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TINCIÓN DE GRAM

Tinción de Gram
•  La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de

tinción diferencial empleado en microbiología para la
visualización de bacterias, sobre todo en muestras
clínicas.
•  Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram,
que desarrolló la técnica en 1884.
•  Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular
bacteriana como para poder realizar una primera
aproximación a la diferenciación bacteriana.

Provoca el edema inflamatorio . abscesos y tejidos. •  También puede aplicarse a diferentes tipos de materiales de uso hospitalario. exudados. excreciones (orina). como líquidos corporales estériles (LCR). •  EXUDADO: En medicina un exudado es el conjunto de elementos extravasados en el proceso inflamatorio. que se depositan en el intersticio de los tejidos o cavidades del organismo.Tinción de Gram •  La tinción de Gram tiene valor diagnóstico y puede ser aplicada a diversos y múltiples tipos de especímenes clínicos. secreciones (esputo).

y tamaño de las células bacterianas a partir tanto de las muestras clínicas como de cultivos bacterianos. racimos. etc. bacilos. cadenas y empalizadas).). agrupación (parejas. .Tinción de Gram •  La observación de esta tinción permite encontrar características como forma (cocos.

Tinción de Gram Reactivos para la tinción de Gram •  Cristal violeta o violeta de genciana (colorante básico) •  Lugol de Gram (mordiente) •  Alcohol-acetona (decolorante) •  Fucsina o Safranina (colorante de contraste) .

  Cubrir la placa con lugol durante 1 minuto.  . 1.  Observar al microscopio con aceite de inmersión.  Cubrir la placa con alcohol acetona durante 5 segundos. 8. 2. objetivo 100X. 3. condensador abierto totalmente.  Lavar con agua corriente.  Lavar con agua corriente.  Cubrir la placa con fucsina durante 20 segundos. 4. 9. 11. 7. 5.  Lavar con agua corriente.  Lavar con agua corriente. 6. 10. 12.  Dejar secar al aire.  Fijar el material a estudio a la placa pasándola 2 o 3 veces por la llama de un mechero evitando el calentamiento excesivo.Tinción de Gram Técnica Realizar un extendido delgado de la muestra clínica o de una colonia sobre un portaobjetos y dejar secar.  Colocar la placa sobre un soporte y cubrirla con cristal violeta durante 1 minuto.

Tinción de Gram Resultados •  Bacterias Gram +: Azul o negro. •  Bacterias Gram-: Rosadas o rojas. .

lo que aumenta la permeabilidad celular. y aun después del tratamiento con el decolorante conservan el colorante básico. debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular. con la ayuda del mordiente se refuerza la unión del colorante (La función del mordiente es favorecer la fijación del colorante en las fibras).Tinción de Gram Fundamento de la técnica •  El Cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana. •  Las bacterias Gram – pierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante. Las bacterias Gram + debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo Cristal violeta-lugol. . dando como resultado la perdida del complejo Cristal violeta-lugol. por lo que se observan al microscopio de color azul oscuro o violeta una vez concluida la técnica de tinción. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste. razón por la cual son luego observadas de color rojo o rosado al terminar la tinción.

Tinción de Gram Tinción de Gram .

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las Gram-positivas no presentan una segunda membrana lipídica externa a la pared celular y esta pared es mucho más gruesa. . La capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. que rodea a la anterior.Tinción de Gram Bacterias Gram positivas •  La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano. A diferencia de las Gram-negativas.

es gruesa y homogénea y no hay membrana externa. estas bacterias se tiñen de violeta/ azul con la tinción de Gram.•  E n las bacterias Gram positivas la red de peptidoglicanos origina varias capas superpuestas. .

pero se incluyen por su similitud molecular con otras bacterias Gram-positivas. Streptococcus). no todas las bacterias del grupo son Gram-positivas (no se tiñen por la aplicación de ese método). Algunas especies son fotosintéticas. Muchas de estas bacterias forman endosporas en condiciones desfavorables. Realmente. . Clostridium. pero la mayoría son heterótrofas. etc) o coco (Staphylococcus. con gruesas paredes celulares o sin ellas.Tinción de Gram Bacterias Gram positivas •  Incluyen especies tanto móviles (vía flagelos) como inmóviles con forma de bacilo (Bacillus.

Tinción de Gram Bacterias Gram negativas •  Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglicano. . mientras que las bacterias Grampositivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptiglicano es mucho más gruesa. no retiene el colorante durante la tinción de Gram. Al ser la pared fina.

. estos últimos. a polisacáridos que se proyectan hacia el exterior. bacterias que se tiñen de rojo con la tinción de Gram.•  En las Gram negativas. hay una sola c a p a d e péptidoglucanos sobre la que se dispone una membrana externa constituida por una capa de fosfolípidos y otra de glicolípidos asociados.

la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias. Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa se localiza el espacio periplásmico relleno de una sustancia denominada periplasma. . y una membrana externa que recubre la pared celular de estas bacterias. una pared celular delgada de peptidoglicano.Tinción de Gram Bacterias Gram negativas •  La envoltura celular de las bacterias Gramnegativas está compuesta por una membrana citoplasmática (membrana interna). que rodea a la anterior.

). Algunos de ellos causan principalmente enfermedades respiratorias (Haemophilus influenzae. entre otros. Los cocos Gram-negativos causan la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae). . Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran número de especies. enfermedades urinarias (Escherichia coli) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori). etc. Klebsiella pneumoniae.Tinción de Gram Bacterias Gram negativas •  Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades. meningitis (Neisseria meningitidis) y síntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis).

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Constituye la estructura básica de la pared celular de las bacterias .4. La cadena es recta y no ramificada.Tinción de Gram Peptidoglucano: El peptidoglicano o mureína es un copolímero formado por una secuencia alternante de N-acetilglucosamina y el Ácido N-acetilmurámico unidos mediante enlaces β-1.

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