a seletividade em MAG.
baseado no Planejamento Fatorial 23
Variveis
Coeficiente
Erro padro
Teste t
Valor de p
Temperatura (C)
- 6,8
4,2
- 3,3
0,0140
Razo molar
glicerol/cido esterico
Concentrao de
catalisador (% m/m) *
- 7,8
4,2
- 3,7
0,0072
- 5,9
4,2
- 2,8
0,0252
* em relao ao cido esterico
A Tabela 34 traz os dados da anlise de varincia (ANOVA). O modelo apresentado

na Equao 10 apresentou um F calculado 3,6 vezes maior que o valor crtico de F e o R2 foi
0,82. O valor de R2 prximo de 1 e o valor de F calculado superior ao F crtico valida o
modelo gerado. O erro puro foi baixo, indicando uma razovel reprodutibilidade dos
experimentos. Alm disso, o modelo gerou seletividades em MAG similares aos valores
obtidos experimentalmente em quase todos os experimentos (Tabela 32).
Tabela 34: Anlise de varincia (ANOVA) do Planejamento Fatorial 23
Fonte de
variao
Soma
quadrtica
Graus de
liberdade
Mdia
quadrtica
Valor de F*
Regresso
1136,5
378,8
10,9
Resduo
243,6
34,8
Falta de ajuste
196,4
39,3
Erro puro
47,2
23,6
Total
1380,1
10

127

os valores de seletividade em MAG preditos para cada par de variveis dentro da faixa
estudada (Figuras 35 a 37).
temperatura e razo molar com concentrao de catalisador = - 1
A Figura 35 mostra que, considerando a concentrao de catalisador mais baixa

utilizada (j que esta varivel influencia a seletividade em MAG de maneira inversamente
proporcional), maiores seletividades em MAG so obtidas utilizando-se os valores mnimos
de temperatura e razo molar (110C e 4, respectivamente).
128
temperatura e concentrao de catalisador com razo molar = - 1
A Figura 36 mostra que, considerando a razo molar mais baixa utilizada (j que esta
varivel influencia a seletividade em MAG de maneira inversamente proporcional), maiores
seletividades em MAG so obtidas utilizando-se os valores mnimos de temperatura e
concentrao de catalisador (110C e 5 % m/m, respectivamente).
129
Figura 37: Superfcie de resposta para a seletividade em MAG em funo das variveis razo
molar e concentrao de catalisador com temperatura = - 1
A Figura 37 mostra que, considerando a temperatura mais baixa utilizada (j que esta
varivel influencia a seletividade em MAG de maneira inversamente proporcional), maiores
seletividades em MAG so obtidas utilizando-se os valores mnimos de concentrao de
catalisador e razo molar (5 % m/m e 4, respectivamente).
Atravs de anlise das Figuras 35 a 37 pode-se concluir que a condio tima para a
varivel de resposta seletividade em MAG : 110C, 5 % m/m de estearato de zinco e razo
molar glicerol/cido esterico de 4.
130
Varivel de resposta: Seletividade em DAG

modelo emprico para a seletividade em DAG em funo das variveis codificadas, incluindo
apenas os termos estatisticamente significativos (valor de p < 0,1) e marginalmente
significativos (Equao 11):
DAG (%) = 13,2 + 6,4T + 5,9T2 - 3,0R - 4,8T.R
Equao 11
onde DAG (%) a seletividade em DAG, T a temperatura (C) e R a razo molar

glicerol/cido esterico.
Rotacional realizado, os valores de seletividade em DAG experimentais e preditos pelo
modelo gerado e o desvio relativo entre eles.
131
Tabela 35: Valores experimentais e preditos de seletividade em DAG para as diferentes

condies experimentais do Delineamento Composto Central Rotacional (via qumica)
Razo
Molar
*
Concentrao
de catalisador **
DAG (%)
experimental
DAG
(%)
predita
Desvio
relativo
-1
-1
-1
18
10,9
39,4
-1
-1
13
10,9
16,2
-1
-1
13,9
14,5
- 4,3
-1
16,7
14,5
13,2
-1
-1
34,9
33,3
4,6
-1
37,2
33,3
10,5
-1
20,8
17,7
14,9
12,9
17,7
- 37,2
- 1,68
14,5
19,1
- 31,7
10 1,68
39,8
40,6
- 2,0
11 0
- 1,68
13,2
- 65,0
12 0
1,68
15,7
13,2
15,9
13 0
- 1,68
11,6
18,2
- 57,2
14 0
1,68
10,6
8,2
23,0
15 0
19
13,2
30,5
16 0
8,1
13,2
- 63,0
17 0
9,7
13,2
- 36,1
Experimento
Temperatura
(C)

seletividade em DAG baseado nos dados do Delineamento Composto Central Rotacional. De
acordo com a Tabela 36,
a varivel que mais influencia a seletividade em DAG a
temperatura, sendo que tanto o seu termo linear quanto o quadrtico influenciam a
seletividade em DAG de maneira diretamente proporcional. A razo molar e a interao entre
temperatura e razo molar influenciam a seletividade em DAG de maneira inversamente
proporcional.
132
Tabela 36: Efeito das variveis estatisticamente significativas sobre a seletividade em DAG
baseado no Delineamento Composto Central Rotacional *
Variveis
Coeficiente
Teste t Valor de p
6,4
Erro
padro
2,6
Temperatura (C) (L)
4,8
0,0004
Temperatura (C) (Q)
5,9
2,7
4,3
0,0010
Razo molar glicerol/cido esterico (L)
- 3,0
2,6
- 2,2
0,0449
Temperatura (C) (L) . Razo molar

glicerol cido esterico (L)
- 4,8
3,5
- 2,7
0,0178

0,82. O valor de R2 prximo de 1 e o valor de F calculado superior ao F crtico valida o
experimentos.

Fonte de
variao
Soma
quadrtica
Graus de
liberdade
Mdia
quadrtica
Valor de F*
Regresso
1300,4
325,1
13,5
Resduo
287,4
12
24,0
Falta de ajuste
218,1
10
21,8
Erro puro
69,3
34,7
Total
1587,8
16

O modelo obtido foi utilizado para a construo de uma superfcie de resposta,

mostrando os valores de seletividade em DAG preditos para o par de variveis razo molar e
temperatura dentro da faixa estudada (Figura 38).
133
Figura 38: Superfcie de resposta para a seletividade em DAG em funo das variveis razo
molar e temperatura com concentrao de catalisador = 0
A Figura 38 mostra que valores medianos de DAG (10 - 30%) podem ser obtidos em
razes molares altas (5 - 6,7), independentemente da temperatura utilizada, ou em razes
molares baixas (3,3 - 5) e temperaturas inferiores a 140C. Assim, pode-se concluir que a
condio tima para a varivel de resposta DAG : Temperatura menor que 140C, razo
molar glicerol/cido esterico de 3,3 - 5 e 1,6 % m/m de estearato de zinco. A baixa
concentrao de catalisador (valor mnimo dentro da faixa estudada) justifica-se pelo fato de
que a concentrao de catalisador no influenciou a seletividade em DAG de maneira
significativa (Tabela 36) e, por isso, deve ser escolhida de forma a gerar economia para o
processo global (menos gastos com o catalisador).
134
Varivel de resposta: Seletividade em TAG

modelo emprico para a seletividade em TAG em funo das variveis codificadas, incluindo
apenas os termos estatisticamente significativos (valor de p < 0,1) e marginalmente
TAG (%) = 37,4 - 6,6T2 + 6,8R + 6,6C + 6,6T.R
Equao 12
onde TAG (%) a seletividade em TAG, T a temperatura (C), R a razo molar

glicerol/cido esterico e C a concentrao de estearato de zinco (% m/m em relao ao
cido esterico).
Rotacional realizado, os valores de seletividade em TAG experimentais e preditos pelo
modelo gerado e o desvio relativo entre eles.
135

condies experimentais do Delineamento Composto Central Rotacional (via qumica)
Razo
Molar
*
Concentrao
de catalisador **
TAG (%)
experimental
TAG
(%)
predita
Desvio
relativo
-1
-1
-1
10,7
24,0
- 124,3
-1
-1
35
37,2
- 6,3
-1
-1
32,6
24,4
25,2
-1
37,4
37,6
- 0,5
-1
-1
13,9
10,8
22,3
-1
10,5
24,0
- 128,6
-1
36
37,6
- 4,4
65,4
50,8
22,3
- 1,68
28,2
18,8
33,4
10 1,68
11,3
18,8
- 66,1
11 0
- 1,68
27
26,3
2,5
12 0
1,68
47,9
48,5
- 1,2
13 0
- 1,68
41,1
26,0
36,8
14 0
1,68
35,9
48,8
- 36,0
15 0
35,8
37,4
- 4,5
16 0
42,3
37,4
11,6
17 0
35,4
37,4
- 5,6
Experimento
Temperatura
(C)

seletividade em TAG baseado nos dados do Delineamento Composto Central Rotacional. A
Tabela 39 mostra que as variveis estatisticamente significativas influenciam a seletividade
em TAG praticamente da mesma forma em termos de intensidade, j que os valores absolutos
dos coeficientes so muito prximos. Por outro lado, a temperatura influencia a seletividade
em TAG de maneira inversamente proporcional enquanto que a razo molar, a concentrao
136
de catalisador e a interao entre a temperatura e razo molar influenciam a seletividade em

TAG de maneira diretamente proporcional.
Tabela 39: Efeito das variveis estatisticamente significativas sobre a seletividade em TAG
baseado no Delineamento Composto Central Rotacional *
Variveis
Coeficiente
- 6,6
Erro
padro
5,6
Temperatura (C) (Q)

Razo molar glicerol/cido esterico
(L)
Concentrao de catalisador (% m/m)
** (L)
glicerol/cido esterico (L)
Teste t Valor de p
- 2,3
0,0369
6,8
5,5
2,5
0,0291
6,6
5,5
2,4
0,0327
6,6
7,2
1,8
0,0904

** em relao ao cido esterico

0,63. Apesar do R2 ter sido relativamente baixo, o valor de F calculado superior ao F crtico
valida o modelo gerado. O erro puro foi baixo, indicando uma razovel reprodutibilidade dos
experimentos.

Fonte de
variao
Soma
quadrtica
Graus de
liberdade
Mdia
quadrtica
Valor de F*
Regresso
2135,7
533,9
5,2
Resduo
1228,4
12
102,4
Falta de ajuste
1198,4
10
119,8
Erro puro
30,0
15,0
Total
3364,1
16


os valores de seletividade em TAG preditos para cada par de variveis dentro da faixa
137
molar e temperatura com concentrao de catalisador = - 1,68
A Figura 39 mostra que, considerando a concentrao de catalisador mais baixa

utilizada (j que esta varivel influencia a seletividade em TAG de maneira diretamente
proporcional), menores seletividades em TAG so obtidas utilizando-se os valores mnimos
de temperatura e razo molar (99,8C e 3,3, respectivamente).
138
molar e concentrao de catalisador com temperatura = 1,68
A Figura 40 mostra que, considerando a temperatura mais alta utilizada (j que esta
varivel influencia a seletividade em TAG de maneira inversamente proporcional), menores
seletividades em TAG so obtidas utilizando-se os valores mnimos de concentrao de
catalisador e razo molar (1,6 % m/m e 3,3, respectivamente).
139
concentrao de catalisador e temperatura com razo molar = - 1,68
A Figura 41 mostra que, considerando a razo molar mais baixa utilizada (j que esta
varivel influencia a seletividade em TAG de maneira diretamente proporcional), menores
seletividades em TAG so obtidas utilizando-se os valores mnimos de temperatura e
concentrao de catalisador (99,8C e 1,6 % m/m, respectivamente).
Atravs da anlise das Figuras 39 - 41 pode-se concluir que a condio tima para a
seletividade em TAG : 99,8C, 1,6 % m/m de estearato de zinco e razo molar glicerol/cido
esterico de 3,3.
A Tabela 41 traz a comparao entre as condies timas para as 4 variveis de
resposta (alta converso, alta seletividade em MAG, mdia - baixa seletividade em DAG,
baixa seletividade em TAG) da sntese de monoestearato de glicerila aps 2 horas de reao
utilizando estearato de zinco como catalisador conforme indicado pelas superfcies de
resposta dos respectivos planejamentos experimentais.
Atravs da Tabela 41, observa-se que, principalmente em relao temperatura e
concentrao de catalisador, as condies timas para a converso e para a seletividade da
140
reao so contrastantes. Isto , enquanto que um valor alto destas variveis independentes
favorece a obteno de altas converses, leva a uma baixa seletividade em MAG e altas
seletividades em DAG e TAG. O contrrio tambm vlido. Assim para a obteno de
resultados timos (alta converso, alta seletividade em MAG e baixas seletividades em DAG
e TAG) necessrio encontrar um equilbrio entre as variveis independentes de forma a se
obter valores de converso e seletividade aceitveis. Em outras palavras, no possvel
conciliar uma mxima converso com uma mxima seletividade em MAG.
Usando-se os modelos (equaes) obtidos a partir dos planejamentos experimentais
realizados para cada varivel de resposta, foi possvel realizar uma otimizao a fim de
calcular os valores das variveis independentes atravs dos quais seria possvel obter, ao
mesmo tempo, converso e seletividade timas para a reao estudada. As condies timas
calculadas foram: 140C, razo molar glicerol/cido esterico de 4 e 15 % (m/m) de estearato
de zinco. Os valores das variveis de resposta preditos pelos modelos nas condies timas
foram: 73,6 % de converso, 44,3 % de MAG, 33,3 % de DAG e 24,0 % de TAG.
As condies timas experimentais obtidas a partir dos resultados dos experimentos
(Tabela 28) coincidiu com as condies timas preditas pelos modelos. Os valores das
variveis de resposta obtidos experimentalmente nas condies timas foram: 83,9 % de
converso, 52,3 % de MAG, 37,2 % de DAG e 10,5 % de TAG (experimento 6).
monoestearato de glicerila por via qumica
Variveis de Temperatura Concentrao de catalisador
Razo molar
resposta
(C)
(% m/m) *
150,2
10 - 18,4
3,3 ou 6,7
X (%)
MAG (%)
110
DAG (%)
99,8 - 140
1,6 - 18,4
3,3 - 5
TAG (%)
99,8 - 150,2
99,8
1,6
5 - 6,7
3,3
* em relao ao cido esterico
Macierzanka e Szelag (2004) estudaram a esterificao do glicerol com diferentes

cidos graxos (C12:0, C14:0, C16:0 e C18:0) na presena de sabes de zinco destes cidos
graxos durante 6 horas de reao, utilizando concentraes eqimolares de reagentes. Eles
estudaram o efeito do cido graxo, da temperatura (130 - 160C) e da frao molar de sabo
de zinco (0,00625 - 0,05 mol) na converso e no teor de MAG no produto final.
141
Para facilitar a comparao do trabalho de Macierzanka e Szelag (2004) com o

presente trabalho importante padronizar a concentrao de catalisador. Assim, pode-se dizer
que os autores supracitados utilizaram 1,4 - 11,1% (m/m) de estearato de zinco em relao ao
cido esterico, considerando a massa molar do cido esterico e do estearato de zinco,
respectivamente, de 284,5 e 632,33 g/mol e que os autores utilizaram cido esterico e
estearato de zinco de alta pureza em termos de cido graxo.
Estes autores observaram que cidos graxos com cadeias maiores so menos reativos.
Assim, o cido graxo escolhido para o presente trabalho est dentre um dos menos reativos.
Utilizando 5,6% de estearato de zinco e uma temperatura de 150C, os autores supracitados
obtiveram uma converso de 60% em 2 horas e o mximo de 90% em 6 horas. O teor de
MAG obtido aps 6 horas de reao foi de 44,8% no produto final, considerando todos os
componentes e no apenas os glicerdeos, e de 57,2% considerando somente os glicerdeos.
No presente trabalho, o melhor resultado do planejamento experimental, tanto em relao
converso quanto em termos de seletividade (83,9% e 52,3%, respectivamente) foi obtido em
apenas 2 horas de reao utilizando as condies experimentais do experimento 6 (140C,
razo molar glicerol/cido esterico de 4 e 15% de estearato de zinco). Assim, possvel
observar que um aumento na concentrao de catalisador possibilitou a obteno de
resultados similares aos alcanados por Macierzanka e Szelag (2004) em menos tempo (2
horas de reao em contraste com 6 horas de reao).
Similarmente ao obtido no presente trabalho, Macierzanka e Szelag (2004)
observaram que um aumento da temperatura e do teor de sabo de zinco levou a maiores
converses, independentemente do cido graxo utilizado.
Os mesmos autores observaram que a temperatura e a concentrao de sabo de zinco
tambm influenciaram a taxa de formao de MAG. Foi observado que em tempos menores
de reao (2 horas), a formao de MAG foi favorecida por valores mais altos de temperatura
e de concentrao de sabo de zinco. No entanto, em tempos maiores de reao (6 horas), a
formao de MAG foi favorecida por valores mais baixos de temperatura e concentrao de
sabo de zinco. No caso do presente trabalho foi observado que aps 2 horas de reao,
valores menores de temperatura e sabo de zinco favoreceram a alta seletividade em MAG.
Esta diferena pode ser explicada pelas diferentes quantidades de catalisador utilizadas
durante os experimentos: 1,4 - 11,1% por Macierzanka e Szelag (2004) e 1,6 - 18,4% pelo
presente trabalho. Alm disso, tais dados foram obtidos pelos autores supracitados utilizando
cido lurico e laurato de zinco, enquanto que o presente trabalho utilizou cido esterico
(menos reativo que o cido lurico) e estearato de zinco.
142
Adicionalmente, Macierzanka e Szelag (2004) observaram que, em todas as reaes

estudadas (utilizando diferentes cidos graxos, temperaturas e concentraes de sabo de
zinco), as maiores formaes de MAG ocorreram para as converses entre 70 e 73% , em
termos de consumo de glicerol. Adicionalmente, foi observado em todas as anlises dos
produtos das reaes que a quantidade de 2-MAG no excedeu 5% p/p da quantidade de 1MAG. No presente trabalho, obteve-se o maior teor de MAG (52,3%) em uma converso de
83,9% em termos de consumo de cido graxo e no foi feita nenhuma anlise a fim de
analisar o ismero de MAG sintetizado em maior escala. Entretanto, atravs dos resultados
obtidos por Macierzanka e Szelag (2004) pode-se inferir que o ismero 1-MAG tenha sido
produzido mais abundantemente.
importante ressaltar que Macierzanka e Szelag (2004) tambm estudaram a
esterificao na ausncia de sabo de zinco em comparao com a esterificao em sua
presena, utilizando o cido lurico como cido graxo. Eles observaram que aps 6 horas de
reao, os valores de converso atingidos com apenas 1,4% de laurato de zinco foram de 25 a
30% maiores que os obtidos em sua ausncia. Esta observao evidencia a ao cataltica do
sabo de zinco na reao de esterificao.
Segundo Hartmann (1966), em concentraes equimolares de reagentes, a
esterificao em reaes sem catalisador tanto menor quanto maior for a cadeia do cido
graxo utilizado. Assim, pode-se considerar que para o cido esterico a esterificao sem
catalisador desprezvel em comparao com a reao catalisada.
Diversas hipteses sobre o mecanismo de ao do estearato de zinco so encontradas
na literatura. Macierzanka e Szelag (2004), aps analisarem os resultados das esterificaes
de glicerol com cido lurico em presena e ausncia de estearato de zinco, concluram que o
sabo de zinco age como um agente emulsionante, aumentando a rea de contato entre os dois
reagentes imiscveis (glicerol e cido graxo) e, assim, agilizando a sntese de MAG. Assim,
quanto maior a concentrao de sabo de zinco, maior ser a disperso do glicerol no cido
graxo e maior ser a rea de contato entre os dois. Eles formularam a hiptese de que aps a
formao de MAG, este atua juntamente com o sabo de zinco formando um filme interfacial
que estabiliza a microemulso formada e pode ser penetrada por molculas de cido graxo
que iro reagir com o glicerol. Adicionalmente, os autores supem que a esterificao do
MAG steres mais substitudos ocorre na interface. Fitremann et al. (2007) tambm
cogitaram a ao emulsionante do estearato de zinco fundido em misturar a sacarose com um
ster palmtico para sntese de palmitato de sacarose em meio bsico. Por outro lado, Di Serio
143
et al. (2005) e Jacobson et al. (2008) retrataram o estearato de zinco como sendo um
catalisador cido de Lewis.
Na realidade, provvel que os dois mecanismos expliquem a ao cataltica do
estearato de zinco. Segundo Di Serio et al. (2005), a atividade cataltica dos sais de metais
bivalentes est relacionada fora dos metais como cidos de Lewis (aceptores de eltrons) e
estrutura molecular do nion, sendo que estearatos so mais eficientes que os acetatos em
reaes que ocorrem em fase oleosa devido sua maior solubilidade neste meio. Na verdade,
as caractersticas anfiflicas do estearato de zinco fazem com que ele fique localizado na
interface entre os dois reagentes imiscveis (nesse caso, glicerol e cido esterico),
diminuindo a tenso interfacial e aumentando a rea de contato entre eles. Como resultado,
haver um aumento da velocidade de reao (MACIERZANKA; SZELAG, 2004).
5.3.2 Estudo cintico da reao

A reao estudada cineticamente foi realizada 140C, com razo molar glicerol/cido
esterico de 4 e 15% (m/m em relao ao cido esterico) de catalisador. O experimento 18
na verdade uma repetio do experimento 6 em termos de condies experimentais utilizadas.
O experimento 6 do planejamento experimental foi escolhido para ser estudado cineticamente
pois foi o experimento que levou aos melhores resultados em termos de converso e
seletividade em monoglicerdeos. Os resultados do estudo cintico em termos de converso e
seletividade esto ilustrados na Tabela 42 e na Figura 42.
Tabela 42: Resultados obtidos do estudo cintico da reao (via qumica)

Experimento Tempo (min) X * (%)
MAG (%) DAG (%)
TAG (%)
18 **
15
5,9
54,6
18,9
26,5
30
8,1
53
17,2
29,8
45
14,8
49,4
23,6
27,0
60
25
35
9,3
55,7
120
59,6
45,3
14,4
40,3
180
76,5
45,4
27,9
26,7
240
83,1
52,1
36,5
11,4
* Converso em termos de consumo de cido graxo

** Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 15 % m/m de catalisador em relao ao cido esterico e 140C
144
90
80
Porcentagem (%)
70
60
Converso
50
MAG
40
DAG
TAG
30
20
10
0
0
50
100
150
200
250
Tempo (min)
* Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 15 % m/m de catalisador em relao ao cido esterico e 140C
Figura 42: Perfil do progresso da reao do experimento18 (via qumica) *
A Tabela 42 mostra que o experimento 18 levou o dobro de tempo (4 horas) para

atingir os mesmos resultados em termos de converso e seletividade que o experimento 6.
Isso pode ter ocorrido devido ao aumento de escala da reao em trs vezes em relao ao
experimento 6. Entretanto, os resultados de converso e seletividade de ambos os
experimentos foram praticamente iguais.
A Tabela 42 ainda mostra que houve um aumento da converso ao longo de todo o
tempo de reao. Os teores de MAG, DAG e TAG aumentaram durante os primeiros 15
minutos de reao, indicando a formao destes trs produtos, sendo que houve predomnio
da formao de MAG. Isto sugere que a esterificao ocorreu preferencialmente em
molculas de glicerol livre. Nos 30 minutos seguintes de reao, os teores de MAG, DAG e
TAG se mantiveram praticamente constantes. Nos 15 minutos seguintes houve uma
diminuio de MAG e DAG e um aumento de TAG, indicando uma possvel preferncia pela
esterificao de MAG e DAG para a formao de TAG. A partir da nota-se um aumento de
MAG e DAG e uma diminuio de TAG, resultando numa composio final de 52,1% de
MAG, 36,5% de DAG e 11,4% de TAG, o que sugere uma esterificao preferencial em
molculas de glicerol livre e MAG. Como a reao foi realizada em sistema aberto de forma a
ocorrer a livre evaporao de gua, pode-se dizer que a hiptese de hidrlise de TAG para a
formao de MAG e DAG durante as ltimas 3 horas de reao improvvel. Alm disso, a
alta temperatura da reao (140C) favorece a evaporao da gua.
145
Macierzanka e Szelag (2004) estudaram a cintica da esterificao do glicerol com

diferentes cidos graxos (C12:0, C14:0, C16:0 e C18:0) na presena de sabes de zinco destes
cidos graxos durante 6 horas de reao. Os experimentos foram realizados em temperaturas
(130 - 160C) e fraes molares de sabes de zinco variadas (0,00625 - 0,05 mol) variadas,
em concentraes eqimolares dos reagentes. As alquotas foram retiradas nos primeiros 30
minutos e, a seguir, a cada uma hora de reao. Independentemente do cido graxo utilizado,
eles verificaram que a converso (em termos de consumo de cido graxo e glicerol) aumentou
ao longo da reao e que a concentrao de MAG a atingiu um valor mximo decrescendo
posteriormente. Alm disso, eles observaram que as concentraes de cido graxo e glicerol
diminuram ao longo de toda a reao. Simultaneamente, foi verificada a formao de DAG e
TAG. Sua concentrao permaneceu muito baixa durante os 30 primeiros minutos da reao,
o que, provavelmente, foi causado por uma esterificao preferencial do glicerol livre durante
este perodo. Adicionalmente, os autores observaram que as concentraes de DAG e TAG
continuaram a aumentar aps a concentrao mxima de MAG ser alcanada. Segundo eles,
isto indica que o MAG formado foi posteriormente esterificado levando formao de DAG e
TAG e, consequentemente, a um declnio na concentrao de MAG. O consumo simultneo
de glicerol neste perodo indica que novas molculas de MAG tambm foram formadas.
Os mesmos autores concluram que a esterificao do glicerol realizada nas condies
estudadas pode ser descrita como uma reao consecutiva de primeira ordem que tem o MAG
como um produto intermedirio (G MAG DAG + TAG, com taxas de reao k1 e k2,
respectivamente). Os cidos graxos reagem com o glicerol, formando MAG, e
simultaneamente, os monosteres de glicerol so esterificados para formar DAG e, a seguir,
TAG. Os estudos cinticos demonstraram que, em todos os casos estudados, a concentrao
mxima de MAG no ultrapassou 50%. Alm disso, estes estudos ainda mostraram que com o
aumento da temperatura e da concentrao de sabo de zinco, as taxas de reao triplicaram,
independentemente do cido graxo utilizado. Adicionalmente, foi observado que ambas as
taxas de reao dependem fortemente do cido graxo utilizado, diminuindo medida que a
cadeia hidrocarbonada do cido graxo aumenta. O tipo de cido graxo utilizado no
influenciou a concentrao mxima de MAG alcanada, mas influenciou o tempo mximo de
reao. Nem a temperatura nem a concentrao de sabo de zinco influenciaram
significativamente a concentrao mxima de MAG, entretanto o tempo mximo de reao
(tempo no qual o valor mximo de MAG era alcanado) diminuiu com o aumento destes dois
parmetros (MACIERZANKA; SZELAG, 2004).
146
Macierzanka e Szelag (2004) tambm estimaram os valores de energia de ativao das

reaes estudadas a partir da esquao de Arrhenius: E1 (G MAG) e E2 (MAG DAG +
TAG). Esta estimativa foi realizada sob as seguintes condies: cidos graxos variados
(C12:0, C14:0, C16:0 e C18:0), temperatura de 130 - 160C e razo molar glicerol/cido
graxo/sabo de zinco de 1:1:0,025. Os resultados demonstraram que no houve uma diferena
significativa entre os dois valores de energia de ativao, o que sugere que no h
favorecimento de uma das reaes em detrimento da outra. Alm disso, sugere que os
mecanismos de ao das esterificaes a partir dos diferentes cidos graxos estudados so
similares.
Os resultados obtidos no presente trabalho diferem dos obtidos por Macierzanka e
Szelag (2004) no que tange ao perfil cintico da reao. Este fato pode ser justificado atravs
das diferentes condies de reao utilizadas (tempo de reao, teor de sabo de zinco e razo
molar entre os reagentes). O presente estudo utilizou para o estudo cintico condies de
grande excesso de glicerol, enquanto que os autores supracitados utilizaram concentraes
eqimolares de reagentes. Alm disso, a concentrao de sabo de zinco utilizada no presente
estudo foi significativamente maior em relao s utilizadas pelos autores supracitados.
A Figura 43 mostra o cromatograma do produto sintetizado no experimento 18 aps
240 min de reao. Pode-se observar a quase ausncia de cido esterico (tempo de reteno =
9 - 12,5 min) e a presena de MAG, DAG e TAG com os tempos de reteno de,
respectivamente, 13 - 16 min, 22 - 25 min e 27 - 31 min. Este experimento (assim como o 6)
levou aos melhores resultados em termos de converso e seletividade dentre todos os
experimentos realizados por via qumica com uma alta converso (83,1 %) e uma composio
em glicerdeos (52,1% de MAG, 36,5% de DAG e 11,4% de TAG) similar ao monoestearato
de glicerila comercial da marca PROQUIMIOS (54,5% de MAG, 34,8% de DAG e 10,7% de
TAG).
* Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 15 % m/m de catalisador em relao ao cido esterico e 140C
(via qumica) *
147
5.3.3 Efeito da razo molar entre os reagentes

Posteriormente avaliou-se unilateralmente o efeito da razo molar entre os reagentes
na converso e seletividade da reao de sntese de monoestearato de glicerila conduzida nas
condies descritas na Tabela 43 aps 2 horas de reao. A Tabela 43 e a Figura 44 ilustram
os resultados obtidos.
(via qumica)
Concentrao de X ***
catalisador **
(%)
19 140
15
20 140
140
140
Experimento
Razo Molar *
Temperatura
(C)
MAG
(%)
DAG
(%)
TAG
(%)
90,5
4,4
48,7
46,9
15
90,6
33
58,8
8,2
15
83,9
52,3
37,2
10,5
15
91,8
21,7
12,9
65,4
100
90
Porcentagem (%)
80
70
Converso
MAG
DAG
TAG
60
50
40
30
20
10
0
1:1
2:1
4:1
6:1
Razo molar
* 15 % m/m de catalisador em relao ao cido esterico e 140C
Figura 44: Efeito da razo molar entre os reagentes (via qumica) *
148
Os resultados demonstram que a alterao da razo molar entre os reagentes no

afetou significativamente a converso da reao. Entretanto, atravs da anlise dos resultados
pode-se observar claramente que a alterao da razo molar entre os reagentes afetou de
forma bastante significativa a seletividade da reao. Somente a razo molar de 4 resultou em
uma seletividade adequada para um monoesterato de glicerila de uso cosmtico, com um teor
de MAG de 52,3%. As demais razes apresentaram teores menores de MAG, sendo a razo 1
a que resultou na pior seletividade em MAG, embora fosse a melhor do ponto de vista
econmico.
Os resultados demonstram que a razo molar 4 apresentou-se como melhor alternativa,
dentre as razes estudadas, para a sntese de MAG por via qumica pois resultou numa alta
converso e numa seletividade adequada para o monoesterato de glicerila de uso cosmtico.
As demais razes apresentaram uma seletividade ruim para MAG, apesar de apresentarem
uma alta converso.
Macierzanka e Szelag (2004) estudaram a sntese de monoestearato de glicerila com
razo molar glicerol/cido esterico 1 utilizando o estearato de zinco como catalisador.
Atravs de seus estudos cinticos eles planejaram quando a reao deveria ser interrompida
para a obteno de um produto final que pudesse ser usado diretamente como emulsionante
A/O, sem necessidade de etapa de purificao. Segundo os autores, os resultados mostraram
que os produtos originrios da esterificao do glicerol com cido esterico possuem uma
hidrofobicidade to grande que a adio de estearato de zinco, em concentraoes variadas,
no foi capaz de afetar suas propriedades hidrofbicas. Isso fica bem evidente quando se
compara os valores de EHL de produtos contendo diferentes concentraes de estearato de
zinco (Tabela 44).
149
Concentrao de
catalisador **
Converso***
Converso****
Seletividade em
MAG
Tabela 44: Resultados obtidos por Macierzanka e Szelag *

Composio do produto final (%)
1,4
81
62
56,3
44,0
1,0
12,3
34,1
8,6
4,6
2,8
86
66
55,7
43,6
2,1
11,0
34,7
8,6
4,7
5,6
92
74
57,2
44,8
4,0
9,5
33,5
8,2
4,7
11,1
93
83
57,0
43,0
7,7
9,9
32,4
7,0
4,7
MAG
Estearato
de zinco
cido
esterico
DAG
TAG
e Glicerol
EHL
*****
* Temperatura = 150C / Tempo de reao = 6 horas / Razo molar glicerol/cido esterico = 1

*** em termos de cido esterico
**** em termos de glicerol
***** EHL: Equilbrio hidroflico-lipoflico
Fonte: Macierzanka e Szelag, 2004
A Tabela 44 mostra que com razo molar glicerol/cido esterico de 1, nas condies
estudadas por Macierzanka e Szelag (2004), foi possvel obter uma boa seletividade em
MAG. No entanto, no possvel verificar se os valores de DAG e TAG seriam aceitveis
pois esto computados juntos. Adicionando um dado Tabela 44, com a concentrao de
catalisador de 5,6% foi possvel obter uma converso de aproximadamente 60% (em termos
de cido esterico) aps 2 horas de reao.
Ao compararmos os resultados obtidos pelo presente trabalho utilizando razo molar 1
(Tabela 43 e Figura 44) com os obtidos por Macierzanka e Szelag (2004) (Tabela 44)
possvel observar que, no trabalho dos autores supracitados, na faixa de 1,4 - 11,1% de
esterato de zinco no houve influncia significativa da concentrao de catalisador na
seletividade em MAG, mas houve um aumento da converso. No entanto, no presente
trabalho, com o aumento da concentrao de catalisador para 15% e a diminuio da
temperatura de 150 para 140C houve uma reduo drstica da seletividade em MAG (de
aproximadamente 55% para 4,4%) e um aumento significativo da converso aps 2 horas de
reao (de 60% para 90,5%) em relao aos resultados obtidos por Macierzanka e Szelag
(2004). importante ressaltar que as seletividades comparadas foram obtidas em diferentes
tempos de reao (6 e 2 horas) e que o tempo de reao tambm influencia bastante a
seletividade conforme demonstrado pelo trabalho de Macierzanka e Szelag (2004) (dados no
explicitados).
150
No caso do presente trabalho, importante ressaltar que a reao ocorreu em apenas 2

horas e que concentraes menores de catalisador levaram a uma diminuio significativa da
converso (Tabela 28).
Adicionalmente, tambm possvel utilizar o produto final, sem a etapa adicional de
purificao, em cosmticos. Isto se d pois todos os ingredientes do produto final so
corriqueiramente usados na formulao de cosmticos. Os glicerdeos e o cido esterico que
no reagiu compem o monoestearato de glicerila de uso cosmtico, o estearato de zinco pode
atuar como corante branco, alm de contribuir para o EHL final (emulsionantes da mistura =
monoestearato de glicerila + estearato de zinco), e o glicerol atua como umectante. Dessa
forma, o glicerol que no foi consumido na reao passaria de subproduto componente do
produto final, agregando valor ao mesmo. O formulador que utilizasse este produto como
componente de uma emulso, dependendo do teor de glicerol requerido, teria o glicerol
suprido pelo produto ou poderia acrescentar um pouco mais de glicerol caso fosse necessrio,
o que facilitaria a formulao da emulso cosmtica. Na rea cosmtica muito comum o uso
de ingredientes que na verdade so blends, ou seja, misturas de ingredientes que facilitam o
processo de fabricao dos cosmticos. A fabricao facilitada pois a indstria passa a
diminuir a quantidade de matrias-primas diferentes a serem compradas e utilizadas,
facilitando assim os processos de aquisio e controle de qualidade de matrias-primas e o de
fabricao do cosmtico propriamente dito.
Dependendo da converso da reao, ter-se- uma certa concentrao de cido
esterico no produto final. Esta concentrao pode ser permitida em um monoestearato de
glicerila de uso cosmtico, j que estes apresentam um limite mximo de acidez (Tabela 26).
Se a concentrao de cido esterico ultrapassar este limite, ele tambm pode entrar na
composio do blend pois o cido esterico muito utilizado como emoliente em cosmticos.
Ademais, o produto obtido pelo presente trabalho tambm pode sofrer etapa adicional
de purificao para remoo do glicerol em excesso e do estearato de zinco e ser
comercializado como monoestearato de glicerila para uso cosmtico.
No entanto, para a empresa fornecedora de matrias-primas, a venda do blend seria
mais vantajosa pois, alm de ser um produto mais caro que o monoestearato de glicerila
sozinho, dispensaria o custo e o tempo gasto com a etapa de purificao. Outro aspecto
interessante que seria um produto inovador na rea cosmtica, uma rea que tem uma
demanda enorme por novas matrias-primas pois novos ingredientes podem gerar novos
produtos.
151
5.4 Sntese de monoestearato de glicerila por via enzimtica

5.4.1 Efeito do tipo de lipase
A Tabela 45 traz os resultados obtidos atravs do estudo do efeito do tipo de lipase na
converso e seletividade das reaes realizadas 60C, razo molar glicerol/cido esterico de
Experimento
4 e 5% (m/m em relao ao cido esterico) de enzima em meio isento de solvente.
20
21
22
23
Tabela 45: Resultados obtidos do estudo do efeito do tipo de lipase

Lipase
Tempo (h)
X*
MAG
DAG
(%)
(%)
(%)
TAG
(%)
Novozym 435
Lipozyme RM IM
Lipozyme TL IM
Pinho manso
86,1
43
21,4
35,6
78,7
63,3
10,7
26
33,8
58,8
10,5
30,7
17,7
56,2
12,0
31,8
___
___
___
___
___
___
7,1
___
___
___
___
___
___
Atravs da Tabela 45 pode-se observar que as enzimas Lipozyme TL IM e de pinho

manso no se mostraram adequadas para a sntese de monoestearato de glicerila nas condies
reacionais utilizadas Os valores de converso para as reaes catalisadas pelas mesmas foram
nulos ou muito baixos. Assim, os valores de glicerdeos nem chegaram a ser contabilizados.
Segundo Souza et al. (2009), a lipase de pinho manso apresenta uma atividade
excelente no que tange hidrlise de leos vegetais e resduos orgnicos oleosos. Esta lipase
no havia sido estudada ainda em reaes de esterificao. Atravs dos resultados do presente
trabalho, pode-se concluir que esta enzima no seria adequada para a reao de esterificao
estudada. A Tabela 45 mostra que os steres formados ao longo das primeiras 4 horas foram
hidrolisados nas 2 horas seguintes.
Quanto enzima Lipozyme TL IM, apesar de ser descrita pelo fabricante como sendo
ativa para a sntese de steres a partir de uma variedade de alcois e cidos, no se mostrou
152
ativa para a reao de esterificao em questo. Provavelmente a atividade de gua do meio

foi suficiente para favorecer a reao de hidrlise em detrimento da reao de esterificao.
A Tabela 45 mostra ainda que as enzimas Lipozyme RM IM e Novozym 435
apresentaram boa atividade na reao em questo. A Figura 45 ilustra a comparao entre o
desempenho destas duas enzimas. Quanto seletividade, ambas se mostraram adequadas pois
resultaram em um alto teor de MAG. Entretanto, em relao converso, a Novozym 435
apresentou melhores resultados, sendo que em 4 horas de reao resultou em uma maior
converso e uma menor seletividade em MAG e aps 6 horas de reao ocorreu o inverso.
100
90
Porcentagem (%)
80
70
Converso
60
MAG
50
DAG
40
TAG
30
20
10
0
4
Novozym 435
Lipozyme RM IM
* Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 5 % m/m de lipase em relao ao cido esterico e 60C em meio
isento de solvente
Figura 45: Comparao entre o desempenho das lipases Novozym 435 e Lipozyme RM IM *
A Lipozyme RM IM descrita como sendo ativa para a sntese de steres a partir de

uma variedade de alcois e cidos. um catalisador muito robusto e estvel que pode ser
aplicado em processos em batelada e contnuos (NOVOZYMES, 2009a). Estudos com lipases
de Rhizomucor miehei mostraram que ela muito seletiva na produo de monosteres
oticamente puros (FABER, 1997 apud FREITAS, 2006). Os resultados obtidos pelo presente
trabalho confirmam estes dados.
As informaes obtidas do fabricante da Novozym 435 esto de acordo com os
resultados obtidos no presente trabalho. Segundo o fabricante, uma das aplicaes mais
relevantes da Novozym 435 seu uso como esterase para produzir steres especficos, tais
como os usados na indstria cosmtica, em processos baixas temperaturas. Tambm
153
utilizada na re-sntese de glicerdeos a partir de glicerol e cidos graxos quando necessria a

adio de cidos graxos especficos (NOVOZYMES, 2009e).
A enzima Novozym 435 tm sido bastante estudada como catalisador para a sntese de
monoglicerdeos a partir de cidos graxos variados e glicerol. Os resultados tm sido muito
bons, tanto em relao converso, quanto em relao seletividade em MAG (DUCRET et
al., 1995; OTERO et al., 2001; YANG et al., 2003; GUAMGUI et al., 2006).
A lipase de Rhyzomucor miehei (lipase que imobilizada em um suporte especfico d
origem lipase comercial Lipozyme RM IM) tambm tm sido estudada como catalisador em
reaes de esterificao para a sntese de MAG. Entretanto, ela tem sido mais utilizada na sua
forma livre ou imobilizada em suportes prprios, mas no na sua forma comercial imobilizada
(Lipozyme RM IM) (HOQ et al., 1985; YAMANE et al., 1984; BELLOT et al., 2001).
Freitas (2006) comparou o desempenho das lipases Novozym 435, Lipozyme RM IM
e Lipozyme TL IM, na concentrao de 2% m/m, como catalisadores da sntese de
monolaurato de glicerila via esterificao 55 - 60C com razo molar glicerol/cido lurico
de 3:1. Aps 6 horas de reao os resultados de converso foram os seguintes: 35% para a
Lipozyme TL IM, 70% para a Novozym 435 e 80% para a Lipozyme RM IM. Comparando
estes resultados com o presente trabalho nota-se que:
Em ambos os casos, a pior enzima em termos de desempenho de catlise foi a

Lipozyme TL IM, sendo que no caso do presente trabalho a converso foi nula;
Houve uma inverso do desempenho da Novozym 435 e Lipozyme RM IM. No

presente trabalho, a melhor enzima em termos de catlise foi a Novozym 435, que se
mostrou muito superior Lipozyme RM IM. Nos estudos reslizados por Freitas
(2006) os resultados obtidos por estas duas enzimas foi semelhante, sendo que a
Lipozyme RM IM se mostrou melhor.
Estas divergncias se devem principalmente ao tipo de cido graxo utilizado.
5.4.2 Efeito do meio reacional

As duas enzimas com o melhor desempenho no estudo anterior (tem 5.4.1), Lipozyme
RM IM e Novozym 435, foram escolhidas para o estudo do efeito do meio reacional. Foram
feitos experimentos (24 e 25) nas mesmas condies dos experimentos 20 e 21, mudando-se
somente o meio reacional. O estudo do efeito do tipo de lipase tinha sido realizado em meio
isento de solvente. Nesta etapa foram feitas reaes em meio de solvente orgnico para avaliar
o efeito do meio reacional na sntese de monoestearato de glicerila.
154
Em princpio, os processos de sntese de monoglicerdeos podem ser realizados em um

sistema reacional contendo quantidades apropriadas de glicerol e cidos graxos em presena
ou ausncia de solventes orgnicos.
A escolha do solvente uma etapa bastante complexa. O solvente escolhido deve
solubilizar os reagentes de forma adequada e, alm disso, no inativar ou desnaturar o
biocatalisador. No caso da sntese de monoglicerdeos, os dois reagentes possuem
solubilidades diferenciadas. O glicerol hidroflico enquanto o cido graxo hidrofbico. A
baixa solubilidade do glicerol em solventes apolares orgnicos reduz a velocidade de reao e
favorece a reao paralela, ou seja, acilao dos monoacilgliceris e diacilgliceris mais
solveis. Solventes altamente polares so capazes de absorver gua avidamente e retirar a
camada de hidratao da enzima, provocando a perda das propriedades catalticas por
inativao ou desnaturao. Reciprocamente, os solventes hidrofbicos por serem menos
capazes de deformar a camada de hidratao podem apenas afetar parcialmente a atividade
cataltica. Assim, nestes casos de uso de reagentes de polaridades distintas, o ideal seria usar
solventes de polaridade intermediria (LIMA; ANGNES, 1999).
A acetona foi escolhida como solvente no presente trabalho pois j havia sido utilizada
com excelentes resultados por Yang et al. (2003) para a esterificao do glicerol com cido
esterico catalisada pela enzima Novozym 435.
Embora o uso de solventes orgnicos na sntese de steres catalisada por lipases esteja
bem difundido na literatura, a eliminao de solventes tecnicamente possvel e oferece
inmeras vantagens, tais como: Obteno de produes volumtricas mais elevadas,
eliminao do custo adicional dos solventes, separao facilitada dos produtos formados e
pronto reciclo dos substratos no convertidos. Alm disso, a ausncia de solventes geralmente
promove processos produtivos ambientalmente limpos, j que a maioria dos solventes so
txicos e agentes poluentes. Nestes sistemas a ausncia de um solvente que solubilize
reagentes e produtos, e que diminua a viscosidade do sistema, dificulta o controle e determina
a influncia dos vrios parmetros que afetam o processo (FREITAS, 2006; FORESTI et al.,
2007).
A Tabela 46 mostra os resultados obtidos das reaes realizadas em meio de acetona
em comparao com as realizadas em meio sem solvente, catalisadas pelas enzimas Novozym
435 e Lipozyme RM IM.
Experimento
155
20
24
21
25
Tabela 46: Resultados obtidos do estudo do efeito do meio reacional

Lipase
Meio
Tempo
X*
MAG
DAG
reacional (h)
(%)
(%)
(%)
TAG
(%)
Novozym 435
Novozym 435
Lipozyme RM IM
Lipozyme RM IM
Isento de
solvente
86,1
43
21,4
35,6
78,7
63,3
10,7
26
79,3
41,8
15,3
42,9
83,4
38,6
14,1
47,3
Isento de 4
solvente
6
33,8
58,8
10,5
30,7
17,7
56,2
12,0
31,7
Acetona
12,4
41,8
37,4
20,8
15,8
58,2
26,9
14,9
Acetona
A Tabela 46 mostra que o melhor resultado foi o do experimento 20 que utilizou a

enzima Novozym 435 em ausncia de solvente.
As Figuras 46 e 47 comparam o desempenho de cada enzima em presena e ausncia
de solvente.
156
Novozym 435
100
90
Porcentagem (%)
80
70
Converso
MAG
DAG
TAG
60
50
40
30
20
10
0
4
Sem solvente
Acetona
* Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 5 % m/m de lipase em relao ao cido esterico e 60C
Figura 46: Comparao entre o desempenho da Novozym 435

em ausncia e presena de solvente *
Lipozyme RM IM
70
Porcentagem (%)
60
50
Converso
40
MAG
DAG
30
TAG
20
10
0
4
6
Sem solvente
6
Acetona
* Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 5 % m/m de lipase em relao ao cido esterico e 60C
Figura 47: Comparao entre o desempenho da Lipozyme RM IM

em ausncia e presena de solvente *
157
Quando o biocatalisador utilizado foi a Novozym 435 pode-se observar que aps 4
horas de reao, o meio utilizado no influenciou significativamente a seletividade em MAG,
entretanto o meio isento de solvente levou a uma converso um pouco mais alta e a uma
menor seletividade em TAG. J aps 6 horas de reao, em meio isento de solvente houve
uma diminuio da converso (talvez por hidrlise parcial do produto formado) e em meio
com acetona houve um aumento da converso, chegando a valores semelhantes de converso
nos dois casos. Adicionalmente, aps 6 horas de reao, a seletividade em MAG em meio
isento de solvente foi significativamente superior ao meio com acetona e ao meio isento de
solvente aps 4 horas de reao. Assim, pode-se dizer que o melhor desempenho da Novozym
435 ocorreu em meio isento de solvente aps 6 horas de reao (Figura 46).
Quando o biocatalisador utilizado foi a Lipozyme RM IM pode-se observar que aps 4
horas de reao, o meio isento de solvente obteve melhores resultados tanto em termos de
converso quanto em termos de seletividade em MAG. J aps 6 horas de reao, pode-se
observar que o meio utilizado no influenciou os valores de converso e seletividade em
MAG alcanados, influenciando, no entanto, a seletividade em DAG e TAG. Novamente em
meio isento de solvente nota-se uma queda da converso de 4 para 6 horas, provavelmente
devido hidrlise do produto formado. Este comportamento no ocorreu em meio de acetona,
onde nota-se um leve aumento na converso. Para a Lipozyme RM IM, o melhor meio foi o
isento de solvente aps 4 horas de reao (Figura 47).
Os resultados mostram que a reao de esterificao parece ser "dificultada" em meio
com acetona pois as reaes neste meio demoram mais para alcanar converses mais altas
quando comparadas s reaes em meio isento de solvente. Uma das possveis explicaes
para este fato seria a alta polaridade da acetona. Solventes altamente polares so capazes de
absorver gua avidamente e retirar a camada de hidratao da enzima, provocando a perda das
propriedades catalticas por inativao ou desnaturao (KOSKENEN; KLIBANOV, 1996).
Em meio isento de solvente, as converses mais altas foram atingidas logo aps 4
horas de reao, sendo que nas 2 horas seguintes parece que a reao comeou a acontecer no
sentido inverso levando a uma diminuio da converso. Provavelmente, a baixa temperatura
do meio reacional (60C) tenha feito com que a evaporao da gua formada pela reao de
esterificao no tenha sido completa, levando reao de hidrlise nas duas ltimas horas de
reao. J nas reaes em meio contendo acetona, a reao de esterificao foi favorecida ao
longo de toda a reao em detrimento da hidrlise. Provavelmente, a presena de acetona no
meio tenha levado formao de um azetropo com a gua de menor ponto de ebulio do
158
que a gua. Dessa forma, a remoo de gua do meio aconteceu de forma mais eficiente do
que em meio isento de solvente (YAN et al., 1999).
Comparando-se os melhores resultados da Novozym 435 e Lipozyme RM IM, pode-se
observar que o desempenho da Novozym 435 foi significativamente melhor, principalmente
em termos de converso.
Assim, aps os estudos preliminares do efeito do tipo de lipase e do meio reacional na
sntese de monoestearato de glicerila, a enzima e o meio reacional escolhidos para a
otimizao das condies de reao atravs da tcnica de planejamento experimental foram:
Novozym 435 e meio isento de solvente nos tempos de reao de 4 e 6 horas.
Silva (2002) tambm estudou o efeito do meio reacional na seletividade da sntese de
monocaprina via esterificao catalisada pela enzima Lipozyme IM 20. Os resultados
demonstraram que a adio de solvente (n-hexano/t-butanol = 1) no aumentou a seletividade
em monocaprina em relao ao meio isento de solvente.
Geralmente, pode-se prever duas dificuldades imediatas para uma reao em meio
isento de solvente. A mistura reacional deve permanecer lquida durante todo o tempo de
reao. Alm disso, deve haver alguma condio que desloque a reao no sentido da
formao de produtos (SILVA, 2002). No presente trabalho, estas dificuldades foram
superadas utilizando-se temperaturas acima ou prximas do ponto de fuso do cido graxo
utilizado em reator aberto, o que permitiu a livre evaporao da gua formada durante a
reao de esterificao.

A Tabela 47 mostra a matriz de experimentos gerada de acordo com um Delineamento
Composto Central com Face Centrada e os resultados obtidos em termos de converso e
seletividade aps 4 e 6 horas de reao utilizando a lipase comercial Novozym 435 como
catalisador. As variveis foram escolhidas tendo como base o estudo de Yang et al. (2003)
sobre a esterificao do glicerol com cido esterico catalisada pela enzima Novozym 435.
A anlise do conjunto de resultados ilustrados pela Tabela 47 importante pois
permite identificar a melhor condio experimental, isto , aquela que fornece ao mesmo
tempo uma alta converso e alta seletividade em MAG. Neste caso, pode-se observar que h
vrios resultados aceitveis, dentre os quais, destacam-se os experimentos 26, 30 e 32. Todos
utilizaram 2,5 % de Novozym 435. Os experimentos 26 e 30 utilizaram a razo molar de 4,
enquanto o 32 utilizou a razo molar de 6. Os experimentos 30 e 32 foram realizados 70C e
159
o experimento 26, 60C. Para escolher as condies timas dentre os experimentos citados
importante usar como critrio de escolha, alm de alta converso e seletividade adequada,
aquele que leve a menores gastos durante o processo industrial (menores valores das variveis
independentes).
interessante notar ainda que todas as condies levaram a altas converses (62,8 92,9%) e em quase todos os experimentos a seletividade em MAG foi superior aos demais
glicerdeos (exceto nos experimentos 31 e 39 em 4 horas de reao). Isso mostra o grande
xito da enzima Novozym 435 em catalisar a sntese de monoestearato de glicerila, tanto em
relao reao de esterificao propriamente dita (altas converses) quanto em relao
seletividade.
Aps esta anlise global dos resultados, foi feita uma anlise mais detalhada, para
ambos os tempos de reao, atravs de planejamentos experimentais individuais a fim de
verificar a influncia das variveis independentes (temperatura, razo molar e relao mssica
lipase/cido esterico) sobre cada varivel de resposta ou varivel dependente estudada:
Converso (X %), seletividade em MAG (MAG %), seletividade em DAG (DAG %) e
seletividade em TAG (TAG %). Para cada varivel de resposta foi avaliada a adequao do
modelo quadrtico obtido a partir de um Delineamento Composto Central com Face Centrada.
Nos casos em que o modelo quadrtico no se ajustou adequadamente, um modelo linear foi
proposto a partir de um Planejamento fatorial 23.
Tabela 47: Matriz do Delineamento Composto Central com Face Centrada e

resultados obtidos (via enzimtica)
MAG
(%)
DAG
(%)
TAG
(%)
Temperatura
(C)
X **
(%)
Tempo (h)
Relao mssica
lipase/cido esterico
(%m/m)
Experimento
Razo
Molar *
26
60
2,5
82,5
51,6
36,6
11,8
60
2,5
86,6
55,2
31,2
13,6
60
10
79,4
54,7
34,2
11,1
60
10
75,9
55,7
29,7
14,6
60
2,5
83,7
51,5
32,5
16
60
2,5
90,9
51,7
31,6
16,7
27
28
160
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
60
10
81,6
53,4
38
8,6
60
10
77
55,2
35,6
9,2
70
2,5
88,4
57,8
34,3
7,9
70
2,5
88,9
54,4
33
12,6
70
10
76,6
40,4
44,5
15,1
70
10
82,6
46,6
37,9
15,5
70
2,5
92,6
57
34,4
8,6
70
2,5
92,9
55
27,6
17,4
70
10
82,1
48,1
37,5
14,4
70
10
86
53,8
29,2
17
65
10
64,5
44,5
14,1
41,4
65
10
62,8
44,8
16,5
38,7
65
2,5
77
48
17,5
34,5
65
2,5
76,6
47,6
21,5
30,9
65
6,25
68,6
51,4
22,1
26,5
65
6,25
69,6
46,2
33,8
20
65
6,25
74
50
19,3
30,7
65
6,25
74,3
40,8
26,5
32,7
60
6,25
87,6
56,4
19,1
24,5
60
6,25
89,5
54,8
18,1
27,1
70
6,25
72,2
33,2
27,2
39,6
70
6,25
75,5
72,6
11,7
15,7
65
6,25
85,2
54,4
30,9
14,7
65
6,25
76,9
54
38,1
7,9
65
6,25
78,3
55,6
36,5
7,9
65
6,25
81,7
50,2
40,9
8,9
65
6,25
71
47,6
42,6
9,8
65
6,25
78,8
50,9
36,5
12,6
** Converso em termos de consumo de cido graxo
A seguir encontram-se alistados os resultados obtidos para cada varivel de resposta

aps 4 horas de reao.
161
Varivel de resposta: Converso (t = 4 horas)

A partir de um Delineamento Composto Central com Face Centrada foi possvel
construir um modelo emprico para a converso em funo das variveis codificadas,
incluindo apenas os termos estatisticamente significativos (valor de p < 0,1) e marginalmente
X (%) = 74,1 - 4,0E + 8,6T2
Equao 13
onde X (%) a converso, T a temperatura (C) e E a relao mssica lipase/cido

esterico (% m/m).
com Face Centrada realizado, os valores de converso experimentais e preditos pelo modelo
gerado e o desvio relativo entre eles.
162

experimentais do Delineamento Composto Central com Face Centrada (via enzimtica)
Razo
Molar
*
Relao mssica X (%)

lipase/cido
experimental
esterico
**
(% m/m)
X (%)
predita
Desvio
relativo
26 -1
-1
-1
82,5
86,7
- 5,1
27 -1
-1
79,4
78,7
0,9
28 -1
-1
83,7
86,7
- 3,6
29 -1
81,6
78,7
3,6
30 1
-1
-1
88,4
86,7
1,9
31 1
-1
76,6
78,7
- 2,7
32 1
-1
92,6
86,7
6,4
33 1
82,1
78,7
4,1
34 0
64,5
70,1
- 8,7
35 0
-1
77
78,1
- 1,4
36 0
-1
68,6
74,1
- 8,0
37 0
74
74,1
- 0,1
38 -1
87,6
82,7
5,6
39 1
72,2
82,7
- 14,5
40 0
85,2
74,1
13,0
41 0
78,3
74,1
5,4
42 0
71
74,1
- 4,4
Experimento
Temperatura
(C)

converso baseado nos dados do Delineamento Composto Central com Face Centrada. A
Tabela 49 mostra que a varivel que mais influencia a converso o termo quadrtico da
temperatura, sendo que esta varivel faz isto de forma diretamente proporcional enquanto que
a relao mssica lipase/cido esterico afeta a converso de forma inversamente
proporcional.
163
Tabela 49: Efeito das variveis estatisticamente significativas sobre a converso baseado no
Delineamento Composto Central com Face Centrada *
Variveis
Coeficiente
Teste t
Valor de p
- 4,0
Erro
padro
3,5

esterico (% m/m) (L)
Temperatura (C) (Q)
- 2,3
0,0399
8,6
5,5
3,1
0,0075

0,51. Apesar do R2 ter sido baixo, o valor de F calculado superior ao F crtico valida o
experimentos. Alm disso, o modelo gerou converses muito similares aos valores obtidos
experimentalmente (Tabela 48).
Centrada
Fonte de
variao
Soma
quadrtica
Graus de
liberdade
Mdia
quadrtica
Valor de F*
Regresso
463,5
231,7
7,4
Resduo
436,7
14
31,2
Falta de ajuste
335,9
12
27,9
Erro puro
100,8
50,4
Total
900,2
16


mostrando os valores de converso preditos para o par de variveis temperatura e relao
mssica lipase/cido esterico dentro da faixa estudada (Figura 48).
164
relao mssica lipase/cido esterico com razo molar = 0
A Figura 48 mostra que os valores mximos de converso podem ser obtidos em
temperaturas mximas (70C) ou mnimas (60C) utilizando-se relaes mssicas lipase/cido
esterico mnimas (prximas a 2,5 % m/m). Assim, pode-se concluir que a condio tima
para a varivel de resposta converso : Temperatura 60C, razo molar glicerol/cido
esterico de 4 e 2,5 % m/m de Novozym 435. A baixa razo molar (valor mnimo dentro da
faixa estudada) justifica-se pelo fato de que a mesma no influenciou a converso de maneira
significativa (Tabela 49) e, por isso, deve ser escolhida de forma a gerar economia para o
processo global (menos gastos com reagentes). Este resultado bastante interessante pois
mostra que atravs da combinao dos valores mnimos de todas as variveis estudadas
(condio tima em termos econmicos) possvel obter altas converses.
165
Varivel de resposta: Seletividade em MAG (t = 4 horas)

para a seletividade em MAG em funo das variveis codificadas, incluindo apenas os termos
MAG (%) = 52,0 - 2,7E - 3,9E.T
Equao 14
onde MAG (%) a seletividade em MAG, T a temperatura (C) e E a relao

mssica lipase/cido esterico (% m/m).
A Tabela 51 mostra as condies experimentais do Planejamento Fatorial 23
realizado, os valores de seletividade em MAG experimentais e preditos pelo modelo gerado e
o desvio relativo entre eles.
condies experimentais do Planejamento Fatorial 23 (via enzimtica)
Razo
Molar
*
Relao mssica MAG (%)

lipase/cido
experimental
esterico
(% m/m)
MAG
(%)
predita
Desvio
relativo
26 -1
-1
-1
51,6
50,8
1,6
27 -1
-1
54,7
53,2
2,7
28 -1
-1
51,5
50,8
1,4
29 -1
53,4
53,2
0,4
30 1
-1
-1
57,8
58,6
- 1,4
31 1
-1
40,4
45,4
- 12,4
32 1
-1
57,0
58,6
- 2,8
33 1
48,1
45,4
5,6
40 0
54,4
52
4,4
41 0
55,6
52
6,5
42 0
47,6
52
- 9,2
Experimento
Temperatura
(C)

seletividade em MAG baseado nos dados do Planejamento Fatorial 23. Esta tabela mostra que
a varivel que mais influencia a seletividade em MAG a interao entre a relao mssica
166
lipase/cido esterico e a temperatura. Tanto esta varivel quanto a relao mssica

lipase/cido esterico influenciam a seletividade em MAG de forma inversamente
proporcional.
Variveis
Coeficiente
Teste t
Valor de p
- 2,7
Erro
padro
2,2

esterico (% m/m)
esterico (% m/m) . Temperatura (C)
- 2,4
0,0413
- 3,9
2,2
- 3,6
0,0073

na Equao 14 apresentou um F calculado 3 vezes maior que o valor crtico de F e o R2 foi
0,70. O valor de F calculado superior ao F crtico valida o modelo gerado. O erro puro foi
relativamente baixo, indicando uma boa reprodutibilidade dos experimentos. Alm disso, o
modelo gerou seletividades em MAG muito similares aos valores obtidos experimentalmente
(Tabela 51).
Fonte de
variao
Soma
quadrtica
Graus de
liberdade
Mdia
quadrtica
Valor de F*
Regresso
179,2
89,6
9,3
Resduo
76,9
9,6
Falta de ajuste
39,7
6,6
Erro puro
37,2
18,6
Total
256,1
10


mostrando os valores de seletividade em MAG preditos para o par de variveis temperatura e
relao mssica lipase/cido esterico dentro da faixa estudada (Figura 49).
167
temperatura e relao mssica lipase/cido esterico com razo molar = 0
A Figura 49 mostra que os valores mximos de seletividade em MAG (58%) podem
ser obtidos em temperaturas altas (prximas a 70C) e relaes mssicas lipase/cido esterico
mnimas (2,5 % m/m). interessante notar que tambm possvel obter valores de
seletividade em MAG relativamente altos (54%) utilizando-se a combinao temperatura
mnima (60C) e relao mssica lipase/cido esterico mxima (10 % m/m). Assim, pode-se
concluir que a condio tima para a varivel de resposta seletividade em MAG,
considerando que o custo alto com a lipase comercial o que mais onera o processo global, :
Temperatura prxima a 70C, razo molar glicerol/cido esterico de 4 e 2,5 % m/m de
Novozym 435. A baixa razo molar (valor mnimo dentro da faixa estudada) justifica-se pelo
fato de que a mesma no influenciou a seletividade em MAG de maneira significativa (Tabela
52) e, por isso, deve ser escolhida de forma a gerar economia para o processo global (menos
gastos com reagentes).
168
Varivel de resposta: Seletividade em DAG (t = 4 horas)

No foi possvel construir um modelo emprico linear nem quadrtico para a
seletividade em DAG em funo das variveis codificadas pois nenhum dos termos foram
estatisticamente significativos (valor de p < 0,1) e nem marginalmente significativos.
A Tabela 54 mostra as condies experimentais do Planejamento Fatorial 23 realizado
e os valores de converso experimentais. O modelo linear (R2 = 0,42) apresentou um ajuste
um pouco melhor que o quadrtico (R2 = 0,28) e, por isso, apenas os resultados do
Planejamento Fatorial 23 esto alistados na Tabela 54.
experimentais do Planejamento Fatorial 23 (via enzimtica)
Razo
Molar
*
Relao mssica lipase/cido DAG (%)

esterico (% m/m)
experimental
26 -1
-1
-1
36,6
27 -1
-1
34,2
28 -1
-1
32,5
29 -1
38,0
30 1
-1
-1
34,3
31 1
-1
44,5
32 1
-1
34,4
33 1
37,5
40 0
30,9
41 0
36,5
42 0
42,6
Experimento
Temperatura
(C)
A Tabela 55 mostra o efeito das variveis estudadas sobre a seletividade em DAG

baseado nos dados do Planejamento Fatorial 23, comprovando que nenhuma delas foi
estatisticamente significativa e nem marginalmente significativa.
169
Planejamento Fatorial 23
Variveis
Coeficiente
Teste t
Valor de p
2,1
Erro
padro
3,5

esterico (% m/m)
Temperatura (C)
1,2
0,3036
1,2
3,5
0,7
0,5361
- 0,9
3,5
- 0,5
0,6319

esterico (% m/m) . Razo molar
Temperatura (C) . Razo molar
1,27
3,5
0,7
0,5039
0,1
3,5
0,1
0,9569
- 0,8
3,5
- 0,5
0,6598
Varivel de resposta: Seletividade em TAG (t = 4 horas)

para a seletividade em TAG em funo das variveis codificadas, incluindo apenas os termos
TAG (%) = 11,4 + 2,6E.T
Equao 15
onde TAG (%) a seletividade em TAG, T a temperatura (C) e E a relao

mssica lipase/cido esterico (% m/m).
A Tabela 56 mostra as condies experimentais do Planejamento Fatorial 23
realizado, os valores de converso experimentais e preditos pelo modelo gerado e o desvio
relativo entre eles.
170

condies experimentais do Planejamento Fatorial 23 (via enzimtica)
Razo
Molar
*
Relao mssica TAG (%)

lipase/cido
experimental
esterico
(% m/m)
TAG
(%)
predita
Desvio
relativo
26 -1
-1
-1
11,8
14
- 18,6
27 -1
-1
11,1
8,8
20,7
28 -1
-1
16,0
14
12,5
29 -1
8,6
8,8
- 2,3
30 1
-1
-1
7,9
8,8
- 11,4
31 1
-1
15,1
14
7,3
32 1
-1
8,6
8,8
- 2,3
33 1
14,4
14
2,8
40 0
14,7
11,4
22,4
41 0
7,9
11,4
- 44,3
42 0
9,8
11,4
- 16,3
Experimento
Temperatura
(C)
A Tabela 57 mostra o efeito da nica varivel estatisticamente significativa sobre a

seletividade em TAG baseado nos dados do Planejamento Fatorial 23. A interao entre a
relao mssica lipase/cido esterico e a temperatura influenciam a seletividade em TAG de
forma diretamente proporcional.
Tabela 57: Efeito da varivel estatisticamente significativa sobre a seletividade em TAG

Variveis
Coeficiente

2,6
Erro
padro
1,5
Teste t
Valor de p
3,5
0,0073

171
0,57. Apesar do R2 ter sido baixo, o valor de F calculado superior ao F crtico valida o
modelo gerado. O erro puro foi relativamente baixo, indicando uma boa reprodutibilidade dos
experimentos.
Fonte de
variao
Soma
quadrtica
Graus de
liberdade
Mdia
quadrtica
Valor de F*
Regresso
55,7
55,7
11,9
Resduo
42
4,7
Falta de ajuste
17,4
2,5
Erro puro
24,6
12,3
Total
97,7
10


mostrando os valores de seletividade em TAG preditos para o par de variveis temperatura e
relao mssica lipase/cido esterico dentro da faixa estudada (Figura 50).
172
A Figura 50 mostra que os valores mnimos de seletividade em TAG podem ser
obtidos em duas situaes: Temperatura mxima (70C) e relao mssica lipase/cido
esterico mnima (2,5 % m/m) ou temperatura mnima (60C) e relao mssica lipase/cido
esterico mxima (10 % m/m). Assim, pode-se concluir que a condio tima para a varivel
de resposta seletividade em TAG, considerando-se que o alto custo da lipase comercial o
que mais onera o processo global, : Temperatura de 70C, razo molar glicerol/cido
esterico de 4 e 2,5 % m/m de Novozym 435. A baixa razo molar (valor mnimo dentro da
faixa estudada) justifica-se pelo fato de que a mesma no influenciou a seletividade em TAG
de maneira significativa (Tabela 57) e, por isso, deve ser escolhida de forma a gerar economia
para o processo global (menos gastos com reagentes).
utilizando a lipase comercial Novozym 435 como catalisador conforme indicado pelas
superfcies de resposta dos respectivos planejamentos experimentais.
173
monoestearato de glicerila por via enzimtica (t = 4 horas)
Variveis de Temperatura (C)
resposta
X (%)
60 ou 70
Relao mssica lipase/cido Razo molar

esterico (% m/m)
glicerol/cido
esterico
2,5
4-6
MAG (%)
70
2,5
4-6
DAG (%)
60 - 70
2,5 - 10
4-6
TAG (%)
70
2,5
4-6
60
10
Atravs da Tabela 59, observa-se que, as condies timas das variveis de resposta
estudadas no so contrastantes, ou seja, possvel encontrar condies nas quais os valores
timos de todas as variveis sejam obtidos. Estas condies so: 70C, 2,5 % de Novozym
435 e razo molar 4 - 6.
As condies timas (valores das variveis independentes) calculadas atravs dos
modelos (equaes) obtidos a partir dos planejamentos experimentais (70C, 2,5 % de
Novozym 435 e razo molar de 4 - 6) coincidiram com as condies timas experimentais
(experimentos 30 e 32 da Tabela 47). Os valores das variveis de resposta preditos pelos
modelos nas condies timas foram: 86,7 % de converso, 58,6 % de MAG e 8,8 % de TAG.
No foi possvel gerar um modelo para a seletividade em DAG, por isso torna-se invivel
prever para esta varivel um valor nas condies timas.
A seguir encontram-se alistados os resultados obtidos para cada varivel de resposta

aps 6 horas de reao.
Varivel de resposta: Converso (t = 6 horas)
X (%) = 74,4 - 5,2E + 10,2T2 + 1,8R + 1,4E.T
Equao 16
onde X (%) a converso, T a temperatura (C), E a relao mssica lipase/cido

esterico (% m/m) e R a razo molar glicerol/cido esterico.
174

com Face Centrada realizado, os valores de converso experimentais e preditos pelo modelo
gerado e o desvio relativo entre eles.
experimentais do Delineamento Composto Central com Face Centrada (via enzimtica)
Razo
Molar
*
Relao mssica X (%)

lipase/cido
experimental
esterico
**
(% m/m)
X (%)
predita
Desvio
relativo
26 -1
-1
-1
86,6
89,4
- 3,2
27 -1
-1
75,9
76,2
- 0,4
28 -1
-1
90,9
93,0
- 2,3
29 -1
77,0
79,8
- 3,6
30 1
-1
-1
88,9
86,6
2,6
31 1
-1
82,6
79,0
4,4
32 1
-1
92,9
90,2
2,9
33 1
86,0
82,6
4,0
34 0
62,8
69,2
- 10,2
35 0
-1
76,6
79,6
- 3,9
36 0
-1
69,6
72,6
- 4,3
37 0
74,3
76,2
- 2,6
38 -1
89,5
84,6
5,5
39 1
75,5
84,6
- 12,1
40 0
76,9
74,4
3,3
41 0
81,7
74,4
8,9
42 0
78,8
74,4
5,6
Experimento
Temperatura
(C)

significativas sobre a converso baseado nos dados do Delineamento Composto Central com
Face Centrada. Esta Tabela mostra que a varivel que mais influencia a converso o termo
quadrtico da temperatura, sendo que ela faz isto de forma diretamente proporcional. As
175
variveis razo molar e a interao entre a relao mssica lipase/cido esterico e a

temperatura tambm afetam a converso de forma diretamente proporcional. J a relao
mssica lipase/cido esterico afeta a converso de maneira inversamente proporcional.

converso baseado no Delineamento Composto Central com Face Centrada *
Variveis
Coeficiente

esterico (% m/m) (L)
Temperatura (C) (Q)
(L)
esterico (% m/m) (L) . Temperatura
(C) (L)
Teste t
Valor de p
- 5,2
Erro
padro
1,5
- 6,8
0,0212
10,2
2,4
8,6
0,0134
1,8
1,5
2,3
0,1492
1,4
1,7
1,7
0,2374

significativamente baixo, indicando uma tima reprodutibilidade dos experimentos. Alm
disso, o modelo gerou converses muito similares aos valores obtidos experimentalmente
(Tabela 60).
Centrada
Fonte de
variao
Soma
quadrtica
Graus de
liberdade
Mdia
quadrtica
Valor de F*
Regresso
741,1
185,3
7,3
Resduo
305,5
12
25,5
Falta de ajuste
293,8
10
29,4
Erro puro
11,7
5,9
Total
1046,6
16
* Coeficiente de determinao: R2 = 0,7081; F0,1;4.12= 2,48

176

os valores de converso preditos para cada par de variveis dentro da faixa estudada (Figuras
51 a 54).
relao mssica lipase/cido esterico com razo molar = 1
A Figura 51 mostra que, considerando a razo molar mais alta utilizada (j que esta
varivel influencia a converso de maneira diretamente proporcional), os valores mximos de
converso podem ser obtidos em temperaturas mximas (70C) ou mnimas (60C) utilizandose relaes mssicas lipase/cido esterico mnimas (prximas a 2,5 % m/m).
177
relao mssica lipase/cido esterico com temperatura = 1
A Figura 52 mostra que os valores mximos de converso podem ser obtidos

utilizando-se relao mssica lipase/cido esterico mnima (2,5 % m/m) e razo molar
mxima (6).
178
relao mssica lipase/cido esterico com temperatura = - 1
A Figura 53 mostra que os valores mximos de converso podem ser obtidos
utilizando-se relao mssica lipase/cido esterico mnima (2,5 % m/m) e razo molar
mxima (6).
Atravs da comparao entre as Figuras 52 e 53 possvel confirmar as informaes
fornecidas, a seguir, pela Figura 54 de que possvel obter valores timos de converso em
temperaturas mnimas ou mximas (60 ou 70C).
179
temperatura com relao mssica lipase/cido esterico = - 1
A Figura 54 mostra que, considerando a relao mssica lipase/cido esterico mais
baixa utilizada (j que esta varivel influencia a converso de maneira inversamente
proporcional), os valores mximos de converso podem ser obtidos em temperaturas mximas
(70C) ou mnimas (60C) utilizando-se razes molares glicerol/cido esterico mximas
(prximas a 6).
varivel de resposta converso : Temperatura de 60C, razo molar glicerol/cido esterico
de 6 e 2,5 % m/m de Novozym 435. A baixa temperatura (valor mnimo dentre os dois
timos: 60 e 70C) foi escolhida a fim de gerar economia para o processo global (menos
gastos com energia).
180
Varivel de resposta: Seletividade em MAG (t = 6 horas)

MAG (%) = 50,9 - 4,1E2 + 1,0T + 13,4T2 - 6,8R2 - 1,6E.T + 1,2E.R + 1,5T.R
Equao 17
onde MAG (%) a seletividade em MAG, T a temperatura (C), E a relao

mssica lipase/cido esterico (% m/m) e R a razo molar glicerol/cido esterico.
com Face Centrada realizado, os valores de seletividade em MAG experimentais e preditos
pelo modelo gerado e o desvio relativo entre eles.
181

condies experimentais do Delineamento Composto Central com Face Centrada (via
enzimtica)
Razo
Molar
*
Relao mssica MAG (%)

lipase/cido
experimental
esterico
(% m/m)
MAG
(%)
predita
Desvio
relativo
26 -1
-1
-1
55,2
53,5
3,1
27 -1
-1
55,7
54,3
2,5
28 -1
-1
51,7
48,1
7,0
29 -1
55,2
53,7
2,7
30 1
-1
-1
54,4
55,7
- 2,4
31 1
-1
46,6
50,1
- 7,5
32 1
-1
55,0
56,3
- 2,4
33 1
53,8
55,5
- 3,2
34 0
44,8
46,8
- 4,5
35 0
-1
47,6
46,8
1,7
36 0
-1
46,2
44,1
4,5
37 0
40,8
44,1
- 8,1
38 -1
54,8
63,3
- 15,5
39 1
72,6
65,3
10,1
40 0
54,0
50,9
5,7
41 0
50,2
50,9
- 1,4
42 0
50,9
50,9
0,0
Experimento
Temperatura
(C)

significativas sobre a seletividade em MAG baseado nos dados do Delineamento Composto
Central com Face Centrada. Esta Tabela mostra que a varivel que mais influencia a
seletividade em MAG o termo quadrtico da temperatura, sendo que ela faz isto de forma
diretamente proporcional. Alm disso, as variveis temperatura, e as interaes entre a relao
mssica lipase/cido esterico e a razo molar e entre a temperatura e razo molar tambm
influenciam a seletividade em MAG de maneira diretamente proporcional. J o termo
182
quadrtico da relao mssica lipase/cido esterico, o termo quadrtico da razo molar e a

interao entre a relao mssica lipase/cido esterico e a temperatura inflenciam a
seletividade em MAG de forma inversamente proporcional.
Tabela 64: Efeito das variveis estatisticamente e marginalmente sobre a seletividade em

MAG baseado no Delineamento Composto Central com Face Centrada *
Variveis
Coeficiente
- 4,1
Erro
padro
2,5
Relao mssica lipase/cido esterico

(% m/m) (Q)
Temperatura (C) (L)
Teste t Valor de p
- 3,4
0,0787
1,0
1,3
1,5
0,2651
Temperatura (C) (Q)
13,4
2,5
10,8
0,0084

(Q)
(% m/m) (L) . Temperatura (C) (L)
(% m/m) (L) . Razo molar
- 6,8
2,5
- 5,5
0,0311
- 1,6
1,43
- 2,3
0,1510
1,2
1,43
1,7
0,2353
1,5
1,43
2,1
0,1752

significativamente baixo, indicando uma tima reprodutibilidade dos experimentos. Alm
disso, o modelo gerou seletividades em MAG muito similares aos valores obtidos
experimentalmente (Tabela 63).
183
Centrada
Fonte de
variao
Soma
quadrtica
Graus de
liberdade
Mdia
quadrtica
Valor de F*
Regresso
556,5
79,5
3,7
Resduo
194,1
21,6
Falta de ajuste
185,9
26,6
Erro puro
8,2
4,1
Total
750,6
16


os valores de seletividade em MAG preditos para cada par de variveis dentro da faixa
184
A Figura 55 mostra que os valores mximos de seletividade em MAG podem ser

obtidos em temperaturas mximas (70C) ou mnimas (60C) utilizando-se relaes mssicas
lipase/cido esterico medianas (prximas a 6,25 % m/m).
temperatura e razo molar com relao mssica lipase/cido esterico = 0
A Figura 56 mostra que os valores mximos de seletividade em MAG podem ser

obtidos em temperaturas mximas (70C) ou mnimas (60C) utilizando-se razes molares
glicerol/cido esterico medianas (prximas a 5).
185
relao mssica lipase/cido esterico e razo molar com temperatura = 1
A Figura 57 mostra que os valores mximos de seletividade em MAG, considerando a
temperatura mais alta utilizada (j que esta varivel influencia a converso de maneira
diretamente proporcional), podem ser obtidos utilizando-se valores medianos de razo molar
(prximos a 5) e relao mssica lipase/cido esterico (prximas a 6,25 % m/m).
varivel de resposta converso : Temperatura de 60C, razo molar glicerol/cido esterico
de 5 e 6,25 % m/m de Novozym 435. A baixa temperatura (valor mnimo dentre os dois
timos: 60 e 70C) deve ser escolhida de forma a gerar economia para o processo global
(menos gastos com energia).
186
Varivel de resposta: Seletividade em DAG (t = 6 horas)

seletividade em DAG em funo das variveis codificadas pois nenhum dos termos foram
e os valores de seletividade em DAG experimentais. O modelo linear (R2 = 0,40) apresentou
um ajuste um pouco melhor que o quadrtico (R2 = 0,31) e, por isso, apenas os resultados do
Planejamento Fatorial 23 esto alistados na Tabela 66.
Razo
Molar
*
Relao mssica DAG (%)

lipase/cido
experimental
esterico (% m/m)
26 -1
-1
-1
31,2
27 -1
-1
29,7
28 -1
-1
31,6
29 -1
35,6
30 1
-1
-1
33,0
31 1
-1
37,9
32 1
-1
27,6
33 1
29,2
40 0
38,1
41 0
40,9
42 0
36,5
Experimento
Temperatura
(C)
A Tabela 67 mostra o efeito das variveis estudadas sobre a seletividade em DAG

estatisticamente significativa.
187
Variveis
Coeficiente
Teste t
Valor de p
1,1
Erro
padro
3,7

esterico (% m/m)
Temperatura (C)
0,6
0,5808
- 0,1
3,7
- 0,02
0,9800

esterico
esterico (% m/m) . Temperatura
(C)
- 1,0
3,7
- 0,5
0,6305
0,5
3,7
0,3
0,8029
0,3
3,7
0,1
0,8905
- 2,6
3,7
- 1,4
0,2454
Varivel de resposta: Seletividade em TAG (t = 6 horas)

seletividade em TAG em funo das variveis codificadas pois nenhum dos termos foram
e os valores de seletividade em TAG experimentais. O modelo linear (R2 = 0,43) apresentou
um ajuste um pouco melhor que o quadrtico (R2 = 0,23) e, por isso, apenas os resultados do
Planejamento Fatorial 23 esto listados na Tabela 68.
188
Tabela 68: Valores experimentais de seletividade em TAG para as diferentes condies

Razo
Molar
*
Relao mssica
lipase/cido
esterico (% m/m)
TAG (%)
experimental
26 -1
-1
-1
13,6
27 -1
-1
14,6
28 -1
-1
16,7
29 -1
9,2
30 1
-1
-1
12,6
31 1
-1
15,5
32 1
-1
17,4
33 1
17,0
40 0
7,9
41 0
8,9
42 0
12,6
Experimento
Temperatura
(C)
A Tabela 69 mostra o efeito das variveis estudadas sobre a seletividade em TAG

estatisticamente significativa.
189
Tabela 69: Efeito das variveis testadas sobre a seletividade em TAG baseado no
Variveis
Coeficiente
Teste t
Valor de p
- 0,5
Erro
padro
2,9

esterico (% m/m)
Temperatura (C)
- 0,3
0,7441
1,1
2,9
0,7
0,5034

esterico
esterico (% m/m) . Temperatura
(C)
0,5
2,9
0,3
0,7441
1,1
2,9
0,8
0,4753
- 1,5
2,9
- 1,0
0,3604
1,1
2,9
0,8
0,4939

utilizando a lipase comercial Novozym 435 como catalisador conforme indicado pelas
superfcies de resposta dos respectivos planejamentos experimentais.
monoestearato de glicerila por via enzimtica (t = 6 horas)
Variveis de Temperatura (C)
resposta
X%
60 ou 70
Relao mssica lipase/cido Razo molar

esterico (% m/m)
glicerol/cido
esterico
2,5
6
MAG (%)
60 ou 70
6,25
DAG (%)
60 - 70
2,5 - 10
4-6
TAG (%)
60 - 70
2,5 - 10
4-6
Atravs da Tabela 70, observa-se que as condies timas para a converso e para a
seletividade da reao so contrastantes em termos de relao mssica lipase/cido esterico e
razo molar. Enquanto que a razo molar de 6,25 e a relao mssica lipase/cido esterico de
5 % favorece uma seletividade adequada em glicerdeos, a razo molar de 6 e a relao
190
mssica lipase/cido esterico de 2,5 % favorece uma maior converso. Assim, para a
obteno de resultados timos (alta converso, alta seletividade em MAG e baixas
seletividades em DAG e TAG) necessrio encontrar um equilbrio entre as variveis
independentes de forma a se obter valores de converso e seletividade aceitveis. Em outras
palavras, no possvel conciliar uma mxima converso com uma mxima seletividade em
MAG.
Usando-se os modelos (equaes) obtidos a partir dos planejamentos experimentais
realizados para cada varivel de resposta, foi possvel realizar uma otimizao a fim de
calcular os valores das variveis independentes atravs dos quais seria possvel obter, ao
mesmo tempo, converso e seletividade timas para a reao estudada. As condies timas
calculadas foram: 70C, razo molar glicerol/cido esterico de 5 e 2,5 % (m/m) de Novozym
435. Os valores das variveis de resposta preditos pelos modelos nas condies timas foram:
88,4 % de converso e 62,8 % de MAG. No foi possvel gerar modelos para a seletividade
em DAG e TAG, por isso torna-se invivel prever para estas variveis um valor nas condies
timas.
As condies timas experimentais obtidas a partir dos resultados dos experimentos
(experimentos 26, 30 e 32 da Tabela 47) no coincidiram com as condies timas preditas
pelos modelos. As condies timas calculadas pelos modelos (70C, razo molar
glicerol/cido esterico de 5 e 2,5 % (m/m) de Novozym 435) no foram reproduzidas
experimentalmente pois no foram contempladas pelas matrizes geradas a partir dos
planejamentos experimentais realizados no presente trabalho. As condies dos experimentos
30 e 32 se aproximam das condies calculadas pelo modelo (mesma temperatura e mesma
relao mssica lipase/cido esterico). As razes molares dos experimentos 30 e 32 foram,
respectivamente, 4 e 6.
A seguir ser realizada uma comparao entre os resultados obtidos a partir do

planejamento experimental para os dois tempos de reao estudados na sntese de
monoestearato de glicerila por via enzimtica.
As Tabelas 71 e 72 comparam os resultados obtidos atravs do planejamento
experimental (superfcies de resposta) e atravs de dois dos melhores experimentos para os
dois tempos de reao estudados na sntese de monoestearato de glicerila por via enzimtica.
191
Tabela 71: Comparao entre as condies timas para a sntese de monoestearato de glicerila
por via enzimtica nos dois tempos de reao
Variveis
de resposta
Tempo
Temperatura (C)
de reao
60
Relao mssica
lipase/cido esterico
(% m/m)
2,5
Razo molar
glicerol/cido
esterico
4-6
X (%)
4
6
60
2,5
70
2,5
4-6
60
6,25
DAG (%)
4e 6
60 - 70
2,5 - 10
4-6
TAG (%)
70
2,5
4-6
60 - 70
2,5 - 10
4-6
MAG (%)
A Tabela 71 mostra que para a varivel de resposta converso, o tempo de reao s

influenciou a varivel razo molar. Para a varivel seletividade em MAG houve diferena
com relao s 3 variveis independentes testadas. Para a varivel seletividade em DAG no
foi possvel prever condies timas em nenhum dos dois tempos de reao (isto , qualquer
valor dentro do intervalo estudado pode ser considerado como timo). J para a seletividade
em TAG foi possvel prever condies timas no tempo de 4 horas e no foi possvel faz-lo
no tempo de 6 horas. Estes resultados mostram que em alguns casos a influncia do tempo de
reao significativa, principalmente no caso das seletividades em MAG e em TAG. Assim,
o tempo de reao deve ser levado em conta ao se determinar as condies timas da reao
de sntese de monoestearato de glicerila por via enzimtica utilizando-se a lipase comercial
Novozym 435.
192
Tabela 72: Comparao entre os resultados experimentais (Exp.) e preditos (Pred.) para a
sntese de monoestearato de glicerila por via enzimtica nos dois tempos de reao
Variveis
de
resposta
X (%)
Tempo Modelo
VS* Experimento 26 **
Experimento 30 ***
de
proposto
Exp. Pred. Desvio Exp. Pred. Desvio
reao
4
Quadrtico T2
82,5 86,7 5,1
88,4 86,7 1,9
R2 = 0,51
6
Quadrtico T2
86,6
89,4
- 3,2
88,9
86,6
2,6
51,6
50,8
1,6
57,8
58,6
- 1,4
55,2
53,5
3,1
54,4
55,7
- 2,4
34,3
R2 = 0,71
MAG (%)
Linear
E.T
R2 = 0,70
6
Quadrtico T2
R2 = 0,74
DAG (%)
TAG (%)
N ****
36,6
31,2
Linear
E.T
11,8
14,0
13,6
33,0
- 18,6
7,9
8,8
12,6
- 11,4
R2 = 0,57
6
* Varivel significativa que mais afetou a respectiva varivel de resposta.

** Condies experimentais: 60C, razo molar glicerol/cido esterico de 4 e 2,5 % m/m de Novozym 435.
*** Condies experimentais: 70C, razo molar glicerol/cido esterico de 4 e 2,5 % m/m de Novozym 435.
**** No foi possvel criar um modelo emprico pois as variveis testadas no foram estatisticamente
significativas.
A Tabela 72 mostra que, com relao aos modelos propostos, existiram diferenas
com relao ao tipo de modelo, a possibilidade de se criar um modelo e em relao ao R2 de
acordo com o tempo de reao. Alm disso, so comparados os valores experimentais e
preditos de dois experimentos que levaram a resultados timos.
Para a varivel de resposta converso, o modelo quadrtico foi o que melhor se ajustou
em ambos os tempos de reao estudados, sendo que o termo quadrtico da temperatura foi a
varivel estatisticamente significativa que mais influenciou a converso. No entanto, o
modelo obtido a partir dos resultados de 6 horas de reao apresentou um melhor ajuste
evidenciado pelo maior R2 e pelos menores desvios entre os valores experimentais e preditos
do experimento 26. Os desvios entre os valores experimentais e preditos do experimento 30
foram bastante semelhantes. Com relao aos valores experimentais, em ambos os
193
experimentos houve um aumento da converso com o tempo de reao, sendo que este
aumento foi mais significativo em temperaturas mais baixas (experimento 26).
Para a varivel de resposta seletividade em MAG, o modelo linear foi o que melhor se
ajustou em 4 horas de reao (onde a interao entre a relao mssica lipase/cido esterico e
a temperatura foi a varivel que mais influenciou a resposta), enquanto que o quadrtico se
ajustou melhor aps 6 horas de reao (onde o termo quadrtico da temperatura foi a varivel
que mais influenciou a resposta). No entanto, ambos os modelos apresentaram ajustes
semelhantes. Isso pode ser evidenciado pela similaridade entre os R2 e pelos desvios similares
entre os valores experimentais e preditos. Com relao aos valores experimentais, no
experimento 26 houve um aumento da seletividade em MAG em funo do tempo de reao.
J no experimento 30 ocorreu o inverso, mostrando que a diferena em 10C na temperatura
foi significativa para o comportamento da seletividade em MAG em diferentes tempos de
reao.
Para a varivel de resposta seletividade em DAG, no foi possvel criar modelos
empricos em ambos os tempos de reao. Com relao aos valores experimentais, em ambos
os experimentos houve uma diminuio da seletividade em DAG com o tempo de reao,
sendo que esta diminuio foi mais significativa em temperaturas mais baixas (experimento
26).
Para a varivel de resposta seletividade em TAG, no foi possvel criar um modelo
emprico para 6 horas de reao. Entretanto, para 4 horas de reao foi proposto um modelo
linear onde a interao entre a relao mssica lipase/cido esterico e a temperatura foi a
varivel que mais influenciou a resposta. Com relao aos valores experimentais, em ambos
os experimentos houve um aumento da seletividade em TAG com o tempo de reao, sendo
que este aumento foi mais significativo em temperaturas mais altas (experimento 30).
Considerando todos os modelos propostos, o modelo proposto para a varivel
seletividade em TAG foi o que apresentou maiores desvios entre os valores experimentais e
preditos.
Ghamgui et al. (2006) estudaram a produo de monoolena via esterificao
catalisada pela lipase de Staphylococcus simulans imobilizada num sistema isento de solvente
aps 48 horas de reao. Foi realizado um planejamento composto central rotacional para o
estudo da influncia das seguintes variveis na produo de monoolena: Razo molar
glicerol/cido olico, quantidade de gua adicionada no incio da reao e quantidade de
lipase. As variveis que mais influenciaram o processo foram a quantidade de gua
adicionada no incio da reao e a razo molar ao quadrado. Os resultados demonstraram que
194
a sntese de monoolena predominou em razes molares maiores que 1, ou seja, em excesso de

glicerol. A razo molar que resultou em maior sntese de MAG foi a de 5. Razes molares
menores que 1 levaram a um favorecimento da produo de DAG e TAG. A quantidade ideal
de enzima para o processo foi de 100 UI. A partir deste valor, no houve alteraes
significativas na produo de MAG.
O presente trabalho confirma o fato de que um excesso de glicerol favorece a sntese
de MAG, conforme j relatado por Ghamgui et al. (2006). Alm disso, foi observado que
valores mnimos de enzima favorecem tanto a converso quanto seletividade em MAG. O
fato de maiores concentraes de enzima prejudicarem o processo confirma o observado por
Ghamgui et al. (2006) e pode ser explicado pela seguinte teoria formulada por estes autores:
Um grande excesso de molculas de enzima poderiam levar a uma agregao protica, o que
impediria que os stios ativos enzimticos estivessem expostos aos substratos.
Silva (2002) estudou a sntese de monocaprina via esterificao em meio isento de
solvente catalisada pela enzima Lipozyme IM. Foi realizado um planejamento fatorial a fim
de se investigar a influncia de algumas variveis (temperatura, razo molar glicerol/cido
cprico e concentrao de enzima) na seletividade em monocaprina aps 4 horas de reao.
Os resultados demonstraram que todas as variveis influenciaram o processo, sendo que os
nveis menores das variveis favoreceram a sntese de monocaprina (40C, razo molar de 2 e
1% m/m de enzima). A razo molar entre os reagentes foi a que mais influenciou na
seletividade em monocaprina.
No caso do presente trabalho, a seletividade em MAG aps 4 horas de reao foi
influenciada apenas pela relao mssica lipase/cido esterico e pela interao entre esta
relao e a temperatura, sendo que esta ltima varivel foi a que mais influenciou o processo.
Um provvel motivo de a razo molar no ter sido to determinante para a MAG (%)
no planejamento experimental realizado no presente trabalho assim como relatado por outros
autores a proximidade entre os valores testados (4, 5 e 6). No tem 5.4.5 ser feito um
estudo mais detalhado do efeito da razo molar entre os reagentes na sntese de monoestearato
de glicerila utilizando a lipase comercial Novozym 435.
5.4.4 Estudo cintico da reao

As reaes estudadas cineticamente foram realizadas com razo molar glicerol/cido
esterico de 4 e 2,5 % (m/m em relao ao cido esterico) de Novozym 435. Os
195
experimentos 43 e 44 foram conduzidos 70 e 60C, respectivamente. Estes experimentos

foram repeties dos experimentos 30 e 26 do planejamento experimental (Tabela 73),
respectivamente, os quais obtiveram timos resultados de converso e seletividade em MAG.
Os resultados esto ilustrados na Tabela 73 e nas Figuras 58 e 59.
Comparando a Tabela 47 com a 73, pode-se observar que os experimentos originais e
suas repeties chegaram a valores semelhantes de converso e teor de MAG no mesmo
tempo de reao (4 e 6 horas). Entretanto, observa-se nos experimentos 30 e 26 uma maior
razo DAG/TAG em relao aos experimentos 43 e 44. Isso pode ter ocorrido devido ao
aumento de escala da reao em duas vezes em relao aos experimentos 30 e 26. Alm disso,
notvel observar que em apenas 2 horas de reao j possvel obter resultados aceitveis
em termos de converso e seletividade em MAG. Este resultado excelente para uma reao
enzimtica.
Tabela 73: Resultados obtidos do estudo cintico da reao (via enzimtica)

Experimento Tempo (h)
X *** (%)
MAG (%)
DAG (%)
TAG (%)
43 *
44 **
63,6
57,1
23,1
19,8
83
55,9
25
19,1
83,3
52,1
22,7
25,2
86,4
52,8
24,5
22,7
84,2
48,3
23,4
28,3
0,5
29,7
49,3
13,7
37
51
47,8
13
39,2
78,2
55,7
16,0
28,3
85,7
49,6
26,9
23,5
84
54,9
22,8
22,3
87,4
54,1
20,6
25,3
* Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 2,5 % m/m de Novozym 435 em relao ao cido esterico e 70C
** Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 2,5 % m/m de Novozym 435 em relao ao cido esterico e 60C
196
Temperatura = 70C
100
90
Porcentagem (%)
80
70
Converso
60
MAG
50
DAG
40
TAG
30
20
10
0
0
10
Tempo (h)
* Razo molar glicerol/cido esterico = 4 e 2,5 % m/m de Novozym 435 em relao ao cido esterico
Figura 58: Perfil do progresso da reao do experimento 43 (via enzimtica) *
Temperatura = 60C
100
90
Porcentagem (%)
80
70
Converso
60
MAG
50
DAG
TAG
40
30
20
10
0
0
10
Tempo (h)
* Razo molar glicerol/cido esterico = 4 e 2,5 % m/m de Novozym 435 em relao ao cido esterico
Figura 59: Perfil do progresso da reao do experimento 44 (via enzimtica) *
Analisando os resultados do experimento 43 pode-se ver que a converso aumentou

at 2 horas de reao, quando atingiu o valor de equilbrio. Um comportamento similar pode
197
ser visto em relao aos nveis de MAG, DAG e TAG, sendo que neste caso o equilbrio foi
atingido aps 1 hora de reao. Dentre os 3 glicerdeos, aquele que se manteve mais estvel
em funo do tempo foi o DAG. Em relao ao teor de MAG e TAG, observa-se, ao longo do
tempo, uma leve diminuio do teor de MAG e um leve aumento do teor de TAG. Isto sugere
que parte do MAG formado esterificado posteriormente para a formao de TAG. bom
ressaltar que durante toda a reao a reao de esterificao do glicerol para a formao de
MAG foi favorecida j que os teores de MAG se mantiveram significativamente superiores
aos dos demais glicerdeos. Os valores de DAG e TAG se mantiveram praticamente iguais ao
longo da reao, demonstrando no haver preferncia para a formao de DAG ou TAG. Na
ltima 1 hora houve um leve aumento de TAG e uma leve diminuio de DAG, sugerindo
uma esterificao do DAG para formar TAG (Figura 58).
Analisando os resultados do experimento 44 pode-se ver que a converso aumentou
at 4 horas de reao, quando atingiu o valor de equilbrio. Nos primeiros 30 minutos ocorreu
um aumento de todos os glicerdeos, com uma predominncia do teor de MAG seguida pelo
teor de TAG e, por ltimo, de DAG. Isto sugere que as reaes favorecidas neste perodo
foram a esterificao do glicerol livre e do DAG, formando MAG e TAG, respectivamente.
Nos 30 minutos seguintes os teores de glicerdeos permaneceram praticamente constantes. Ao
longo da segunda hora, houve um leve aumento de MAG e DAG acompanhado por uma
diminuio de TAG. Considerando a reao de hidrlise de TAG desprezvel nas condies
estudadas, as observaes ao longo da segunda hora sugerem um favorecimento nas reaes
de esterificao do glicerol livre e de MAG, para formar MAG e DAG, respectivamente. No
perodo de 2 a 4 horas de reao ocorre uma leve diminuio de MAG e TAG acompanhada
por um aumento de DAG. Isto sugere um leve favorecimento da reao de esterificao de
MAG para formar DAG. Em 4 horas de reao so atingidos valores de equilbrio de MAG,
DAG e TAG. bom ressaltar que durante toda a reao a reao de esterificao do glicerol
para a formao de MAG foi favorecida j que os teores de MAG se mantiveram
significativamente superiores aos dos demais glicerdeos (Figura 59).
Freitas (2006) estudou a sntese de monoestearato de glicerila utilizando a enzima
Lipozyme IM 20, temperatura de 60C e razo molar (glicerol/cido graxo) de 3. Ela estudou
a cintica da reao ao longo de 48 horas. Aps 8 horas de reao foi possvel obter 70% de
converso e aps 48 horas, 77,77%. Observou-se um aumento de converso ao longo do
tempo, sendo que em 8 horas foi atingido um valor que se manteve praticamente constante at
o trmino da reao. Comparando estes resultados com os do experimento 44 do presente
198
trabalho, pode-se observar que as condies utilizadas no presente trabalho se mostraram

superiores pois foi possvel obter 78,2% de converso aps apenas 2 horas de reao.
Yang et al. (2003) estudaram a sntese de monoestearato de glicerila em meio de
acetona, com razo molar glicerol/cido esterico 4, adio de peneira molecular e 5% de
Novozym 435 (m/m em relao ao cido esterico) em reator fechado 50C. Foi realizado
um estudo cintico que permitiu observar que o equilbrio ocorreu em 8 horas com uma
converso aproximada de 80% e um teor de MAG de 96,6%.
Ghamgui et al. (2006) estudou a produo de monoolena via esterificao catalisada
pela lipase de Staphylococcus simulans num sistema isento de solvente 37C, 100 UI de
enzima, razo molar glicerol/cido olico de 5 e 5% de gua adicionada no incio da reao.
Um estudo cintico realizado nestas condies demonstrou que o equilbrio na produo de
monoolena foi atingido em 24 horas, resultando em um rendimento em MAG de 70%. Houve
um crescente aumento no teor de MAG ao longo das primeiras 24 horas e, aps isso, o valor
de MAG se manteve constante at o final do experimento (48 horas).
No caso do presente estudo, pode-se observar que a temperatura mais alta acelerou a
obteno do equilbrio, tanto em relao converso quanto em relao composio em
glicerdeos. O equilbrio foi alcanado em 2 horas 70C e em 4 horas 60C, valores muito
menores do que os encontrados por Yang et al. (2003) e Ghamgui et al. (2006). Quanto
formao dos glicerdeos, pode-se notar ao longo de toda a reao ( 60 ou 70C) uma
preferncia para a formao de MAG, j que seus teores se mantiveram superiores aos demais
glicerdeos. J com relao formao de DAG e TAG, pode-se notar que nas primeiras 3
horas houve uma predominncia de TAG em relao ao DAG 60C. O inverso ocorreu
70C. Isto demonstra que a temperatura influenciou a seletividade da reao em DAG e TAG
ao longo das primeiras 3 horas de reao. Nas 5 horas seguintes os teores de DAG e TAG
permaneceram muito semelhantes, em ambas as temperaturas, demonstrando no haver
preferncia para a formao de DAG ou TAG (Figuras 58 e 59).
A Figura 60 ilustra o cromatograma do produto sintetizado no experimento 43 aps 2
h de reao. Pode-se observar a quase ausncia de cido esterico (tempo de reteno = 10 13 min) e a presena de MAG, DAG e TAG com os tempos de reteno de, respectivamente,
15 - 18 min, 24 - 28 min e 30 - 36 min. Este experimento (assim como o 30) levou aos
melhores resultados em termos de converso e seletividade dentre todos os experimentos
realizados 70C. Isto se deu pois o mesmo apresentou uma alta converso e uma
composio em glicerdeos similar ao monoestearato de glicerila comercial da marca
PROQUIMIOS (Tabela 74).
199

(via enzimtica) *
Tabela 74: Comparao entre os teores de glicerdeos dos produtos obtidos atravs dos
melhores experimentos realizados por via enzimtica e de um produto comercial
Produto
MAG (%)
DAG (%)
TAG (%)
Experimento 30*
57,8
34,3
7,9
Experimento 43**
55,9
25
19,1
Experimento 26***
51,6
36,6
11,8
Experimento 44****
55,7
16,0
28,3
PROQUIMIOS
54,5
34,8
10,7
em 4 horas de reao
** Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 2,5 % m/m de Novozym 435 em relao ao cido esterico e 70C
em 2 horas de reao
*** Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 2,5 % m/m de Novozym 435 em relao ao cido esterico e 60C
em 4 horas de reao
**** Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 2,5 % m/m de Novozym 435 em relao ao cido esterico e
60C em 2 horas de reao
As Figuras 61 a 66 mostram os cromatogramas dos produtos sintetizados no

experimento 44 nos seguintes tempos de reao: 30 min, 1, 2, 4, 6 e 8 horas. Dessa forma,
possvel acompanhar o desaparecimento do cido esterico (tempo de reteno = 10 - 13 min)
e a formao dos glicerdeos ao longo do tempo (tempos de reteno: MAG = 15 - 18 min,
DAG = 24 - 28 min, TAG = 30 - 36 min). Este experimento (assim como o 26) levou aos
melhores resultados em termos de converso e seletividade dentre todos os experimentos
realizados 60C. Isto se deu pois o mesmo apresentou uma alta converso e uma
composio em glicerdeos similar ao monoestearato de glicerila comercial da marca
PROQUIMIOS (Tabela 74).
200

(via enzimtica) *

(via enzimtica) *

(via enzimtica) *
201

(via enzimtica) *

(via enzimtica) *

(via enzimtica) *
Aps a anlise dos resultados de estudo cintico das reaes, pode-se observar que
possvel reduzir pela metade o tempo de reao enzimtica, sem prejuzos significativos em
termos de converso e seletividade em MAG (Tabela 74). Apesar da diferena de temperatura
202
de 10C ter influenciado o perfil da reao ao longo do tempo (principalmente nas primeiras 4
horas de reao), a converso (a reao 70C resultou em uma converso levemente
superior) e a seletividade em DAG e TAG (a reao 70C resultou em uma maior razo
DAG/TAG), ela no influenciou significativamente a seletividade em MAG aps 2 horas de
reao (Figuras 58 e 59) (Tabela 74) .
Assim, comparando os resultados obtidos pelos experimentos 43 e 44 aps 2 horas de
reao pode-se concluir que a reao 70C resultou em uma maior converso e uma melhor
seletividade em termos de glicerdeos (mais semelhante ao produto comercial da marca
PROQUIMIOS) (Tabela 74).

Posteriormente avaliou-se unilateralmente o efeito da razo molar dos reagentes na
converso e seletividade da reao de sntese de monoestearato de glicerila conduzida nas
condies descritas na Tabela 75. A Tabela 75 e as Figuras 67 e 68 ilustram os resultados
obtidos.
(via enzimtica)
Relao
mssica
lipase/cido
esterico
(% m/m)
X **
(%)
MAG
(%)
DAG
(%)
TAG
(%)
45 4
70
2,5
59,9
52,2
42,5
5,3
70
2,5
28,4
45,6
34,4
20
46 4
70
2,5
56,2
80,6
13,2
6,2
70
2,5
71
62,3
15,6
22,1
30 4
70
2,5
88,4
57,8
34,3
7,9
70
2,5
88,9
54,4
33
12,6
32 4
70
2,5
92,6
57
34,4
8,6
70
2,5
92,9
55
27,7
17,3
Tempo (h)
Razo
Molar *
Experimento
Temperatura
(C)
203
Tempo de reao: 4 horas

100
90
Porcentagem (%)
80
70
Converso
60
MAG
50
DAG
40
TAG
30
20
10
0
1:1
2:1
4:1
6:1
Razo molar
* 2,5 % m/m de Novozym 435 em relao ao cido esterico e 70C
Tempo de reao: 6 horas

100
90
Porcentagem (%)
80
70
Converso
60
MAG
50
DAG
40
TAG
30
20
10
0
1:1
2:1
4:1
6:1
Razo molar
* 2,5 % m/m de Novozym 435 em relao ao cido esterico e 70C
Os resultados demonstram que, aps 4 horas de reao, a alterao da razo molar

entre os reagentes afetou significativamente a converso da reao. Para razes menores (1 e
204
2) observa-se valores de converso similares da ordem de aproximadamente 60%, enquanto

para valores de razes maiores (4 e 6) observa-se valores de converso similares de
aproximadamente 90%. Assim, pode-se concluir que quanto maior a razo molar entre os
reagentes, ou seja, quanto maior o excesso de glicerol, maior ser o favorecimento da
formao de produtos. Entretanto, a alterao de 1 para 2 ou de 4 para 6 no afetou
significativamente os valores de converso.
Aps 6 horas de reao, a alterao da razo molar entre os reagentes tambm afetou
significativamente a converso da reao. Pode-se observar que quanto maior a razo molar
entre os reagentes, ou seja, quanto maior o excesso de glicerol, maior ser o favorecimento da
formao de produtos.
Freitas (2006) estudou a sntese de monolaurato de glicerila utilizando a enzima
Lipozyme IM 20, temperatura de 60C e tempo de reao de 4 horas. Durante o estudo foram
utilizadas as razes molares (glicerol/cido graxo) de: 1, 3 e 1:3. Foi observado que um
excesso de glicerol aumentou a converso das reaes. Esse comportamento similar ao
descrito na literatura para diferentes sistemas reacionais e diversas fontes de lipase
(PASTORE; PARK, 1993; MONTEIRO et al., 2003).
Em relao ao teor de MAG aps 4 horas de reao, observa-se que a razo molar de 2
foi a que mais favoreceu a formao de MAG levando a um teor de 80,6%, enquanto que as
demais razes levaram a valores semelhantes de aproximadamente 55%.
Ainda em relao ao teor de MAG, aps 6 horas de reao, observa-se que a razo
molar de 2 tambm foi a que mais favoreceu a formao de MAG levando a um teor de
62,3%, enquanto que a razo de 1 foi a que menos favoreceu levando a um teor de 45,6%. As
demais razes levaram a valores semelhantes (55%). O perfil da influncia da razo molar na
produo de MAG foi bem semelhante nos tempos de reao 4 e 6 horas (Figuras 67 e 68);
Estes resultados de seletividade em MAG so excelentes se comparados a outros
resultados da literatura. Freitas (2006) utilizando razo molar de 3 e as condies supracitadas
conseguiu apenas 28% de MAG aps 4 horas de reao, sendo que utilizou como cido graxo
o cido lurico que muito mais reativo que o esterico.
Silva (2002) estudou o efeito da razo molar glicerol/cido cprico na seletividade da
sntese de monocaprina via esterificao catalisada pela enzima Lipozyme IM 20 em meio
isento de solvente. Os resultados demonstraram que um aumento na concentrao de cido
cprico favoreceu a sntese de DAG e TAG, enquanto que um excesso de glicerol (razo
molar = 2) favoreceu a taxa de formao de MAG, porm no resultou em um aumento
significativo na seletividade em monocaprina.
205
Yang et al. (2003) estudaram o efeito da razo molar glicerol/cido esterico sobre a
sntese de monoestearina catalisada pela enzima Novozym 435 (5% m/m em relao ao cido
esterico) em meio de acetona 50C, em reator fechado com adio de peneira molecular.
Dentre todas as razes estudadas (1, 2, 3:1, 4, 5 e 6), a razo molar 4 foi a que resultou em
uma maior converso (85,5%) e teor de MAG no produto final (82,4%) aps 8 horas de
reao. Os piores resultados foram obtidos com as razes 1 (48% de MAG e 62% de
converso) e 2 (61% de MAG e 75% de converso). As razes 3, 4 e 5 apresentaram
resultados semelhantes e a razo 6 foi levemente pior (70% de MAG e 78% de converso). Os
resultados do presente trabalho em relao ao efeito da razo molar so semelhantes aos
encontrados por Yang et al. (2003) no sentido que as razes 1 e 2 foram as piores e que as
razes 4 e 6 foram as melhores em termos da obteno de altas converses e seletividades
adequadas. Os resultados de converso tambm so semelhantes. No entando, os teores de
MAG obtidos por Yang et al. (2003) com razo molar de 4 e 6 foram bastante superiores aos
encontrados no presente trabalho. A principal diferena est no meio reacional, na estratgia
de remoo de gua e no tempo de reao. Segundo Yang et al. (2003), tanto o cido esterico
quanto a monoestearina so solveis em acetona, o que resulta em uma alta formao de
MAG. No entanto, a acetona se mostrou menos adequada para o presente trabalho conforme
relatado no tem 5.4.2. O uso de solvente e de peneira molecular (estratgias usadas por Yang
et al., 2003) acarreta uma elevao dos gastos com reagentes e com o processo de purificao,
alm de aumentar o tempo gasto em todo o processo. O uso de meio isento de solvente em
reator aberto para evaporao livre de gua (estratgia usada no presente tranalho) elimina
estes gastos. Adicionalmente, o monoestearato de glicerila cosmtico no precisa desta
elevada pureza. Yang et al. (2003) se esforaram em obter uma pureza elevadssima pois o
produto sintetizado por eles era para uso alimentcio. Estes autores obtiveram estes elevados
valores em MAG aps 8 horas de reao, enquanto que o presente trabalho conseguiu valores
adequados para o fim a que se prope em apenas 2 horas de reao, levando em considerao
o estudo cintico.
Em relao ao teor de DAG aps 4 horas de reao, observa-se que a razo molar de 1
foi a que mais favoreceu a formao de DAG levando a um teor de 42,5%, enquanto que a
razo de 2 foi a que menos favoreceu levando a um teor de 13,2%. As demais razes levaram
a valores semelhantes (34,5%) (Tabela 75 e Figuras 67 e 68).
Ainda em relao ao teor de DAG, aps 6 horas de reao, observa-se que a razo
molar de 2 foi a que menos favoreceu a formao de DAG levando a um teor de 15,6%,
206
enquanto que as razes de 1 e 4 foram as que mais favoreceram levando a um teor de 34%. A
razo 6 levou a um valor intermedirio de 27,7% (Tabela 75 e Figuras 67 e 68).
Em relao ao teor de TAG aps 4 horas de reao, observa-se que quanto maior a
razo molar, maior o teor de TAG, sendo que a variao foi pequena, de 5,3 a 8,6% (Tabela
75 e Figuras 67 e 68).
Ainda em relao ao teor de TAG, aps 6 horas de reao, observa-se que a razo
molar que menos favoreceu sua formao foi a de 4 (12,6%). As demais razes apresentaram
valores semelhantes de TAG (17,3 a 22,1%) (Tabela 75 e Figuras 67 e 68).
interessante notar que as razes 4 e 6 no levaram a alteraes significativas de
converso e seletividade com o acrscimo de 2 horas de reao, ou seja, os tempos de reao
4 e 6 horas levaram a resultados semelhantes tanto para a razo 4 quanto para a razo 6
(Figuras 67 e 68).
J com as razes 1 e 2, pode-se observar alteraes significativas de converso e
seletividade em MAG e TAG com o acrscimo de 2 horas de reao (Tabela 75 e Figuras 67 e
68).
Com a razo 1 observa-se uma diminuio drstica da converso, uma diminuio de
MAG e DAG e um aumento grande de TAG de 4 para 6 horas de reao. Estes resultados
mostram que, provavelmente, aps 4 horas de reao esta comeou a ocorrer no sentido
inverso (hidrlise), levando a uma diminuio da converso O no excesso de um dos
reagentes pode ter favorecido este acontecimento. Alm disso, deve ter ocorrido um
favorecimento da hidrlise de MAG e DAG (Tabela 75 e Figuras 67 e 68).
Com a razo 2 observa-se um aumento significativo da converso, uma diminuio de
MAG e um aumento grande de TAG de 4 para 6 horas de reao (o valor de DAG
permaneceu constante). Estes resultados mostram que aps 4 horas de reao a reao
continuou a ocorrer no sentido de esterificao, sendo que as reaes de esterificao de
MAG para formar DAG e a posterior esterificao do DAG formado para a formao de TAG
estavam sendo favorecidas durante este perodo (Tabela 75 e Figuras 67 e 68).
A anlise da Tabela 75 mostra que tanto a razo molar 4 quanto a 6 apresentaram-se
adequadas, dentre as razes estudadas, para a sntese de MAG por via enzimtica pois ambas
resultaram em uma alta converso e em uma seletividade adequada para o MAG de uso
cosmtico. Dentre estas duas, a melhor a razo molar 4, pois implica em um gasto menor
com reagentes (glicerol), com tempo de reao de 4 horas. As razes molares de 1 e 2 levaram
a valores baixos de converso, tornando-as inviveis, apesar da boa seletividade em MAG.
207
Assim, conclui-se que no foi possvel otimizar as condies do processo alterando-se a razo
molar entre os reagentes.
5.5 Comparao entre a via qumica e a enzimtica

A Tabela 76 traz a comparao entre os resultados obtidos a partir dos planejamentos
experimentais com os catalisadores qumico (2 horas de reao) e enzimtico (4 horas de
reao) para a sntese de monoestearato de glicerila.
Tabela 76: Comparao entre os resultados obtidos atravs dos planejamentos experimentais
com catalisadores qumico e enzimtico para a sntese de monoestearato de glicerila
Variveis de resposta
Catalisador
Modelo proposto
VS*
X (%)
Qumico
Quadrtico
R2 = 0,75
Enzimtico
Quadrtico
T2
R2 = 0,51
MAG (%)
Qumico
Linear
R2 = 0,82
Enzimtico
Linear
E.T
R = 0,70
DAG (%)
Qumico
Quadrtico
R2 = 0,82
TAG (%)
Enzimtico
N **
Qumico
Quadrtico
R2 = 0,63
Enzimtico
Linear
E.T
R = 0,57
* Varivel significativa que mais afetou a respectiva varivel de resposta.
** No foi possvel criar um modelo emprico pois as variveis testadas no foram estatisticamente
significativas.
208
Atravs da anlise da Tabela 76 pode-se observar que foi proposto um modelo

quadrtico para a varivel de resposta X (%) tanto no planejamento qumico quanto no
enzimtico. A mesma similaridade ocorreu para a varivel de resposta MAG (%), sendo que,
neste caso, o modelo proposto foi linear. No houve similaridade entre os tipos de modelos
propostos para as variveis de resposta DAG (%) e TAG (%). Em todos os casos, o R2 do
modelo qumico foi superior ao do enzimtico, sugerindo um melhor ajuste. Alm disso, as
variveis estatisticamente significativas que mais afetaram cada varivel de resposta foram
diferentes comparando-se os planejamentos qumico e enzimtico.
5.5.2 Estudo cintico

Comparando-se o estudo cintico da reao de sntese de monoestearato de glicerila
por via qumica e enzimtica, pode-se observar que:
O estudo por via qumica utilizou o triplo das quantidades de reagentes e catalisador
em relao ao experimento original, enquanto que o estudo por via enzimtica utilizou
o dobro;
No estudo qumico, 4 horas foram necessrias para se obter os mesmos resultados que
foram obtidos no experimento original em 2 horas;
No estudo enzimtico foram obtidos resultados semelhantes no mesmo tempo de

reao dos experimentos originais, com exceo da seletividade em DAG e TAG.
Observou-se uma diminuio indesejvel da razo DAG/TAG;
A partir do estudo enzimtico foi possvel observar que aps 2 horas de reao j
podem ser obtidos resultados aceitveis em termos de converso e seletividade 70C
(Figura 69);
O perfil das reaes por via qumica e enzimtica, em termos de converso e

seletividade, foi bem diferente: A reao por via qumica demorou mais tempo para
atingir o valor de equilbrio de converso e apresentou variaes mais bruscas dos
teores de glicerdeos ao longo do tempo do que a reao conduzida por via enzimtica
(Figura 69).
209
Figura 69: Comparao entre os perfis cinticos das reaes de sntese de monoestearato de
glicerila por via qumica - A (140C, razo molar: 4 e 15% de estearato de zinco) e
enzimtica - B (70C, razo molar: 4 e 2,5% de Novozyme 435)

O efeito da razo molar glicerol/cido esterico (razes testadas: 1, 2, 4 e 6) sobre a
converso e seletividade das reaes de sntese de monoestearato de glicerila por via qumica
e enzimtica foi bastante diferente (Figura 70).
210
Figura 70: Comparao entre o efeito da razo molar nas reaes de sntese de monoestearato
de glicerila por via qumica - A (140C e 15% de estearato de zinco) e enzimtica - B (70C e
2,5% de Novozym 435)
Na reao conduzida por via qumica, observou-se que diferentes razes molares no
influenciaram significativamente a converso das reaes, entretanto, influenciaram bastante a
seletividade das mesmas. A nica razo molar que levou a resultados aceitveis em termos de
converso e seletividade foi a 4 (Figura 70).
Na reao conduzida por via enzimtica (4 horas de reao), observou-se que
diferentes razes molares influenciaram significativamente a converso das reaes. Para
211
todas as razes molares, houve um favorecimento de MAG, seguido por DAG e TAG,
destacando a alta seletividade da Novozym 435. As razes molares 4 e 6 levaram a resultados
aceitveis de converso e seletividade (Figura 70).
5.5.4 Condio tima experimental

A Tabela 77 mostra a comparao entre os experimentos que forneceram os melhores
resultados por via qumica (experimento 6) e enzimtica (experimento 30 e 43) tendo como
critrio altas converses e composio em glicerdeos semelhante a um dos produtos
comerciais em um menor tempo de reao possvel. Os resultados mostram que a via
enzimtica (experimento 30) se demonstrou levemente superior qumica pois levou
converso e seletividade em MAG levemente superiores e a um teor um pouco menor de
TAG. O experimento 43 foi o estudo cintico da reao enzimtica realizado nas mesmas
condies que o experimento 30. Atravs dos resultados do experimento 43 possvel notar
que em 2 horas j possvel alcanar uma converso e seletividade em MAG elevadas.
Entretanto, observa-se um aumento no teor de TAG e uma diminuio do teor de DAG, que
indesejvel considerando-se o teor de MAG obtido. Se o teor de MAG fosse maior, esta
condio de DAG e TAG poderia at ser aceitvel conforme mostram os resultados das
anlises dos produtos comerciais (Tabela 27). Como houve um aumento da escala da reao
em duas vezes para a realizao do estudo cintico, so esperadas mudanas nos resultados do
experimento 43 em relao ao 30. Estas variaes podem vir a ser corrigidas atravs da
modificao de alguns parmetros da reao para que um timo resultado possa ser alcanado
em 2 horas de reao, o mesmo tempo da reao por via qumica.
212
Temperatura
(C)
Tempo (h)
Experimento
Tabela 77: Comparao entre os experimentos que forneceram os melhores resultados por
via qumica e enzimtica
Razo
Molar *
Relao mssica X **
catalisador/cido
(%)
esterico (%m/m)
MAG
(%)
DAG
(%)
TAG
(%)
30 4
70
2,5
88,4
57,8
34,3
7,9
43 2
70
2,5
83
55,9
25
19,1
140
15
83,9
52,3
37,2
10,5
A Figura 71 ilustra a comparao, em termos de composio em glicerdeos, entre os

experimentos que forneceram os melhores resultados por via qumica (experimento 6) e
enzimtica (experimento 30) e o produto comercial da marca PROQUIMIOS, que o que
mais se assemelha aos produtos obtidos experimentalmente em termos de composio. Os
resultados mostram que ambos os produtos obtidos experimentalmente so adequados para
uso cosmtico pois apresentam composio semelhante ao produto comercial, entretanto, o
produto obtido por via enzimtica ainda superior ao produto comercial pois possui um maior
teor de MAG e um menor teor de TAG.
213
100%
90%
80%
Porcentagem (%)
70%
60%
TAG
DAG
MAG
50%
40%
30%
20%
10%
0%
Qumico
Enzimtico
PROQUIMIOS
* Via qumica: Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 15 % m/m de catalisador em relao ao cido esterico
e 140C em 2 horas de reao
Via enzimtica: Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 2,5 % m/m de novozym 435 em relao ao cido
esterico e 70C em 4 horas de reao
Figura 71: Comparao entre a composio de produtos obtidos por via qumica, enzimtica e
comercial *
A Figura 72 traz uma comparao entre os cromatogramas do produto comercial da

marca PROQUIMIOS e dos produtos obtidos utilizando-se as condies timas da via
qumica (experimento 18, que foi uma repetio do 6) e da via enzimtica (experimento 43).
Assim, possvel observar de forma mais detalhada a similaridade entre a composio de
glicerdeos dos produtos citados acima.
Primeiramente, preciso lembrar que os cromatogramas A e C foram obtidos a parir
de uma coluna com dimenses levemente diferentes da B, por isso h uma pequena diferena
entre os tempos de reteno destes cromatogramas. Mesmo assim, possvel observar que o
perfil cromatogrfico dos 3 produtos bastante semelhante. importante notar que no
produto comercial (C) tambm h glicerdeos derivados de dois cidos graxos (palmtico e
esterico), assim como nos produtos sintetizados. Isso fica bem evidente pela presena de 2
picos principais de monoglicerdeos (monopalmitina e monoestearina) no cromatograma C,
assim como nos demais.
214
* Via qumica (A): Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 15 % m/m de catalisador em relao ao cido
esterico e 140C
Via enzimtica (B): Razo molar glicerol/cido esterico = 4; 2,5 % m/m de novozym 435 em relao ao cido
esterico e 70C
Figura 72: Comparao entre os cromatogramas dos produtos sintetizados por via qumica
(A), por via enzimtica (B) e do produto comercial da marca PROQUIMIOS (C) *
5.5.5 Aspecto do produto final da reao

Um fator muito importante para um insumo cosmtico sua cor. Isto porque a cor do
insumo pode influenciar a cor final do produto cosmtico. Quanto mais clara for a matriaprima, menores sero as chances de haver influncia na cor do produto final. A Figura 73
mostra a colorao de vrios produtos obtidos durante o presente trabalho tanto por via
qumica quanto por via enzimtica.
Analisando as coloraes de todos os produtos obtidos por via qumica foi possvel
observar que os parmetros que influenciaram a cor final do produto foram a temperatura e a
razo molar glicerol/cido esterico. Dentre as temperaturas utilizadas nos experimentos por
via qumica, observou-se que em temperaturas abaixo de 140C (Produto A) o produto
apresenta uma colorao marfim enquanto que a partir de 140C o produto passa a apresentar
215
uma colorao mais amarronzada (Produto B). Em relao razo molar, considerando
temperaturas a partir de 140C, observou-se que em razo molar 1 a colorao fica mais
escura (Produto C) do que nas demais razes molares estudadas.
J nos experimentos realizados por via enzimtica, observou-se que em todas as
temperaturas estudadas o produto apresentou uma colorao branca (Produto D). Entretanto, a
razo molar influenciou o aspecto do produto final. Em razo molar 6 observou-se a formao
de duas fases com polaridades distintas, uma delas composta pelo glicerol em excesso e a
outra formada pelos glicerdeos e cido esterico que no reagiu (Produto E). Nas demais
razes molares, no houve separao de fases (Produto D). Uma possvel explicao para
este fato que em situaes de grande excesso de glicerol (razo molar 6), o monoestearato
de glicerila formado no foi capaz de emulsionar as duas fases de polaridades distintas.
Enquanto que em razo molar 6 ocorre separao de fases no produto obtido por via
enzimtica (Produto E), no produto obtido por via qumica isto no ocorre. Uma possvel
explicao para este fato que o estearato de zinco age juntamente com o monoestearato de
glicerila formando um filme interfacial que diminui a tenso entre as duas fases, mantendo,
assim, uma fase emulsionada na outra, o que, a olho nu, aparece como uma fase nica. Esta
observao refora a hiptese de que o estearato de zinco aja como emulsionante facilitando a
reao, conforme discutido no tem 5.3.1 deste trabalho.
Comparando os produtos obtidos por via qumica com os obtidos por via enzimtica,
pode-se notar que o aspecto dos produtos correspondentes aos melhores resultados de cada via
foram o produto B (via qumica) e o produto D (via enzimtica) da Figura 73. Atravs da
observao da Figura 73 possvel observar claramente que o produto obtido por via
enzimtica apresenta uma colorao significativamente mais clara do que o obtido por via
qumica, sendo, portanto, mais adequado para uso como insumo cosmtico. Inclusive
importante ressaltar que a colorao dos produtos comerciais bastante semelhante ao
produto D da Figura 73.
216
* A: Via qumica / Temperatura < 140C

B: Via qumica / Razo molar glicerol/cido esterico 4 / Temperatura: 140C
C: Via qumica / Razo molar glicerol/cido esterico 1 / Temperatura: 140C
D: Via enzimtica / Razo molar glicerol/cido esterico 4
E: Via enzimtica / Razo molar glicerol/cido esterico 6
Figura 73: Produtos obtidos nas reaes de sntese de monoestearato de glicerila por via
qumica e enzimtica *
5.5.6 Consideraes finais

Comparando a via qumica com a enzimtica pode-se concluir que o tempo gasto com
a reao o mesmo (2 horas). O custo com reagentes tambm o mesmo, j que em ambos os
casos a razo molar glicerol/cido esterico de 4 foi a escolhida como tima. Em relao aos
gastos com energia, o processo qumico tem como temperatura tima (140C) o dobro da
temperatura utilizada no processo enzimtico (70C). Com relao aos gastos com
catalisadores, a enzima comercial Novozym 435 consideravelmente mais cara que o
estearato de zinco. Alm disso, este pode ser facilmente sintetizado. Porm, deve-se
considerar a possibilidade de reuso da enzima, o que permite que a mesma enzima seja
utilizada em vrios ciclos de reao.
Yang et al. (2003) estudaram o reuso da enzima Novozym 435 para a sntese de
monoestearina via esterificao em meio de acetona 50C. O tempo reacional total estudado
por eles foi de 24 horas de reao. Aps o final de cada reao, a enzima foi filtrada, lavada
com acetona por 3 vezes e seca com uma corrente de ar seco (50C). Os resultados deste
estudo demonstraram que a enzima Novozym 435 pode ser utilizada para realizar 14 ciclos de
217
reao (de 24 horas cada), mantendo 90% de sua atividade em termos de formao de MAG
aps estes ciclos. Se na presena de acetona, que pode prejudicar a atividade da enzima por
ser um solvente polar e capaz de remover a gua essencial para sua atividade, e com um
tempo grande de reao (24 horas), o reuso da Novozym 435 pde ser realizado com sucesso,
podemos inferir que, provevelmente, nas condies utilizadas pelo presente trabalho (meio
isento de solvente e tempo de reao de 2 a 4 horas) o reuso tambm ser perfeitamente
possvel. A possibilidade de reuso viabiliza significativamente o uso de enzimas em processos
realizados em grande escala pois reduz o gasto com a aquisio de novas enzimas. O elevado
custo das enzimas o que muitas vezes onera a sua aplicao nvel industrial. Entretanto,
importante lembrar que insumos de alto valor agregado, como o caso de insumos
cosmticos, justificam e at possibilitam o uso de enzimas na sua sntese. Alm disso, a
sntese enzimtica encarada como uma via de sntese mais limpa, branda, segura e "natural",
o que bastante interessante para uma matria-prima cosmtica e pode aumentar ainda mais o
valor do produto final.
Os produtos sintetizados por ambas as vias podem ser purificados para a remoo do
excesso do glicerol ou utilizados diretamente como blends contendo monoestearato de
glicerila (emulsionante, emoliente, aglutinante) e glicerol (umectante), ambos insumos
largamente utilizados em cosmticos. O cido esterico que no reagiu, de acordo com sua
concentrao, pode entrar na composio do monoestearato de glicerila (Tabela 26 - acidez
mxima permitida) ou fazer parte da composio do blend como emoliente. Com relao ao
catalisador, a enzima seria reutilizada e o estearato de zinco poderia ser removido ou
participar da composio do blend j que tambm um insumo muito utilizado em cosmtico,
apresentando diversas aplicaes (emulsionante, p lubrificante, corante). A produo do
blend apresenta duas vantagens principais: Aumento do valor agregado do produto final e
diminuio dos gastos com purificao durante o processo industrial.
6 CONCLUSES
A principal concluso a que se pode chegar aps o trabalho realizado que possvel
sintetizar monoestearato de glicerila de uso cosmtico a partir de esterificao catalisada tanto
por via qumica (estearato de zinco) quanto por via enzimtica (Novozym 435), com
excelentes converses e seletividade apropriada, no mesmo tempo de reao.
218
Atravs do planejamento experimental realizado para a esterificao por via qumica

(estearato de zinco) foi possvel concluir que a temperatura a varivel que mais afeta a
converso, sendo a seletividade em MAG influenciada principalmente pela razo molar
glicerol/cido esterico.
Aps todos os estudos realizados para a esterificao por via qumica foi possvel
concluir que a condio tima para a sntese de monoestearato de glicerila utilizando estearato
de zinco como catalisador foi: 140C, razo molar glicerol/cido esterico de 4, 15 % m/m de
catalisador em relao ao cido esterico e 2 horas de reao, em meio isento de solvente com
livre evaporao da gua formada na reao de esterificao.
A partir de estudos prvios sobre o efeito do tipo de lipase e do meio reacional sobre a
sntese de monoestearato de glicerila a partir de esterificao catalisada por via enzimtica
(lipase), foi possvel identificar as condies mais adequadas, em termos de converso e
seletividade, para a sntese em questo: Lipase comercial Novozym 435 e meio isento de
solvente.
Atravs do planejamento experimental realizado para a esterificao por via
enzimtica (Novozym 435 - 4 horas de reao) foi possvel concluir que o termo quadrtico
da temperatura a varivel que mais afeta a converso, sendo a seletividade em MAG
influenciada principalmente pela interao entre a relao mssica lipase/cido esterico e a
temperatura.
Aps todos os estudos realizados para a esterificao por via enzimtica foi possvel
concluir que a condio tima para a sntese de monoestearato de glicerila utilizando
Novozym 435 como catalisador foi: 70C, razo molar glicerol/cido esterico de 4, 2,5 %
m/m de catalisador em relao ao cido esterico e 2 horas de reao, em meio isento de
solvente com livre evaporao da gua formada na reao de esterificao.
Apesar das duas vias terem se mostrado adequadas para a sntese de monoestearato de
glicerila de uso cosmtico, a via qumica apresentou o grande inconveniente de resultar em
um produto de colorao muito escura, o que pode prejudicar sua aplicao cosmtica j que
pode influenciar a cor final do produto cosmtico. Este prejuzo somente em termos
estticos, no funcionais, e sua relevncia depende muito das demais matrias-primas
utilizadas para a formulao do produto e do produto final propriamente dito.
Ambos os catalisadores apresentam vantagens para a sntese de uma matria-prima
cosmtica. Por um lado, a sntese enzimtica encarada como uma via de sntese limpa,
branda, segura e "natural". Por outro lado, o estearato de zinco um catalisador qumico no-
219
convencional que no precisa ser removido do produto final da reao, j que amplamente
utilizado como insumo cosmtico.
Os produtos sintetizados por ambas as vias podem ser purificados ou utilizados
diretamente como blends, j que todos os componentes do produto final so insumos
cosmticos (glicerol, monoestearato de glicerila e estearato de zinco), com exceo da enzima
que poder ser reutilizada. A produo do blend apresenta duas vantagens principais:
Aumento do valor agregado do produto final e diminuio dos gastos com purificao durante
o processo industrial.
7 SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS

Como sugestes para trabalhos futuros, destacam-se os seguintes pontos:
Fazer uma anlise econmica comparativa dos processos de sntese de monoestearato

de glicerila por via qumica e enzimtica desenvolvidos no presente trabalho;
Estudar processos de purificao e separao para remoo do glicerol em excesso e

do catalisador qumico, no caso de o objetivo da sntese ser a obteno do
monoestearato de glicerila de uso cosmtico e no do blend;
Estudar a possibilidade de recuperao e reuso da Novozym 435 em novos ciclos

sintticos a fim de aumentar a viabilidade de sua aplicao a nvel industrial;
Verificar experimentalmente o EHL do monoestearato de glicerila purificado e dos

blends sintetizados por via qumica (monoestearato de glicerila + glicerol em excesso
+ estearato de zinco) e enzimtica (monoestearato de glicerila + glicerol em excesso) a
fim de direcionar a aplicao de tais produtos em cosmticos;
Aplicar os produtos obtidos (monoestearato de glicerila purificado e blends) em

formulaes cosmticas, bem como avaliar a estabilidade destas formulaes;
Estudar a possibilidade de substituio da Novozym 435 (enzima comercial de alto

custo) por uma preparao enzimtica recombinante de menor custo desenvolvida no
Laboratrio de Biotecnologia Microbiana - Labim - IQ - UFRJ;
Estudar a possibilidade de substituio do glicerol comercial por glicerol oriundo da

sntese de biodiesel a fim de diminuir o gasto com reagentes e reaproveitar um
subproduto de outra via sinttica.
220
8 REFERNCIAS
ALOULOU, A.; RODRIGUEZ, J. A.; FERNANDEZ, S.; OOSTERHOUT, D. V.;
PUCCINELLI, D.; CARRIERE, F. Exploring the specific features of interfacial enzymology
Based on lipase studies. Biochimica et Biophysica Acta, v. 1761, p. 995-1013, 2006. il.
color.
ALVES, A. C.; CARDOSO, J. J.; MELO, C. K.; ALMEIDA, M. A. P. Reaproveitamento de

lipase imobilizada na transesterificao do leo de babau. In: I Congresso da Rede
Brasileira de Tecnologia de Biodiesel - 2006, 2006, Braslia. Disponvel em:
<http://www.biodiesel.gov.br/docs/congressso2006/producao/Reaproveitamento01.pdf >.
Acesso em: 20 jul. 2009.
ANSEL, H. C.; POPOVICH, N. G.; ALLEN, L. V. Farmacotcnica: Formas farmacuticas

e sistemas de liberao de frmacos. 6 ed. So Paulo : Premier, 2000. xii, 568 p.
ARCOS, J. A.; OTERO, C. Enzyme, medium and reaction engineering to design a low-cost
selective production method for mono and dioleylglycerols. Journal of the American Oil
Chemists Society, v. 73, n. 6, p. 673-682, 1996.
ARRUDA, P. V.; RODRIGUES, R. C. L. B.; FELIPE, M. G. A. Glicerol: um subproduto

com grande capacidade industrial e metablica. Revista Analytica, n. 26, Dez. 2006/Jan.
2007. il. color.
BAILLARGEON, M. W.; SONNET, P. E. Selective lipid hydrolysis by Geotrichum

candidum NRRL y-553 lipase. Biotechnology Letters, v. 13, n. 12, p. 871-874, 1991.
BANCQUART, S.; VANHOVE, C.; POUILLOUX, Y.; BARRAULT, J. Glycerol

transesterification with methyl stearate over solid basic catalysts I. Relationship between
activity and basicity. Applied Catalysis A: General, v. 218, p. 1-11, 2001.
BARON, A. M. Preparao e caracterizao de lipases imobilizadas para utilizao em

biocatlise. Curitiba, 2008. 138 f. Tese (Doutorado em Qumica) - Departamento de Qumica,
Universidade Federal do Paran, 2008, somente il.
BELLOT, J. C.; CHOISNARD, L.; CASTILLO, A.; MARTY, A. Combining solvent

engineering and thermodynamic modeling to enhance selectivity during monoglyceride
synthesis by lipase-catalyzed esterification. Enzyme and Microbial Technology, v. 28, n. 45, p. 362-369, 2001.
221
BERGER, M.; SCHNEIDER, M. P. Enzymatic esterification of glycerol: Lipase-catalyzed

synthesis of regioisomerically pure 1(3)-rac-monoacylglycerols. Journal of the American
Oil Chemists Society, v. 69, n. 10, p. 961-965, 1992.
BERGER, M.; SCHNEIDER, M. P. Regioisomerically pure mono- and diacylglycerols as

synthetic building blocks. Fat Science Technology, v. 95, n. 5, p. 169-175, 1993.
BORNSCHEUER, U. T. Lipase-catalyzed synthesis of monoacylglycerols. Enzyme and

Microbial Technology, v. 17, n. 7, p. 578-586, 1995.
BORNSCHEUER, U. T.; YAMANE, T. Activity and stability of lipase in the solid-phase

glycerolysis of triolein. Enzyme and Microbial Technology, v. 16, n. 10, p. 864869, 1994.
BORSCHIVER, S.; NOGUEIRA, N. S. Monitoramento tecnolgico da glicerina, co-produto

da fabricao de biodiesel. In: II Congresso da Rede Brasileira de Tecnologia do Biodiesel
- 2007, 2007, Braslia. Disponvel em:
<www.biodiesel.gov.br/docs/congresso2007/coproduto/13.pdf>. Acesso em: 20 jul. 2009.
BOYLE, E. Monoglycerides in food systems: Current and future uses. Food Technology, v.
51, n. 8, p. 55-59, 1997.
BRASIL. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo n. 79, de 28 de agosto

de 2000, Anexo III. Lista de Substncias Corantes Permitidas para Produtos de Higiene
Pessoal, Cosmticos e Perfumes. Dirio Oficial da Unio, 31 ago. 2000. Disponvel em:
<http://www.e-legis.anvisa.gov.br>. Acesso em: 01 set. 2009.
BRASIL. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo RDC n. 211, de 14 de julho

de 2005. Definio e a Classificao de Produtos de Higiene Pessoal, Cosmticos e
Perfumes. Dirio Oficial da Unio, 18 jul. 2005. Disponvel em:
<http://www.e-legis.anvisa.gov.br>. Acesso em: 01 set. 2009.
CASTRO, H. F.; MENDES, A. A.; SANTOS, J. C.; AGUIAR, C. L. Modificao de leos e

gorduras por biotransformao. Qumica Nova, v. 27, n. 1, p. 146-156, 2004.
CAVALCANTI, E. D. C.; MACIEL, F. M.; VILLENEUVE, P.; LAGO, R. C. A.;

MACHADO, O. L.; FREIRE, D. M. G. Acetone powder from dormant seeds of Ricinus
communis L.: Lipase activity and presence of toxic and allergenic compounds. Applied
Biochemistry and Biotechnology, v. 136, p. 57-65, 2007.
222
CHANG. P. S.; RHEE, J. S.; KIM, J. J. Continuous glycerolysis of olive oil by

Chromobaterium viscosum lipase immobilized on liposome in reversed micelles.
Biotechnology and Bioengineering, v. 38, n. 10, p. 1159-1165, 1991.
CHEIRSILP, B.; KAEWTHONG, W.; H-KITTIKUN, A. Kinetic study of glycerolysis of

palm olein for monoacylglycerol production by immobilized lipase. Biochemical
Engineering Journal, v. 35, p. 71-80, 2007.
CHICUTA, A. M.; FREGOLENTE, L. V.; MACIEL, M. R. W. Sntese de monoglicerdeos a

partir de leo de soja comercial. In: VI Congresso Brasileiro de Engenharia Qumica em
Iniciao Cientfica - 2005, 2005, Campinas. Disponvel em:
<http://www.feq.unicamp.br/~cobeqic/tRT02.pdf>. Acesso em: 20 jul. 2009.
COMISSO DA FARMACOPIA PORTUGUESA. Farmacopeia Portuguesa VII. Lisboa

: Infarmed, 2002.
COMISSO PERMANENTE DE REVISO DA FARMACOPIA BRASILEIRA.

Farmacopia Brasileira, parte II, fascculo 1, 4 ed. So Paulo : Atheneu, 1996.
COMIT EUROPEU DE NORMALIZAO (CEN). Norma EN 14103. Derivados de leos

e gorduras - steres metlicos de cidos graxos (FAME) - Determinao do contedo de
steres e steres metlicos do cido linolnico, 2003.
CORMA, A.; HAMID, S. B. A.; IBORRA, S.; VELTY, A. Lewis and Brnsted basic active
sites on solid catalysts and their role in the synthesis of monoglycerides. Journal of
Catalysis, v. 234, p. 340-347, 2005.
CORMA, A.; IBORRA, S.; MIQUEL, S.; PRIMO, J. Catalysts for the production of fine
chemicals: Production of food emulsifiers, monoglycerides, by glycerolysis of fats with solid
base catalysts. Journal of catalysis, v. 173, p. 315-321, 1998.
DALLA-VECCHIA, R.; NASCIMENTO, M. G.; SOLDI, V. Aplicaes sintticas de lipases

imobilizadas em polmeros. Qumica Nova, v. 27, n. 4, p. 623-630, 2004. il.
DIEZ, R. Degomagem: Tendncias e novas tecnologias. Revista de leos e Gros, p. 38-39,

1996.
DI SERIO, M.; TESSER, R.; DIMICCOLI M.; CAMMAROTA, F.; NASTASI, M.;
SANTACESARIA, E. Synthesis of biodiesel via homogeneous Lewis acid catalyst. Journal
of Molecular Catalysis A: Chemical, v. 239, p. 111-115, 2005.
223
DRAELOS, Z. D. Cosmticos em Dermatologia. 2 ed. Rio de Janeiro : Revinter, 1999.

329 p.
DUCRET, A.; GIROUX, A.; TRANI, M.; LORTIE, R. Enzymatic preparation of

biosurfactants from sugars or sugar alcohols and fatty acids in organic media under reduced
pressure. Biotechnology Bioengineering, v. 48, p. 214, 1995.
ECCLESTON, G.M. Functions of mixed emulsifiers and emulsifying waxes in

dermatological lotions and creams. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and
Engineering Aspects, v. 123-124, p. 169-182, 1997. il.
ESMELINDRO, A. F. A.; FIAMETTI, K. G.; CENI, G.; CORAZZA, M. L.; TREICHEL, H.;
OLIVEIRA, D.; OLIVEIRA, J. V. Lipase-catalyzed production of monoglycerides in
compressed propane and AOT surfactant. Journal of Supercritical Fluids, v. 47, p. 64-69,
2008.
FERREIRA-DIAS, S.; CORREIA, A. C.; BAPTISTA, F. O.; FONSECA, M. M. R.

Contribution of response surface design to the development of glycerolysis systems catalyzed
by commercial immobilized lipases. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, v. 11, p.
699-711, 2001.
FERREIRA-DIAS, S.; CORREIA, A. C.; FONSECA, M. M. R. Response surface modeling

of glycerolysis catalyzed by candida rugosa lipase immobilized in different polyurethane
foams for the production of partial glycerides. Journal of Molecular Catalysis
B:Enzymatic, v. 21, p. 71-80, 2003.
FERREIRA-DIAS, S.; FONSECA, M. M. R. Enzymatic glycerolysis of olive oil: A reactional

system with major analytic problems. Biotechnology Techniques, v. 7, n. 7, p. 447-452,
1993.
FITREMANN, J.; QUENEAU, Y.; MATREC, J.; BOUCHUD, A. Co-melting of solid

sucrose and multivalent cation soaps for solvent-free synthesis of sucrose esters.
Tetrahedron Letters, v. 48, p. 4111-4114, 2007.
FERNANDES, M. L. M. Produo de lipases por fermentao no estado slido e sua

utilizao em biocatlise. Curitiba, 2007. 120 f. Tese (Doutorado em Qumica) Departamento de Qumica, Universidade Federal do Paran, 2007.
FOCOR. Estearato de zinco. Disponvel em:

<http://www.focor.pt/UserFiles/File/Artigos/503/Estearato_de_Zinco_EZ.pdf>. Acesso em:
01 set. 2009.
224
FORESTI, M. L.; PEDERNERA, M.; BUCAL, V.; FERREIRA, M. L. Multiple effects of

water on solvent-free enzymatic esterifications. Enzyme and Microbial Technology, v. 41,
p. 62-70, 2007.
FRAGON. Estearato de zinco. Disponvel em:

<http://www.fragon.com.br/principal/sublinks/produtos/busca/especificacoes/Estearato%20de
%20Zinco.pdf>. Acesso em: 01 set. 2009.
FREGOLENTE, L. V. Obteno de monoglicerdeos de alta concentrao atravs do

processo de destilao molecular. Campinas, 2006. 89 f. Dissertao (Mestrado em
Engenharia Qumica) - Faculdade de Engenharia Qumica, Universidade Estadual de
Campinas, 2006.
FREIRE, D. M. G.; CASTILHO, L. R. Lipases em Biocatlise. In: Bon, E. P. S.; Ferrara, M.

A.; Corvo, M. L. Enzimas em Biotecnologia: Produo, Aplicaes e Mercado. 1 ed. Rio
de Janeiro: Intercincia, 2008, v. 1, p. 369-385.
FREITAS, L. Seleo de rota enzimtica para produo de monoglicerdeos empregando

lipase imobilizada em matriz obtida pela tcnica sol-gel. Lorena, 2006. 122 f. Dissertao
(Mestrado em Engenharia Qumica) - Escola de Engenharia de Lorena, Universidade de So
Paulo, 2006.
FREITAS, L.; BUENO, T.; PEREZ, V. H.; CASTRO, H. F. Monoglicerdeos: Produo por
via enzimtica e algumas aplicaes. Qumica Nova, v. 31, p. 1514-1521, 2008.
GANCET, C. Catalysis by Rhizopus arrhizus mycelial lipase. Annals of the New York
Academy of Sciences, v. 613, p. 600-604, 1990.
GHAMGUIA, H.; MILED, N.; REBAI, A.; KARRA-CHAABOUNI, M.; GARGOURI, Y.

Production of mono-olein by immobilized Staphylococcus simulans lipase in a solvent-free
system: Optimization by response surface methodology. Enzyme and Microbial
Technology, v. 39, p. 717-723, 2006.
GONALVES, J. A. Esterificao de compostos modelos sobre cido nibico para

produo de biodiesel. Rio de Janeiro, 2007. 150 f. Dissertao (Mestrado em Tecnologia de
Processos Qumicos e Bioqumicos) - Escola de Qumica, Universidade Federal do Rio de
Janeiro, 2007.
GRAMALUX. Monoestearato de glicerila. Disponvel em:

<http://www.gramalux.com.br/comm_meg.asp>. Acesso em: 20 jul. 2009.
225
HARTMAN, L. Esterification rates of some saturated and unsaturated fatty acids with
glycerol. Journal of American Oil Chemist's Society, v. 43, p. 536, 1966.
HASAN, F.; SHAH, A. A.; HAMEED, A. Industrial applications of microbial lipases.

Enzyme and Microbial Technology, v. 39, p. 235-251, 2006.
HESS, R.; BORNSCHEUER, U.; CAPEWELL, A.; SCHEPER, T. Lipase-catalyzed synthesis

of monostearoylglycerol in organic solvents from 1,2-O-isopropylidene glycerol. Enzyme
and Microbial Technology, v. 17, p. 725-728, 1995.
HESTER, A. Microbial glycerol. Industrial Bioprocess, v.22, n. 4, p. 3-5, 2000.
HOLM, H. C. Produzindo cremes e batons mais verdes. BioTimes, n. 1, 2007. Disponvel em:
<http://www.Novozyms.com/NR/rdonlyres/3CE078EF-8C65-46EC-82AFBC64D706CCDC/0/PT_cream.pdf>. Acesso em: 20 jul. 2009. il. color.
HOLMBERG, K.; LASSEN, B.; STARK, M. B. Enzymatic glycerolysis of a triglyceride in

aqueous and nonaqueous microemulsions. Journal of the American Oil Chemists Society,
v. 66, n. 12, p. 1796-1800, 1989.
HOLMBERG, K.; STERBERG, E. Enzymatic preparation of monoglycerides in

microemulsion. Journal of the American Oil Chemists Society, v. 65, n. 9, p. 1544-1548,
1988.
HOQ, M. M.; TAGAMI, H.; YAMANE, T.; SHIMIZU, S. Some characteristics of continuous
glyceride synthesis by lipase in a microporous hydrophobic membrane bioreactor.
Agricultural and Biological Chemistry, v. 49, n. 11, p. 335-342, 1985.
HUR, B. K.; WOO, D. J.; KIM, C. B. Hydrolisis mechanisms of fish oil by lipolase-100T.
Journal of Microbiology and Biotechnology, v. 9, n. 5, p. 624-630, 1999.
JACOBSON, K.; GOPINATH, R.; MEHER, L. C.; DALAI, A. K. Solid acid catalyzed
biodiesel production from waste cooking oil. Applied Catalysis B: Environmental, v. 85, p.
86-91, 2008.
JANSSEN, A. E. M.; VANDER PADT, A.; VANTRIET, K. Solvent effects on lipasecatalysed esterification of glycerol and fatty-acids. Biotechnology and Bioengineering, v.
42, n. 8, p. 953-962, 1993.
226
KAEWTHONG, W.; H-KITTIKUN, A. Glycerolysis of palm olein by immobilized lipase PS

in organic solvents. Enzyme and Microbial Technology, v. 35, p. 218-222, 2004.
KAEWTHONG, W.; SIRISANSANEEYAKUL, S.; PRASERTSAN, P. Continuous

production of monoacylglycerols by glycerolysis of palm olein with immobilized lipase.
Process Biochemistry, v. 40, n. 5, p. 1525-1530, 2005.
KANICKY, J. R.; SHAH, D. O. Effect of degree, type, and position of unsaturation on the
pka of long-chain fatty acids. Journal of Colloid and Interface Science, v. 256, n. 1, p. 201207, 2002.
KLOOSTERMAN, J.; VANWASSENAAR, P. D.; BEL, W. J. Membrane Bioreactors. Fett

Wissenschaft Technologie/Fat Science Technology, v. 89, n. 14, p. 592-597, 1987.
KOSKINEN, A. M. P.; KLIBANOV, A. M. Enzimatic Reactions in Organic Media. 1 ed.

Great Britain : Blackie academic and professional, 1996. 314 p.
KRONENBERGER, F. A.; SANTAANNA, L. M. M.; FERNANDES, A. C. L. B.;

MENEZES, R. R.; BORGES, C. P.; FREIRE, D. M. G. Oxygen controlled biosurfactant
production in a bench scale bioreactor. Applied Biochemistry and Biotechnology, v. 147, p.
33-45, 2008.
KWON, S. J., HAN, J. J., RHEE, J. S. Production and in situ separation of mono or
diacylglycerol catalyzed by lipases in n-hexane. Enzyme and Microbial Technology, n. 17,
n. 8, p. 700-704, 1995.
LANGONE, M. A. P. Sntese de triglicerdeos catalisada por lipase. Rio de Janeiro, 1998.

Tese (Doutorado em Engenharia Qumica) - Programa de Engenharia Qumica da COPPE,
Universidade Federal do Rio de Janeiro, 1998.
LEHNINGER, A. L.; NELSON, D. L.; COX, M. M. Princpios de Bioqumica. 4 ed. So

Paulo : Sarvier, 2006. 1202 p.
LI, Z. Y.; WARD, O. P. Lipase-catalysed esterification of glycerol and n-3 polyunsaturated

fatty-acid concentrate in organic-solvent. Journal of the American Oil Chemists Society,
v. 70, n. 8, p. 745-748, 1993.
LIMA, A. W. O.; ANGNES, L. Biocatlise em meios aquo-restritos: fundamentos e

aplicaes em qumica analtica. Qumica Nova, v. 22, n. 2, 1999.
227
LIMA, U. A.; AQUARONE, E.; BORZANI, W.; SCHMIDELL, W. Biotecnologia

Industrial - Processos fermentativos e enzimticos. So Paulo : Edgard Blcher, v. 3, 2001.
616 p.
LIN, X.; CHUAH, G. K.; JAENICKE, S. Base-functionalized MCM-41 as catalyst for the
synthesis of monoglyceride. Journal of Molecular Catalysis A: Chemical, v. 150, p. 287294, 1999.
MACHADO, M. D.; PEREZ-PARIENTE, J.; SASTRE E., CARDOSO D., GUERENE, A.

M. Selective synthesis of glycerol monolaurate with zeolitic molecular sieves. Applied
Catalysis A: General, v. 203, n. 2, p. 321-328, 2000.
MACIERZANKA, A.; SZELAG, H. Esterification kinetics of glycerol with fatty acids in the
presence of zinc carboxylates: preparation of modified acylglycerol emulsifiers. Industrial
and Engineering Chemistry Research, v. 43, p. 7744-7753, 2004.
MACIERZANKA, A.; SZELAG, H. Microstructural behavior of water-in-oil emulsions

stabilized by fatty acid esters of propylene glycol and zinc fatty acid salts. Colloids and
Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects, v. 281, p. 125-137, 2006.
MATSUMOTO, M.; KIDA, K.; KONDO, K. Effects of polyls and organic solvents on
thermostability of lipase. Journal of Chemical Technology and Biotechnology, v. 70, p.
188-192, 1997.
MAUGARD, T.; REJASSE, B.; LEGOY, M. D. Synthesis of water-soluble retinol derivatives

by enzymatic method. Biotechnology Progress, v. 18, p. 424-428, 2002.
MCNEILL, G. P.; BERGER, R. G. Enzymatic glycerolysis of palm oil fractions and a palm
oil based model mixture: Relationship between fatty-acid composition and monoglyceride
yield. Food Biotechnology, v. 7, n. 1, p. 75-87, 1993.
MCNEILL, G. P.; BOROWITZ, D.; BERGER, R. G. Selective distribution of saturated fattyacids into the monoglyceride fraction during enzymatic glycerolysis. Journal of the
American Oil Chemists Society, v. 69, n. 11, p. 1098-1103, 1992.
MCNEILL, G. P.; SHIMIZU, S.; YAMANE, T. Solid-phase enzymatic glycerolysis of beef

tallow resulting in a high yield of monoglycerides. Journal of the American Oil Chemists
Society, v. 67, n. 11, p. 779-783, 1990.
228
MCNEILL, G. P.; YAMANE, T. Further improvements in the yield of monoglycerides during

enzymatic glycerolysis of fats and oils. Journal of the American Oil Chemists Society, v.
68, n. 1, p. 6-10, 1991.
MILLER, C.; AUSTIN, H.; POSORSKE, L.; GONZLEZ, J. Characteristics of an

immobilized lipase for the commercial synthesis of esters. Journal of the American Oil
MILLQVIST-FUREBY, A.; ADLERCREUTZ, P.; MATTIASSON, B. Glyceride synthesis in

a solvent-free system. Journal of the American Oil Chemists Society, v. 71, p. 1489-1495,
1996.
MOQUIN, P. H. L.; TEMELLI, F. Production of monoolein from oleic acid and glycerol in
supercritical carbon dioxide media: A kinetic approach. Journal of Supercritical Fluids, v.
44, p. 40-47, 2008.
MONTEIRO, J. B.; NASCIMENTO, M. G.; NINOW, J. L. Lipase-catalysed synthesis of

monoacylglycerol in a homogeneous system. Biotechnology Letters, v. 25, n. 8, p.641-644,
2003.
MUO, M. D. M.; ESTEBAN, L.; ROBLES, A.; HITA, E.; JIMNEZ, M. J.; GONZLEZ,
P. A., CAMACHO, B.; MOLINA, E. Synthesis of 2-monoacylglycerols rich in
polyunsaturated fatty acids by ethanolysis of fish oil catalyzed by 1,3 specific lipases. Process
Biochemistry, v. 43, p. 1033-1039, 2008.
MYRNES, B.; BATSTAD, H.; OLSEN, R. L.; ELVEOLL, E. O. Solvent-free enzymatic

glycerolysis of marine oil. Journal of the American Oil Chemists Society, v. 72,
n. 11, p. 1339-1344, 1995.
NAKAMURA, R.; KOMURA K.; SUGI, Y. The esterification of glycerine with lauric acid
catalyzed by multi-valent metal salts: Selective formation of mono- and dilaurins. Catalysis
Communications, v. 9, p. 511-515, 2008.
NITSCHKE, M.; PASTORE, G. M. Biossurfactantes: Propriedades e aplicaes. Qumica

Nova, v. 25, n. 5, p. 772-776, 2002.
NOVOZYMES. Lipozyme RM IM. Disponvel em:

<http://www.Novozymes.com/en/MainStructure/ProductsAndSolutions/Biocatalysis/Commer
cial+products/Lipozyme+RM+IM/Lipozyme+RM+IM> Acesso em: 01 set. 2009a.
229
NOVOZYMES. Lipozyme TL IM. Disponvel em:

<http://www.Novozymes.com/en/MainStructure/ProductsAndSolutions/Oils+and+fats/Oil+ba
sed+specialties/Lipozyme+TL+IM/Lipozyme+TL+IM> Acesso em: 01 set. 2009b.
NOVOZYMES. Lipozyme TL IM. Disponvel em:

cial+products/Lipozyme+TL+IM/Lipozyme+TL+IM> Acesso em: 01 set. 2009c.
NOVOZYMES. Novozym 435. Disponvel em:

cial+products/Novozym+435/Novozym+435> Acesso em: 01 set. 2009d.
NOVOZYMES. Novozym 435. Disponvel em:

<http://www.Novozymes.com/en/MainStructure/ProductsAndSolutions/Oils+and+fats/Oil+ba
sed+specialties/Novozym+435/Novozym+435>. Acesso em: 01 set. 2009e.
OLIVEIRA, A. G.; SCARPA, M. V.; CORREA, M. A.; CERA, L. F. R.; FORMARIZ,T. P.

Microemulses: estrutura e aplicaes como sistema de liberao de frmacos. Qumica
Nova, v. 27, n. 1, p. 131-138, 2004. il.
OLIVEIRA, D.; FEIHRMANN, A. C.; DARIVA, C.; BEVILAQUA, J. V.; DESTAIN, J.;
CUNHA, A. G.; OLIVEIRA, J. V.; FREIRE, D. M. G. Influence of compressed fluids
treatment on the activity of Yarrowia lipolytica lipase. Journal of Molecular Catalysis B:
Enzymatic, v. 39, p. 117-123, 2006.
OHTA, Y.; YAMANE, T.; SHIMIZU, S. Inhibition and inactivation of lipase by fat peroxide
in the course of batch and continuous glycerolyses of fat by lipase. Agricultural and
Biological Chemistry, v. 53, n. 7, p. 1885-1890, 1989.
OTERO, C.; ARCOS, J. A.; BERRENDERO, M. A. Emulsifiers from solid and liquids
polyols: Different strategies for obtaining optimum conversions and selectivities. Journal of
the Molecular Catalysis B: Enzymatic, v. 11, n. 4-6, p. 883-892, 2001.
PAIVA, A. L.; BALCO, V. M.; MALCATA, F. X. Kinetics and mechanisms of reactions

catalysed by imobilized lipases. Enzyme Microbiology and Technology, v. 27, n. 3-5, p.
187-204, 2000.
PAQUES, F. W.; MACEDO, G. A. Lipases de ltex vegetais: Propriedades e aplicaes

industriais. Qumica Nova, v. 29, n. 1, p. 93-99, 2006.
230
PASQUALI, R. C.; TAUROZZI, M. P.; BREGNI, C. Some considerations about the

hydrophilic-lipophilic balance system. International Journal of Pharmaceutics, v. 356, p.
44 - 51, 2008.
PASTORE, G. M.; PARK, Y. K. Produo de monoleina por lipase microbiana. Cincia e

Tecnologia em Alimentos, v. 13, n. 1, p. 13-21, 1993.
PEREIRA-SOARES, V. L.; SILVA, S. S. Aproveitamento de sub-produtos de biodiesel:

Preparao de monoster de glicerina e cido dodecanico na presena de derivados de
nibio. In: II Congresso da Rede Brasileira de Tecnologia do Biodiesel - 2007, 2007,
Braslia. Disponvel em: <http://www.biodiesel.gov.br/docs/congresso2007/coproduto/2.pdf>.
Acesso em: 20 jul. 2009.
PREZ-PARIENTE, J.; DAZ, I.; MOHINO, F.; SASTRE, E. Selective synthesis of fatty
monoglycerides by using functionalised mesoporous catalysts. Applied Catalysis A:
General, v. 254, p. 173-188, 2003.
PHARMA SPECIAL. Monoestearato de glicerila. Disponvel em:

<http://www.pharmaspecial.com.br/default.asp?resolucao=1680X1050>. Acesso em: 20 jul.
2009.
POUILLOUX, Y.; ABRO, S.; VANHOVE, C.; BARRAULT, J. Reaction of glycerol with
fatty acids in the presence of ion-exchange resins: Preparation of monoglycerides. Journal of
Molecular Catalysis A: Chemical, v. 149, p. 243-254, 1999.
POUILLOUX, Y.; MTAYER, S.; BARRAULT, J. Synthesis of monooctadecanoate from

octadecanoic acid and glycerol: Influence of solvent on the catalytic properties of basic
oxides. Surface Chemistry and Catalysis, v. 3, p. 589-594, 2000.
RAHMAN, M. A.; GHOSH, A. K.; BOSE, R. N. Dissociation constants of long chain fatty
acids in methanol-water and ethanol-water mixtures. Journal of Chemical Technology and
Biotechnology, v. 29, p. 158-162, 1979.
ROSSI, C. G. F. T.; DANTAS, T. N. de C.; NETO, A. A. D.; MACIEL, M. A.M.

Tensoativos: Uma abordagem bsica e perspectivas para aplicabilidade industrial. Revista
Universidade Rural, v. 25, n. 1-2, p. 73-85, 2006. il.
RUPPEL, T.; HALL, G. Glicerina livre e total em biodiesel B100 por cromatografia a gs.
Revista Analytica, n. 30, Ago./Set. 2007.
231
SANTOS, E. P.; VELASCO, M. V. R.; VILLA, A. L. V.; SIMES, S. I. Enzimas na

Indstria de Cosmticos. In: Bon, E. P. S.; Ferrara, M. A.; Corvo, M. L. Enzimas em
Biotecnologia: Produo, Aplicaes e Mercado. 1 ed. Rio de Janeiro: Intercincia, 2008, v.
1, p. 333-348.
SAKIYAMA, T.; YOSHIMI, T.; TANAKA, A.; OZAKI, S.; NAKANISHI, K. Analysis of
monoglyceride synthetic reaction in a solvent-free two-phase system catalyzed by a
monoacylglycerol lipase from Pseudomonas sp. LP7315. Journal of Bioscience and
Bioengineering, v. 91, n. 1, p. 88-90, 2001.
SCHUELLER, R.; ROMANOWSKI, P. Iniciao Qumica Cosmtica. 1 ed. So Paulo :

Tecnopress, v. 2, 2002. 105 p.
SEBRO, D.; SILVA, V. D.; NASCIMENTO, M. G.; MOREIRA, M. A. Imobilizao de

lipases em filme de caseinato de sdio/glicerol: Aplicao na sntese de steres. Qumica
Nova, v. 30, n. 5, p. 1182-1187, 2007.
SECUNDO, F.; CARREA, G.; TARABIONO, C.; GATTI-LAFRANCONI, P.; BROCCA, S.;
LOTTI, M.; JAEGER, K.; PULS, M.; EGGERT, T. The lid is a structural and functional
determinant of lipase activity and selectivity. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic,
v. 39, p. 166-170, 2006.
SILVA, M. A. M. Sntese de monocaprina sintetizada por lipase em meio sem solvente.

Rio de Janeiro, 2002. 95 f. Dissertao (Mestrado em Cincias) - Instituto de Qumica,
Universidade Federal do Rio de Janeiro, 2002.
SILVA, M. A. M.; MEDEIROS, V. C.; LANGONE, M. A.P.; FREIRE, D. M. G. Synthesis of

monocaprin catalyzed by lipase. Applied Biochemistry and Biotechnology, v. 105, p. 757767, 2003.
SINGH, A.; VAN HAMME, J. D.; WARD, O. P. Surfactants in microbiology and

biotechnology: Part 2. Application aspects Biotechnology Advances, v. 25, p. 99-121, 2007.
SOCIEDADE AMERICANA PARA TESTES E MATERIAIS (ASTM). Norma ASTM

6584-00. Mtodo para determinao de glicerina livre e total em biodiesel B100 (steres
metlicos) por cromatografia gasosa, 2000.
SONNTAG, N. O. V. Glycerolysis of fats and esters: Status, review and critique. Journal of
the American Oil Chemists Society, v. 59, n. 10, p. 795-802, 1982.
232
SOUSA, J.; CAVALCANTI, E. D. C.; ARANDA, D. A. G.; FREIRE, D. M. G. Aplicao da

lipase vegetal de pinho manso (Jatropha curcas Lin.) em processo hbrido
(enzimtico/qumico) de hidroesterificao para produo de biocombustvel. In: XVII
Simposio Nacional de Bioprocessos - SINAFERM 2009, 2009, Natal. v. XVII, p. 1-7.
STEFFEN, B.; ZIEMANN, A.; LANG, S.; WAGNER, F. Enzymatic monoacylation of

trihydroxy compounds. Biotechnology Letters, v. 14, n. 9, p. 773-778, 1992.
STEVENSON, D. E.; STANLEY, R. A.; FURNEAUX, R. H. Glycerolysis of tallow with

immobilized lipase. Biotechnology Letters, v. 15, n. 10, p. 1043-1048, 1993.
SZELAG, H.; MACIERZANKA, A. Synthesis of modified acylglycerol emulsifiers in the

presence of Na, K and Zn fatty acid carboxylates. Tenside Surfactants Detergents, v. 38, p.
377-380, 2001.
SZELAG, H.; ZWIERZYKOWSKI, W. Esterification kinetics of glycerol with fatty acids in

the presence of sodium and potassium soaps. Fett/Lipid, v. 100, p. 302-307, 1998.
TAN, T.; YIN, C. The mechanism and kinetic model for glycerolysis by 1,3 position specific
lipase from Rhizopus arrhizus. Biochemical Engineering Journal, v. 25, p. 39-45, 2005.
VAN DER PADT, A.; KEURENTJES, J. T. F.; SEWALT, J.J.W.; VAN DAM, E.M.; VAN
DORP, L.J.; VANT RIET, K. Enzymatic synthesis of monoglycerides in a membrane
bioreactor with an in-line adsorption column. Journal of the American Oil Chemists
Society, v. 69, n. 8, p. 748-754, 1992.
VIRTO, M. D.; LASCARAY, J. M.; SOLOZABAL, R. Enzymatic-hydrolysis of animal fats

in organic-solvents at temperatures below their melting-points. Journal of the American Oil
WANG, Y. F.; WONG, C. H. Lipase-catalyzed irreversible transesterification for preparative

synthesis of chiral glycerol derivatives. Journal of Organic Chemistry, v. 53, n. 13, p. 31273129, 1988.
WANG, Z. X.; ZHUGE, J.; FANG, H.; PRIOR, B. A. Glycerol production by microbial
fermentation: A review. Biotechnology Advances, v.19, p. 201-223, 2001.
WANJUN, T.; DONGHUA, C. A simple and clean process for the synthesis of
(C17H35COO)2 (M=Zn, Pb). Powder Technology, v. 181, p. 343-346, 2008.
233
WATANABE, Y.; YAMAUCHI-SATO, Y.; NAGAO, T.; YAMAMOTO T.; OGITA K.;
SHIMADA, Y. Production of monoacylglycerol of conjugated linoleic acid by esterification
followed by dehydration at low temperature using Penicillium camembertii lipase. Journal of
Molecular Catalysis B: Enzymatic, v. 27, p. 249-254, 2004.
WIKIPEDIA. Gordura. Disponvel em: <http://pt.wikipedia.org/wiki/Gordura>. Acesso em:

01 set. 2009, somente il. color.
JACOBSON, K.; GOPINATH, R.; MEHER, L. C.; DALAI, A. K. Solid acid catalyzed
biodiesel production from waste cooking oil. Applied Catalysis B: Environmental, v. 85, p.
86-91, 2008.
XIA, Y. M.; FANGA, Y.; ZHANG, K. C.; SHI,G. Y.; BROWN, J. J. Enzymatic synthesis of
partial glycerol caprate in solvent-free media. Journal of Molecular Catalysis B:
Enzymatic, v. 23, p. 3-8, 2003.
YAMAGUCHI, S.; MASE, T. High yield synthesis of monoglyceride by mono and

diacylglycerol lipase from Penicillium camemberti U-150. Journal of Fermentation and
Bioengineering, v. 72, n. 3, p. 162-167, 1991.
YAMANE, T.; HOQ, M. M.; ITOH, S.; SHIMIZU, S. Glycerolysis of fat by lipase. Journal
of the American Oil Chemists Society, v. 35, p. 625-631, 1986.
YAMANE, T.; HOQ, M. M.; SHIMIZU, S.; ISHIDA, S.; FUNADA, T. Continuous synthesis
of glycerides by lipase in a microporous membrane bioreactor. Annals of the New York
Academy of Sciences, v. 434, p. 558-568, 1984.
YAN, Y.; BORNSCHEUER, U. T.; CAO, L.; SCHMID, R. D. Lipase-catalyzed solid-phase

synthesis of sugar fatty acid esters: Removal of byproducts by azeotropic distillation. Enzyme
and Microbial Technology, v. 25, p. 725-728, 1999.
YANG, Y. C.; VALI, S. R.; JU, Y. H. A Process for synthesizing high purity monoglyceride.
Journal of the Chinese Institute of Chemical Engineers, v. 34, n. 6, p. 617-623, 2003.
ZANIN, S. M. W.; MIGUEL, M. D.; CHIMELLI, M. C.; OLIVEIRA, A. B. .Determinao

do equilbrio hidrfilo-lipfilo (EHL) de leos de origem vegetal. Viso Acadmica, v. 3, n.
1, p. 13-18, 2002. il.

Síntese de monoestearato de glicerila

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO

PRISCILLA HENRIQUES GROETAERS DE SOUZA COSTA

SNTESE DE MONOESTEARATO DE GLICERILA

Priscilla Henriques Groetaers de Souza Costa

SNTESE DE MONOESTEARATO DE GLICERILA PARA

Dissertao de Mestrado apresentada ao

Orientadores: Donato Alexandre Gomes Aranda, D. Sc.

Costa, Priscilla Henriques Groetaers de Souza.

Priscilla Henriques Groetaers de Souza Costa

SNTESE DE MONOESTEARATO DE GLICERILA PARA

Dissertao de Mestrado apresentada ao

Aprovada em 03 de agosto de 2010.

por via enzimtica (70C, razo molar

glicerol/cido esterico de 4 e 2,5 % m/m de catalisador em relao ao cido esterico) em

REVISO BIBLIOGRFICA .................................................. 25

Mtodos de obteno de monoglicerdeos............................................... 39

Reagentes utilizados na sntese de monoglicerdeos via esterificao .. 65

Estearato de zinco .................................................................................... 72

MATERIAIS E MTODOS ...................................................... 99

Metodologia experimental ..................................................................... 101

Mtodos analticos.................................................................................. 107

Anlise do cido esterico utilizado como reagente ......................................107

RESULTADOS E DISCUSSO.............................................. 112

Anlise do cido esterico utilizado como reagente............................. 112

Anlise dos produtos comerciais ........................................................... 113

Sntese de monoestearato de glicerila por via qumica ........................ 117

Planejamento experimental .............................................................................117

Sntese de monoestearato de glicerila por via enzimtica.................... 151

Comparao entre a via qumica e a enzimtica.................................. 207

Efeito da razo molar entre os reagentes .......................................................209

CONCLUSES ......................................................................... 217

SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS .................. 219

REFERNCIAS ........................................................................ 220

Figura 27: Cromatograma dos padres...................................................................................115

em ausncia e presena de solvente *.....................................................................................156

em ausncia e presena de solvente *.....................................................................................156

Figura 65: Cromatograma do produto sintetizado no experimento 44 aps 6 h de reao

enzimtica - B (70C, razo molar: 4 e 2,5% de Novozyme 435)..........................................209

Tabela 61: Efeito das variveis estatisticamente e marginalmente significativas sobre a

Lista de Siglas, Abreviaturas e Smbolos

CEN Comit Europeu de Normalizao (Comit Europen de Normalisation)

steres de uso cosmtico sintetizados enzimaticamente, por exemplo, tm sido designados

Estudar a influncia do tipo de lipase (Lipozime TL IM, Lipozyme RM IM, Lipase de

Investigar a influncia de algumas variveis (temperatura, relao mssica

Propor modelos empricos resultantes da tcnica de planejamento experimental que

Realizar um estudo cintico das melhores condies experimentais obtidas com o

Estudar unilateralmente o efeito da razo molar entre os reagentes na converso e

Fonte: ROSSI et al., 2006

Figura 1: Representao esquemtica de um surfactante

Fonte: ROSSI et al., 2006

Figura 2: Orientao dos surfactantes nas interfaces

destacam-se a menor toxicidade, biodegradabilidade e possibilidade de serem produzidos a

3.1.2 Classificao e aplicaes cosmticas

Figura 3: Classes de Tensoativos

O grupo polar do tensoativo determina suas propriedades marcantes. Os tensoativos

Fonte: adaptado de ZANIN et al., 2002

Figura 4: Escala de Griffin X Aplicaes cosmticas dos tensoativos

Fonte: adaptado de ECCLESTON, 1997

Figura 5: Fotomicrografia de uma emulso de lcool cetoestearlico em gua explicitando a

Macroemulses: So emulses opacas, termodinamicamente instveis, com gotculas

Microemulses: So sistemas termodinamicamente estveis, disperses isotrpicas,

Miniemulses: Possuem aaspecto branco-azulado semi-opaco, baixa viscosidade e