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Regional Distrito Capital

Sistema de Gestin de la Calidad

Informe de Laboratorio No 02
DETERMINACIN DE BIOINDICADORES MICROBIOLGICOS EN LA INDUSTRA
EMPRESA CUARTS LTDA.

Aprendices
GINA LIZZETH MORENO CORDERO
ELIANA MILENA SANCHEZ JUISA
MAYRA ALEJANDRA SOTO TABIMBA

Instructor
SONIA MARCELA BUITRAGO MORALES

Centro de Gestin Industrial


Diciembre de 2014

Tabla de contenido
1. Introduccin
Se realiz una siembra de microorganismos (hongos, bacterias, levaduras) en
diferentes agares con la cantidad de nutrientes necesarios para su crecimiento
con el fin de determinar la existencia de estos en la muestra de agua tomada de
las curtiembres de San Benito las cuales contenan sulfuros, para lo cual se hizo
necesario hacer una serie de clculos con el nico objetivo de determinar la
cantidad de agar necesario para preparar y luego servir en las cajas de Petri
donde se hara la siembra de la muestra de agua con contenido microbiano.
Como primera medida se prepararon los agares y el agua peptonada necesaria
para las diluciones utilizadas en toda la prctica. A continuacin se llev a
autoclave todo el material necesario como: Cajas de Petri, pipetas, bastn de
vidrio y los frascos Scott los cuales contenan los agares por 15 minutos a 121
C.
Luego de tener esterilizados todo el material se procedi a servir los agares en
las cajas de Petri, en este caso se utilizaron tcnicas en superficie y profundidad
para la siembra de bacterias (profundidad), hongos y levaduras (superficie) y se
utilizaron tubos de ensayo con los cuales se pretenda estudiar la presencia de
coliformes y E.coli en la muestra de agua, los agares con su respectiva siembra
de la muestra liquida fueron llevados a la incubadora por un periodo de tiempo
de 48 horas a una temperatura de 35C +/- 2 C, al cabo del cual se procedi a
realizar el conteo de las colonias presentes en cada una de las cajas en UFC
(unidades formadoras de colonia) / g o ml y en el caso de los tubos en NPM
(Numero ms probable) / g o ml. Los procedimientos y resultados se presentan
en todo el contenido del presente informe.

2. Objetivos:
Objetivo General
Sembrar microorganismos en las cajas de Petri para su posterior conteo e
identificacin macroscpica y microscpica.
Objetivos Especficos
Preparar los agares y servirlos en las cajas de Petri de manera tal que
se induzca el crecimiento de los microorganismos.
Realizar el conteo de las colonias presentes en los agares y reportar los
resultados en UFC y NPM segn sea el caso.

3. Procedimiento
Mediante diagramas de flujo deben realizarse los siguientes procedimientos
3.1 Elaboracin de medios de cultivo

3.2 Montaje de la tcnica de recuento en placa (bacterias, hongos y levaduras)

3.3 Montaje de la tcnica de NMP de coliformes totales y Escherichia coli

3.4 Montaje de la tcnica de aislamiento.

3.5 Lectura de resultados de los recuentos obtenidos en la prctica.

4. Clculos
Preparacin de medios de cultivo
Agua peptonada
Frasco de 90 ml
2 tubos de ensayo de 9 ml
ml de agua destilada = 90+9+9= 108 ml de agua destilada
Agua peptonada
20 ml/1000 ml *108 ml = 2,16 g de agua peptonada pesados y agregados en los 108
ml de agua destilada.
20 ML DE AGUA PARA CADA CAJA DE PETRI.
Agar plate count
3 Cajas de Petri con Plate Count
20 ml * 3 cajas = 60 ml
23,5 g/1000ml * 60 ml = 1.41 g de agar plate count en 60 ml de agua destilada.
Agar PDA
3 Cajas de Petri con agar PDA
20 ml * 3 cajas = 60 ml
39 g/1000 ml * 60 ml = 1.41 g de agar PDA en 60 ml de agua destilada.
Agar mac conkey
2 Cajas de Petri con agar Mac Conkey
20 ml *2 cajas = 40 ml
50 g/1000 ml * 40 ml = 2 g de agar Mac Conkey en 40 ml de agua destilada.
Recuentos microbianos
Agar plate count = 9 colonias (10-1)
9 *10 = 90 UFC/G
Agar PDA = 15 colonias (10-1)
15*10 = 150 UFC/G
5. Resultados
5.1 Recuentos microbianos

5.1.1 Recuento de bacterias totales en placa


Al finalizar el tiempo de incubacin se realiz el conteo de las bacterias presentes en la
parte profunda de las cajas de Petri, seleccionando la caja marcada con la dilucin 101, ya que esta contena una cantidad mayor de microorganismos, las colonias fueron
contadas usando un marcador, a partir de la cantidad encontrada se realizan los
respectivos clculos para la determinacin de la ufc/g o ml. (Los resultados encontrados
se presentan en la tabla 1)
5.1.2. Recuento de hongos y levaduras en placa
Al finalizar el tiempo de incubacin se realiz el conteo de los hongos y las levaduras
presentes en las diluciones, siendo la dilucin 10-1 la que contena mayor nmero de
microorganismos y con la cual se hizo el respectivo conteo y los clculos para la
determinacin de la ufc/g o ml. (Los resultados encontrados se presentan en la tabla 1,
que se encuentra prrafos abajo).
5.1.3 Recuento de Escherichia coli por NMP
Al cabo de las 48 horas de incubacin se determin que en los tubos de ensayo no
exista presencia de E.coli, ya que no hubo cambio en ninguna de las muestras en
cuanto a las caractersticas de las mismas. (Los resultados encontrados se presentan
en la tabla 1)
5.1.2 Recuento de coliformes totales de NMP
Al cabo de las 48 horas de la incubacin se determin que en los tubos no exista
presencia de coliformes ya que no presentaron cambio de color a azul- verdoso el cual
indicaba la presencia de la bacteria gran negativa en la muestra de agua contenida en
los tubos de ensayo. (Los resultados encontrados se presentan en la tabla 1)
Tabla 1. Recuento de bioindicadores en la muestra de agua de curtiembre de la
empresa Cuarts Ltda.
ANLISIS
Bacterias totales

Recuento
Temperatura de
UFC NMP/ml Incubacin
90 UFC/ ml

35 C +/- 2C

< 3 NMP/ ml

35 C +/- 2C

150 UFC/ ml

25C+/-2C

< 3 NMP/ ml

35 C +/- 2C

Coliformes totales

Tcnica
utilizada
Recuento en
profundidad
Tcnica por
Nmero ms
probable

Hongos y levaduras
Escherichia coli

5.2 Identificacin de los microorganismos aislados

Recuento en
superficie
Tcnica por
Nmero ms
probable

5.2.1 Identificacin macroscpica y microscpica de los microorganismos


aislados
Medio de cultivo de
donde se toma el
microorganismo
A

Caractersticas
macroscpicas

Caractersticas
microscpicas

B
El nmero de microorganismos depender de las colonias que el grupo proyecto
haya concertado con el Instructor para su caracterizacin.
6. Anlisis de resultados
El anlisis de coliformes totales y e.coli en la muestra de agua residual de la
curtiembre no mostro resultado por la tcnica de nmero ms probable donde
sembr en el caldo LMX en tubos para su posterior anlisis, debido a que las
condicione de pH de crecimiento de la bacteria Gram negativa esta entre (4-10) y la
muestra de agua contena un pH de 13.
En el anlisis de hongos y levaduras en la muestra tampoco demostr una alta tasa
de crecimiento esto es debido a que la muestra de agua es de caractersticas
industriales lo cual implica altos contenidos de materia inorgnica y baja de orgnica,
la cual es esencial para el crecimiento de los hongos y levaduras.
Los anlisis realizados a la muestra buscan identificar la presencia de bacterias
dainas para la salud y son realizadas para el control de calidad de alimentos y agua
potable, se realizaron en la muestra de agua residual a fin de conocer el
procedimiento y resultados de la misma pero no son necesarios para este tipo de
muestra, la muestra contena un pH alcalino, alto contenido de sulfuros, materia
inorgnica y baja concentraciones de materia orgnica, lo cual impidi el alto
desarrollo de los diferentes microorganismos.
7. Conclusiones
Se realizaron los diferentes medios de cultico para cada anlisis y se llevaron a
montaje donde se sembr la muestra en cada uno y se llev a incubacin, se
mostr un bajo crecimiento bacteriano en los diferentes medios lo que indica que
las condiciones ideales para el crecimiento de cada microorganismo no eran las
adecuadas.
Se realiz el conteo de las colonias presentes en la disolucin ms concentrada
de la muestra en cada una las siembras y se reportaron los resultados con la
tcnica del nmero ms probable y las unidades formadoras de colonias donde
se mostraron como negativos la alta concentracin de los microorganismos, lo
que indica que la muestra es muy alcalina, o no contenga los microorganismos.

8. Bibliografa
FUNDACIN VASCA PARA LA SEGURIDAD ALIMENTARIA. Escherichia coli
<http://www.elika.net/datos/pdfs_agrupados/Documento84/3.Ecoli.pdf>(citado en
10 de diciembre de 2014)
Anexos