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“Año del Centenario de Machu Picchu para el Mundo” UNIVERSIDAD DE HUÁNUCO FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD E.A.P. ODONTOLOGÍA EFICACIA ANTIBACTERIANA IN VITRO DEL EXTRACTO DE HOJA DE COCA EN COMPARACIÓN CON CLORHEXIDINA FRENTE A STAPHYLOCOCCUS Y STREPTOCOCCUS HUANUCO 2011 Presentado por el Bachiller Ricardo A Rojas Sarco. HUÁNUCO – PERÚ 2011 INDICE DATOS GENERALES DE LA TESIS Pág. RESUMEN PRESENTACIÓN INTRODUCCIÓN CAPITULO I 1. EL PROBLEMA DE INVESTIGACION 1.1 Fundamentación del Problema ………………………………………………. 1.2 Formulación del Problema………………...……………………….……….….. 7 8 Problema General……………………………………………………………… 8 Problema Específico…………………………………………………………... 8 1.3 Justificación………………………………………………………….….……….. 9 1.4 Objetivos. ……………………………………………………………….….…….. 9 Objetivo General………………………………………………….…….….…. 9 Objetivos Específicos………………………………...……………………... 9 1.5 Limitaciones o Dificultades………………………………………………..…..…. 10 CAPITULO II 2. MARCO TEÓRICO 2.1 Antecedentes…………………………………………….……………………...... 11 2.2 Base Teóricas y Científicas……………………………………………….…….. 14 2.2.1 Coca (Erythroxylum)………………………………………………….. 14 2.2.2 Clorhexidina…………………………………………………………….. 19 2.2.3 Staphylococos Aureus y estreptococos mutans.……………………. 22 2.3 Definición de Términos…………………………………………….…………….. 32 2.4 Hipótesis………………………………………………………….……………….. 35 2.5 Identificación de variables………………………………………….………….... 35 2.6 Operacionalización de Variables………….……………….….......…..……… 36 CAPITULO III 3. DISEÑO METODOLOGÍCO 3.1 Tipo de Investigación……………………………………………………………. 37 3.2 Población y Muestra ……….…………………………………………………. 38 3.3 tecnica de recoleccion de instrumentos……………………………………………. 39 3.4 plan de tabulacion y analisis de datos……………………………………………… 40 CAPITULO IV 4. RESULTADOS 4.1resultados De Las Observaciones………………………………………….. 41 4.2 Prueba De Hipótesis………………………………………………………… 44 DISCUSIÓN……………………………………………………………………… 55 CONCLUCIONES……………………………………………………………….. 57 RECOMENDACIONES………………………………………………………………… 58 BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………… 59 ANEXOS……………………………………………………………………………….. 65     CAPITULO I EL PROBLEMA 1.1 FUNDAMENTACION DEL PROBLEMA La cavidad oral esta formada por un conjunto de tejidos, con numerosos microorganismos asociados a ellos, constituyendo un ecosistema. Cuando este sistema ecológico se encuentra en equilibrio se denomina eubiosis y, en cambio, cuando estas relaciones se han alterado, pasara a llamarse disbiois, que correspondería a una boca enferma. La gran mayoría de la población andina del Perú, padecen de enfermedades buco dentales debido a la carencia de conocimiento sobre la higiene bucal. Pero de manera compensatoria e inconsciente, el consumo de la hoja de coca en la población, ha demostrado interferir con el rol del proceso carioso, debido a los componentes beneficiosos que contiene dicha hoja; al mismo tiempo la excesiva actividad masticatoria a perjudicado las estructuras dentales produciendo traumas en las estructuras duras del diente y en las que lo rodean, conllevando ha enfermedades periodontales, ocasionando la perdida dentaria. Gracias a la investigación realizada por la U.N.M.S.M. sobre la hoja de coca como antibacteriano sobre microorganismos de la cavidad oral, se pretende comparar la eficacia antibacteriana de dicha hoja con la clorhexidina en el tratamiento de staphylococcus aureus 7   y streptococcus mutans., y dar una opción en el futuro de revertir la dramática situacional de la salud bucal de la población andina del Perú. Es por tal motivo que dicha investigación tiene como propósito principal dar solución a las enfermedades buco dentales de las personas de bajo recursos económicos y menos accesibilidad a un establecimiento de salud bucal. 1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja de coca en comparación con la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. Para este estudio se elabora la siguiente pregunta: General • ¿Cuál es la eficacia antibacteriana in vitro del extracto de hoja de coca en comparación con la clorhexidina 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans? Especifico • ¿Será el extracto de hoja de coca un eficaz antibacteriano in vitro frente a staphylococcus aureus y streptococcus mutans? • ¿Habrá diferencia entre la eficacia antibacteriana in Vitro de la clorhexidina 0.12% en comparación con extracto de hoja de coca frente a staphylococcus aureus y streptococcus mutans? 8   1.3 JUSTIFICACION Una de las incógnitas que se tratan de explicar de manera, es la causa de los bajos niveles de lesiones cariosas en personas que practican el hábito de masticar la hoja de coca crónicamente, pero la mayoría de las investigaciones de la hoja de coca en el área de la Odontoestomatología no logran explicar, de manera clara dicha eficacia. Es necesario que se consideren todos los factores que puedan intervenir en la baja incidencia de las lesiones cariosas en los chacchadores de hoja de coca, y uno de los factores que necesita mayor importancia de estudio, es la actividad antibacteriana de la hoja de coca, para poder aportar un mayor conocimiento en el área de la Odontoestomatología y aclarar las incógnitas sobre el beneficio de dicha planta. Con los resultados positivos que se obtengan de la existencia de la eficacia antibacteriana del extracto alcohólico de la hoja de coca, se podrá comparar con otro agente bactericida efectivo que es la clorhexidina y encaminar una planificación para el tratamiento, tanto preventivo como interceptivo, de enfermedades orales de origen infeccioso con el uso de extractos de la hoja de coca o con los componentes exactos de la planta que causen dicho efecto antibacteriano. 1.4 OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN Objetivo General: • Determinar la eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja de coca en comparación con la clorhexidina al 0.12 % en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans Objetivos Específicos: • Identificar la eficacia del extracto de hoja de coca como antibacteriano in vitro en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. • Evaluar la eficacia antibacteriana in vitro entre la clorhexidina 0.12% en comparación con el extracto de hoja de coca en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. 9   1.5 LIMITACIONES O DIFICULTADES • Los pocos estudios realizados con la hoja de coca a nivel local, la cual impide obtener datos importantes para realizar este trabajo. • El crecimiento inadecuado de la bacteria con la que se esta trabajando. • Contaminación del los agares con otros microorganismos 10   CAPITULO II MARCO TEORICO 2.1 ANTECEDENTES • Según GOICOCHEA, A., en 1954; realizo un estudio en 30 masticadores de la hoja de coca, que el número de piezas que faltaban y el porcentaje de caries eran bajos. Mientras que el grado de abrasión dentaria fue alto.1 • Según AYALA, C., en 1963; realiza un estudio a 40 individuos en Puno, en el cual da como uno de sus resultados, que los chacchadores (masticadores) de la hoja de coca presentaban lesiones cariosas en un mínimo porcentaje, mientras que la abrasión dentaria fue elevada.2 • Según ÚNGARO, M., en 1972; realiza un estudio en un grupo de 500 chacchadores de la hoja de coca, que la prevalecía de lesiones cariosas era de un 68%.3 11   • Según CORONEL, M., en 1988; realizó estudios en comunidades de chacchadores de hoja de coca con un tiempo de hábito mayor de 10 años y edades comprendidas entre los 30 y 50 años.4 • Según NAVARRO A., Ángel, en 1988; realizo un estudio con 67 sujetos entre 30 y 45 años de edad y con un tiempo del habito mayor a 10 años.5 • Según PANDO, R., en 1988; realiza un estudio en una comunidad de chacchadores con 60 individuos, con edades comprendidas entre los 30 y 50 años y con un tiempo de chacchado de la hoja de coca mayor de 10 años.6 • Según LI SING, C., en 1994; estudio las propiedades inhibitorias del Erythroxylum coca lam. var. coca y del Erythroxylum Novogranatense var. truxillense contenidos en el filtro de mate de coca frente a las especies de hongos.7 • Según AGUILAR, E. y ENCARNACIÓN, J., en 1995; realizaron un estudio para observar el comportamiento “in vitro” de algunas especies del género Mycobacterium frente a Erythroxylum coca-Erythroxylum novogranatense (Mate de coca).8 • Según CASTRO, P. y CHAVEZ, J., en 1995; realizaron un estudio sobre la acción inhibitoria in vitro de Erythroxylum coca Lam var. coca y Erythroxylum Novogranatense var. truxillense contenidas en el filtro de “Mate de Coca” frente a cepas de uropatógenos Gram negativos multiresistentes.9 • Según CAM, O. y VILLANUEVA, P., en 1996; hicieron un estudio de actividad inhibitoria del extracto acuoso metanólico de los principios activos totales extraídos de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) var. truxillense Rugby frente a cepas bacterianas de bacterias Gram (-), Gram (+) y levaduras aisladas.10 • Según MERTZ, M. y REYES, E., en 1996; realizaron un trabajo de investigación sobre la propiedad inhibitoria de Erythroxylum coca lam. Y Erythroxylum novogranatense (Morris) var. truxillense Rugby contenidas en el filtro de “Mate de coca”, sobre el crecimiento de Enterobacterias, Cocos Gram (+) y Bacillus.11 12   • Según SOLANO, D., en 1996; la presente investigación ha comprendido el estudio de 40 muestras; correspondientes a placa bacteriana, caries dental, cálculo dental, absceso radicular y gingivitis, frente a dos extractos de Erythroxylum Novogranatense (Morris) var. truxillense. Rusby: Acuoso y metanólico de principios activos totales.12 • Según FLORES MIR, F., en 1997; realizo un estudio para determinar la prevalencia de lesiones cariosas, enfermedad periodontal y desgaste dentario y su relación con la presencia, tiempo y frecuencia del habito de masticación de hojas de coca.13 • Según GALVEZ, O., en 1997; realizó un estudio sobre la acción inhibitoria de crecimiento del extracto acuoso de Erythroxylum Novogranatense Morris var. truxillense (Rugby) frente a bacterias Gram negativas que presentaron resistencia a 5 antibacterianos.14 • Según BORROVIC RAMOS, F., en el 2006; realizo una investigación acerca del efecto antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca frente a la microflora oral.15 • Según VENTURA G., CASTRO A., ROQUE M., RUIZ J., en el 2009; estudió la actividad antibacteriana del aceite esencial de la hoja de coca, frente a las cepas de Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus epidermidis, y Pseudomonas aeruginosa.16 13   2.2 BASES TEORICAS 2.2.1 COCA (ERYTHROXYLUM): 2.2.1.1 Generalidades: Etimológicamente la palabra coca proviene del quechua “kuka” o “koka” que debe interpretarse, según Storni, “ku” o “ko”, parte más destacada o principal de algo, “ka” o “kau” vivificante, que da vida, vigorosa y fuerte.17 El género Erythroxylum, “familia Erythroxylaceae”. (Anexo 1). Se encuentra ampliamente distribuido en las regiones tropicales de Sudamérica, principalmente en el Perú y Bolivia y en menor escala en Colombia, Ecuador, Venezuela y Brasil.18 Actualmente se cultivan varias especies de coca en el país. El Erythroxylum coca, planta arbustiva de crecimiento silvestre en las laderas de los Andes Peruanos, principalmente entre los 1000 y 2000 m de altitud, cultivadas desde tiempos remotos en el Perú, Bolivia y otros países cálidos. En la población andina tradicional, donde el uso más conocido que se le da a las hojas de coca es el “chacchado”. Sin embargo también las usan como “lubricante” para la interacción social, como medicina, instrumento para adivinar el futuro y diagnosticar enfermedades.19, 20       ___________________________ 17. BORGHELLI, R.: Revista de la Asociación Odontológica Argentina. 18. BURCHARD, R.: la masticación de la coca. América Indígena. 19. TERRAN, M. y SANDAGORDA, A.: Aspectos socioculturales del consumo de la coca. 20. CARTER, W.; MAMANI, M. y PARKENSON, P.: Coca en Bolivia. Universidad de Florida. Miami. 14   2.2.1.2 Botánica: Erythroxylum (Erythroxylaceae) es un género de 250 especies que se hallan distribuidos en las regiones tropicales de Sudamérica. No obstante que la mayoría de las especies contiene alcaloides relacionados con la cocaína, Erythroxylum Lambran coca y Erythroxylum Novogranatense son las especies más conocidas y extensamente cultivadas en el Perú.18, 21 De acuerdo al lugar de su probable procedencia, la coca peruana es separada en dos variedades: 1. Variedad de Huanuco o boliviana: Hojas anchas y gruesas, color verde oscuro, sabor amargo, con alto porcentaje de cocaína. Derivada de Erythroxylum lambran. Coca (Anexo 2), es cultivada en los valles tropicales de las faldas occidentales de los Andes (desde Ecuador hasta Bolivia). Sus hojas son oblongas, elípticas, grandes, anchas, gruesas y de color verde oscuro. Es la más importante por su contenido promedio de alcaloide, que presenta el más alto de todas las especies 1.1%.22 2. Variedad de Trujillo: Hojas pequeñas y delgadas, color verde claro, sabor dulce y aromático. Derivada de Erythroxylum Novogranatense (Anexo 3), cultivada en áreas secas de Colombia y la variedad truxillense, cultivada en el norte del Perú, su contenido promedio de cocaína es de 0.56%. Esta coca es de gran comercialización por el agradable sabor se sus hojas debido a su alto contenido de ácidos grasos volátiles que son usados como saborizantes en la industria de bebidas gaseosas.22 _____________________________ 18. BURCHARD, R.: Una nueva perspectiva sobre la masticación de la coca. Instituto Indigenista Interamericano. 21. MACHADO, E.: El Género Erythroxylum en el Perú. 22. MACHADO GARZOLA, EDGARDO: “El género Erythroxylum en el Perú”. 15   2.2.1.3 Efectos: ™ Sobre el Organismo: Los efectos del hábito de la masticación de la coca sobre el individuo se deben principalmente a la dosis de alcaloides que ellos ingieren. Se calcula que extraen un promedio de 86% de los alcaloides y que el 80% de los alcaloides es cocaína, el efecto del resto de los alcaloides (menores) no puede ir más allá de un planeamiento teórico, pues no existen estudios farmacológicos adecuados.23, 25 Estos efectos son de diversa índole, pero entre ellos destacan los de carácter fisiológico y psicológico, tanto agudos como crónicos. Las manifestaciones fisiológicas agudas se caracterizan por taquicardia, ligero aumento de presión arterial y de la temperatura corporal, alteraciones respiratorias, aumento de resistencia a la fatiga, entre otros. En cuanto a las manifestaciones fisiológicas de carácter crónico, su delimitación se ve obstaculizada por el alcoholismo, la deficiente alimentación y en general por las desfavorables condiciones higiénicas en que viven los chacchadores, pero generalmente se asocia a malnutrición, hepatomegalia, linfadenopatias, deficiencias visuales, etc. Respecto a las alteraciones psicológicas, como de la personalidad, se hicieron diversos estudios los cuales se contradicen entre sí, además en algunos ellos se usaron técnicas que ahora no pueden aceptarse como válidas ni fidedignas, por lo tanto tendríamos que esperar nuevos trabajos acerca del efecto del hábito sobre el estatus mental de los individuos que lo practican.24, 25, 26 ______________________ 23. CABIESES, F.: Apuntes de medicina tradicional. 24. CABIESES, F.: Aspectos etnológicos de la coca y la cocaína. Cocaína 25. DOMIC, Z.: Revisión crítica bibliográfica y consideraciones generales acerca del masticado de coca. 26. ZAPATA O., V.: El problema de la masticación de la coca en el Perú. 16   ™ Sobre la Cavidad Oral: La mucosa oral, es una de las estructuras de nuestro cuerpo que constantemente está expuesta a substancias extrañas dependiendo de muchos factores, entre ellos los hábitos de cada persona, de allí que sustancias como el tabaco, alcohol, café, etc. Han sido motivo de diversas investigaciones sobre el efecto de dichas sustancias sobre la mucosa oral, en el caso de la masticación de la hoja de coca y su efecto sobre las estructuras orales, los estudios son limitados. ™ Sobre la Mucosa Oral: El chacchador crónico mantiene el bolo de coca, durante un tiempo promedio de 6 horas diarias, habiéndose sugerido que la acción irritante y/o friccional de estas sustancias, causan a largo plazo, alteraciones en la mucosa oral 28 , tales como zonas blanquecinas, rugosas, agrietadas, paraqueratosis, acantosis, hiperqueratosis, leucoedema y leucoplasia.17, 27, 28 ™ Sobre los Dientes y Periodonto: Según la mayoría de estudios realizados, el desgaste dentario y la enfermedad periodontal tienden a incrementarse con el hábito del chacchado. Se cree que la primera de ellas es causada tanto por efectos físicos (abrasión) como químicos (erosión) y la segunda por el contacto de las sustancias usadas en el chacchado con las estructuras de soporte dentario, las cuales son debilitadas.1, 3 Pero ninguno de estos estudios tiene un sustento científico con respecto a la relación entre los componentes de la hoja de coca y la incidencia a caries. ________________________ 1. GOICOCHEA I., A.: Estudio de la cavidad bucal en los sujetos habituados a la masticación de hojas de coca 3. UNGARO, M.: Patología oral en masticadores de hojas de coca. 17. BORGHELLI, R.: Lesiones de la mucosa bucal por el uso de hojas de coca 27. HAMER, J. E : The effect of coca leaf chewing on de buccal mucosa of Aymara and Quechua Indians in Bolivia. 28. BERNAL, J.: Odontoestomatología y Precancerosis oral. 17   2.2.1.4 Composición Química de la Coca: La hoja de coca (anexo 04, 05, 06), depende de factores intrínsecos y extrínsecos. Entre los factores extrínsecos, se tiene a la ubicación geográfica, la forma en que ha sido cultivada la planta y el medio ambiente en el que se desarrolla la especie; como intrínsecos tenemos la edad de la especie vegetal. La hoja de coca también presenta en su composición química: Aceites esenciales y son los que le dan a las hoja de coca su aroma especial.10 Propiedades Nutricionales de la Hoja de Coca: Gracias a la investigación realizada por la Universidad de Harvard, en 1975, titulada “Valor nutricional de la hoja de coca”, se ha probado que la masticación diaria de 100 gramos de hojas de coca, satisface la ración alimentaría recomendada tanto para el hombre para la mujer. Su contenido en vitaminas y determinados oligoelementos hacen que al mismo tiempo el mate de coca constituya un complemento nutritivo de la dieta diaria. Estos mismos estudios de la Universidad de Harvard sostienen que en 100 gramos de coca se pueden tener casi dos gramos de potasio que son necesarios para el equilibrio del corazón y se le atribuyen además propiedades adelgazantes. Sabiendo que estos mates son tan ricas en estos nutrientes, se convierten en alimento y medicina. La concentración de cocaína en la hoja es muy baja, según investigaciones realizadas por médicos farmacólogos de la Universidad de Caldas, y por lo tanto, ingerida en forma natural, no produce toxicidad ni genera dependencia. Actúa como estimulante leve, mejora la atención y la coordinación de ideas. ___________________________ 10. CAM ALBUJAR, O. y VILLANUEVA VÍLCHEZ, P. Acción Inhibitoria in vitro del extracto acuoso y extracto metanólico de la hoja de Erythroxylumnovogranatense (Morris) var. truxillense (Rusby) frente a bacterias Gram (-) y Gram (+). Tesis de bachiller para Químico farmacéutico UNMSM. Lima, 1996 18   2.2.2 CLORHEXIDINA (Bucoxidina 0.12%) INTRODUCCIÓN La clorhexidina fue desarrollada en la década de los 40 por Imperial Chemical Industries en Inglaterra por científicos que realizaban un estudio sobre la malaria. En ese momento los investigadores fueron capaces de desarrollar un grupo de compuestos denominados polibiguanidas, que demostraron tener un amplio espectro antibacteriano y salió al mercado en 1954 como antiséptico para heridas de la piel. Posteriormente comenzó a usarse en medicina y cirugía tanto para el paciente como para el cirujano. En odontología se utilizó inicialmente para desinfección de la boca y endodoncia.29, 30 2.2.2.1 Concepto: La clorhexidina es un potente antiséptico del grupo de las biguanidas que actúa eficaz y rápidamente como bactericidas sobre microorganismos Gram. (+) y (-) 31 ,pero poco eficaz sobre bacterias acido resistentes hongos o virus. se utiliza para enjuagues bucales en el tratamiento de la gingivitis y de la enfermedad periodontal y tópicamente en la preparación de la piel del paciente antes de una operación quirúrgica, lavado de heridas, y tratamiento del acné vulgar. Otros usos de la clorhexidina incluyen la profilaxis y el tratamiento de las infecciones de boca, la estomatitis, la estomatitis ulcerativa y la gingivitis aguda ulcerativa necrotizante. ________________________ 29. BASCONES MARTÍNEZ A. Antisépticos en el tratamiento de la enfermedad periodontal. 30. MARISOL BETANCOURTH, Microorganismos inusuales en surcos y bolsas periodontales. 31. HERNÁN PÉREZ TORRES (2005) Farmacología Y Terapéutica Odontológica.. 19   2.2.2.2 Composición: Este compuesto es una base fuerte dicatiónica a pH superior a 3,5 con dos cargas positivas en cada extremo del puente de hexametileno. Es esta naturaleza dicatiónica la que la hace extremadamente interactiva con los aniones, lo que es relevante para su eficacia, seguridad, efectos secundarios locales y dificultad para formularla en productos.32 Cada 100 ml de solución contiene: Clorhexidina gluconato……………...0.12g. Excipientes csp……………………...100 ml. 2.2.2.3 Mecanismo de Acción: La clorhexidina desestabiliza y penetra las membranas de las células bacterianas. La clorhexidina precipita el citoplasma y interfiere con la función de la membrana, inhibiendo la utilización de oxígeno, lo que ocasiona una disminución de los niveles de ATP y la muerte celular. En las bacterias Gram-negativas, la clorhexidina afecta la membrana exterior permitiendo la liberación de las enzimas periplasmáticas. La membrana interna de estos microorganismos no es destruída, pero sí que es impedida la absorción de pequeñas moléculas. A bajas concentraciones, la clorhexidina exhibe un efecto bacteriostático, mientras que a altas concentraciones es bactericida. Los siguientes microorganismos muestran una alta susceptibilidad a la clorhexidina: Estreptococos, estafilococos, Cándida albicans, Escherichia coli, salmonellas, y bacterias anaeróbicas.32, 33 ________________________ 32. BUCOXIDINA (clorhexidina 0.12%) – colutorio, gianfarma s.a. 33. VADEMECUN FARMACOLOGICO PERUANO. Clorhexidina, 20   2.2.2.4 Reacciones Adversas Ocasionalmente se puede presentar alteración transitoria en el gusto, efecto cuya incidencia es reducida por la baja concentración de principio activo.33 2.2.2.5 Concentraciones: La clorhexidina suele presentarse en dos concentraciones, al 0,12% y al 0,2%, 0.4%.32, 33 2.2.2.6 Indicaciones y Dosificación: Colutorios: la clorhexidina para enjuagues orales se comercializa en envases que contienen un vasito o medida de unos 15 ml. Esta es la dosis que se debe mantener en la boca durante aproximadamente 1 minuto. 34 Clorhexidina para aplicación tópica: utilizar una gasa o algodón para tratar el área deseada. Evitar el contacto con los ojos, los oídos y la boca. Si esto ocurriera, enjuagar inmediatamente con agua abundante. La clorhexidina se debe mantener fuera de la luz, evitando temperaturas extremas. 33, 34 2.2.2.7 Contraindicaciones: Hipersensibilidad al gluconato de clorhexidina.33 2.2.2.8 Interacciones Aunque la clorhexidina se absorbe muy poco por el tracto digestivo puede haber una interacción potencial con el disulfiram, debido al contenido en alcohol de los enjuagues orales. La ingestión de alcohol en los pacientes tratados con disulfiram puede ocasionar serios efectos secundarios. Los pacientes tratados simultáneamente con metronidazol y clorhexidina pueden experimentar una reacción similar a la del disulfiram.33 ________________________ 32. BUCOXIDINA (clorhexidina 0.12%) – colutorio, gianfarma s.a. 33. VADEMECUN FARMACOLOGICO PERUANO. Clorhexidina. 34. DRA. MILEYDI. La clorhexidina, bases estructurales y aplicaciones en; la estomatología. 21   2.2.3 STAPHYLOCOCCUS AUREUS Y STREPTOCOCCUS MUTANS. 2.2.3.1 Generalidades: Ecología de la Boca La boca alberga innumerables microorganismos en un ecosistema de complejidad considerable que todavía no ha sido investigado en su totalidad y está lejos de ser comprendido en toda su magnitud. Hasta hace muy poco, la boca se consideraba como un hábitat simple para los microorganismos pero en la actualidad se reconoce que los dientes, el surco gingival, la lengua, otras superficies mucosas y la saliva, todos forman habitáis o sitios diferentes donde los microorganismos se multiplican. Cada zona o hábitat contiene su propia población característica, a menudo, con muchas especies microbianas distintas, las cuales pueden complementarse o competir con otras en la misma población, por tanto, la flora bucal es una entidad dinámica afectada por numerosos cambios durante la vida del huésped.35 _______________________ 35. JOSE LIÉBANA UREÑA. Microbiología Oral. 22   2.2.3.2 Staphylococcus Aureus Los estafilococos son células esféricas Gram positivas, generalmente dispuestas en racimos irregulares parecidos a racimos de uvas; crecen con rapidez sobre muchos tipos de medios y son metabolitamente activos, fermentan carbohidratos y producen pigmentos que varían desde el color blanco hasta amarillo intenso. Algunos son miembros de la flora normal de la piel y de las mucosas de los humanos; otros causan supuración, formación de abscesos, varias infecciones piógenas e incluso septicemia mortal. Los estafilococos patógenos casi siempre causan hemólisis y coagulación del plasma; y producen varias encimas y toxinas extracelulares.37 El tipo más común de envenenamiento alimentario es causado por una enterotoxina termoestable de los estafilococos. Estos desarrollan con rapidez resistencia a muchos antimicrobianos y presentan problemas terapéuticos difíciles.37 El genero staphylococcus contiene al menos 30 especies. Las tres de importancia clínica son staphylococcus aureus, staphylococcus epidermidis, staphylococcus saprophyticus. El primero es coagulasa – positivo que lo diferencia de las otras especies, el S. aureus es un patógeno importante para los humanos. Casi toda persona padece algún tipo de infección por S. aureus durante su vida, que varia en gravedad desde intoxicación alimentaría o infecciones cutáneas menores hasta infecciones graves potencialmente mortales.37 1. Características del Género: Los estafilococos son células esféricas de casi 0.5 a 1.5 um de diámetro 36 , dispuestas en grupos irregulares, en líquidos de cultivos también se observan cocos únicos en parejas, tétradas y cadenas. Los cocos jóvenes son fuertemente Gram positivos; después de envejecer muchas células se hacen Gram negativas 37 . Los cocos están desprovistos de motibilidad y no forman esporas. Bajo la influencia de fármacos los estafilococos sufren lisis 37 . En la actualidad este género comprende 35 especies o más y junto con otros géneros integra la familia de micrococcaceae 36 . Viven de manera libre en el ambiente y forman paquetes regulares de 4 u 8 cocos, sus colonias pueden ser de color amarillo, rojo o naranja 37. __________________________________ 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets. 23   2. Cultivo: Los estafilococos crecen con facilidad sobre casi todos los medios bacteriológicos en condiciones aeróbicas o microaerofilicas. Crecen con mayor rapidez a 37º C, pero el pigmento se forma mejor a temperatura ambiente (20 a 25 ºC), sobre medios sólidos las colonias son redondas, lisas prominentes o brillantes. El S. aureus comúnmente forma colonias de color gris o amarillo dorado intenso 37. 3. Características de Crecimiento: Los estafilococos producen catalasa que los diferencia de los estreptococos, fermentan latentemente muchos carbohidratos y producen acido láctico pero no gas. Los estafilococos son relativamente resistentes a la desecación al calor (resisten 50º C durante 30 min.) y al cloruro de sodio al 9%, pero se inhiben con facilidad mediante ciertas sustancias químicas, por ejemplo, hexaclorofeno al 3%. Los estafilococos muestran resistencia a muchos fármacos por la producción de beta lactamasa baja el control de un plasmido y confiere al microorganismo resistencia a muchas penicilinas 37. Composición Antigénica y Factores de Virulencia: Los estafilococos poseen un antígeno específico de especie, el polisacárido A, unido al mucopeptido, y por lo tanto, presenta en la pared celular. En dicha pared también se encuentra la proteína A, que se une a la región Fc. De la IgG, lo que le da actividad antifagocitica.36 El peptidoglucano de la pared, que actúa como una endotoxina, atrae leucocitos PMN y activa la lisozima.36 Los ácidos teitoicos favorecen la adhesión, al igual que la capa del limo o slime, constituida por hidratos de carbono y proteínas extracelulares. Esta capa facilita la adhesión e inhibe la quimiotaxis y la fagocitosis.36 ___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets. 24   Encimas y Toxinas Catalasa: Los estafilococos producen catalasa, que convierte el peroxido de hidrógeno en agua y oxigeno. La prueba de catalasa pude diferenciar los estafilococos que positivos, de los estreptococos, que son negativos.37 Coagulasa y Factor de Agrupamiento: Los S. aureus produce coagulasa, una proteína parecida a enzima que coagula. La coagulasa de une la con protronbina; juntas se vuelven activas desde el punto de vista enzimático e inician la polimerización de fibrina. La coagulasa puede depositar fibrina sobre la superficie de los estafilococos, alterando talvez su ingestión por células fagocíticas o su destrucción dentro de dichas células. Se considera que la producción de coagulasa es sinónimo de patógeno potencialmente invasor.37 Otras Enzimas: Otras enzimas producidas por los estafilococos incluyen una hialuronidasa, o factor de propagación; una estafilocinasa que produce fibrinolisis, pero actúa de manera mucho mas lenta en comparación con la estreptocinasa, la proteinasa, la lipasas, y la beta lactamasa.37 Exotoxinas: La hemolisina estafilococica o toxinas alfa, beta, Y, O, se diferencia por los tipos de eritrocitos que lisan. Estas toxinas también actúan sobre otras células 36: • Toxina alfa: daña el músculo liso, las células de la piel, los macrófagos y las plaquetas. • Toxina beta: degrada esfingomielina. • Toxina y: disuelve los eritrocitos de humanos y animales. • Toxinas o: toxina para muchas células polimorfonucleares, macrófagos, linfocitos y plaquetas. Leucocidina: esta toxina posee dos compuestos (F y S) que actuan en forma sinérgica para dañar PMN y macrófagos; si bien su mecanismo de acción no es muy claro, aparentemente parecería que consiste en alterar la permeabilidad de la membrana celular.36 ___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets. 25   Exfoliatina o Toxina Epidermolitica (Exotoxina): Hay dos tipos A y B; son codificadas por un plasmido y producen una lesión cutánea conocida como dermatitis aguda exfoliativa.36 Toxina del Síndrome de Shock Toxico (TSSS-I) o Toxina Pirogenica: Se trata de una toxina semejante a las que producen los estreptococos y se la considera un súper antígeno. Puede causar una erupción escarlatiniforme. No se la encuentra en todos los casos de shock séptico estafilococico (SSS).36 CUADROS CLINICOS 36 • Infecciones cutáneas: foliculitis, orzuela, impétigo • Síndrome del shock toxico: Ataca a mujer en la etapa de menstruación • Neumonía • Osteomielitis • Infecciones de heridas • Enteritis o enterocolitis • Infecciones odontológicas: Se han encontrado infecciones endodonticas, y algunos abscesos periapicales. La osteomielitis de huesos maxilares, parotiditis, manifestaciones gingivales, periodontitis y estomatitis. ___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets. 26   2.2.3.3 Streptococcus Mutans Los estreptococos son bacterias esféricas Gram positivas que por lo general forman pares de cadenas durante su crecimiento. Se distribuyen ampliamente en la naturaleza. Algunos son miembros de la flora humana normal; otros se asocian con enfermedades humanas importantes atribuibles en parte a infección por estreptococos y en parte a sensibilización a ellos. Elaboran varias sustancias extracelulares y enzimas.37 Los estreptococos son un grupo heterogéneo de bacterias y no hay un sistema apropiado para clasificarlos.37 Morfología e Identificación 1. Características del Género Los estreptococos son microorganismos sumamente difundidos y, la cavidad bucal alberga gran número de especies de este género 36 . Los estreptococos tienen formas esféricas u ovoides y se disponen en cadenas, se agrupan en cadenas de longitud variable. Cada uno de los elementos aisladamente tiene un diámetro que oscila entre 0.6 y 1 a 2 um 36 . Los miembros de esta cadena con frecuencia presentan una aspecto de diplococos. Los estreptococos son Gram positivos, sin embargo, conforme un cultivo envejece y las bacterias mueren, pierden su Gram positividad y se tornan Gram negativos; esto puede ocurrir después de incubación durante una noche.37 Algunos estreptococos elaboran un polisacárido capsular. La mayor parte de las cepas de los grupos A, B y C producen capsulas compuestos de acido hialuronico. Las capsulas son mas notables es los cultivos jóvenes. Impiden la fagocitosis. La pared de la célula estreptocócica contiene proteínas (antígenos M, T, R), carbohidratos (específicos del grupo) y peptidoglucanos. Los Pili semejantes a vellosidades se prolongan a través de la capsula de los estreptococos del grupo A. los Pili contienen parte proteína M y están cubiertos de acido lipoteicoico. Este último es importante para la adhesión de los estreptococos a otras células epiteliales.37 ___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets. 27   2. Clasificación de los Estreptococos: Las clasificaciones que se han propuesto para estas bacterias son innumerables y se basan en sus distintas características; las más actuales tienen encuesta la biología molecular.37 Según la doctora lancefield (1933), ubico a estas bacterias en grupos identificados con letras. Estas son 37: Grupo A: S. pyogenes. Beta hemolítico Grupo B: S. agalactia. Beta hemolítico. Grupo D: enterococcus faecalis (y otros enterococos). Alfa hemolítico y no hemolítico. Grupo C, G: S. dysgalalactiae. Alfa y beta hemolítico. Grupo D: S. Bovis. No hemolíticos Grupo F (A, C, G) y no tipicables: S. anginosus (S. intermedius, constellatus, millen). Alfa y beta hemolíticos y no hemolíticos No tipificados: S. viridans (S. mutans). Alfa hemolíticos y no hemolíticos. Sin grupo: S. pneumoniae. Alfa hemolíticos Sin grupo: peptostreptococcus (muchas especies). Alfa hemolíticos y no hemolíticos. Factores de Virulencia Los mayores factores de virulencia son los anfígenos de superficie. La llamada proteína M se comporta como un factor antifagicitico (hay mas de 80 tipos de proteína M), esta proteína contribuye a la adhesión y, por lo tanto a la colonización.36 Existen dos proteínas útiles para la identificación, la T (tripsina –resistente) y la R, pero hasta el momento no a demostrado que confiera virulencia al microorganismo.36 Las fimbrias de los estreptococos, que desempeñan un papel en la adherencia, están recubiertas por proteína M y acido teitoico. 36 La secreción de una capsula de acido hialuronico les confiere cierto poder antifagocitico.36 ___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets. 28   El acido lipoteitoico también actúa como un factor de adherencia y se une la fibronectina de las células del hospedero. Se ha detectado una proteína F estreptocócica de unión a la fibronectina que genera una unión mas firme que la del acido lipoteitoico.36 Enzimas y Toxinas Que no son muy específicas de cada una. Casi todas producen 37: • Exotoxina Pirogenica Estreptocócica o Toxina Eritrogenica: Esta toxina que es excretada por la cepas que se encuentran en estado lisogénico, es responsable citotoxicidad, erupción escarlatina y pirogenicidad, inmunosupresion y alteraciones de la permeabilidad de las células de la corteza cerebral.36 • Estreptolisina O: Que se llama así por su labilidad frente al oxigeno y que es segregado por los estreptococos del grupo A y por algunos del grupo C y G, conduce ala lisis de os glóbulos rojos, y es citotóxica para los neutrofilos, las plaquetas y las células del tejido cardiaco. Se inactiva con el oxigeno, de ahí la letra que lo identifica.36 • Estreptolisina S: Que debe su nombre a que la producen algunas cepas en presencia de suero, sirve para identificar a los estreptococos en agrar sangre, tiene acción lítica para los leucocitos pero no es un antígeno.36 • Estreptocinasa (Fibrinolisina): Es una proteína natural antigénica que secretan los estreptococos del grupo A, C y G. esta proteína digiere la fibrina y así impide la formación de una barrera de esta sustancia por lo que favorece la diseminación.36 • Desoxirribonucleasa: Hay 4 tipos de esta enzima presentes en los de los grupos A, C y G. las desoxirribunucleasas hidrolizan ácidos nucleicos y nucleoproteínas que utilizan como nutrientes. Al reducir la viscosidad del pus, facilitan la diseminación de la infección.36 ___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 37. GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets. 29   • Hialuronidasa: Que es producida por los grupos A, B, C y G, favorece la disfunción en los tejidos y por eso también se le conoce como factor de disfunción.36 • NADasa: Se relaciona al efecto leucotoxico y es producido por los estreptococos del grupo A, C y G.36 • Lipoproteinaza o Factor de Opacidad del Suero: Esta enzima es característica del grupo A tipo M; la lipoproteinaza esta relacionada con la proteína M, es antigénica y sirve para identificar a los estreptococos. Los estreptococos del grupo A también pueden segregar C5a peptidasa; esta enzima inactiva al componente C5a del complemento que impide que se una a los PMN y altera la efectividad de este elemento de defensa.36 Fuentes De Infección Boca (presente en la saliva), colonizan el tracto gastrointestinal, la vagina, el aparato respiratorio superior.36 CUADROS CLÍNICOS 36 • Erisipela (puede conllevar a una celulitis de la zona) • Fiebre Puerperal (posparto) • Sepsis (en heridas y politraumatizados) • Faringitis • Impétigo o Piodermia (en niños) • Facitis Necrotizante • Miositis • Sd. de Shock Estreptocócico (Px. HIV) ___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 30   Enfermedades Pos-Estreptocócicas: 36 • Fiebre reumática • Glomerulonefritis En Odontología: 36 • Lengua afranbuesada • Palidez peribucal • Abscesos • Caries dental ___________________________ 36. MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. 31   2.4 DEFINICION DE TERMINOS o Microorganismos: También llamado microbio, es un ser vivo que sólo puede visualizarse con el microscopio.42 o Antibacteriano: Relativo a una sustancia que destruye las bacterias o inhibe su crecimiento y reproducción.42 o Bactericida: Que mata las bacterias./ Poder bactericida: La más débil concentración de una sustancia capaz de provocar la destrucción definitiva de la vitalidad de un microbio.42 o Bacteriostático: Concentración mínima de una sustancia capaz de impedir el desarrollo de una bacteria sin llegar a destruirla.42 o Grampositivo: Que conservan el color violeta de la tinción que se utiliza en el método de Gram. para teñir microorganismos.42 o Gramnegativo: que posee la coloración rosada de la contra tinción que se utiliza en el método de Gram. para teñir microorganismos.42 o Carbohidrato: Grupo de compuestos orgánicos entre los que se hallan la glucosa, la fructuosa, el almidón, la celulosa y la goma.42 o Pigmentos: Cualquier material colorante orgánico producido en el organismo, como la melanina.42 o Enzimas: Proteína producida por las células vivas que cataliza las reacciones químicas en la materia orgánica.42 o Toxinas: Veneno o toxico, generalmente producido por una planta o microorganismo.42 32   o Coagulasa: Enzima producida por bacterias en especial staphylococcus aureus, que desencadena la coagulación.42 o Lisis: Sufijo que significa degradación o destrucción.42 o Aeróbio: Microorganismo que vive y crece en presencia de oxigeno libre. Los aerobios se dividen en aerobios facultativos y aerobios obligados.42 o Proteína: Compuesto nitrogenado natural de carácter organico complejo, constituido por muchos aminoácidos.42 o IgG.: Uno de los 5 tipos de anticuerpos hormonales producido por el organismo. Es una proteína especializada que se sintetiza como respuesta a la invasión de bacterias, hongos y virus.42 o Quimiotaxis: respuesta que supone un movimiento positivo, hacia un estimulo químico, o negativo alejándose del mismo.42 o Fagocitosis: Proceso por el cual determinadas células engullen y desechan microorganismos y detritus celulares.42 o Protrombina: Proteína plasmática precursora de la trombina. La transformación de protrombina en trombina para la formación de coagulo.42 o Fibrina: Proteina filamentosa insoluble que proporciona su carácter semisólido al coagulo sanguíneo y esta producida por la acción de la trombina sobre el fibrinogeno en el proceso de la coagulación.42 o Patógeno: Cualquier microorganismo capaz de producir una enfermedad.42 o Virulencia: capacidad de un microorganismo para producir una enfermedad.42 33   o Hialuronidasa: Enzima que hidroliza el acido hialuronico.42 o Eficacia: Es la capacidad de lograr un efecto deseado o esperado.42 o Necrotizante: Muerte de una porción de tejido consecutiva a enfermedad o lesión.42 o Interacción: Modificación del efecto de un fármaco que se produce cuando este se administra con otro. El efecto puede consistir en el aumento o disminución de la acción42. 34   2.5 HIPÓTESIS: Hipótesis de Investigación La eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja coca es mayor que la eficacia de la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de Staphylococos Aureus y estreptococos mutans. Hipótesis Nula La eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja coca a las concentraciones de 250 ug / 20ul, 500 ug / 20ul, 1000 ug / 20ul, 1500ug / 20ul, no es mayor que la eficacia de la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. Hipótesis Alterna La eficacia antibacteriana in Vitro del extracto de hoja coca a las concentraciones de 250 ug / 20ul, 500 ug / 20ul, 1000 ug / 20ul, 1500ug / 20ul, es igual que la eficacia de la clorhexidina al 0.12% en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. 2.6 IDENTIFICACION DE VARIABLES 2.6.1 Variables Independiente Concentración del extracto alcohólico de la hoja de coca y clorhexidina 0.12%. 2.6.2 Variable Dependiente Eficacia antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca. 35   2.6 OPERACIONALIZACION DE VARIABLES Variable Definición Indicadores Independiente Escala Categoría Numérica De Razón Numérica De Razón Numérica De Razón 250µg/ 20µl. Concentración del extracto alcohólico de la hoja de coca y clorhexidina. Cantidad del extracto alcohólico de la hoja de coca contenidos en un volumen determinado de agua destilada y alcohol rectificado al 80º y clorhexidina al 0.12% 500µg/ 20µl. 1000µg/ 20µl. Numérica De Razón 1500µg/ 20µl. 0.12% Numérica De Razón Numérica De Razón Dependiente Eficacia antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de coca. Es la inhibición en el desarrollo o crecimiento de las bacterias debido a la presencia del extracto alcohólico de Hoja de coca. 8 mm. resistencia 11 mm. sensible 36   CAPITULO III METODOLOGIA 3.1 TIPO DE ESTUDIO La presente investigación se realizó con un diseño de tipo experimental y longitudinal. 3.1.1 Tipo De Investigación Según el propósito: Aplicativa Según la ocurrencia de hechos: prospectivo Según el periodo y secuencia: longitudinal Según el análisis y la secuencia: experimental Según la participación del investigador: Participativo 3.1.2 Método Comparativo 37   3.1.3 Nivel De Estudio Experimental 3.2 POBLACIÓN Y MUESTRA 3.2.1 Población 20 Cepas staphylococcus aureus y 20 cepas streptococcus mutans.de diferentes espécimen clínicos, adquiridos del banco de bacterias del laboratorio del H.R.H.V.M. 3.2.2 Muestra Muestreo no probabilístico, intencional por conveniencia (al azar). CRITERIOS DE INCLUSION Y EXCLUSION • Criterios de inclusión: Cepas que pertenezcan al genero staphylococcus aureus y streptococcus mutans. • Criterios de exclusión: Cepas que no pertenezcan al genero staphylococcus aureus y streptococcus mutans. Unidad maestral: • Cepas de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. Unidad de análisis: • Cultivos bacterianos de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. Diseño experimental G1 O1 X1 O2 G2 O3 X2 O4 G3 O5 X3 O6 G4 O17 X4 O8 G5 O9 X5 O10 38   G1 Muestra de estudio recibirá tratamiento con 250µg/ 20µl de extracto alcohólico de hoja de coca. G2 Muestra de estudio recibirá tratamiento con 500µg/ 20µl de extracto alcohólico de hoja de coca. G3 Muestra de estudio recibirá tratamiento con 1000µg/ 20µl de extracto alcohólico de hoja de coca. G4 Muestra de estudio recibirá tratamiento con 1500µg/ 20µl de extracto alcohólico de hoja de coca. G5 muestra de estudio recibirá tratamiento con 0.12% de clorhexidina. 3.3 TÉCNICA DE RECOLECCIÓN DE DATOS INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS • Protocolo de trabajo • Guía de observación. Para detallar la medición de halos bajo la inspección clínica Procedimiento para la extracción de los principios activos totales El medio de extracción utilizado es el método de maceración alcohólica. En un envase de vidrio estéril (2 litros de capacidad) forrado con papel aluminio, se coloco en su interior ¼ kg de hojas de erythroxylum lambran (coca) previamente cortada, luego se añadio el alcohol rectificado al 80º, se dejo reposar por 7 días (se agito la botella 3 veces al dia). Luego se filtro el macerado de hoja de coca a través de un papel estéril y el líquido obtenido se evaporo en un horno al vacio en 40º, para poder obtener los principios activos totales de la hoja de erythroxylum lambran (coca de Huanuco). El insumo de hoja de coca obtenido se diluyó en agua destilada, luego fue impregnado en discos de papel filtro con las diferentes concentraciones, para simular discos de sensibilidad. “Ejemplo: 250µg (microgramos), diluido en 20µl (microlitros) de agua destilada 39   Técnica de Observación Directa. • Examen De Laboratorio Con las cepas proporcionadas por el del laboratorio del H.R.H.V.M., se procedio a realizar el antibiograma en el agar Muller Hinton en el cual se coloco los discos de sensibilidad preparados con las distintas concentraciones del extracto alcohólico de la hoja de coca y con la clorhexidina. Los que se incubaron a 37°C por 24 y 48 horas. Medición del halo inhibición Las muestras son evaluadas en las primeras, 24 horas, 48 horas, periodo en cual se realiza las mediciones correctamente estipuladas de los halos de inhibición con una regla flexible milimetrada para determinar con una escala categórica de sensible halo > 11 mm , resistente halo <8mm. 3.4 PLAN DE TABULACIÓN Y ANÁLISIS DE DATOS Procesamiento de Datos El proceso de recolección de datos se realizo mediante la aplicación una guía de observación de campo. El procesamiento de datos se realizo de manera automatizada empleando una computadora utilizando el siguiente software: • Procesador de texto Microsoft Word XP. • Programa de Análisis Estadístico SPSS 15. Análisis de Datos Prueba U de Mann-Whitney (prueba no paramétrica) 40   CAPITULO IV RESULTADOS 4.1 RESULTADOS DE LAS OBSERVACIONES 4.1.1 MUESTRA La muestra de estudio lo constituye 20 cepas de staphylococcus aureus y 20 cepas de streptococcus mutans de diferentes especimenes clínicos, adquiridos del Banco de bacterias del Laboratorio del Hospitar Regional Hermilio Valdizan Medrano de Huánuco. 4.1.2 RESULTADOS Las observaciones se realizaron en cada una de las muestras indicadas anteriormente. El tratamiento consistió en la aplicación de dos diferentes concentraciones del extracto seco obtenido por extracción alcoholica; el cual luego se diluyó en agua destilada en las siguientes concentraciones: 1000 µg/20 µl y 1500 µg/20 µl. Comparándolo con un antibiótico convencional como clorhexidina al 0.12 %; observándose el tamaño de los halos como medida de la inhibición bacteriana ante el extracto de coca y el del antibiótico. Los resultados se presentan en las tablas 1 y 2 respectívamente 41   Tabla 1: Diámetros de los halos de inhibición obtenidos al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre staphylococcus Aureus. ANTIBIOGRAMA Staphylococcus Aureus Cultivo #01 24 horas Cultivo #01 48 horas Cultivo #02 24 horas Cultivo #02 48 horas Cultivo #03 24 horas Cultivo #03 48 horas Cultivo #04 24 horas Cultivo #04 48 horas Cultivo #05 24 horas Cultivo #05 48 horas Cultivo #06 24 horas Cultivo #06 48 horas Cultivo #07 24 horas Cultivo #07 48 horas Cultivo #08 24 horas Cultivo #08 48 horas Cultivo #09 24 horas Cultivo #09 48 horas Cultivo #10 24 horas Cultivo #10 48 horas Cultivo #11 24 horas Cultivo #11 48 horas Cultivo #12 24 horas Cultivo #12 48 horas Cultivo #13 24 horas Cultivo #13 48 horas Cultivo #14 24 horas Cultivo #14 48 horas Cultivo #15 24 horas Cultivo #15 48 horas Cultivo #16 24 horas Cultivo #16 48 horas Cultivo #17 24 horas Cultivo #17 48 horas Cultivo #18 24 horas Cultivo #18 48 horas Cultivo #19 24 horas Cultivo #19 48 horas Cultivo #20 24 horas Cultivo #20 48 horas Concentración del Extracto Alcohólico de la Hoja Clorhexidina de Coca 250µg/20µl 500µg/20µl 1000µg/20µl 1500µg/20µl 0.12% - 10mm 10mm 8mm 7mm 7mm 8mm 8mm 10mm 10mm 8mm 8mm - 42 10mm 10mm 10mm 11mm 11mm 11mm 15mm 15mm 13mm 15mm 10mm 11mm 10mm 10mm 11mm 11mm 11mm 11mm 11mm 11mm 10mm 10mm 12mm 13mm 10mm 11mm 11mm 11mm 15mm 15mm 14mm 14mm 10mm 12mm 10mm 10mm 13mm 13mm 14mm 15mm 12mm 13mm 12mm 12mm 12mm 12mm 17mm 17mm 18mm 18mm 13mm 13mm 15mm 15mm 12mm 12mm 13mm 13mm 12mm 12mm 15mm 15mm 14mm 14mm 12mm 12mm 12mm 12mm 15mm 15mm 17mm 17mm 13mm 14mm 12mm 12mm 15mm 15mm 15mm 15mm 15mm 15mm 20mm 20mm 23mm 23mm 23mm 23mm 15mm 15mm 24mm 24mm 20mm 20mm 15mm 15mm 17mm 17mm 15mm 15mm 18mm 18mm 15mm 15mm 20mm 20mm 20mm 20mm 18mm 18mm 22mm 22mm 20mm 20mm 25mm 25mm 25mm 25mm 25mm 25mm   Tabla 2: Diámetros de los halos de inhibición obtenidos al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre Streptococcus Mutans ANTIBIOGRAMA Streptococcus Mutans Cultivo #01 24 horas Cultivo #01 48 horas Cultivo #02 24 horas Cultivo #02 48 horas Cultivo #03 24 horas Cultivo #03 48 horas Cultivo #04 24 horas Cultivo #04 48 horas Cultivo #05 24 horas Cultivo #05 48 horas Cultivo #06 24 horas Cultivo #06 48 horas Cultivo #07 24 horas Cultivo #07 48 horas Cultivo #08 24 horas Cultivo #08 48 horas Cultivo #09 24 horas Cultivo #09 48 horas Cultivo #10 24 horas Cultivo #10 48 horas Cultivo #11 24 horas Cultivo #11 48 horas Cultivo #12 24 horas Cultivo #12 48 horas Cultivo #13 24 horas Cultivo #13 48 horas Cultivo #14 24 horas Cultivo #14 48 horas Cultivo #15 24 horas Cultivo #15 48 horas Cultivo #16 24 horas Cultivo #16 48 horas Cultivo #17 24 horas Cultivo #17 48 horas Cultivo #18 24 horas Cultivo #18 48 horas Cultivo #19 24 horas Cultivo #19 48 horas Cultivo #20 24 horas Cultivo #20 48 horas Concentración del Extracto Alcohólico de la Hoja de Clorhexidin Coca a 250µg/20µl 500µg/20µl 1000µg/20µl 1500µg/20µl 0.12% 15mm 17mm 23mm 15mm 17mm 23mm 10mm 15mm 20mm 25mm 10mm 15mm 20mm 25mm 10mm 20mm 15mm 10mm 20mm 15mm 10mm 16mm 20mm 10mm 16mm 20mm 10mm 15mm 17mm 11mm 15mm 17mm 12mm 14mm 20mm 12mm 14mm 20mm 8mm 11mm 16mm 15mm 8mm 11mm 16mm 15mm 8mm 10mm 15mm 17mm 8mm 11mm 15mm 17mm 9mm 12mm 15mm 15mm 9mm 13mm 15mm 15mm 12mm 15mm 20mm 12mm 15mm 20mm 11mm 13mm 20mm 11mm 13mm 20mm 15mm 18mm 22mm 15mm 18mm 22mm 10mm 14mm 20mm 10mm 14mm 20mm 14mm 15mm 19mm 15mm 15mm 19mm 15mm 15mm 23mm 15mm 16mm 23mm 10mm 12mm 16mm 20mm 10mm 12mm 16mm 20mm 12mm 14mm 20mm 12mm 14mm 20mm 13mm 15mm 25mm 13mm 15mm 25mm 10mm 11mm 13mm 20mm 10mm 11mm 13mm 20mm 15mm 18mm 22mm 15mm 18mm 22mm 43   4.2 PRUEBA DE HIPÓTESIS La hipótesis de investigación plantea la eficacia antibacteriana del extracto de coca, comparándola con un antibiótico convencional como la clorhexidina al 0.12 %, en el tratamiento de staphylococcus Aureus y de Streptococcus Mutans. En primer lugar vamos a probar que el tratamiento con una concentración de extracto de coca de 1500 µg/20µl es superior al de 1000 µg/20µl. En la siguiente tabla se comparan los datos del halo obtenido con las dos concentraciones del extracto de coca. Tabla 3: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca sobre staphylococus aureus medido después de 24 horas Concentración del extracto de coca Cultivo Nº 1000 µg/20 µl 1500 µg/20 µl 1 10 12 2 10 12 3 11 12 4 15 17 5 13 18 6 10 13 7 10 15 8 11 12 9 11 13 10 11 12 11 10 15 12 12 14 13 10 12 14 11 12 15 15 15 16 14 17 17 10 13 18 10 12 19 13 15 20 14 15 44   El planteamiento de nuestra hipótesis lo realizamos utilizando una prueba estadística no paramétrica que es la U de Mann-Whitney, en previsión a la no normalidad de los datos 1. Hipótesis nula: No hay diferencias entre los dos tratamientos con el extracto de coca. Lo planteamos matemáticamente por Ho: µ1000, 24 hr = µ1500, 24 hr. 2. HA: µ1500, 24 hr.> µ1000, 24 hr (La concentración a 1500 es superior a la de 1000) 3. α = 0.05 (nivel de significación) 4. Estadística U de Mann Whitney, se utiliza para probar la hipótesis nula de dos muestras independientes, asumiendo que los datos no son normalmente distribuidos. 5. Utilizaremos el programa SPSS 15. Los resultados del procesamiento de los datos se dan a continuación: La U de Mann Whitney es el más pequeño de los valores calculado para los 2 grupos. En este caso es de 68.5. De tablas se obtiene para n=19, m=19 y α=0.05 prueba de una cola wα=123. Puesto que 68.5<123; se rechaza la hipótesis nula. Además el valor de Asymp. Sig (una cola), que es la probabilidad extrema es de 0.005<0.05; por lo que también se rechaza la hipótesis nula y se conviene que el tratamiento con una concentración de 1500 µg/20 µl, es más eficaz que con 1000 µg/20 µl. Tabla 4: Salida del SPSS para los datos de la tabla 3 HALO U de MannWhitney W de Wilcoxon Z Sig. asintót. (bilateral) Sig. exacta [2*(Sig. unilateral)] 68.500 258.500 -3.317 .001 .001(a) a No corregidos para los empates. b Variable de agrupación: CONCENT 45   La contrastación de los datos a 48 horas de tratamiento prácticamente arrojaría el mismo resultado, ya que no se observan cambios en el halo después de 24 horas. Por lo tanto utilizaremos la concentración de coca de 1500 µg/20 µl y tiempo de tratamiento de 24 horas para probar la hipótesis de que es equivalente al tratamiento con clorhexidina al 0.12 %. A continuación se presenta en las siguientes tablas el diámetro de halo obtenido con extracto acuoso de coca versus clorhexidina al 0.12 % sobre staphylococus aureus, así como sobre Streptococcus Mutans, medido después de 24 horas de aplicación. Tabla 5: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre staphylococus aureus, medido después de 24 horas Cultivo Nº 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Diametro del halo obtenido (mm) aplicando los siguientes tratamientos Extracto acuoso Clorhexidina de coca, 1500 µg/20µL al 0.12 % 17 23 20 25 20 15 16 20 15 17 14 20 16 15 15 17 15 15 15 20 13 20 18 22 14 20 15 19 15 23 16 20 14 20 15 25 13 20 18 22 46   Tabla 6: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre streptococcus mutans, medido después de 24 horas Cultivo Nº 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Diametro del halo obtenido (mm) aplicando los siguientes tratamientos Extracto acuoso Clorhexidina de coca, 1500 µg/20µL al 0.12 % 17 23 20 25 20 15 16 20 15 17 14 20 16 15 15 17 15 15 15 20 13 20 18 22 14 20 15 19 15 23 16 20 14 20 15 25 13 20 18 22 47   Gráfico 1: Histograma del diametro del halo de staphylococcus aureus aplicando clorhexidina al 0.12 % 10 Frecuencia 8 6 4 2 0 15,00 17,50 20,00 22,50 25,00 Media =19,90 Desviación típica =2,989 N =20 diámetro del halo en mm La distribución de tamaños observada en el gráfico no es normal, observamos una concentración de los diámetros entre 19 a 21 mm, los datos no son simétricos más bien están concentrados al lado negativo de la distribución, es decir se tiene una gráfica con asimetría negativa. Esto significa que la mayoría de tamaños alcanzados serán superiores a 19 mm en el caso de clorhexidina. El gráfico 2 nos muestra la distribución de tamaños del halo en el caso de utilizar un extracto de coca sobre staphylococus aureus 48   Gráfico 2: histograma del diámetro del halo de staphylococus aureus aplicando extracto de coca Histograma 10 Frecuencia 8 6 4 2 0 12,00 14,00 16,00 18,00 20,00 22,00 Media =15,70 Desviación típica =2,003 N =20 diametro del halo, mm Nuevamente se observa que la distribución de tamaños difiere de la normal, observándose que la mayoría de los diámetros se concentra en tamaños que oscilan entre 14 y 16 mm; con una concentración de datos entre 13 y 17 mm, teniendo la distribución una asimetría positiva. La observación de los datos nos inducen a sostener que la eficacia de la clorhexina es superior al del extracto de coca; para probarlo utilizaremos nuevamente la prueba estadística no paramétrica U de Mann Whitney. 1. Ho : µdiametros clorhexidina = µdiámetros coca 2. HA: µdiámetros clorhexidina> µdiámetros coca 3. Nivel de significación α= 0.05 4. Estadística de prueba: U de Mann Whitney 5. Cálculos obtenidos por el SPSS 15 49   Tabla 7: salida SPSS de la prueba estadística para staphylococus aureus DIAMET RO 53.500 263.500 -4.029 .000 U de Mann-Whitney W de Wilcoxon Z Sig. asintót. (bilateral) Sig. exacta [2*(Sig. .000(a) unilateral)] a No corregidos para los empates. b Variable de agrupación: CULTIVO Siendo la significación asintótica bilateral 0.00<0.05; concluimos con un nivel de significancia del 0.05; que la media de los diámetro obtenidos con clorhexidina es mejor que la obtenida con extracto de coca aplicado a stapylococus aureus; lo que confirma la distribución de los datos. En el diagrama de cajas que se presenta a continuación se puede confirmar esta conclusión. Gráfico 3: diagrama de cajas de los diámetros del halo para staphylococcus aureus 24,00 DIAMETRO 22,00 23 20,00 22 18,00 16,00 14,00 12,00 CLORHEX COCA CULTIVO La mediana del halo para clorhexidina es de 20mm y para coca es de 15 mm; con clorhexidina el 50 % de los datos oscila entre 18 y 22 mm y en el caso de coca los datos 50   están entre 14 y 17 mm. Nuevamente se puede confirmar la ganancia en eficacia de la clorhexidina, pero también se debe percibir la eficacia como tratamiento aunque en menor cuantía del extracto de coca. En el caso del tratamiento sobre streptococcus mutans, los datos que se presentan a continuación comparan la eficacia entre el tratamiento con clorhexidina al 0.12 % y extracto de coca de 1500 µg/20 µl, por medición del halo en mm, donde un tamaño mayor del halo representa mejor eficacia de tratamiento. Los datos para 24 horas después de su aplicación son los siguientes: Tabla 8: Tamaño del halo obtenido (mm) al aplicar extracto de coca y clorhexidina sobre streptococcus mutans, medido después de 24 horas Cultivo Nº 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Diametro del halo obtenido (mm) aplicando los siguientes tratamientos Extracto acuoso de coca, Clorhexidina 1500 µg/20µL al 0.12 % 17 23 20 25 20 15 16 20 15 17 14 20 16 15 15 17 15 15 15 20 13 20 18 22 14 20 15 19 15 23 16 20 14 20 15 25 13 20 18 22 51   Gráfico 4: histograma del diámetro del halo de streptococcus mutans Aplicando extracto de coca STRPCOC 10 Frecuencia 8 6 4 2 0 12,00 13,00 14,00 15,00 16,00 17,00 18,00 19,00 20,00 21,00 22,00 Media =15,70 Desviación típica =2,003 N =20 STRPCOC Gráfico 5: histograma del diámetro del halo de streptococcus mutans Aplicando clorhexidina STRPCLR 10 Frecuencia 8 6 4 2 0 15,00 17,50 20,00 22,50 25,00 Media =19,90 Desviación típica =2,989 N =20 STRPCLR 52   En el gráfico de cajas podemos observar el comportamiento de los datos. Gráfico 4: Diagrama de cajas del diámetro del halo para streptoccus mutans 24 DIAMETRO 22 23 20 22 18 16 14 12 CLORHEX COCA CULTIVO Los histogramas obtenidos nos confirman la no normalidad de los datos, siendo más bien asimétrico positivo en el caso de coca y streptococcus; y en el caso de clorhexidina nos presenta una ligera asimetría negativa. Nuevamente se observa que los diámetros obtenidos con clorhexina son superiores a los obtenidos con el extracto de coca. Los tamaños para el intervalo entre el percentil 25 y el percentil 75 para la clorhexina es de 18 a 22 mm, teniendo una mediana de 20 mm. Para la coca oscila entre 14.5 a 16.5, con una mediana de 15 mm. De modo que nuevamente se determina que que el tratamiento con clorhexina es superior al obtenido con extracto de coca a esa concentración. La prueba estadística no paramétrica U de Mann Whitney se proporciona en la siguiente tabla: 53   Tabla 9: salida SPSS de la prueba estadística para streptococcus mutans U de Mann-Whitney W de Wilcoxon Z Sig. asintót. (bilateral) Sig. exacta [2*(Sig. unilateral)] DIAMETRO 53.500 263.500 -4.029 .000 .000(a) Nuevamente la probabilidad extrema es 0.00 < 0.05; lo que nos indica que el diámetro medio obtenido con clorhexidina es superior al obtenido con el extracto de coca. Si consideramos que la eficacia de la clorhexidina es del 100%, siendo su mediana 20 mm; entonces la coca con una mediana de 15mm, tendría una eficacia de 75 % en el caso de streptococcus mutans y en el caso de staphylococcus aureus la efectividad es también de 75 %. Del análisis de los datos se concluye que la clorhexidina es más eficaz que la coca para el tratamiento de 2 bacterias, pero que la coca representa el 75 % de la eficacia del antibiótico. CONCLUSIONES DE LA PRUEBA DE HIPÓTESIS 1. El aumento de la concentración de extracto de coca aumenta la eficacia del tratamiento; por ejemplo se ha demostrado que el tratamiento con 1500 µg/20 µL; es mejor que con 1000 µg/20µL. 2. El tratamiento de staphylococcus aureus con clorhexidina al 0.12 % resulta más eficaz, que con extracto de coca de 1500 µg/20µL(7.5%); donde el extracto de coca tiene una eficacia del 75 % con respecto a la clorhexidina. 3. El tratamiento de streptococcus aureus con clorhexidina al 0.12 % es más eficaz que con extracto de coca de 1500 µg/20µL(7.5%); pero el extracto de coca también tiene una eficacia del 75 % con respecto a la clorhexidina. 54   DISCUSIÓN En la presente investigación se busco evaluar si el extracto de la hoja de Erythroxylum lambran ejercía una eficacia antibacteriana en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans de la flora oralen comparación con la clorhexidina al 0.12% normalmente utilizado como colutorio, lo cual quedó demostrado, la existencia de un efecto de inhibición de desarrollo bacteriano del extracto estudiado, según los resultados obtenidos; pero no demuestra superioridad para con los resultados obtenidos con la clorexidina a además se encontró diferencias significativas (según los análisis estadísticos) con respecto al tamaño de los halos de inhibición en las distintas concentraciones utilizadas del extracto de Erythroxylum lambran (coca de Huanuco). Los resultados indican que existe una accion antibacteriana del extracto de la hoja Erythroxylum lambran, lo cual da sustento a otras investigaciones realizadas en chacchadores de coca, como son los trabajos de investigación de Goicochea1, Ayala2, Coronel4, Navarro5 y Pando6, quienes obtuvieron como resultados una disminución en la prevalencía e incidencia de caries en sus grupos poblacionales que tenían el habito del chacchado. Además en los resultados de Coronel4, Pando6 y Flores13 sobre la enfermedad periodontal en personas que presentan el hábito de chacchado de hoja de coca, se observa una tendencia de aumento en la prevalencia de enfermedad periodontal . Existen estudios que tratan sobre las propiedades antibacterianas del extracto de Erythroxylum lambran como en el caso de Castro y Chávez9, Mertz y Reyes11, por el contrario si hay estudios sobre el mismo genero de la planta pero distinta especie como en el caso de investigaciones de Can y Villanueva10, Solano12, Gálvez14 los cuales obtienen resultados positivos del efecto antibacteriano del Erythroxylum Novogranatense var. truxillense en distintos agentes microbianos como son respectivamente bacterias Gram (-) y Gram (+), Stretococcus de la cavidad bucal, bacterias Gram (-) resistentes. Aguilar y Encarnación8, Castro y Chávez9, Mertz y Reyes11 basaron sus estudios sobre el efecto bacteriano sobre el mate de coca de Erythroxylum coca Lambran-Erythroxylum Novogranatense var. truxillense sobre agentes microbianos como Mycobacterium 55   tuberculosis, uropatógenos Gram (-) multiresistentes, enterobacterias, obteniéndose resultados positivos con respecto al efecto antibacteriano del mate de coca estudiado por los autores antes mencionados. Por los tanto, se observa que los distintos estudios observados se obtiene un efecto antibacteriano del Erythroxylum, ya sea que la extracción de los principios activos totales hayan sido bajo el método de la extracción alcohólica (la utilizada en el presente estudio) o la extracción acuosa (mate de coca), en distintos agentes microbianos se obtuvieron resultados de un efecto antibacteriano del Erythroxylum (coca). Pero en ningunos de las investigaciones mencionadas realizan comparaciónes con agentes bactericidas (clorhexidina 0.12% u otros), como en el caso de la presente investigación. En el caso de estudios microbiológico de índole oral solo se halló el realizado por borrovic15, en dicho estudio solo se analizó la flora mixta salival para ello tomo la muestra solo de origen salival. borrovic15 utilizo un medio de cultivo enriquecido no selectivo como es el Agar Tripticasa Soya, para tratar de desarrollar al máximo todas las bacterias presentes en la saliva, con el fin de observar un efecto antibacteriano de la flora salival, a diferencia de la presente investigación que se utilizó un medio de antibiograma como es el agar muller hinton con el fin de observar un efecto eficas frente a las bacterias de staphylococcus aureus y streptococcus mutans en comparación con la clorhexidina. Con respecto a los resultados se observo coincidencia en la inhibición bacteriana, sin embargo, en la presente investigación se encontró un efecto antibacteriano en las concentraciones (1000 y 1500 μg) pero no una eficacia en la comparación con la clorhexidina al 0.12%, a diferencia de borrovic15 que hallo efecto antibacteriano a partir de las concentraciones de (250, 500, 1000 y 1500 μg) con un control negativo sobre la flora mixta salival. Cabe resaltar que a mayor sea la concentración utilizada del extracto de hoja de Erythroxylum (coca), mayor será el halo de inhibición producida sobre las bacterias para determinar el efecto antibacteriano de dicha planta, motivo que demuestra tal investigación. 56   CONCLUSIONES • Existe un efecto antimicrobiano positivo a las concentraciones de 1000 y 1500 μg/ 20 μl del extracto de Erythroxylum lambran en el tratamiento de staphylococcus aureus y streptococcus mutans. • A mayor concentración del extracto de Erythroxylum lambran mayor efecto antimicrobiano. • Las concentraciones 1000 y 1500 μg/ 20 μl utilizadas tienen una diferencia estadísticamente significativa pero no superior con respecto al grupo control. 57   RECOMENDACIONES • Se recomienda continuar con las investigaciones utilizando microorganismos patógenos de la microflora oral. • Se recomienda realizar estudios con respecto a la composición de la hoja de coca con el fin de determinar el o los compuestos químicos que causan la acción antimicrobiana. • Se recomienda hacer estudios sobre la posibilidad de una acción sinérgica entre el o los compuestos antimicrobianos del Erythroxylum lambran y los distintos fármacos antimicrobianos. • Se recomienda realizar trabajos comparativos entre las distintas especies de hoja de coca. 58   BIBLIOGRAFÍA 1) GOICOCHEA I., A.: Estudio de la cavidad bucal en los sujetos habituados a la masticación de hojas de coca en la hacienda Collambay-Trujillo. 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MARCIAL DÍAZ ÁLVAREZ, DRA. ALINA ACOSTA MORALES. La clorhexidina, bases estructurales y aplicaciones en; la estomatología. Revista estomatologíca de México 2008. 35) JOSE LIÉBANA UREÑA. Microbiología Oral. Mc Graw Hill – Interamericana De España 1995. Cáp. 29. Pág.393. 36) MARTA NEGRONI. Microbiología Estomatología “Fundamentos Y Guía Práctica”. Editorial Médica Panamericana 2009; Pág. 347 - 377. 37) GEO. F. BROOKS, MD., JANET S. BUTEL, PhD., STEPHEN A. MORSE, PhD., Microbiología medica de jawets, melnick y adelberg. Editorial el manual moderno2005, Cáp. 14 – 15. 38) PATRICK R. MURRAY, PhD; KEN S. ROSENTHAL, PhD; GEORGE S. KOBAYASHI, PhD; MICHAEL A. PFALLER, MD., Microbiología Medica, Cuarta Edición en Español 2002. España 39) ELLEPOLA AN, SAMARANAYAKE LP. Adjunctive use of chlorhexidine in oral candidoses: a review. Oral Dis 2001 Jan 7 63   40) TRIPATHI. Farmacología Odontología “Fundamentos”. Clorhexidina. Editorial. Medica Panamericana 2009; Pág. 317, 487, 489. 41) ENACO. Empresa Nacional De La Coca S.A 2011. 42) LUIS MISSOURI USA.: Océano Mosby. MMIV Editorial Océano, milanesat 21 – 23. 43) WALPOLE, MYERS, Probabilidad y estadística, Mexico 1992, cuarta edición, editorial Mc Graw Hill 44) DANIEL, Bioestadística, Mexico 2004, cuarta edición, Editorial Limusa S.A. 64   ANEXOS 65   ANEXO Nº1 PRINCIPALES ESPECIES ERYTHROXYLUM EN EL PERÚ REINO : Vegetal DIVISION : Discífloras SUBDIVISION : Displotemonas CLASE : Dicotiledóneas ORDEN : Gerianales FAMILIA : Erythroxylaceae GENERO : Erythroxylum ESPECIE : Erythroxylum coca Lambran (Huanuco) Erythroxylum Novogranatense Var. Truxillense (trijillo) 66   ANEXO Nº2 ERYTHROXYLUM COCA LAMBRAN (HUANUQUEÑA) 67   ANEXO Nº3 ERYTHROXYLUM NOVOGRANATENSE VAR. TRUXILLENSE (TRUJILLO) 68   ANEXO Nº4 PRINCIPAL COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA HOJA DE COCA HUMEDAD CALORÍAS PROTEÍNAS CARBOHIDRATOS GRASAS 6.5 305 cal % 12.99 g % 46.2 g % 5g% VITAMINAS VITAMINA A VITAMINA C VITAMINA E VITAMINA B12 RIBOFLAVINA NIACINA ÁCIDO PANTOTENICO PIRIDOXINA TIAMINA BIOTINA 11000 1.46 43.50 1.05 1.90 1.29 0.6684 0.503 0.35 0.0863 UI mg % UI mg % mg % mg % mg % mg % mg % mg % MINERALES FÓSFORO MAGNESIO FIERRO SODIO ALUMINIO ESTRONCIO MANGANESO BORO 911.00 213.00 45.80 40.60 39.50 9.71 6.65 5.35 mg % mg % mg % mg % mg % mg % mg % mg % BARIO CINC POTASIO CALCIO COBRE CROMO YODO 4.67 2.70 2.02 1.54 1.21 0.359 5.0 mg % mg % mg % mg % mg % mg % mg % ALCALOIDES TOTALES 0.25 % A 2.25 % COCAÍNA BENZOILECGONINA CINNAMOILCOCAINA BENZOILTROPINA CUSCOHIGRINA DIHIDROXITROPINA HIGRINA TROPOCAINA ALFA-TRUXILLENSE BETA-TRUXILLENSE HYGROLINA METILCOLINA METILECGONIDINA NICOTINA OTROS TANINOS FLAVONOIDES FENOLES SAPONINAS ACEITES ESENCIALES GLICOSIDOS 69   ANEXO Nº5 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LAS HOJAS DE COCA (HUANUCO) CONTENIDO EN 100 gr. 70   ANEXO Nº6 Alcaloides Naturales de la Hoja de Coca Es el éter metílico de la benzoilegnonina, tiene propiedades anestésicas y Cocaína analgésicas. Es un derivado carboxilado de la atropina, tiene propiedades de metabolizar Egnonina grasas, glúcidos y carbohidratos. Adelgaza la sangre. Atropina. O es anestésico que produce sequedad en el árbol respiratorio. escopolamina Pectina. Es absorbente y antidiarreico, junto a la Vitamina E, regula la producción de melanina para la piel. Es absorbente y antidiarreico, junto a la Vitamina E, regula la producción de Pectina melanina para la piel Esta proteasa, que en mayor proporción contiene la papaya, es muy parecida a Papaína la catepsina animal, es una especie de fermento que acelera la digestión. Excita las glándulas salivares cuando hay deficiencia de oxígeno en el Higrina ambiente Es un cardiotónico que regula la carencia de oxígeno en el ambiente, Globulina mejorando la circulación sanguínea. Evita el sorojche (mal de altura) Acelera la formación y funcionamiento del cerebro, aumenta la irrigación Piridina sanguínea a la hipófisis y las glándulas, traduciéndose en una mejoría del cuerpo en general Evita la formación de la caries dental junto al fósforo y al calcio. Quinolina Es un anestésico poderoso. Conina Es un analgésico que junto a la anterior, ayuda a aumentar las propiedades Cocamina anestésicas y analgésicas de la cocaína natural. Acelera la formación de células musculares y evita la putrefacción de Benzoína alimentos, de ahí sus propiedades terapéuticas para gastritis y úlceras. Regula la presión arterial en hipo e hipertensión y ayuda a la formación de Reserpina células óseas. Refresca y mejora el funcionamiento del hígado, la secreción de la bilis y su Inulina acumulación a la vesícula. Es diurético, Es un polisacárido, muy parecido a las vitaminas B-12, que produce aumento de células de la sangre. Estos 14 alcaloides, los aminoácidos que contienen, los ácidos y las vitaminas A, B1, C y E, la tiamina, niacina y riboflavina, la convierten en la planta más completa del universo en Nitrógeno No Proteico, que es el que elimina las toxinas y patologías del cuerpo, obteniendo combinaciones óptimas con frutas y plantas medicinales 71   ANEXO Nº7 Materiales para el proceso de maceración alcohólica de la hoja de coca Erythroxylum Coca Lambran (Huanuqueña) Botella de vidrio transparente alcohol rectificado al 80º Papel aluminio para forrar la botella de vidrio Hoja de coca huanuqueña 72   ANEXO Nº8 Procesamiento de filtrado y evaporación en horno al vacio de extracto alcoholico de hoja de coca Laboratorio de biotecnología de la UDH 73   ANEXO Nº9 Dilución y preparación de las concentraciones del extracto de hoja de coca de pasta sólida 74   ANEXO Nº10 Impregnado de la solución de extractote hoja de coca con la s concentraciones en los discos de papel filtro 75   ANEXO Nº11 Los discos de sensibilidad 76   Anexo nº12 Discos de sensibilidad insertados en los agares Muller Hinton ya sembrados con las bacterias en cultivo y verificación de la formación de halos 77   ANEXO Nº13 Lecturas de las láminas al microscopio 78   79   ANEXO Nº14 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES                        Setiembre  2010  Octubre  2010  Noviembre  2010  Diciembre  2010  Enero  2011  Febrero  2011  Marzo  2011  Abril   2011  Mayo  2011  Junio  2011  X  x  X  X                      x  x  x        Aprobación del  proyecto de  investigación              x        Ejecución del  proyecto de  investigación              x        Análisis e  interpretación  datos  (estadísticos,  tablas y gráficos).                x      Presentación del  informe final.                x  x    Sustentación de  la tesis                    x  ACTIVIDADES    Elaboración del  anteproyecto de  investigación.  Elaboración del  proyecto de  investigación  80   1.‐ FORMULACIÓN  DEL PROBLEMA  GENERAL   ‐  ¿Cuál  es  la  eficacia  antibacteriana in vitro del  extracto  de  la  hoja  de  coca en comparación con  la  clorhexidina 0.12 % en  el  tratamiento  de  staphylococcus  aureus  y  streptococcus mutans?    ESPECÍFICOS    ‐  ¿Será  el  extracto  de  la  hoja  de  coca  un  eficaz  antibacteriano  in  vitro  frente  a  staphylococcus  aureus  y  streptococcus  mutans?   ‐ ¿Habrá diferencia entre  la  eficacia  antibacteriana  in Vitro de la clorhexidina  0.12%  en  comparación  con  extracto    de  la  hoja  de  coca  frente  a  staphylococcus  aureus  y  streptococcus mutans?    2.‐ OBJETIVOS  3.‐ JUSTIFICACIÓN 4.‐ HIPÓTESIS Aclarar  las  incógnitas  sobre  el  beneficio  de  dicha  planta.  Con  los  resultados  positivos  que  se  obtengan  de  la  existencia  de  la  eficacia  antibacteriana del extracto alcohólico  de la hoja de coca, se podrá comparar  con  otro  agente  bactericida  efectivo  que  es  la  clorhexidina  y  encaminar  una planificación para el tratamiento,  tanto  preventivo  como  interceptivo,    de  enfermedades  orales  de  origen  infeccioso  con  el  uso  de  extractos  de  la  hoja  de  coca  o  con  los  ESPECÍFICOS  componentes  exactos  de  la  planta   ‐  Identificar  la  eficacia   que  causen  dicho  efecto  del extracto de la hoja de  antibacteriano.  coca    como  antibacteriano  in  vitro  en  el  tratamiento  de  staphylococcus  aureus  y  streptococcus mutans.   ‐  Evaluar  la  eficacia  antibacteriano  in  vitro  entre  la  clorhexidina  0.12%    en  comparación  con el extracto de la hoja  de coca en el tratamiento  de  staphylococcus  aureus  y streptococcus mutans.  GENERAL   ‐  Determinar  eficacia  antibacteriano in Vitro del  extracto  de  la  hoja  de  coca  en  comparación  con  la  clorhexidina  al  0.12  %  en  el  tratamiento  de  staphylococcus  aureus  y  streptococcus mutans    5.‐VARIABLES Hipótesis de Investigación  VARIABLE INDEPENDIENTE  La  efectividad  antibacteriana  (Vi)  in  Vitro  del  extracto  de  la  Concentración  del  extracto  alcohólico  de  la  hoja  de  coca  y  hoja  coca  es  mayor  que  la  clorhexidina 0.12%.  efectividad de la clorhexidina  ESCALA CATEGORIA al  0.12%  en  el  tratamiento  INDICADORES De Razón 250µg/ 20µl.  Numérica de  Staphylococos  Aureus  y  estreptococos mutans.  De Razón  500µg/ 20µl.  Numérica    1000µg/ 20µl.  Numérica  1500µg/ 20µl. Numérica Numérica  0.12%  Hipótesis Nula VARIABLE DEPENDIENTE  La  efectividad  antibacteriana  (Vd)  De Razón  De Razón De Razón  in  Vitro  del  extracto  de  la  Eficacia  antibacteriano  del  extracto  alcohólico  de  la  hoja  de  hoja  coca  a    las  coca.  concentraciones de 250, 500,  INDICADORES  ESCALA  CATEGORIA  1000,  1500ug  /  20ul,    no  es      mayor  que  la  efectividad  de    la clorhexidina al 0.12% en el  tratamiento  de    staphylococcus  aureus  y  8 mm. resistencia  streptococcus mutans.        Hipótesis Alterna   11 mm.  sensible  Numérica  De Razón  La  efectividad  antibacteriana  in  Vitro  del  extracto  de  la  hoja  coca  a    las  concentraciones de 250, 500,  1000, 1500ug / 20ul,  es igual  que  la  efectividad  de  la  clorhexidina  al  0.12%  en  el  tratamiento  de  staphylococcus  aureus  y  streptococcus mutans.  81