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Regional Distrito Capital

Sistema de Gestión de la Calidad

Informe de Laboratorio No 03
ENSAYOS DE ECOTOXICIDAD CON SEMILLAS DE LECHUGA LACTUCA
SATIVA L EMPRESA CUART’S LTDA.

Aprendices
GINA LIZZETH MORENO CORDERO
ELIANA MILENA SANCHEZ JUISA
MAYRA ALEJANDRA SOTO TABIMBA

Instructor
SONIA MARCELA BUITRAGO MORALES

Centro de Gestión Industrial

Marzo 2015

MARCO TEORICO
Introducción..........................................................................................................2
Objetivos...............................................................................................................3
Objetivo General.................................................................................................3
Objetivos Específicos........................................................................................3
Procedimiento.......................................................................................................4
3.1 Preparación de la solución ácido bórico al 2,5% p/v................................4
3.2.2 Calculos......................................................................................................7
Solucio acido borico al 2.5 % p/v......................................................................8
3.3 Lectura de resultados..................................................................................8
4. Resultados........................................................................................................9
4.1.2 control negativo.........................................................................................9
4.1.2 control positivo..........................................................................................9
4.1.3 Dilución 0.3%...........................................................................................10
4.1. dilución 10 %..............................................................................................11
4.1.3 Dilución 30%............................................................................................12
5. Análisis de resultados.....................................................................................13
Conclusiones......................................................................................................13
Anexos................................................................................................................14
Anexo A “Análisis Fisicoquímico de agua residual industria curtiembres”14
Bibliografía..........................................................................................................15

Para realizar un bioensayo de ecotoxicidad con semillas de lechuga Lactuca sativa L. tiene unas condiciones óptimas de crecimiento.80%. humedad del 60 . a una temperatura entre -6°C y 30°C. Se utilizan semillas de lechuga para el montaje del ensayo debido a que en el período de germinación y los primeros días de desarrollo de la plántula ocurren numerosos procesos fisiológicos en los que la presencia de una sustancia tóxica puede interferir alterando la supervivencia y el desarrollo normal de la planta. lo cual facilita medir los efectos morfológicos sobre el crecimiento e inhibición de la misma. a fin de determinar el grado de afectación que puede producir los vertimientos de la organización sobre una especie vegetal en su entorno natural. (Feliz Perez GarciaUniversidad politecnica de madrid) Los bioensayos de eco toxicidad se realizan con la finalidad de conocer los efectos tóxicos de sustancias químicas puras o complejas. 2008) . y las concentraciones a las cuales se pueden ver una mortalidad del 50% de una población.Introducción Se tomó una muestra de agua en el proceso de pelambre de la empresa Cuart’s Ltda. sobre organismos vivos. La lechuga Lactuca sativa L es una es una planta herbácea propia de las regiones semitempladas que se cultiva con fines alimenticios. pH entre 6 . (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco.7.

. a fin de determinar el grado de toxicidad de la muestra. con semillas de lechuga Lactuca sativa L. con las diferentes concentraciones de la muestra. Objetivos Específicos  Realizar la metodología y procedimientos para la siembra de las semillas en las cajas Petri.  Realizar el conteo de las semillas germinadas y la caracterización de los efectos citotóxicos.Objetivos Objetivo General Realizar un bioensayo de ecotoxicidad en la muestra de agua de la empresa Cuart’s Ltda.  Determinar la concentración efectiva 50 en la muestra. para determinar grado de toxicidad de los vertimientos de la organización.

1 Preparación de la solución ácido bórico al 2. 3. donde la inhibición de las semillas debe ser de un 99 a 100%.5% p/v Se prepara la para el control positivo. Fuente: autores . además del control positivo y negativo.Procedimiento A continuación se presentan mediante diagramas de flujo los pasos a seguir para llevar a cabo el montaje del bioensayo de eco toxicidad.

2. para tener una inhibición de la germinación.1 Montaje de la prueba En el montaje de la prueba se realizó un control positivo con ácido bórico. y a cual se da la inhibición de un 50 % de los organismos. para poder determinar a qué concentraciones es afectada la población.2 Preparación de la muestras a evaluar Se realizan diluciones de la muestra. Fuente: autores 3. y un control negativo con solo agua destilada para el crecimiento normal de la población una inhibición total .3.

Fuente: autores .

5 g x 50 ml: 1.5 g x 50 ml: 1.3.5 % p/v Cantidad: 50 ml solución 2. 100 ml Preparacion diluciones de la muestra Preparación de solución ácido bórico para el control negativo. 30. dando como resultado la cantidad de muestra a pipetear en cada tubo de ensayo.2 Cálculos Preparación de solución ácido bórico para el control negativo. 3 y 1 % v/v respectivamente.1%) dividido en cien. posteriormente aforar con agua destilada. 100 ml Preparacion diluciones de la muestra Prepara 5 diluciones de 10 ml cada una Se realizaron concentraciones de 100.5 % p/v Cantidad: 50 ml solución 2.25 g ácido bórico a pesar. 10.10.30. Para realizar los calculos se multiplaca el volumen de la dilucion (10ml) por el porcentanje (100. Solucion acido borico al 2. Solucion acido borico al 2.2. .25 g ácido bórico a pesar.

6 % .3 ml 10x1/100=0.10x 100/ 100= 10 ml 10x30/100= 3 ml 10x10/100=1 ml 10x3/100=0.1 ml Porcentajes de germinación A continuación se muestran los cálculos de las diluciones de referencia los cuales serán control negativo y control positivo Control Negativo: (control de referencia) Promedio de semillas germinadas. % de germinación Control negativo 59 3 Control positivo Porcentaje de inhibición X 100 = 19.

6 % de inhibición Dilución 0.1% 19.1 X100 Dilución 0.Se determina el porcentaje de inhibición a partir de la siguiente fórmula: % de inhibición = % de germinación de control (+) .% de germinación de la dilución 30% Porcentaje de germinación A partir de los datos obtenidos se determina de la siguiente manera: % de germinación = =0 Dilución 0.1% sobre muestra de referencia % de germinación 11 X 100 = 56.56.1 % X 100 = 11% 3 Dilución 0.1% X 100 % de germinación 33 Dilución 0.3% X 100 = 43.9% .1% 100.

0% 3 Dilución 10% sobre muestra de referencia % de germinación 19 X 100 = 97% 19.6 % de inhibición Dilución 30% Dilución 10% 100.3 % sobre muestra de referencia % de 19.3 % % de inhibición No se obtiene ya que él % de germinación es de 100% Dilución 10 % X 100 % de germinación Dilución 10% 57 X 100 = 19.6 germinación 19.Dilución 0.3% 59 X100 % de germinación =19.6% 3 Dilución 0.6 X100 = 100% Dilución 0.97 X100 = 3% .

33 X100 = 1.70% 19.6 19.1.3 .70 X100 = 98.6 Dilución 100 X 100 % de germinación Dilución 100% 1 X 100 = 0.6 X100 Dilución 30% sobre muestra de referencia % de germinación 16.6 3 Dilución 30% % de inhibición 100 – 84.6 % de inhibición Dilución 100% 100.33% 3 Dilución 100% sobre muestra e referencia % de germinación 0.4 = 84.6 X 100 = 16.% de germinación Dilución 30% 50 X100 =16.

2 Control negativo Se realizó el montaje en tres cajas Petri de solo agua destilada. y se colocaron 20 semillas por caja. (cambios en el crecimiento normal del hipocotilo y radícula. se procede a cuantificar los efectos sobre la plántula. Resultados Terminado el tiempo de exposición se procedió a cuantificar los efectos sobre las plántulas.3 Lectura de resultados Pasado el tiempo de exposición de la semilla con la muestra.3. daños morfológicos o inhibición). Fuente: autores 4.1. a continuación se presentan los resultados obtenidos 4. .

Porcentaje de germinación Control Número de semillas negativo Replica 1 Replica 2 Replica 3 Total germinadas 20 20 19 59 Crecimiento y elongación de la radícula e hipocotilo (promedio de las dos plántulas más grandes por replica) Caja Replica 1 Replica 2 Replica 3 Hipocótilo 1 3.5 cm Radícula 1 7 cm 5 cm 3.2. Control positivo Replica 1 Replica 2 Replica 3 Total Número de semillas Número de germinadas semillas no 0 0 0 0 germinadas 20 20 20 60 4.1.5 cm 2.2 cm 4. Dilución 0.5 cm 2.2 Control positivo Se realizó el montaje de tres cajas Petri con ácido bórico y se colocaron 20 semillas por caja. Porcentaje de germinación.1% Porcentaje de germinación Dilución Número de Número de .1.

1.3 Dilución 0. Dilución 0.4 cm 3.5 cm Hipocotilo 4 cm 3 cm 4 cm .3% Replica 1 Replica 2 Replica 3 Total Número de Número de semillas semillas no germinadas 19 20 20 59 germinadas 1 0 0 1 Crecimiento y elongación de la radícula e hipocotilo Replica 1 2 3 Radícula 4.1 % semillas Replica 1 Replica 2 Replica 3 Total semillas no germinadas 13 20 0 33 germinadas 7 0 20 27 Crecimiento y elongación de la radícula e hipocotilo Replica 1 2 3 Radícula 7 cm 0 cm 5 cm Hipocotilo 3.5 cm 5.3% Porcentaje de germinación.0.5 cm 0 cm 3 cm 4.

Dilución 10% Replica 1 Replica 2 Replica 3 Total Número de Número de semillas semillas no germinadas 19 19 19 57 germinadas 1 1 1 3 Crecimiento y elongación de la radícula e hipocotilo Caja Replica 1 Replica 2 Replica 3 Radícula 1 2.5 3 2.5 5 6 Hipocótilo 1 2.4.3 Dilución 30% Porcentaje germinación Dilución 30% Replica 1 Replica 2 Replica 3 Total Número de Número de semillas semillas no germinadas germinadas 18 15 17 50 2 5 3 8 Además se toma en cuenta el porcentaje de germinación del control negativo que en este caso fue de 59 semillas germinadas .1.5 4. . Dilución 10 % Porcentaje de germinación.1.

3 14.12 germinadas 98. engrosamiento de la radícula.5 cm 1.6%100 19.6100 Resultado Resultado semillas semillas no germinadas 1.5 cm 1.03 97 100 56.Dilución 30% Replica 1 Replica 2 Replica 3 Hipocolito 1 5 cm 4.5 cm 5 cm Radícula 1 1.33%/19.47 3 0 43.88 Descripción cambios morfológicos Dentro de las características encontradas se observó un color marrón en las semillas germinadas. por otra parte se pudo observar que habían .6*100 16. enrollamiento del hipocolito en algunos casos.6%/19.10% 1/3 50/3 57/3 59/3 33/3 0.67%/19.6%100 19%/19.30% 0.6%100 11%/19.70 85.5 cm Dilución 100% En esta dilución la cual es la más concentrada hubo un % de germinación del 0% y % de inhibición del 100% Dilución Replica 1 Replica 2 Replica 3 Número de Número de semillas semillas no germinadas germinadas 1 0 0 19 20 20 Tabla de resultados Concentración Calculo Calculo 2 de la muestra 1 100% 30% 10% 0.

en esta etapa se da la absorción de nutrientes y agua. eliminación de grupos sulfhídricos y oxidación. temperatura. y de esta forma su óptimo funcionamiento). 2008). donde empiezan los procesos metabólicos para su transformación en plántula. En el ensayo realizado se obtuvo un porcentaje de germinación del 98. disponibilidad de oxígeno y oscuridad para el crecimiento de la raíz. donde pierden su estructura nativa. estuvieron en su medio óptimo de crecimiento como lo es el sustrato húmedo.algunas que tenían radículas y cotiledones demasiado secos que presentaban rompimiento. Lo que indica que las semillas son un buen indicador de toxicidad en una muestra. (Casanova. rotura de membrana celular. Cuando están en una solución de ácido bórico este inhibe su crecimiento debido a que es un compuesto químico. (Patricia Ramirez Romero . esto es debido a que las semillas. ligeramente ácido que es usado como antiséptico.33%. que inhiben el desarrollo de microorganismos por medio de desnaturalización de proteínas (es un cambio estructural de las proteínas o ácidos nucleicos.12% de semillas germinadas. según el protocolo para ensayos de toxicidad con lechuga Lactuca Sativa L. estas presentan mayor sensibilidad en su etapa de germinación.Ania Mendoza Cantú. Análisis de resultados El control negativo es usado como punto de referencia para el crecimiento adecuado de las semillas. 2013) En el control positivo se obtuvo una inhibición del 100% las semillas. 5. Los antisépticos son sustancias antimicrobianas. en otros casos se presentaron radículas e hipocolitos muy cortos. esto es debido a que el medio es extremo para el . (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco) En la concentración del 1% de la muestra se obtuvo un resultado del 56. el porcentaje de germinación debe ser superior al 95%.

En la concentración 100% de la muestra. se presentó un crecimiento del 97% de las semillas. (Autores. 2003). (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco) . la cual se evidencio en el crecimiento de hongos y la inhibición total de las semillas. se presentó un crecimiento del 85% de las semillas. se presentó un crecimiento del 100% de las semillas. por absorción y acumulación de sustancias toxicas (UNIVERSIDAD POLITECNICA DE VALENCIA. Para una concentración efectiva 50. En la concentración de 10% de la muestra. lo que indica que el agua tiene un alto grado de toxicidad para el desarrollo de una población vegetal.33 de las semillas. 2015) En la concentración de 3% de la muestra. pH. afectan los procesos de metabolización de la plántula. lo que indica que a pesar de la toxicidad presente se necesitan mayores concentraciones para lograr alterar de forma significativa las condiciones óptimas de crecimiento de la población vegetal. se presentó una inhibición del 98. En la concentración de 30% de la muestra. esta es la concentración efectiva 50. ya que logra inhibir a más del 50% de la población.crecimiento de la plántula. ya que las condiciones de disponibilidad de oxígeno. (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco). se deben sobre pasar una concentración del 50% de la muestra. En la réplica número dos de la dilución del 1% se presentó contaminación cruzada. lo que indica que el contenido del contaminante no afecta el crecimiento normal de la plántula. por lo tanto para conservar la integridad y veracidad de los resultados no se toma en cuenta para la concentración efectiva 50. lo que indica que el contenido de contaminante por cada ml no es lo suficientemente alto como para afectar el desarrollo normal de la germinación. y contenido de químicos tóxicos (Ver anexo A) que presenta la misma.

Disueltos 2540 D 400 mg/l 600 mg/l 1191 mg/l 800 mg/l 2400 mg/l 1500 mg/l 1000 mg/l 800 mg/l Sol.5-9 PH 4500 H 9.03 ppm 0.5 Conductividad 2510 10 siemens OD SAAM 4500-O 5540-C 4. esto nos indica que se deben tratar los vertimientos de la organización antes de ser dispuestos a fin de reducir o eliminar las concentraciones de los contaminantes debido a que estos vertimientos pueden degradar de manera significativa un ecosistema. Sedimentadles 2540 D 3 mg/l 2 mg/l Sol.44 mg/l 10 mg/l Cr (V) 3500-Cr 155 mg/l 0. Anexos Anexo A “Análisis Fisicoquímico de agua residual industria curtiembres” Parámetro Método Resultado Límites permisibles 4.Conclusiones Se realizó el bioensayo con semillas de lechuga lactuca sativa L. Totales DQO DBO Fuentes: autores. 5220 .1 mg/l Grasas y aceites 5520 155 mg/l 100 mg/l Sol. donde se determinó la toxicidad de los vertimientos generados por la organización y se encontró una concentración efectiva 50 en la concentración del 100% de la muestra.

longevidad y conservación de semillas. Obtenido de http://www2. Vola .f.pdf Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco.es/varios/biologia/temas/tema_17.).).pdf M.htm .Universidad politecnica de madrid. Obtenido de http://repository.inecc.uy/cefa/2008/grampositivosaerobios. (2008).gob. Lección 17 Germinación de Semillas. btenido de http://www. Macedo. vigor. Ensayo de toxicidad aguda con semillas de lechuga Lactuca Sativa L. (s. (s.upv.es/templates/portal/ficheros/websDinamicas/20/conserva ci%C3%B3n%20semillas. (2009).f.edu.mx/publicaciones/libros/573/cap4. D. Obtenido de http://www. M.higiene.pdf Salle.-U.Bibliografía Felix Perez Garcia. E.euita.co/bitstream/handle/10185/14030/T41.lasalle.09%20D85d. (2003). Principales grupos de bacilos Gram positivos aerobios .p df?sequence=1&isAllowed=y Universidad politecnica de valencia.edu. Obtenido de http://servicios. Vitalidad.educarm.