Regional Distrito Capital

Sistema de Gestin de la Calidad

Informe de Laboratorio No 03
ENSAYOS DE ECOTOXICIDAD CON SEMILLAS DE LECHUGA LACTUCA
SATIVA L EMPRESA CUARTS LTDA.

Aprendices
GINA LIZZETH MORENO CORDERO
ELIANA MILENA SANCHEZ JUISA
MAYRA ALEJANDRA SOTO TABIMBA

Instructor
SONIA MARCELA BUITRAGO MORALES

Centro de Gestin Industrial

Marzo 2015

MARCO TEORICO
Introduccin..........................................................................................................2
Objetivos...............................................................................................................3
Objetivo General.................................................................................................3
Objetivos Especficos........................................................................................3
Procedimiento.......................................................................................................4
3.1 Preparacin de la solucin cido brico al 2,5% p/v................................4
3.2.2 Calculos......................................................................................................7
Solucio acido borico al 2.5 % p/v......................................................................8
3.3 Lectura de resultados..................................................................................8
4. Resultados........................................................................................................9
4.1.2 control negativo.........................................................................................9
4.1.2 control positivo..........................................................................................9
4.1.3 Dilucin 0.3%...........................................................................................10
4.1. dilucin 10 %..............................................................................................11
4.1.3 Dilucin 30%............................................................................................12
5. Anlisis de resultados.....................................................................................13
Conclusiones......................................................................................................13
Anexos................................................................................................................14
Anexo A Anlisis Fisicoqumico de agua residual industria curtiembres14
Bibliografa..........................................................................................................15

Introduccin
Se tom una muestra de agua en el proceso de pelambre de la empresa Cuarts
Ltda. Para realizar un bioensayo de ecotoxicidad con semillas de lechuga
Lactuca sativa L, a fin de determinar el grado de afectacin que puede producir
los vertimientos de la organizacin sobre una especie vegetal en su entorno
natural.
La lechuga Lactuca sativa L es una es una planta herbcea propia de las
regiones semitempladas que se cultiva con fines alimenticios, tiene unas
condiciones ptimas de crecimiento, a una temperatura entre -6C y 30C, pH
entre 6 - 7, humedad del 60 - 80%. Se utilizan semillas de lechuga para el
montaje del ensayo debido a que en el perodo de germinacin y los primeros
das de desarrollo de la plntula ocurren numerosos procesos fisiolgicos en los
que la presencia de una sustancia txica puede interferir alterando la
supervivencia y el desarrollo normal de la planta, lo cual facilita medir los efectos
morfolgicos sobre el crecimiento e inhibicin de la misma. (Feliz Perez GarciaUniversidad politecnica de madrid)
Los bioensayos de eco toxicidad se realizan con la finalidad de conocer los
efectos txicos de sustancias qumicas puras o complejas, sobre organismos
vivos, y las concentraciones a las cuales se pueden ver una mortalidad del 50%
de una poblacin. (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco, 2008)

Objetivos

Objetivo General

Realizar un bioensayo de ecotoxicidad en la muestra de agua de la empresa

Cuarts Ltda. con semillas de lechuga Lactuca sativa L, para determinar grado
de toxicidad de los vertimientos de la organizacin.

Objetivos Especficos

Realizar la metodologa y procedimientos para la siembra de las semillas

en las cajas Petri, con las diferentes concentraciones de la muestra.

Realizar el conteo de las semillas germinadas y la caracterizacin de los

efectos citotxicos, a fin de determinar el grado de toxicidad de la muestra.

Determinar la concentracin efectiva 50 en la muestra.

Procedimiento

A continuacin se presentan mediante diagramas de flujo los pasos a seguir para

llevar a cabo el montaje del bioensayo de eco toxicidad, adems del control
positivo y negativo.
3.1 Preparacin de la solucin cido brico al 2,5% p/v

Se prepara la

para el control positivo, donde la inhibicin de las semillas debe

ser de un 99 a 100%.

Fuente: autores

3.2 Preparacin de la muestras a evaluar

Se realizan diluciones de la muestra, para poder determinar a qu
concentraciones es afectada la poblacin, y a cual se da la inhibicin de un 50 %
de los organismos.

Fuente: autores
3.2.1 Montaje de la prueba
En el montaje de la prueba se realiz un control positivo con cido brico, para
tener una inhibicin de la germinacin, y un control negativo con solo agua
destilada para el crecimiento normal de la poblacin una inhibicin total

Fuente: autores

3.2.2 Clculos

Preparacin de solucin cido brico para el control negativo.

Solucion acido borico al 2.5 % p/v
Cantidad: 50 ml solucin
2.5 g

x 50 ml: 1.25 g cido brico a pesar.

100 ml

Preparacion diluciones de la muestra

Preparacin de solucin cido brico para el control negativo.
Solucion acido borico al 2.5 % p/v
Cantidad: 50 ml solucin
2.5 g

x 50 ml: 1.25 g cido brico a pesar.

100 ml

Preparacion diluciones de la muestra

Prepara 5 diluciones de 10 ml cada una
Se realizaron concentraciones de 100, 30, 10, 3 y 1 % v/v respectivamente.
Para realizar los calculos se multiplaca el volumen de la dilucion (10ml) por el
porcentanje (100,30,10,1%) dividido en cien, dando como resultado la cantidad
de muestra a pipetear en cada tubo de ensayo, posteriormente aforar con agua
destilada.

10x 100/ 100= 10 ml

10x30/100= 3 ml
10x10/100=1 ml
10x3/100=0.3 ml
10x1/100=0.1 ml

Porcentajes de germinacin

A continuacin se muestran

los clculos de las diluciones de referencia los

cuales sern control negativo y control positivo

Control Negativo: (control de referencia)

Promedio de semillas germinadas.

% de germinacin

Control negativo
59
3

Control positivo

Porcentaje de inhibicin

X 100

= 19.6 %

Se determina el porcentaje de inhibicin a partir de la siguiente frmula:

% de inhibicin = % de germinacin de control (+) - % de germinacin de la
dilucin 30%
Porcentaje de germinacin
A partir de los datos obtenidos se determina de la siguiente manera:

% de germinacin =

=0

Dilucin 0.1%

X 100
% de germinacin

33

Dilucin 0.1 %
X 100

= 11%

Dilucin 0.1% sobre muestra de referencia

% de germinacin
11
X 100

= 56.1%

19.6

% de inhibicin

Dilucin 0.1%
100- 56.1

X100

Dilucin 0.3%

X 100

= 43.9%

Dilucin 0.3%
59
X100

% de germinacin

=19.6%

3
Dilucin 0.3 % sobre muestra de referencia
% de

19.6

germinacin

19.6

X100

= 100%

Dilucin 0.3 %
% de inhibicin No se obtiene ya que l % de germinacin es
de 100%

Dilucin 10 %

X 100

% de germinacin

Dilucin 10%
57

X 100

= 19.0%

Dilucin 10% sobre muestra de referencia

% de germinacin
19
X 100

= 97%

19.6

% de inhibicin

Dilucin 30%

Dilucin 10%
100- 97

X100

= 3%

% de germinacin

Dilucin 30%
50

X100

=16,6

Dilucin 30%
% de inhibicin
100 84.6
X100
Dilucin 30% sobre muestra de referencia
% de germinacin
16,6
X 100

= 16.4
= 84.6

19,6
Dilucin 100

X 100

% de germinacin

Dilucin 100%
1
X 100

= 0.33%

3
Dilucin 100% sobre muestra e referencia
% de germinacin
0.33
X100

= 1.70%

19.6

% de inhibicin

Dilucin 100%
100- 1.70

X100

= 98.3

3.3 Lectura de resultados

Pasado el tiempo de exposicin de la semilla con la muestra, se procede a

cuantificar los efectos sobre la plntula, (cambios en el crecimiento normal del
hipocotilo y radcula, daos morfolgicos o inhibicin).

Fuente: autores

4. Resultados
Terminado el tiempo de exposicin se procedi a cuantificar los efectos sobre
las plntulas, a continuacin se presentan los resultados obtenidos

4.1.2 Control negativo

Se realiz el montaje en tres cajas Petri de solo agua destilada, y se colocaron
20 semillas por caja.

Porcentaje de germinacin
Control

Nmero de semillas

negativo
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Total

germinadas
20
20
19
59

Crecimiento y elongacin de la radcula e hipocotilo (promedio de las dos

plntulas ms grandes por replica)
Caja
Replica 1
Replica 2
Replica 3

Hipoctilo 1
3,5 cm
2,5 cm
2,5 cm

Radcula 1
7 cm
5 cm
3,2 cm

4.1.2 Control positivo

Se realiz el montaje de tres cajas Petri con cido brico y se colocaron 20
semillas por caja.
Porcentaje de germinacin.

Control positivo

Replica 1
Replica 2
Replica 3
Total

Nmero de semillas

Nmero de

germinadas

semillas no

0
0
0
0

germinadas
20
20
20
60

4.1.2. Dilucin 0.1%

Porcentaje de germinacin
Dilucin

Nmero de

Nmero de

0.1 %

semillas

Replica 1
Replica 2
Replica 3
Total

semillas no

germinadas
13
20
0
33

germinadas
7
0
20
27

Crecimiento y elongacin de la radcula e hipocotilo

Replica
1
2
3

Radcula
7 cm
0 cm
5 cm

Hipocotilo
3,5 cm
0 cm
3 cm

4.1.3 Dilucin 0.3%

Porcentaje de germinacin.
Dilucin
0.3%
Replica 1
Replica 2
Replica 3
Total

Nmero de

Nmero de

semillas

semillas no

germinadas
19
20
20
59

germinadas
1
0
0
1

Crecimiento y elongacin de la radcula e hipocotilo

Replica
1
2
3

Radcula
4.4 cm
3.5 cm
5.5 cm

Hipocotilo
4 cm
3 cm
4 cm

4.1. Dilucin 10 %
Porcentaje de germinacin.
Dilucin 10%

Replica 1
Replica 2
Replica 3
Total

Nmero de

Nmero de

semillas

semillas no

germinadas
19
19
19
57

germinadas
1
1
1
3

Crecimiento y elongacin de la radcula e hipocotilo

Caja
Replica 1
Replica 2
Replica 3

Radcula 1
2.5
5
6

Hipoctilo 1
2.5
3
2.5

4.1.3 Dilucin 30%

Porcentaje germinacin
Dilucin 30%

Replica 1
Replica 2
Replica 3
Total

Nmero de

Nmero de

semillas

semillas no

germinadas

germinadas

18
15
17
50

2
5
3
8

Adems se toma en cuenta el porcentaje de germinacin del control negativo

que en este caso fue de 59 semillas germinadas
.

Dilucin 30%
Replica 1
Replica 2
Replica 3

Hipocolito 1
5 cm
4,5 cm
5 cm

Radcula 1
1,5 cm
1,5 cm
1,5 cm

Dilucin 100%
En esta dilucin la cual es la ms concentrada hubo un % de germinacin del 0%
y % de inhibicin del 100%

Dilucin

Replica 1
Replica 2
Replica 3

Nmero de

Nmero de semillas

semillas

no germinadas

germinadas
1
0
0

19
20
20

Tabla de resultados

Concentracin Calculo

Calculo 2

de la muestra 1
100%
30%
10%
0,30%
0,10%

1/3
50/3
57/3
59/3
33/3

0,33%/19,6*100
16,67%/19,6%100
19%/19,6%100
19,6%/19,6%100
11%/19,6100

Resultado

Resultado

semillas

semillas no

germinadas
1,70
85,03
97
100
56,12

germinadas
98,3
14,47
3
0
43,88

Descripcin cambios morfolgicos

Dentro de las caractersticas encontradas se observ un color marrn en las
semillas

germinadas,

enrollamiento

del

hipocolito

en

algunos

casos,

engrosamiento de la radcula, por otra parte se pudo observar que haban

algunas que tenan radculas y cotiledones demasiado secos que presentaban

rompimiento, en otros casos se presentaron radculas e hipocolitos muy cortos.

5. Anlisis de resultados
El control negativo es usado como punto de referencia para el crecimiento
adecuado de las semillas, segn el protocolo para ensayos de toxicidad con
lechuga Lactuca Sativa L, el porcentaje de germinacin debe ser superior al
95%. (Patricia Ramirez Romero - Ania Mendoza Cant, 2008). En el ensayo
realizado se obtuvo un porcentaje de germinacin del 98.33%, esto es debido a
que las semillas, estuvieron en su medio ptimo de crecimiento como lo es el
sustrato hmedo, temperatura, disponibilidad de oxgeno y oscuridad para el
crecimiento de la raz. (Casanova, 2013)
En el control positivo se obtuvo una inhibicin del 100% las semillas, estas
presentan mayor sensibilidad en su etapa de germinacin, donde empiezan los
procesos metablicos para su transformacin en plntula, en esta etapa se da
la absorcin de nutrientes y agua. Cuando estn en una solucin de cido brico
este inhibe su crecimiento debido a que es un compuesto qumico, ligeramente
cido que es usado como antisptico. Los antispticos son sustancias
antimicrobianas, que inhiben el desarrollo de microorganismos por medio de
desnaturalizacin de protenas (es un cambio estructural de las protenas o
cidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su ptimo
funcionamiento), rotura de membrana celular, eliminacin de grupos sulfhdricos
y oxidacin. Lo que indica que las semillas son un buen indicador de toxicidad en
una muestra. (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco)
En la concentracin del 1% de la muestra se obtuvo un resultado del 56.12% de
semillas

germinadas, esto es debido a que el medio es extremo para el

crecimiento de la plntula, ya que las condiciones de disponibilidad de oxgeno,

pH, y contenido de qumicos txicos (Ver anexo A) que presenta la misma,
afectan los procesos de metabolizacin de la plntula, por absorcin y
acumulacin

de

sustancias

toxicas

(UNIVERSIDAD

POLITECNICA

DE

VALENCIA, 2003).

En la rplica nmero dos de la dilucin del 1% se present contaminacin

cruzada, la cual se evidencio en el crecimiento de hongos y la inhibicin total de
las semillas, por lo tanto para conservar la integridad y veracidad de los
resultados no se toma en cuenta para la concentracin efectiva 50.
(Autores, 2015)
En la concentracin de 3% de la muestra, se present un crecimiento del 100%
de las semillas, lo que indica que el contenido de contaminante por cada ml no
es lo suficientemente alto como para afectar el desarrollo normal de la
germinacin.
En la concentracin de 10% de la muestra, se present un crecimiento del 97%
de las semillas, lo que indica que el contenido del contaminante no afecta el
crecimiento normal de la plntula. (Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco).
En la concentracin de 30% de la muestra, se present un crecimiento del 85%
de las semillas, lo que indica que a pesar de la toxicidad presente se necesitan
mayores concentraciones para lograr alterar de forma significativa las
condiciones ptimas de crecimiento de la poblacin vegetal. Para una
concentracin efectiva 50, se deben sobre pasar una concentracin del 50% de
la muestra.
En la concentracin 100% de la muestra, se present una inhibicin del 98.33
de las semillas, esta es la concentracin efectiva 50, ya que logra inhibir a ms
del 50% de la poblacin, lo que indica que el agua tiene un alto grado de
toxicidad para el desarrollo de una poblacin vegetal. (Maria Cecilia Sombrero y
Alicia Ronco)

Conclusiones

Se realiz el bioensayo con semillas de lechuga lactuca sativa L, donde se

determin la toxicidad de los vertimientos generados por la organizacin y se
encontr una concentracin efectiva 50 en la concentracin del 100% de la
muestra, esto nos indica que se deben tratar los vertimientos de la organizacin
antes de ser dispuestos a fin de reducir o eliminar las concentraciones de los
contaminantes debido a que estos vertimientos pueden degradar de manera
significativa un ecosistema.

Anexos

Anexo A Anlisis Fisicoqumico de agua residual industria curtiembres

Parmetro

Mtodo

Resultado

Lmites
permisibles
4.5-9

PH

4500 H

9.5

Conductividad

2510

10 siemens

OD
SAAM

4500-O
5540-C

4.03 ppm
0.44 mg/l

10 mg/l

Cr (V)

3500-Cr

155 mg/l

0.1 mg/l

Grasas y aceites

5520

155 mg/l

100 mg/l

Sol. Sedimentadles

2540 D

3 mg/l

2 mg/l

Sol. Disueltos

2540 D

400 mg/l

600 mg/l

1191 mg/l

800 mg/l

2400 mg/l

1500 mg/l

1000 mg/l

800 mg/l

Sol. Totales
DQO
DBO
Fuentes: autores.

5220

Bibliografa

Felix Perez Garcia- Universidad politecnica de madrid. (s.f.). Vitalidad, vigor,

longevidad y conservacin de semillas. Obtenido de
http://servicios.educarm.es/templates/portal/ficheros/websDinamicas/20/conserva
ci%C3%B3n%20semillas.pdf
M. Macedo, M. Vola . (2008). Principales grupos de bacilos Gram positivos
aerobios . btenido de
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/grampositivosaerobios.pdf
Maria Cecilia Sombrero y Alicia Ronco. (s.f.). Ensayo de toxicidad aguda con
semillas de lechuga Lactuca Sativa L. Obtenido de
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/573/cap4.pdf

Salle, D. E.-U. (2009).

Obtenido de
http://repository.lasalle.edu.co/bitstream/handle/10185/14030/T41.09%20D85d.p
df?sequence=1&isAllowed=y
Universidad politecnica de valencia. (2003).
Leccin 17 Germinacin de Semillas.
Obtenido de http://www.euita.upv.es/varios/biologia/temas/tema_17.htm